气相色谱法快速鉴定光滑念珠菌与白念珠菌

目的：探讨脂肪酸组成对白念珠菌与光滑念珠菌的鉴别意义。方法：采用盐酸甲醇法提取5株白念珠菌和4株光滑念珠菌的脂肪酸,以色相色谱法进行检测,配以计算机分析各种饱和与不饱和脂肪酸含量。结果：光滑念珠菌与白念珠菌在脂肪酸的成份与含量上明显不同,光滑念珠菌不含亚麻酸（C18:3）,且不饱和脂肪棕榈油酸（C16:1）与饱和脂肪酸棕榈酸（C16：0）比值不同（白念珠菌皆小于1.3,光滑念珠菌除1例为1.2外,余皆大于3.9）;C16：0与硬脂酸（C18:0）的比值（白念珠菌皆大于2.7,光滑念珠菌皆小于1.1）;C16：1和油酸（C18：1）的比值（白念珠菌皆小于0.5,光滑念珠菌大于0.7）。结论：气相色谱法方法简便、快速,可用于白念球菌与光滑念珠菌化学分类鉴定。     

黄芩苷对白色念珠菌生物膜形成的体外抑制作用

目的：研究黄芩苷体外对白色念珠菌生物膜形成的影响。方法扫描电镜下观察不同培养时间的生物膜形态,并用XTT减低法检测黄芩苷对白色念珠菌生物膜活性的影响,用结晶紫含量测定法检测黄芩苷对白色念珠菌生物膜生物量的影响。结果白色念珠菌在48h时形成成熟的生物膜。黄芩苷在浓度为8．0mg? mL －1时使白色念珠菌生物膜活性及生物量分别减少（90．6±5．2）％和（90．3±2．6）％,生物膜已基本无活性。结论黄芩苷对白色念珠菌生物膜的形成具有抑制作用。     

医院感染光滑念珠菌临床分布及其耐药性分析

目的对医院感染临床标本中分离出的光滑念珠菌临床分布和耐药性分析,了解其临床感染现状,为临床提供病原学诊断和合理使用抗真菌药物的依据。方法对2007～2009年微生物实验室分离鉴定得到的光滑念珠菌,采用ATBFUNGUS3真菌药敏板条进行药敏实验,并对临床分布和耐药性进行统计分析。结果 2007～2009年光滑念珠菌的检出率呈逐年上升趋势,分别为15.6%、16.3%、21.8%,临床分布以痰标本为主,其次是尿液和大便标本。光滑念珠菌对两性霉素B、伏立康唑,5-氟胞嘧啶的敏感率较高,平均敏感率分别是100%,95.8%,97.9%;其次为氟康唑,平均敏感率87.3%;伊曲康唑的抑菌效果则较差,仅为55.4%。结论 2007～2009年光滑念珠菌的临床感染率呈上升趋势,因此,临床微生物实验室要加强对光滑念珠菌的分离培养和药敏实验,指导临床合理用药,有效控制和减少真菌感染。     

光滑念珠菌耐药机制的研究进展

随着念珠菌病患者中感染光滑念珠菌的比例逐年增加,光滑念珠菌已成为除白念珠菌、热带念珠菌外较为常见的致病念珠菌之一。抗光滑念珠菌的药物种类有限,随之而来的耐药问题日益严重,为临床治疗带来困难。本文综述了光滑念珠菌对唑类、棘白菌素类及多烯类药物的耐药机制。     

