两株携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌耐药性及同源性分析

目的 探讨携带blaNDM-1基因布氏柠檬酸杆菌的耐药特点及同源性。方法 试验菌株为从临床尿液标本中分离到的两株耐碳青霉烯类的布氏柠檬酸杆菌。采用Vitek-2全自动微生物鉴定与药敏分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR扩增blaNDM-1基因并测序验证,质粒接合试验了解blaNDM-1基因是否可通过质粒进行水平传播,并对两菌株进行多位点序列分型(MLST)及ERIC-PCR分析。结果 两株菌对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类、喹诺酮类和碳青霉烯类均高度耐药,并携带blaNDM-1基因。接合试验成功将两株菌的blaNDM-1基因转移至大肠埃希菌EC600。MLST分型为ST171,ERIC-PCR发现扩增条带位置完全相同,即为同一基因型。结论     

2017-2020年某院临床分离耐碳青霉烯阴沟肠杆菌检测及分析

摘要：目的 通过研究本院近3年耐碳青霉烯阴沟肠杆菌,探讨其临床分布及相关耐药基因分布情况。方法 收集2017年1月至2020年9月山西白求恩医院分离的33株耐碳青霉烯阴沟肠杆菌为研究对象,利用全自动快速生物质谱检测系统(美国Bruker,MicroflexLT/SH)进行细菌鉴定,VITEK2-Compact全自动微生物分析系统进行细菌药敏试验。采用改良碳青霉烯灭活试验进行耐药表型筛选。采用PCR方法检测碳青霉烯酶基因(blaIMP、blaKPC、blaNDM 、blaVIM和blaOXA-48)。对所有菌株进行MLST分型和同源性分析。质粒接合转移实验研究耐药质粒的传播。结果 22株阴沟肠杆菌对厄他培南、亚胺培南、美罗培南均耐药,11株仅对厄他培南耐药。其中16株阴沟肠杆菌产NDM-1,4株产NDM-5,2株产IPM-1,1株菌同时产NDM-1和KPC-2。11株仅对厄他培南耐药阴沟肠杆菌中有两株检出blaNDM-1、两株检出blaKPC-2基因。MLST分型主要流行株为ST418型。质粒接合转移实验有14株转移成功。结论 本院耐碳青霉烯类阴沟肠杆菌从2017年逐年增加,2020年出现暴发流行。携带的碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,ST418型菌株占多数。耐药基因可通过质粒水平传播,所以加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键。     

北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48)；mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP，其中64株检出blaKPC-2基因，1株检出blaNDM-1基因，1株检出blaNDM-5基因，检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型，其中以ST11为主，共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药，对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现，仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上，其他均定位在质粒上，有4株细菌接合成功，其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒，质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5，下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论 北京地区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子型别多态性大，同时又存在优势序列型，为ST11型。携带blaKPC-2基因的质粒大小不一，提示其遗传背景可能比较复杂。与blaKPC-2基因不同，对比国内外其他研究发现blaNDM-5基因的遗传背景比较稳定，IncX3型质粒在介导blaNDM-5基因的传播上发挥着重要作用。     

北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌分子流行病学和遗传特征调查

目的 调查北京市2016—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶基因流行现状和遗传背景。方法 挑选2016—2017年北京市细菌耐药监测项目收集的厄他培南耐药肺炎克雷伯菌为碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)。PCR扩增检测CRKP中碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaSME、blaIMI、blaGES、blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaSIM、blaGIM、blaNDM和blaOXA-48);mCIM和eCIM法检测碳青霉烯酶。脉冲场凝胶电泳和多位点序列分析检测不同菌株的同源性。采用美国临床实验室标准协会(CLSI)推荐的琼脂二倍稀释法检测常见抗菌药物对其最低抑菌浓度(MIC)。采用S1-PFGE和Southern Blotting技术进行blaKPC-2和blaNDM-5基因定位。采用接合实验检测blaKPC-2和blaNDM-5基因的水平传递性。三代测序技术分析blaNDM-5基因遗传背景。结果 2016—2017年北京14家二级和三级医院收集的肺炎克雷伯菌中共筛选出78株CRKP,其中64株检出blaKPC-2基因,1株检出blaNDM-1基因,1株检出blaNDM-5基因,检出率分别为82.1%、1.3%和1.3%。mCIM和eCIM检测的敏感度和特异度均为100%。MLST将66株碳青霉烯酶基因阳性菌分为12个不同的ST型,其中以ST11为主,共46株(69.7%)。PFGE结果显示共有52个PFGE型别。所有碳青霉烯酶基因阳性菌均对碳青霉烯类抗生素耐药,对其他常见抗菌药物如β-内酰胺类合剂、第三/四代头孢菌素、单环β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药率大于87%。对携带blaKPC-2和blaNDM-5基因的CRKP进行基因定位分析发现,仅一株菌所携带blaKPC-2基因定位在染色体上,其他均定位在质粒上,有4株细菌接合成功,其中携带blaNDM-5基因的是一个大小约为46kb的质粒,质粒类型为IncX3型。遗传背景分析blaNDM-5基因上游为Tn3、IS3000、ISAba125和IS5,下游为bleMBL、trpF、dsbC和IS26。结论     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性，为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10，采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)，TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功，电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性，TaqMan RT-PCR检测可快速准确地为临床治疗提供依据。     

