抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用

抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白的多肽片段,是以IgG型为主的抗体,对类风湿性关节炎（RA）具有很好的敏感性和特异性,且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重.本文对抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用做一综述.     

类风湿性关节炎检测抗CCP抗体RF水平的临床意义

类风湿性关节炎（rheu matoid arthritis，RA）是一种常见的以关节组织慢性炎症表现为主的自身免疫性疾病，类风湿因子（RF）是临床上常用来诊断RA的血清学指标，但RF诊断RA方面特异性有限。2000年Sehellekensur首次合成环瓜氨酸肽（CCP），建立酶联免疫吸附试验（ELISA）检测RA患者血清中的抗CCP抗体，该抗体在诊断RA中有较高的敏感性和特异性，并且是一项评价患者预后的重要指标。     

抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）与类风湿因子（RF）在类风湿性关节炎诊断中的探讨

目的探讨抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子在类风湿性关节炎诊断上的应用。方法选择类风湿性关节炎患者74例,非类风湿性自身免疫性疾病患者55例,分别用酶联免疫吸附试验测抗环瓜氨酸肽抗体,用乳胶增强免疫比浊法测类风湿因子,分析各组抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子有无相关性。结果类风湿因子对类风湿性关节炎敏感性为79.7%,特异性为52.7%。抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎敏感性为51.4%,特异性为96.4%。类风湿因子与抗环瓜氨酸肽抗体联合检测的敏感性72.9%、特异性为86.7%。结论抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿性关节炎的诊断中敏感性比类风湿因子低,但特异性比类风湿因子高,抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子的联合应用,更有助于类风湿性关节炎的早期诊断。     

抗CCP抗体和RF联合检测类风湿性关节炎的临床意义

目的评价抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和类风湿性关节炎因子（RF）在类风湿性关节炎（RA）中的意义。方法选择类风湿性关节炎患者55例,非类风湿性自身免疫性疾病患者50例,正常人血清50例分别用酶联免疫吸附试验测抗环瓜氨酸肽抗体,用免疫比浊法测类风湿因子,对各组抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿因子进行相关统计学分析。结果 55例RA患者抗-CCP和RF阳性率分别为63.63%、67.27%,阳性率均高于其他疾病组和健康对照组（P〈0.01）;抗-CCP和RF对RA诊断的灵敏度分别为63.63%、67.27%,特异性分别为98.00%、79.00%,RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体,而抗CCP抗体对RA的特异性显著高于RF。二者联合时特异性达到99.58%。结论抗-CCP在RA诊断中有良好的灵敏度和特异性,和RF联合检测对诊断RA有重要意义。     

胶原性关节炎大鼠血清中IL-17水平的分析

目的 检测胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清IL-17的水平.并分析其与抗Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ,CII)抗体以及关节炎症指数的关系.方法 建立CIA模型.ELISA法检测IL-17及抗CII抗体的水平;并观察CIA大鼠炎症指数.结果 CIA大鼠血清IL-17和抗CII抗体水平均高于对照组.且CIA组IL-17与关节炎炎症指数和血清抗CII抗体水平呈正相关关系.结论 CIA大鼠血清IL-17水平升高,且与病情活动有关.     

沙眼衣原体Tarp蛋白B细胞表位的预测与鉴定

目的：预测并鉴定沙眼衣原体（Ct）Tarp蛋白的B细胞表位,为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。方法：利用生物信息学软件综合分析、预测筛选E血清型CtTarp蛋白的B细胞表位,获得6个潜在目的表位。将人工合成的表位肽段与弗氏佐剂充分乳化,经背部皮下多点注射途径免疫BALB/c小鼠（每次100μg/只,3只/组,共24只）,间隔2周,共免疫3次。采用ELISA法检测免疫小鼠血清中Tarp蛋白特异性抗体IgG及其亚类IgG1、IgG2a,以及阴道分泌物中Tarp蛋白特异性sIgA抗体;进一步采用间接免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Westernblot法检测表位免疫的血清抗体与Tarp蛋白结合的特异性。结果：筛选并鉴定了Tarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位（aa171-186）,该表位可以刺激小鼠产生较高水平的Tarp蛋白特异性IgG抗体和sIgA抗体,且抗体亚类以IgG1为主。免疫荧光实验、免疫沉淀实验和Westernblot法检测结果显示,该段表位肽免疫血清抗体可特异性识别Tarp蛋白。结论：获得了CtTarp蛋白的一个免疫优势B细胞表位,为进一步研究Tarp蛋白的生物学特性及表位疫苗研制奠定基础。     

