Müller细胞对青光眼视网膜神经节细胞影响的研究进展

视网膜神经节细胞 (RGCs)的过度凋亡是青光眼病理改变的基础.Müller细胞作为视网膜的主要神经胶质细胞,对于维持神经元的完整性、代谢、内环境稳态以及信号转导等均具有重要的作用.随着对Müller细胞研究的逐渐深入,发现Müller细胞不仅参与了青光眼性RGCs的凋亡机制,而且还参与了RGCs的代偿性保护机制.那么Müller细胞是如何对RGCs起作用,它又是通过什么机制参与青光眼引起的RGCs凋亡以及代偿性保护作用呢?就这些问题的最新研究进展进行综述.     

视网膜Müller细胞的研究进展

Müller细胞是视网膜特化的胶质细胞,它贯穿于视网膜全层,与视网膜神经元、其它胶质细胞、视网膜血管等紧密联系。Müller细胞不但对视网膜正常发育起着决定性作用,而且能支持神经元活动、调节神经递质循环、维持细胞外环境平衡、调节视网膜血管通透性。视网膜Müller细胞代谢障碍将导致视功能丧失、神经元细胞死亡、视网膜水肿等。因此,Müller细胞对维持视网膜的正常生理功能起着重要作用。我们就近年来Müller细胞的研究进展作一综述。     

视网膜Müller细胞的研究现状

Müiler细胞是脊椎动物视网膜最重要的胶质细胞,了解其在健康视网膜的生理及功能和在病变视网膜的病理变化,可更好地理解在病变视网膜Müller细胞的胶质反应,探索有效的治疗措施.成年哺乳动物视网膜Müller细胞具有神经干细胞特性,在特定的条件下可能被激活,井受:Notch等一些信号通路的调控.视网膜Müller细胞在维持视网膜正常结构和功能中起重要作用,在病变视网膜中Müller细胞主要表现胶质增多反应,对神经元的功能既有保护又有损害,而Müller细胞的干细胞特性为视网膜神经元再生和对视网膜病变的治疗引出了新方向.     

褪黑素通过Müller细胞保护糖尿病视网膜神经节细胞的机制

目的　探讨褪黑素对糖尿病视网膜Müller细胞的影响及其对视网膜神经节细胞的保护作用。方法　SD大鼠54只随机分为对照组、糖尿病组和褪黑素治疗组，糖尿病组和褪黑素治疗组制造糖尿病模型。造模后，对照组和糖尿病组大鼠腹腔注射体积分数10%乙醇溶液，褪黑素治疗组大鼠腹腔注射褪黑素溶液（10 mg·kg^-1）。3个月后，试剂盒检测视网膜中丙二醛（malondialdehyde，MDA）和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione，GSH）的含量，Western blot检测视网膜中神经胶质酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）及谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）的表达变化，免疫组织化学染色观察GFAP阳性染色的空间分布并进行定量分析，高效液相色谱检测视网膜中谷氨酸含量变化，HE染色计数视网膜神经节细胞密度。结果　对照组及褪黑素治疗组GFAP免疫阳性染色主要局限于视网膜神经纤维层，而糖尿病组GFAP阳性染色几乎贯穿视网膜全层。与对照组相比，糖尿病组视网膜MDA含量增加而GSH含量减少，GFAP表达增加而GS表达减少，谷氨酸含量增加，视网膜神经节细胞密度明显下降（均为P<0.01）。褪黑素治疗组与对照组各指标相比差异均无统计学意义（均为P>0.05）。结论　褪黑素能抑制糖尿病视网膜的氧化应激反应，恢复视网膜Müller细胞功能酶GS的含量，减少视网膜内谷氨酸堆积，保护视网膜神经节细胞。     

视网膜Müller细胞在视网膜病变中的作用和研究现状

视网膜Müller细胞是视网膜内最主要的神经胶质细胞,它贯穿整个视网膜,包绕与联系视网膜上的各类神经细胞,从而与视网膜神经细胞发生多种功能的交互作用.Müller细胞不仅起着支持和营养神经元的作用,还包括维持细胞外离子的稳定及参与谷氨酸盐循环、突触传递等作用.近年来,随着对视网膜Müller细胞的深入研究,发现Müller细胞还参与多种病理和生理过程,并且在视网膜的各种疾病中都发现伴有Müller细胞的神经胶质增生反应.对视网膜Müller细胞的形态和生理功能作了描述和分析,并对在各种病理状况下Müller细胞发生的改变和目前对Müller细胞的研究现状作一综述.     