细菌NDM-1质粒耐药表型与其表达的相关性研究

目的 探讨NDM-1质粒携带菌株耐药表型与其基因表达的相关性,为临床抗菌药物选择提供理论参考。方法 携带NDM-1的质粒电转化入大肠埃希菌TOP10,采用琼脂平板倍比稀释法测定碳青霉烯类药物对野生株和电转化子的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),TaqMan RT-PCR检测碳青霉烯类耐药菌株的blaNDM-1基因表达及亚-MIC亚胺培南诱导对blaNDM-1基因表达的影响。结果 12株产NDM-1菌株中共有8株电转化成功,电转化子对碳青霉烯类药物的耐药性与野生菌株基本一致。细菌对碳青霉烯类的耐药性与blaNDM-1基因表达成正比。亚-MIC亚胺培南诱导后菌株对碳青霉烯类药物的MIC值和blaNDM-1基因表达均显著高于野生株。结论 碳青霉烯类耐药菌株耐药表型与blaNDM-1基因表达具有正相关性,TaqMan     

不同感染途径CREC分子分型特点及耐药分析#br#

目的 探讨我院不同感染途径耐碳青霉烯大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli, CREC)分子分型特点以及耐药情况,为临床预防和治疗提供依据。方法 收集我院2017年9月—2018年12月间不同感染途径获得的CREC共14株;菌株鉴定及药敏采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定/药敏系统,联合纸片扩散法(KB法)、E-Test方法进行药敏试验;用PCR技术分别对碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(blaSHV、blaTEM、blaCTX和blaOXA-1)、AmpC酶耐药基因(blaFOX、blaMOX和blaDHA)、膜孔蛋白基因(ompk35和ompk36)进行检测,同时进行质粒接合试验,掌握我院CREC耐药基因分布及流行情况;采用PFGE对14株不同感染途径CREC进行同源性分析,分析我院CREC分子流行特点。结果 临床资料：14株CREC主要来自重症医学科,占57.14%(8/14);痰标本检出5株,尿标本检出4株,血液标本检出2株,灌洗液、脑脊液、导管尖端各检出1株。耐药基因检出情况：14株CREC有12株携带blaNDM-5、1株携带blaKPC-2和1株携带blaNDM-1;我院CREC通常携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有ompk36基因的缺失。接合试验结果：仅1株CREC接合试验成功。PFGE分型结果：14株CREC分为4个PFGE分型,其中PT03为优势型别,包含11株菌。菌株耐药情况：CREC耐药情况十分严重,对单环β-内酰胺类、头孢类、左氧氟沙星、碳青霉烯类药物均表现耐药;而对氨基糖苷类以及磺胺类药物也达到92.86%的耐药率;对替加环素和多黏菌素均表现为敏感。结论     

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌种群结构和耐药机制研究

耐碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)是临床常见的耐药菌之一。本研究对88株全国49家医院收集的CRKP菌株进行碳青霉烯类耐药基因检测,其中65株(73.9%)检出blaKPC类基因(64株检出blaKPC-2、1株检出blaKPC-3)、9株(10.2%)检出blaNDM类基因(均为blaNDM-1)、7株(8.0%)检出blaIMP类基因(均为blaIMP-4)。通过多位点序列分型(multi-locus sequence typing, MLST)将88株CRKP分为25个MLST型,其中ST11型为优势型别,包含48株菌。88株CRKP通过脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis, PFGE)分为79个PFGE型,呈现高度多态性。本研究揭示了我国blaKPC-2阳性CRKP菌株存在克隆化现象,存在ST11型流行克隆;而blaNDM-1和blaIMP-4阳性CRKP菌株分子型别多态性大,还没形成流行克隆。需要密切监测并采取措施控制携带blaKPC-2基因的ST11型CRKP的传播扩散。     