RF与抗CCP抗体检测在RA诊断中的价值

类风湿性关节炎（ RA）是一种以关节慢性炎症为特征的自身免疫性疾病,目前发病原因不明,其发病率为0．32％～0．36％［1］,主要临床表现为多关节的慢性炎症,最终可易导致不可逆的骨及软骨关节的破坏,预后较差,早期诊断是疾病治疗的关键,以往RA的诊断主要依据临床及血清类风湿因子（ RF ）等检测。2000年首次人工合成环瓜氨酸肽（ CCP ）,并被应用于RA患者的抗CCP抗体的检测中［2］,但两者的敏感性和特异性均有限。通过对CCP及RF的联合检测,可以提高其诊断价值。     

抗-CCP抗体在类风湿性关节炎中的临床意义

近年来,在类风湿性关节炎(RA)患者中发现了多种新的自身抗体,特别是针对自身抗原瓜氨酸肽如聚丝蛋白和它的环状形式即环瓜氨酸肽(CCP)的自身抗体,因其在RA诊断中具有高度敏感性和特异性而尤受关注。大量研究表明,抗-CCP抗体可作为RA早期诊断及预后评估的有效血清学标记。联合检查抗-CCP抗体以及类风湿因子(RF)和抗-Sa抗体,对于疾病的诊断具有很高的特异性。抗瓜氨酸蛋白抗体产生于RA患者的关节局部,关节滑膜内的瓜氨酸肽可能是导致RA患者产生自身抗体的诱因。遗传因素如肽基精氨酸脱亚氨基酶基因PAD I的多态性,可能与自身耐受失衡并诱导针对瓜氨酸肽的自身免疫反应有关。     

SARS病毒N蛋白真核表达质粒构建及诱导的体液免疫

目的构建SARS病毒核衣壳蛋白（N）的真核表达质粒，并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答。方法采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段，定向克隆入真核表达栽体pVAC，构建pVAC-N重组质粒；大量制备该重组质粒，经基因枪腹部皮内注射免疫BALB／c小鼠三次，间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价。结果成功构建了重组表达质粒pVAC-N，免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体。结论构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体，为SARS疫苗的进一步研究打下基础。     

早期类风湿性关节炎生物标志物研究进展

查阅相关文献,从类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白(MCV)抗体、抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体、14-3-3η蛋白、葡萄糖6磷酸异构酶(G6PI)等6个方面对早期类风湿性关节炎的生物标志物研究进行概述,总结有利于早期类风湿性关节炎诊断的特异性生物标志物,指出以上生物标志物在检测特...     

新型鸡Ⅱ型胶原基因疫苗治疗胶原诱导的大鼠类风湿性关节炎的疗效观察

目的系统观察含编码鸡Ⅱ型胶原基因（CCOL2A1）疫苗pcDNA-CCOL2A1对大鼠胶原诱导的关节炎（CIA）的治疗作用。方法以鸡Ⅱ型胶原（CCⅡ）诱导的Wistar大鼠为类风湿关节炎（RA）模型即CIA,系统观察一次性尾部静脉注射20μg/kg、200μg/kg、400μg/kg3个不同剂量pcDNA-CCOL2A1基因疫苗和pcDNA3．1空载体对CIA的治疗效果。通过评估治疗前后CIA鼠关节肿胀指数的改善,结合放射影像学和组织病理学方法,系统分析pcDNA-CCOL2A1基因疫苗对CIA关节炎的治疗作用。结果CIA大鼠在注射pcDNA-CCOL2A1基因疫苗后的第5天,在200μg/kg剂量组就可观察到CIA大鼠四肢关节肿胀程度明显减轻;放射影像学和组织病理学检查显示,经过200μg/kg治疗后,使关节软骨及其下面的骨小梁结构与正常组接近,关节软骨及其下面的骨质结构得到保护,可使炎症分数下降为对照组的50％,仅关节滑膜略有增生,与空载体组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;而20μg/kg和400μg/kg两剂量组与空载体组比较则无任何治疗效果（P〉0．05）。结论pcDNA-CCOL2A1基因疫苗对CIA大鼠关节炎有显著的治疗作用。     