Müller细胞与视网膜神经元的关系

Müller细胞是脊椎动物视网膜中最重要的胶质细胞,它贯穿视网膜全层,与视网膜三级神经元共同构成致密的"神经-胶质"网.近年来,随着对Müller细胞功能研究的深入,逐渐发现它在视网膜神经元的发育、营养、代谢中均发挥着重要作用.它诱导神经元在发育中的迁移、分化,参与神经元能量供应,并通过控制视网膜神经元的微环境和释放神经活性物质而主动调制神经元活动,此外,还以谷氨酸代谢和神经营养因子的分泌等形式保护神经元免受各种病理损害.     

Müller细胞在糖尿病视网膜病变中的作用

Müller细胞是人视网膜内主要的神经胶质细胞之一,其突起分布于外界膜到内界膜.二级突起与神经元和胶质细胞密切接触,并可发挥重要的生理功能.糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病的主要并发症之一,其发病机制尚未完全清楚.近年来,随着对Müller细胞的深入研究,发现其在DR的发病和进展中起着重要的作用,本文就目前对Muller细胞的研究现状以及其在DR中的作用机制作一综述.     

Müller细胞在视网膜糖酵解作用机制中的研究进展

糖酵解是生物通过在细胞内对糖的分解代谢获取部分能量的一种途径,视网膜的病理性改变多与能量代谢相关,视网膜Müller细胞是正常视网膜功能及几乎所有形式的视网膜损伤和疾病的参与者,Müller细胞在调控视网膜病变的病理过程中与糖酵解前体代谢产物之间有着密切关系。本文就视网膜及其Müller细胞与糖酵解前体代谢产物的作用机制进行归纳总结,为视网膜病变的治疗提供新的研究思路。     

Müller胶质细胞在视网膜神经损伤中的作用研究进展

Müller胶质细胞(Müller glial cells, MGCs)是视网膜中的主要神经胶质细胞,呈放射状横跨整个视网膜。MGCs与视网膜神经元紧密接触,相互作用,参与维持视网膜内稳态。在视网膜神经损伤后,MGCs启动多种调控途径应答视网膜内环境改变和损伤,产生视网膜神经保护作用,如：调节神经递质释放,释放神经保护因子及抗氧化因子,重编程进行内源性修复。但在视网膜持续损伤状态下,MGCs增生也能加重神经元功能障碍和丢失。因此,正确认识MGCs对病理刺激的反应及其产生的保护和损害作用,对于研究视网膜神经损伤性疾病的机制及指导疾病治疗具有重要意义。本文围绕MGCs在视网膜神经损伤及修复过程中的作用展开综述,旨在为视网膜神经保护提供新的策略。     

视网膜Müller细胞谷氨酸转运体及其功能调节

谷氨酸的兴奋毒性是造成视网膜神经节细胞损伤和死亡的主要因素之一,而谷氨酸转运体对维持细胞外谷氨酸水平起重要作用.GLAST是表达在Müller细胞膜上的一种重要的谷氨酸转运体,其在分子和蛋白质水平上的调节方式可能为酶底物-诱导的负反馈调节.     

Müller细胞在糖尿病视网膜病变中的研究进展

糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病常见且严重的微血管并发症,近年来对DR发病机制的探讨已成为研究热点。M櫣ller细胞是哺乳动物视网膜主要的神经胶质细胞,贯穿于整个视网膜,参与视网膜的许多病理和生理过程。随着对胶质细胞研究的深入,人们发现M櫣ller细胞对DR的发病机制研究有着重要意义。     

兔视网膜Müller细胞的原代培养

目的 探索体外培养兔视网膜Müller细胞的有效方法.方法 采用酶消化法从乳兔视网膜获取Müller细胞,通过振荡和反复洗涤使之纯化.采用免疫组织化学技术和透射电镜对传代Müller细胞进行鉴定.结果 培养24 h后即有部分细胞贴壁生长,72 h后贴壁细胞进一步增多.通过振荡吹打可使附着于Müller细胞上的神经元脱落.20～25 d后细胞接近融合,呈三角形或不规则形.传代后细胞经1周达到融合.培养细胞GFAP阳性率在95%以上.电镜观察显示细胞内含有线粒体、粗面内质网、核糖体及8～10 nm的中间丝.结论 利用酶消化法可成功分离兔视网膜Müller细胞,通过振荡和吹打洗涤,可使之纯化.     

Müller细胞在糖尿病视网膜病变发病机制中的作用

视网膜Müller细胞作为人类视网膜中重要的神经胶质细胞,具有营养、保护神经元,调节视网膜钾离子、钙离子和水分子的内稳态,参与构成血视网膜屏障等重要生理作用,并且与多种视网膜疾病关系紧密,尤其在糖尿病视网膜病变的发生发展中发挥重要作用.在血管病变发生之前,Müller细胞即可通过分泌多种细胞因子、参与内质网应激、氧化应激反应等,对视网膜神经细胞产生保护及毒性两种作用,并参与视网膜血管渗漏的形成等.     