亚抑菌浓度卡泊芬净对白念珠菌生物膜形成的影响及机制研究

目的 初步探讨亚抑菌浓度(sub-MIC)卡泊芬净对白念珠菌生物膜形成的影响,为清除生物膜策略的制定提供理论基础。方法 用微量肉汤稀释法测定卡泊芬净对白念珠菌的活性,并研究sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌生长的影响;运用菌落计数、XTT染色和扫描电镜分析sub-MIC卡泊芬净作用下形成的白念珠菌生物膜特点;采用实时荧光定量RT-PCR测定Ece1,Can2,Hip1,GAP1,GCN4和Stp2等白念珠菌生物膜相关基因的mRNA表达水平。结果 12株白念珠菌对卡泊芬净的MIC值范围为0.625～0.875μg/mL,sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌的生长有不同程度的抑制作用。针对白念珠菌生物膜的形成,1/4 MIC和1/8 MIC卡泊芬净皆对生物膜中的菌体数量、菌体代谢活性及生物膜结构有抑制作用,而1/16 MIC卡泊芬净则对生物膜无明显影响。1/4 MIC和1/8 MIC卡泊芬净对白念珠菌生物膜相关基因的表达水平也具有抑制作用,1/16 MIC卡泊芬净则对基因表达水平无影响。结论 sub-MIC卡泊芬净对白念珠菌生物膜的形成有一定抑制作用。但白念珠菌在sub-MIC卡泊芬净作用下仍能...     

中药五倍子对白色念珠菌生物膜影响的体外研究

目的:比较五倍子水煎液、氢氧化钙和洗必泰三种根管消毒药物对白色念珠菌生物膜作用效果。方法:在96孔培养板底形成白色念珠菌生物膜,用XTT减低法定量分析生物膜形成过程及三种药物抑制生物膜内细胞生长80%的药物浓度。结果:48h细胞代谢水平最高,细胞活力及耐药性随培养时间延长而增强。结论:白色念珠菌生物膜对氢氧化钙耐药,对洗必泰敏感,五倍子对白色念珠菌生物膜初期阶段具有抑制作用。     

光滑念珠菌的耐药现状与应对策略

侵袭性念珠菌感染是临床常见的侵袭性真菌感染,近年来以光滑念珠菌为首的非白念珠菌感染占比不断增加。光滑念珠菌的耐药率和致死率在全球多个地区都呈上升趋势,其临床治疗难度不断增加。该文从光滑念珠菌的发生率、耐药率和致死率等流行病学现状,光滑念珠菌对常用治疗药物(如三唑类药物、棘白菌素类药物)的耐药机制,以及现有改善光滑念珠菌耐药的策略进行综述,并对新药研发进行展望,旨为侵袭性光滑念珠菌感染的治疗提供参考。     

白色念珠菌生物膜中胞外DNA分布观察

目的：动态观察白色念珠菌生物膜形成过程中胞外DNA的分布情况。方法：在2．0cm^2载玻片上形成白色念珠菌生物膜。用核酸染料对膜中的胞外DNA进行染色．激光共聚焦显微镜下观察不同培养时间的生物膜中胞外DNA的分布。结果：白色念珠菌生物膜中舍有胞外DNA。结论：白色念珠菌生物膜中含有胞外DNA,随培养时间延长,生物膜内胞外DNA的增加,分布在活菌的周围。     

白花丹素联合氟康唑对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合生物膜的作用机制研究

摘要：目的:分析白花丹素单独或者联合氟康唑对金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合生物膜的作用及其机制。方法:收集2019年临床分离的2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）以及2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（MSSA）;利用分光光度计检测白花丹素或联合氟康唑后金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合菌群生长能力变化;菌落计数法测定白花丹素或联合氟康唑作用前后生物膜形成能力差异;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测白花丹素存在与不存在条件下与白色念珠菌DAY185生物膜形成相关基因（ALS1、ALS3和RBT1）以及与金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因（icaA、sarA和cidA）的表达量。结果:白花丹素可以明显降低金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合菌群的生长能力,吸光度(A600)值可降至1.5,当与氟康唑联合使用时效果更佳,A600值可下降至1.0;生物膜形成能力试验显示白花丹素可以明显降低金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合生物膜的形成能力约2～2.5个数量级（P<0.01）;qRT-PCR结果表明：白花丹素主要可以降低白色念珠菌生物膜形成相关的黏附基因ALS3约3倍（P<0.05）以及与金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因sarA约4倍（P<0.05）的表达量。结论:白花丹素可以降低金黄色葡萄球菌与白色念珠菌混合生物膜的能力,其机制主要通过降低白色念珠菌菌丝形成的相关基因ALS3以及与金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因sarA的表达,当联合氟康唑时效果更强。     

白念珠菌生物膜耐药性的研究进展

白念珠菌形成生物膜后耐药性明显增加,几乎对所有抗真菌药物(除了棘球白素和两性霉素B脂质体)具有高度耐药性.白念珠菌生物膜的耐药机制尚未完全清楚,可能与细胞外基质物理屏障作用、细胞营养受限生长代谢缓慢、耐药基因的表达、麦角甾醇的异常、耐药株的存在、附着面粗糙度、微环境的改变以及对抗机体的免疫防御等因素有关,它可能是一种多因素、多机制共同作用的结果.     