Sa抗原相关蛋白质的研究

目的 研究类风湿关节炎（RA）特异性抗Sa抗体识别的Sa抗原,探讨Sa抗原的相关蛋白质。方法 从人胎盘组织阴离子交换柱层析法纯化Sa抗原,应用免疫印迹法检测155例各种风湿病患者血清的抗Sa抗体,155例患者中类风湿关节炎71例,强直性脊柱炎11例、银屑病关节炎7例、反应性关节炎7例、幼年特发性关节炎4例、骨性关节炎5例、风湿性多肌痛6例、痛风6例、系统性红斑狼疮7例、干燥综合征10例、炎性肌病8例、混合性结缔组织病4例、白塞病6例、成人Still病3例。切取与免疫印迹法阳性条带相对应的电泳胶内条带,胰蛋白酶胶内酶解,用高效液相色谱-电喷雾-离子阱质谱鉴定目标蛋白质。以大肠杆菌重组表达目标蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。瓜氨酸化修饰重组蛋白质作为抗原,以免疫印迹法检测相应抗体。结果 抗Sa抗体表现为相对分子质量为50000（和）55000的阳性印迹条带,在155例风湿病中,对RA的诊断敏感性和特异性分别为47．9％和95．2％。质谱鉴定Sa抗原相关蛋白质为波形蛋白（Vimentin）。抗波形蛋白抗体在RA组与其他风湿病组的阳性率差异有统计学意义（P=0．005）,对RA的诊断敏感性和特异性分别为36．6％和83．3％,但与抗Sa抗体的一致性差（Kappa=0．316）。抗瓜氨酸化波形蛋白抗体阳性率在RA组较其他风湿病组高（P〈0．01）,对RA的诊断敏感性和特异性分别为49．3％和86．9％,且与抗Sa抗体的一致性较高（Kappa=0．746）。结论 运用质谱技术鉴定的Sa抗原相关蛋白质波形蛋白,瓜氨酸化修饰后的抗原性与Sa抗原相仿,提示瓜氨酸化波形蛋白与Sa抗原密切相关。     

胶原性关节炎大鼠滑膜病理特征及TNF-α、TGF-β表达的变化

目的观察II型胶原诱导的胶原性关节炎(CIA)大鼠模型滑膜组织病理学特征及相关细胞因子表达水平的变化。方法60只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=50),模型组以牛源性II型胶原皮下注射诱导建立CIA模型,造模成功后随机选取10只大鼠进行病理观察并做免疫组化指标TNF-α、TGF-β检测,并与对照组进行比较。结果与对照组比较,模型组大鼠滑膜组织大量炎性细胞浸润、增生。对照组滑膜组织中TNF-α阳性滑膜细胞数呈低表达,且染色浅,模型组呈高阳性表达,深染色,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);对照组滑膜组织中TGF-β表达较活跃,模型组则表达少而染色浅,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论细胞因子网络失衡与CIA大鼠的发病相关。     

青藤碱对胶原诱导性大鼠关节炎症的影响及其作用机制

目的观察青藤碱对胶原诱导性大鼠关节炎症的作用特点,初步探讨其作用机制。方法实验采用24只雌性Wistar大鼠,随机分为4组,其中3组胶原诱导成功后,分别给予注射用水、甲氨喋呤、青藤碱。第4组作为正常对照组,分别于第1d、6d、11d、16d、21d记录大鼠右侧后肢关节肿胀程度。21d,~脏取血,酶联免疫吸附法测定血清中肿瘤坏死因子一a含量、抗II型胶原抗体含量。处死大鼠,取脾脏分离淋巴细胞,行淋巴细胞转化试验,取右踝关节行钼靶摄片、病理切片观测关节病变情况。结果给药后第6天起甲氨喋呤组关节炎症评分与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。第11天起青藤碱组与模型组比较差异有统计学意义。青藤碱组及甲氨喋呤组大鼠血清抗Ⅱ型胶原抗体含量与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）,青藤碱与甲氨喋呤对胶原刺激的淋巴细胞增殖有明显抑制作用（P〈0．05）,钼靶摄片及病理学观察也同样提示青藤碱与甲氨喋呤对关节破坏有抑制作用。而各干预组与模型组比较血清中肿瘤坏死因子一Ⅸ含量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论青藤碱能够减少关节局部炎症细胞浸润,缓解关节炎症。通过抑制滑膜中CYR-61表达,进而抑制滑膜炎症细胞粘附浸润为其抗炎机制之一。     