新生大鼠视网膜Müller细胞原代培养方法的改良

背景 目前,视网膜Müller细胞的干细胞特性日益受到关注,优化Müller细胞的培养方法对视网膜干细胞治疗的进一步研究具有重要意义. 目的 对视网膜Müller细胞的原代培养方法加以改良,建立一种简单、有效的实验室分离纯化Müller细胞的方法.方法 取新生SPF级SD大鼠眼球,培养基浸泡后室温条件下避光过夜,显微镜下分离视网膜,直接吹打成微小组织悬液后接种于培养瓶中,8～10d后行第1次换液,之后2～3d换液1次,至细胞完全融合后进行传代.细胞形态一致后于光学显微镜下观察细胞的形态特征,免疫荧光法检测Müller细胞标志物谷氨酰胺合成酶(GS)和波形蛋白(Vimentin)的表达,进行细胞鉴定;采用流式细胞术对所得细胞进行纯度检测. 结果 原代培养的Müller细胞胞体狭长,细胞质丰富.传至3代的细胞95％以上对GS和Vimentin反应阳性,阳性染色主要位于细胞质和细胞核.Vimentin阳性染色主要位于细胞质.流式细胞仪检测显示传3代后99.7％的细胞GS表达阳性. 结论 采用Müller细胞改良法-流式细胞术对所得细胞进行纯度检测,简单可行,收获的细胞数量多、纯度高.     

Müller细胞在视网膜病变中的病理反应及其作用机制研究进展

视网膜Müller细胞是包括人在内的脊椎动物视网膜中主要的大胶质细胞,从形态和功能方面维持视网膜内外环境的稳定,对正常视觉功能起到重要作用。在不同视网膜病变中,Müller细胞有不同的病理反应及机制,从分子、代谢、电活动和功能学等角度深入研究和理解这些变化,对于认识Müller细胞在这些病变中作用有重要意义,以期将来获得通过以该细胞为靶点的治疗方法。     

体外培养视网膜Müller细胞高压气体冲击损伤模型

目的 建立一种视网膜Müiler细胞原发性创伤性损伤模型,以探讨视网膜Müller细胞在视网膜损伤中的作用.方法 取体外培养的SD大鼠视网膜Müller细胞,随机分为对照组和致伤组,待细胞融合后与自行研制的新型高压气体冲击细胞装置相连接,致伤组通过计算机设置25、50、100、150、200、250 kPa不同的驱动压力引发直接冲击力作用Müller细胞.致伤后观察细胞形态,台盼蓝染色检测细胞活性,培养上清检测乳酸脱氢酶(LDH)浓度的改变.结果 致伤后形态学显示明显改变,细胞肿胀,线粒体变形.LDH释放率测定显示25 kPa驱动压力下的直接冲击力即可引起细胞膜通透性改变,200 kPa时细胞已达到最大程度的损伤,差异有统计学意义(P<0.05).结论 视网膜Müller细胞的高压气体冲击损伤模型是一种新型的在细胞水平研究创伤性损伤的原发性损伤模型.     

兔视网膜Müller细胞原代培养

目的 建立成年兔视网膜Müller细胞体外原代培养方法.方法 运用组织块培养法.分离出成年兔视网膜神经感觉层,剪成1 mm×1 mm大小组织块,置于含有20%胎牛血清的Dulbecco改良Eagle培养液/F12培养,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜观察及荧光免疫组织化学染色的方法进行培养细胞的鉴定.结果 培养的细胞块3 d后可见部分细胞突起长出,7 d后整个组织块周围放射状长出较多细胞.倒置相差显微镜下,培养细胞呈一端细胞体丰富膨大,另一端有一长突起,细胞核椭圆形,常有2个或2个以上核仁;透射电子显微镜下,细胞胞体大,细胞浆丰富,内含丰富的8～10 nm的微丝.荧光免疫组织化学法显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白和胞内视黄醛结合蛋白阳性,阳性率达95%以上.结论 运用组织块培养法可培养出兔视网膜Müller细胞.