Thymol inhibits Candida albicans biofilm formation and mature biofilm

Candida albicans has a high propensity to develop biofilms that are resistant to traditional antifungal agents. Thymol is credited with a series of pharmacological properties including antimicrobial and antifungal effects. As C. albicans biofilms are known to be important factors underlying its virulence and pathogenicity, the aim of this study was to investigate whether thymol can interfere with biofilm formation as well as acting on mature biofilms. Tests of C. albicans strains ATCC 3153A and ATCC MYA 2876 showed that thymol interferes with the starting phases of biofilm production as well as with mature C. albicans biofilms. The metabolic activity of sessile cells was reduced by >90% at twice the minimum inhibitory concentration of planktonic cells. As biofilm is a multifactorial phenomenon, the multiple mechanisms of thymol (terpenes) could act on different steps in the evolution of mature biofilm.     

硝酸咪康唑治疗光滑念珠菌性阴道炎1例

目的 报道1例光滑念珠菌性阴道炎的抗菌治疗.方法 回顾分析1例光滑念珠菌性阴道炎患者的诊治、检查和治疗过程.结果 患者在口服大剂量伊曲康唑和外用咪康唑栓剂治疗后痊愈.结论对于光滑念珠菌引起的阴道炎,咪康唑敏感性好.     

New Eugenol Glucoside‐based Derivative Shows Fungistatic and Fungicidal Activity against Opportunistic Candida glabrata

A new series of glucosides modified in their saccharide units were synthesized, evaluated against Candida sp., and compared to prototype 1 , an eugenol tetracetyl glucoside previously synthesized and shown to be active against Candida glabrata. Among the new glucosides, benzyl derivative 5 was the most promising, showing fungistatic activity at IC₅₀ 18.1  μ m against Candida glabrata (threefold higher than fluconazole) and fungicidal activity with a low IC₉₀ value of 36.2 μm . Moreover, the cytotoxic activity of compound 5 (CC₅₀: 580.9  μ m ), tested in peripheral blood mononuclear cells, suggests its potential as an agent to treat Candida glabrata infections, with a selectivity index of 32. The new eugenol glucoside 5 may be considered as a novel structural pattern in the development of new anti‐Candida drugs.     

氨溴索对白念珠菌生物被膜结构及其真菌死亡率的影响

目的探讨氨溴索对体外白念珠菌(Candida albicans)生物被膜(biofilm,BF)结构及其真菌死亡率的影响。方法置片法培养90min、24h和48h的白念珠菌ATCC 10231 BF,分别用FITC-ConA染色后荧光显微镜下观察无氨溴索干预时BF的形成情况;激光共聚焦显微镜(CLSM)结合BF图像结构分析软件(Image Structure Analyzer,ISA)对BF结构参数进行定量分析,并采用Image Pro Plus 6.0分析软件分析不同浓度氨溴索干预下BF内真菌的死亡率。结果在无氨溴索干预下,运用荧光显微镜可观察到生长在玻片上呈绿色点片状的BF,且随着时间的延长绿色荧光增多增强。ISA软件定量分析显示:在空白对照组中,随着培养时间的延长,BF逐渐变厚,平均扩散距离(Average Diffusion Distance,ADD)和结构熵(Textual Entropy,TE)呈增加的趋势,区域孔率(Areal Porosity,AP)呈下降趋势。0.25mg/mL和1.5mg/mL氨溴索对90min BF、24h BF和48h BF分别作用8h后,与空白对照组相比,BF厚度、ADD、TE均减少(P<0.05);AP增加(P<0.05)。IPP软件分析显示:0.25mg/mL和1.5mg/mL氨溴索对90min BF、24h BF和48h BF分别作用8h后,与空白对照组相比,BF内真菌死亡率增加(P<0.05);高浓度组(1.5mg/mL)与低浓度组(0.25mg/mL)相比,高浓度组BF内真菌死亡率亦增加(P<0.05)。结论氨溴索干预各个时间段白色念株菌BF后,BF空间结构破坏和BF内死菌比例增加。且在一定浓度范围内,高浓度氨溴索作用BF后,其真菌死亡比例增加更明显。     