Expression of Peptidylarginine Deiminase 4 and Protein Tyrosine Phosphatase Nonreceptor Type 22 in the Synovium of Collagen-Induced Arthritis Rats

Objective To study the expression level of peptidylarginine deiminase 4（PADI4） and protein tyrosine phosphatase nonreceptor type 22（PTPN22） in the synovium of rat model of collagen-induced arthritis, and to explore their possible therapeutic role in rheumatoid arthritis. Methods Thirty-two female Wistar rats weighing 100±20 g were randomly assigned into 3-week collagen-induced arthritis（CIA） model group（n=8）, 4-week CIA model group（n=8）, 6-week CIA model group（n=8）, and the control group（n=8）. The body weight changes of each group were recorded. The expression levels of PADI4 and PTPN22 were detected and compared by the methods of immunohistochemical staining and Western blot. Results Arthritis of rat began to form 14 days after sensitization and the joint swelling reached peak at 28 days. The weights of the rats slowly grew both in CIA model groups and the control group. Immunohistochemical staining results showed that the positive expression of PADI4 and PTPN22 was mainly located in cartilage peripheral mononuclear cells, the cytoplasm of infiltrated cells, and bone marrow cavity. There were significant differences in the optical density of PADI4 and PTPN22 among CIA model groups and the control group（PADI4, 0.2898±0.012, 0.2982±0.022, 0.2974±0.031, 0.2530±0.013 in 3-week CIA model, 4-week CIA model, 6-week CIA model and control groups; PTPN22, 0.2723±0.004, 0.2781±0.010, 0.2767±0.008, 0.2422±0.019; all P 〈0.05）. The expression bands of PADI4 were observed in Western blot 3 weeks after initial immunization, the thickest in the 4th week, and decreased in the 6th week. The expression bands of PTPN2 were observed at all the time points, with no obvious time-dependent trend. Conclusions PADI4 and PTPN22 are obviously correlated with CIA in rat model. PADI4 is expressed at early stage of the disease, while the expression of PTPN22 sustains throughout the course.     

全反式视黄酸对CIA大鼠血清炎性细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响

目的 探讨全反式视黄酸（ATRA）对胶原诱导的类风湿关节炎模型大鼠（CIA大鼠）关节炎症反应、炎性相关细胞因子及软骨损伤相关蛋白表达的影响。方法 将雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组和造模组,造模组采用牛CⅡ型胶原和不完全弗氏佐剂诱导关节炎。造模成功后,将模型鼠随机分为CIA模型组和ATRA治疗组。ATRA治疗组给予不同剂量（0.50 mg/kg、1.00 mg/kg）的ATRA腹腔注射,3次/周,连续治疗6周。空白对照组给予等体积的生理盐水,CIA模型组给予等体积玉米油。观察CIA大鼠关节炎指数（AI）评分、血清炎性相关细胞因子的水平、膝和踝关节组织病理形态学改变及软骨损伤相关蛋白的表达。结果 ATRA干预6周后,不同剂量ATRA治疗组AI评分与CIA模型组相比,差异均无统计学意义（ P>0.05）;HE染色示,CIA模型组和ATRA 1.00 mg/kg剂量组膝、踝关节结构紊乱,ATRA 0.50 mg/kg剂量组膝关节结构有所改善。此外,与CIA模型组相比,ATRA可抑制促炎细胞因子干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α、白介素-17A的分泌（ P<0.05）,促进白介素-4的分泌（ P<0.05）;下调解整链蛋白金属蛋白酶（ADAMTS）-4、基质金属蛋白酶（MMP）3、MMP1的表达（ P<0.05）。结论 ATRA可在一定程度上抑制促炎因子分泌,纠正Th1/Th2及Th17/Treg失衡,并抑制软骨损伤相关酶类的蛋白表达,对类风湿关节炎有潜在的有利影响。     