不同感染途径CREC分子分型特点及耐药分析#br#

目的 探讨我院不同感染途径耐碳青霉烯大肠埃希菌(carbapenem-resistant Escherichia coli, CREC)分子分型特点以及耐药情况,为临床预防和治疗提供依据。方法 收集我院2017年9月—2018年12月间不同感染途径获得的CREC共14株;菌株鉴定及药敏采用VITEK2-Compact全自动细菌鉴定/药敏系统,联合纸片扩散法(KB法)、E-Test方法进行药敏试验;用PCR技术分别对碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)、超广谱β-内酰胺酶基因(blaSHV、blaTEM、blaCTX和blaOXA-1)、AmpC酶耐药基因(blaFOX、blaMOX和blaDHA)、膜孔蛋白基因(ompk35和ompk36)进行检测,同时进行质粒接合试验,掌握我院CREC耐药基因分布及流行情况;采用PFGE对14株不同感染途径CREC进行同源性分析,分析我院CREC分子流行特点。结果 临床资料：14株CREC主要来自重症医学科,占57.14%(8/14);痰标本检出5株,尿标本检出4株,血液标本检出2株,灌洗液、脑脊液、导管尖端各检出1株。耐药基因检出情况：14株CREC有12株携带blaNDM-5、1株携带blaKPC-2和1株携带blaNDM-1;我院CREC通常携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有ompk36基因的缺失。接合试验结果：仅1株CREC接合试验成功。PFGE分型结果：14株CREC分为4个PFGE分型,其中PT03为优势型别,包含11株菌。菌株耐药情况：CREC耐药情况十分严重,对单环β-内酰胺类、头孢类、左氧氟沙星、碳青霉烯类药物均表现耐药;而对氨基糖苷类以及磺胺类药物也达到92.86%的耐药率;对替加环素和多黏菌素均表现为敏感。结论 我院CREC主要来自呼吸道标本,且存在克隆的流行,其优势型别的菌株多携带blaNDM-5以及ESBLs耐药基因,并伴有Ompk36基因的缺失,且表现对多种抗生素呈高度耐药,提示我们应加大对CREC的管控,需密切监测并采取控制措施,阻断CREC在院内的传播和暴发。     

2016—2018年某医院CRE临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因检测

目的 了解耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE)的临床分布、耐药性及碳青霉烯酶基因型,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供依据。方法 收集2016年1月至2018年12月蚌埠医学院第一附属医院临床分离的CRE菌株,采用VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定药敏分析仪进行药敏实验。药敏结果判读参照CLSI 2018版标准,WHONET 5.6软件统计分析。PCR方法检测常见碳青霉烯酶基因。结果 2016年1月至2018年12月我院临床标本中共分离出626株CRE,总检出率为12.46%。其中主要为肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,分别占84.35%(528/626)和9.27%(58/626)。标本来源主要为痰56.87%(356/626)、尿液12.14%(76/626)、血液10.38%(65/626)。病区分布主要为急诊内科32.75%(205/626)和重症监护病房25.08%(157/626)。626株CRE菌株对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑和阿米卡星耐药率分别为56.07%和69.65%,其余在测试的抗菌药物耐药率均高于80%。626株CRE中602株检出携带常见碳青霉烯酶基因。602株菌主要包括肺炎克雷伯菌515株(510株携带blaKPC-2基因,5株携带blaNDM-1基因,2株携带blaIPM基因);大肠埃希菌54株(43株携带blaKPC-2基因,13株携带blaNDM-1基因,1株携带blaIPM基因)。其中3株大肠埃希菌和2株肺炎克雷伯菌同时检出blaKPC-2基因和blaNDM-1基因。未检出blaVIM和blaOXA-48基因。结论 CRE菌株对常用抗菌药物耐药严重,主要的碳青霉烯酶基因为blaKPC-2型。应加强对CRE菌株的医院感染防控。     

广东省肇庆市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药性与MLST分型研究

目的 了解广东省肇庆市肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae, KP)临床分离株的抗生素耐药情况及多位点序列分型(multilocus sequence typing, MLST)特征。方法 收集肇庆市两家医院KP临床分离株63株，采用肉汤微量稀释法进行30种抗生素的体外药物敏感性试验，并对所有菌株进行多位点序列分型。结果 63株KP临床分离株的耐药谱特点可分为4类，即全敏感的高毒力肺炎克雷伯菌(hypervirulent K. pneumoniae, hvKP)、产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(extended spectrum β-lactamases K. pneumoniae, ESBLsKP)、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant K. pneumoniae, CRKP)和其他类型的多重耐药肺炎克雷伯菌(multidrug-resistant K. neumoniae，MDRKP)；MLST分型结果显示63株临床分离株可分成41个ST型。其中，ESBLsKP以ST37型(9株，39.13%)为主，CRKP以ST11型(5株，62.50%)为主，hvKP以ST65(5株，25.00%)型和ST23(3株，15.00%)型为主，而其他类型的多重耐药KP的ST型(12株9种ST型)则呈现明显的多态性。结论 我市肺炎克雷伯菌临床分离株的耐药情况比较严重，要加强院内感染监测，警惕其成为优势菌型并引发院内感染的风险。     