白色念珠菌耐药性产生的分子机制

耐氟康唑的白色念珠菌已成为临床长期用药治疗的一个突出性问题,目前认为白色念珠菌耐药性产生的分子机制,主要包括麦角甾醇生物合成通路中关键靶酶的变异和高表达、多药耐药蛋白对真菌胞内药物浓度的影响以及生物被膜的形成等.     

Probing the Active Site of Candida glabrata Dihydrofolate Reductase with High Resolution Crystal Structures and the Synthesis of New Inhibitors

Candida glabrata, a fungal strain resistant to many commonly administered antifungal agents, has become an emerging threat to human health. In previous work, we validated that the essential enzyme, dihydrofolate reductase, is a drug target in C. glabrata. Using a crystal structure of dihydrofolate reductase from C. glabrata bound to an initial lead compound, we designed a class of biphenyl antifolates that potently and selectively inhibit both the enzyme and the growth of the fungal culture. In this work, we explore the structure–activity relationships of this class of antifolates with four new high resolution crystal structures of enzyme:inhibitor complexes and the synthesis of four new inhibitors. The designed inhibitors are intended to probe key hydrophobic pockets visible in the crystal structure. The crystal structures and an evaluation of the new compounds reveal that methyl groups at the meta and para positions of the distal phenyl ring achieve the greatest number of interactions with the pathogenic enzyme and the greatest degree of selectivity over the human enzyme. Additionally, antifungal activity can be tuned with substitution patterns at the propargyl and para‐phenyl positions.     

白色念珠菌对氟康唑耐药性的诱导和回复研究

目的　研究体外能否以氟康唑诱导白色念珠菌产生耐药性 ,以及诱导耐药株的稳定性。方法　将临床分离的白色念珠菌敏感菌株增菌后分别加入含氟康唑 4、8、16 μg/ ml的 YPD液体培养基中传代 ,测定诱导后各代菌株的 MIC,以观察达到耐药水平所需的天数。以 16 μg/ ml氟康唑诱导形成的耐药株 ,在不含氟康唑的 YPD液体培养基中连续传代 ,测定各代的 MIC,观察其回复敏感性所需的天数。结果　三种不同浓度的氟康唑体外诱导敏感菌株后 ,分别经 30、36、5 2 d呈现耐药 ,耐药株在不含氟康唑的培养基上连续传代后MIC逐渐下降 ,至第 9代恢复对氟康唑的敏感性。结论　敏感白色念珠菌体外经氟康唑诱导后可呈现耐药 ,且同时对三唑类其他品种也耐药 ;但该耐药性不稳定 ,在无氟康唑的环境中会逐渐回复敏感性。     

白假丝酵母菌对抗真菌药物敏感性分析

目的了解院内白假丝酵母菌感染菌株对常用抗真菌药物敏感情况并探讨伊曲康唑对白假丝酵母菌生物膜形成的影响。方法采用Rosco纸牌扩散法检测附属海慈医院临床分离的白假丝酵母菌对5种抗真菌药物的药物敏感性,采用96孔培养板进行白假丝酵母菌生物膜的培养,利用CCK-8试剂盒来检测生物膜不同时期的活性及对伊曲康唑的敏感性。结果临床标本107例,检出白假丝酵母菌47例,感染率为43．9％。体外药敏试验显示临床株白色假丝酵母菌对抗真菌药两性霉素B和制霉素敏感性较高（45％、85％）,而对康唑类抗真菌药物产生了耐药性。白假丝酵母菌生物膜形成早期（8h）生长较快,24h形成成熟稳定的生物膜,游离态的白假丝酵母菌对伊曲康唑的MIC50为2μg／mL,不同浓度伊曲康唑处理组生物膜活性均有所降低。结论白假丝酵母菌对常用抗真菌药物的耐药性呈上升趋势。经抗菌性处理的生物材料对预防生物膜的形成有抑制作用。