耐受型DC/TGF-β联合诱导的iTreg细胞能有效抑制自身免疫性关节炎

目的 初步探讨通过成熟耐受型DC(mtDC)与转化生长因子-β(TGF-β)联合诱导的诱导型调节性T细胞(iTreg细胞)对自身免疫性关节炎的抑制作用.方法 在体外,对CD4+CD25-T细胞进行TGF-β诱导和mtDC细胞扩增,获得iTregmtDC细胞.通过流式细胞术、细胞计数、CBA等方法检测iTregmtDC细胞的表型、对CD4+T效应细胞增殖的抑制作用.在体内实验中,iTregmtDC细胞以1×106个细胞/ml的剂量过继性输注入胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠体内,并通过关节病变评分、病理组织病变评分、血清中细胞因子、总anti-CⅡIgG的分泌情况来评价iTregmtDC细胞对CIA的抑制作用.结果 在体外,通过TGF-β 和mtDC细胞两轮诱导/扩增后,TregmtDC细胞得以大量扩增,并能持续表达高水平的Foxp3.在体外,与iTreg细胞相比,TregmtDC细胞有更强的抑制效应T细胞增殖的能力.在体内,与iTreg细胞相比,TregmtDC细胞的过继性输注能更有效地减少发病关节处的炎性浸润,进一步改善CIA的症状;对CIA小鼠体内细胞因子的分泌有更强的调节能力,能更显著地减少炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)的分泌,并促进大量TGF-β产生;更明显地降低总anti-CⅡIgG的分泌量;进而更有效地抑制CIA病程的发展.结论 与iTreg相比,iTregmtDC细胞能通过调节体内细胞因子和抗CⅡIgG的分泌更有效地抑制CIA病程发展.     

芍甘附子汤加味对CIA大鼠关节滑膜病理及血清IL-2、IL-17A与TNF-α表达水平的影响

[目的]研究芍甘附子汤加味对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型关节滑膜病理及血清白细胞介素(IL)-2、IL-17A及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的干预作用,并探讨其作用机制.[方法]随机将24只大鼠分为正常组、模型组、雷公藤组及芍甘附子汤组.除正常组外,其余各组均用胶原乳液多点皮内注射建立关节炎动物模型.模型建立后...     

Attenuation of Collagen Induced Arthritis by Centella asiatica Methanol Fraction via Modulation of Cytokines and Oxidative Stress

Objective To investigate the anti-inflammatory, antioxidant and anti-arthritic effects of Centella asiatica methanolfraction(CaM E) on collagen-induced arthritis(CIA), an animal model of rheumatoid arthritis. Methods Arthritis was induced in female wistar rats by immunization with porcine type II collagen. The CIA rats were treated orally with CaM E(50, 150, and 250 mg/kg/day) for 15 d(beginning on day 21 of the experimental period). The clinical, histological, biochemical, and immunological parameters were assessed. Results CaM E treatment(150 and 250 mg/kg) significantly attenuated the severity of CIA and reduced the synovial inflammation, cartilage erosion, and bone erosion as evident from both histological and radiographic data. The escalated plasma levels of pro-inflammatory cytokines TNF-α, IL-1β, IL-6, and IL-12 alongwith nitric oxide in CIA rats decreased significantly on CaM E treatment. The serum levels of type-II collagen antibody were significantly lower in rats of CaM E(150 and 250 mg/kg) treated group than those in the arthritic group. Furthermore, by inhibiting the above mediators, CaM E also contributed towards the reversal of the disturbed antioxidant levels and peroxidative damage. Conclusion Our results clearly indicate that oral administration of CaM E suppresses joint inflammation, cytokine expression as well as antioxidant imbalance, thereby contributing to an amelioration of arthritis severity in CIA rats.     

通痹灵对CIA大鼠软骨细胞凋亡及其调控基因p53、Bcl-2表达作用的比较研究

目的探讨中药通痹灵在类风湿关节炎(RA)发病中对软骨细胞凋亡及其基因p53、Bcl-2调控的作用机制.方法采用大鼠CIA模型,分别予通痹灵、甲氨蝶呤片(MTX)、雷公藤治疗36 d,关节软骨免疫组化染色,计算机图像分析系统对软骨p53、Bcl-2基因蛋白及细胞凋亡的表达进行分析,比较各组差异.结果 CIA大鼠软骨细胞中存在高度活跃的p53蛋白表达,通痹灵可以下调细胞中过度活跃的p53蛋白表达,MTX高剂量及雷公藤高剂量的作用不显著;大鼠软骨细胞Bcl-2蛋白表达呈抑制状态,通痹灵低剂量组明显上调Bcl-2蛋白的低表达水平,其次为雷公藤高剂量组;大鼠软骨细胞存在明显的凋亡亢进,通痹灵明显下调细胞凋亡水平.结论通痹灵能通过调整过度表达的p53蛋白与低表达的Bcl-2蛋白,抑制软骨细胞的过度凋亡;MTX与雷公藤对凋亡的作用与Bcl-2基因家族的调控密切相关,与p53相关基因的相关性不显著.