太原地区产质粒介导AmpC酶细菌的耐药性及分子流行病学研究

目的：了解太原地区产质粒介导AmpC β-内酰胺酶革兰阴性菌耐药性及分子流行病学情况。方法：收集太原地区四家医院2004年9月～2006年8月间临床分离的95株产质粒介导AmpC酶革兰阴性菌，K—B纸片扩散法检测耐药性；肠杆菌科基因组内重复一致序列一聚合酶链反应（ERIC—PCR）进行克隆株的DNA分型，确定同源性。结果：95株产质粒AmpC酶菌株对第三代头孢菌素类、头霉素明显耐药，耐药率都在80％以上，对第四代头孢的耐药率为44．2％，对单环菌素、喹诺酮类和氨基糖苷类均有不同程度的耐药，对碳青霉烯类均敏感。ERIC-PCR图谱可以分为25个不同克隆。结论：95株产质粒介导AmpC酶的革兰阴性菌呈多克隆模式，但是不同医院间有很大的相似性。提示中小城市可能更容易整个城市携带耐药质粒的传播和流行。对产AmpC酶细菌感染，首选碳青霉素烯类如亚胺培南，第四代头孢菌素如头孢吡肟有一定疗效。     

Identification and molecular characterisation of New Delhi metallo-β-lactamase-1 (NDM-1)- and NDM-6-producing Enterobacteriaceae from New Zealand hospitals

The global spread of New Delhi metallo-β-lactamase (NDM) is of significant public health concern. This study sought to determine whether bla(NDM) was present in Enterobacteriaceae isolates displaying resistance to carbapenems that were submitted to the National Antibiotic Reference Laboratory, Institute of Environmental Science and Research (Porirua, New Zealand) during 2009 and 2010. Isolates were tested for the presence of β-lactamase genes and 16S rRNA methylase genes by polymerase chain reaction (PCR) and sequencing. Plasmid transfer studies were undertaken on isolates found to be harbouring bla(NDM). Molecular typing was performed by multilocus sequence typing (MLST). The bla(NDM-1) gene was identified in four Enterobacteriaceae isolates (two Escherichia coli, one Klebsiella pneumoniae and one Proteus mirabilis) from four patients in New Zealand hospitals in 2009 and 2010. In addition, the bla(NDM-6) gene, which differed from bla(NDM-1) by a point mutation at position 698 (C→T), was also identified in an E. coli isolate from the same patient who harboured the bla(NDM-1)-positive P. mirabilis. All four patients had recently been hospitalised or received health care in India. Four of the isolates also produced a CTX-M-15 extended-spectrum β-lactamase and/or plasmid-mediated AmpC β-lactamase, and all five isolates harboured the plasmid-mediated 16S rRNA methylase rmtC gene. The E. coli types were diverse by MLST, and the K. pneumoniae isolate belonged to the internationally disseminated sequence type 11 (ST11) clone. These findings further illustrate the diversity of phenotypic and genotypic features found in association with bla(NDM), in addition to documenting the international spread of this resistance mechanism, notably into a country with historically low rates of antimicrobial resistance.     

院内多重耐药鲍曼不动杆菌分子流行病学特征研究

目的 探讨某三级医院4年间多重耐药鲍曼不动杆菌(MDRAB)的分子流行病学特征。方法 对2013-2016年4年间某院临床筛选出的51株MDRAB用PCR法检测碳青霉烯酶基因, 多位点序列分型(MLST)鉴定菌株之间的亲缘关系。结果 51株MDRAB 100%都携带blaOXA-51型碳青霉烯酶基因，94.12%携带blaOXA-23型碳青霉烯酶基因。MLST分析发现有3种已报道的STs，依次为ST191(52.94%)、ST208(31.37%)和ST136(15.69%)，它们都属于克隆复合体CC92。其中4年间ST208在医院内持续性的播散，ST191和ST136在不同时间段间断性的播散。结论 该院各时间段分离的MDRAB都发生过相同ST克隆株的暴发流行，警示医院应加强预防院内感染暴发。