Abstract：

Objective To develop a method for the primary culture of retinal Müller cells of adult rabbit in vitro. Methods Retina was isolated from adult rabbit, cut into 1 mm × 1 mm pieces, and placed into Dulbecco modified Eagle medium/F12 containing 20 % fetal bovine serum to culture. Cultured cells were identified by inverted phase contrast microscope, transmissim electron microscope and immunohistochemistry staining method. Results Visible cell processes grew out from the retinal tissues after three days culture, and more cells grew radically around the retina after seven days culture. The cultured cells were often inflated at one side and had one long process at another side, and the nuclei were elliptical and there were two or more than two nucleoli under inverted phase contrast microscope. The cytoplasm was rich and contained abundant microfilaments in eight to ten nanometers under transmission electron microscope. Immunohistochemistry assay showed that 95% of the cells were positive for glial can be cultured by the explant culture method.     

Müller细胞干细胞特性的研究进展

视网膜退行性病变缺少有效的防治方法.研究显示,Müller细胞可表达视网膜神经元细胞标记物如钙视网膜蛋白、视黄醛结合蛋白等.人Müller细胞不但可表达神经干细胞相关转录因子如SOX2、PAX6、CHX10、NOTCH1,还表达视网膜神经元标记物如双极细胞标记物蛋白激酶C,光感受器神经元标记物(盘膜边缘蛋白),神经节细胞标记物HuD与Brn3,大部分神经元标记物神经丝蛋白、βⅢ微管蛋白,神经节细胞、无长突细胞和水平细胞阳性标记物(钙视网膜蛋白).因此表明,视网膜Müller细胞可分化成不同视网膜神经元细胞,具有干细胞特性,利用Müller细胞进行细胞移植可能是治疗视网膜退行性病变具有潜力的新策略.     

补肾活血剂对高糖和(或)缺氧状态下共同培养视网膜神经节细胞和Müller细胞谷氨酸代谢的影响

目的 应用中药血清药理学方法探讨补肾活血中药复方对体外共同培养的视网膜神经节细胞和Müllcr细胞谷氨酸(glutamate,Clu)代谢的影响.方法 氨基酸分析仪检测共同培养细胞外液中Glu释放量,[3H]标记的D,L-Glu摄入量判断共同培养细胞的Glu 摄取功能测定中药血清干预高糖和(或)缺氧状态下体外共同培养细胞外液中Glu的释放量和摄入量.结果 在48 h时段,缺氧组及高糖缺氧组共同培养细胞的Glu释放量均比正常对照组明显增加(均为P＜0.05),而高糖组Glu释放量比正常对照组明显减少(P＜0.05);补肾活血中药血清能明显降低正常条件下(24h、48 h、72 h)、缺氧及高糖缺氧条件下(48 h、72 h)共同培养细胞的释放量(均为P＜0.05).在24h、48 h、72 h时段缺氧组及高糖缺氧组共同培养细胞的Glu摄入量均比正常对照组明显降低(均为P＜0.05);高糖组共同培养细胞的Glu摄取功能在24 h和72 h时段均比正常对照组增强(均为P＜0.05),但48 h时段Glu摄入比正常对照组降低(P＜0.05);补肾活血中药血清能明显提高正常及缺氧条件下24 h、48 h时段、高糖条件下48 h时段以及高糖和(或)缺氧条件下72 h时段共同培养细胞的Glu摄入量(均为P＜0.05).结论 高糖和(或)缺氧能够引起体外共同培养的视网膜神经节细胞和视网膜Müller 细胞的Glu代谢障碍,这可能是补肾活血法对高糖和(或)缺氧状态下视网膜神经节细胞的保护作用机制之一.     

紫杉醇对视网膜Müller细胞的影响

目的:探究抗肿瘤药物紫杉醇(PTX)对Müller细胞增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态与相关蛋白表达的影响以研究其对视网膜的潜在毒性。方法:体外培养Müller细胞并分成两组：对照组(正常培养基)、加药物组(PTX)。不同浓度PTX(0.005、0.05、0.5、5mg/L)处理视网膜Müller细胞12、24、36、48、72h, CCK8法检测不同浓度PTX、刺激不同时间对Müller细胞增殖的影响;流式细胞术检测不同浓度PTX对Müller细胞凋亡的影响及细胞周期的阻滞作用;免疫荧光观察Müller细胞的形态变化;Western blot及qRT-PCR检测PTX对Müller细胞凋亡相关蛋白表达以及水通道蛋白的影响。结果:PTX可以抑制体外培养的Müller细胞增殖能力,药物浓度越高,刺激时间越久,细胞增殖能力越弱;此外,PTX还能促进Müller细胞的凋亡,越高的药物浓度和更长的刺激时间会导致更高的细胞凋亡率;流式细胞检测细胞周期表明,PTX将Müller细胞阻滞于G2-M期。而细胞形态也由形态清晰、细长纤维状的正常形态趋于圆形,且细胞数量显著减少;药物处理后的细胞炎症因子较对...