沉默YAP1可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力

目的探究沉默Yes 相关蛋白1（YAP1）对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法采用实时荧光定量PCR和 Western blot方法检测YAP1在鼻咽癌细胞系中的表达水平;在鼻咽癌细胞S26和S18中转染3条合成的小干扰RNA：si-NC, si- YAP1#1和si-YAP1#2,以转染阴性对照si-NC的细胞作为对照组,转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的细胞作为实验组,实时荧光定 量PCR和Western blot检测转染后的干扰效率;通过细胞计数、平板克隆形成等方法评估转染si-YAP1#1和si-YAP1#2后的实验 组和转染si-NC的对照组对鼻咽癌细胞增殖能力的影响;用划痕和Transwell 方法分析各组细胞迁移与侵袭能力的变化; Western blot检测各组细胞中c-myc、上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）、神经性钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等与细 胞增殖和上皮间质转化相关蛋白的表达变化。结果YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达;与阴性对照组相比,转染si-YAP1#1和si- YAP1#2的实验组细胞中YAP1的mRNA及蛋白水平均显著降低（P<0.05）;生长计数、平板克隆、划痕及Transwell等实验结果 均显示转染si-YAP1#1和si-YAP1#2的实验组细胞的生长和克隆能力、划痕愈合能力及侵袭能力较阴性对照组细胞明显下降 （P<0.01）;且相较阴性对照组,实验组细胞中c-myc、N-cadherin和Vimentin等蛋白的表达水平降低,E-cadherin的表达量增加。 结论YAP1在鼻咽癌细胞系中高表达,在鼻咽癌细胞中利用siRNA靶向敲低YAP1的表达后可以抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移 及侵袭能力,提示YAP1可以作为一个潜在的鼻咽癌临床治疗干预靶点。     

长链非编码RNA MCF2L-AS1促进胃癌的增殖、侵袭和迁移

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MCF2L-AS1在胃癌中的表达情况以及MCF2L-AS1对胃癌增殖侵袭迁移的影响.方法 生物信息学分析MCF2L-AS1在胃癌组织中的表达情况;实时PCR检测MCF2L-AS1在胃癌细胞中的表达情况.siRNA转染敲低胃癌细胞中的MCF2L-AS1,实时PCR检测敲低的结果....     

长链非编码RNA PRNCR1对胃癌细胞增殖、侵袭及转移的研究

探索胃癌MGC-803细胞和人正常胃黏膜上皮GES-1细胞中,长链非编码RNA PRNCR1的表达,以及沉默PRNCR1 对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法利用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中PRNCR1 表达水平;设计并合成PRNCR1-siRNA及对照序列（PRNCR1-NC）转染胃癌细胞,通过qRT-PCR 检测细胞中PRNCR1 的沉默效果;利用四甲基偶氮唑盐比色法检测胃癌细胞 的增殖;Transwell实验检测胃癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果PRNCR1 在胃癌MGC-803 细胞中的表达高于人正常胃黏膜上皮GES-1 细胞,PRNCR1-siRNA 可以下调胃癌MGC-803 细胞中PRNCR1 的表达,并可以抑制MGC-803 细胞的增殖和侵袭转移能力。结论PRNCR1-siRNA 能够下调PRNCR1 的表达,并有效抑制胃癌细胞的增殖和侵袭迁移力,为以PRNCR1 为靶点的胃癌基因治疗奠定理论基础。     

长链非编码RNA FAS-AS1对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA FAS-AS1在胶质瘤细胞中的表达及其对胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法 使用qRT-PCR分别检测临床标本、胶质瘤细胞系中FAS-AS1表达丰度.采用FAS-AS1质粒转染人脑胶质瘤细胞系U251、SF126细胞,qRT-PCR检测转染效率,通过MTT形成实验及克隆实验检测FAS-AS1对细胞增殖能力的影响;通过Transwell实验检测FAS-AS1对细胞迁移影响;通过基质胶构建生物膜结合Transwell实验检测FAS-AS1对胶质瘤细胞侵袭的影响.结果 胶质瘤组织及人脑胶质瘤细胞系中FAS-AS1的表达下调;FAS-AS1质粒转染成功构建过表达FAS-AS1胶质瘤细胞模型,FAS-AS1过表达抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭.结论 FAS-AS1在胶质瘤中表达下调并能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭.     

长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠心肌缺血再灌注损伤的调控作用

目的 研究长链非编码RNA HIF1A-AS1对大鼠缺血再灌注损伤的调控作用,并初步探索其机制.方法 构建大鼠心肌缺血再灌注损伤和心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,利用实时定量PCR检测HIF1A-AS1的表达.采用siRNA抑制心肌细胞HIF1A-AS1的表达并制备缺氧/复氧损伤模型,用MTT法检测心肌细胞生长活力,ELISA法检测培养液中乳酸脱氢酶的水平,蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白Beclin-1的表达变化.结果 HIF1A-AS1在缺血再灌注大鼠心肌组织和缺氧/复氧损伤心肌细胞中表达上调.抑制HIF1A-AS1表达可保护心肌细胞,逆转缺氧/复氧刺激导致的心肌细胞生长活力降低、乳酸脱氢酶分泌水平增高、自噬标志蛋白Beclin-1表达增高现象.结论 抑制长链非编码RNA HIF1A-AS1,可能通过抑制心肌细胞的过度自噬抵抗缺血再灌注诱导的心肌损伤.     

慢病毒介导长链非编码RNA BACE2-IT1过表达抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 观察长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,lncRNA) BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中的表达,分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞增殖和侵袭影响的作用机制。方法 实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测26例胃癌组织和5种胃癌细胞株中BACE2-IT1的表达。以BACE2-IT1表达最低的胃癌细胞株感染载有BACE2-IT1的慢病毒(实验组)和空载慢病毒(对照组)。通过CCK-8实验和Transwell侵袭实验分析慢病毒介导BACE2-IT1过表达对胃癌细胞株增殖能力和侵袭能力的影响。qPCR和蛋白质印迹法(Western blot法)检测过表达BACE2-IT1后HECT家族E3泛素连接酶1(HACE1)的表达水平及Wnt/β-catenin信号通路的活化程度。结果 与癌旁组织比较,BACE2-IT1 在胃癌组织中呈低表达(P<0.01)。与永生化胃黏膜上皮细胞比较,BACE2-IT1在5种胃癌细胞株中呈低表达(P<0.05),在BGC-823细胞中的表达量最低(P<0.01)。与对照组比较,实验组过表达BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的增殖能力(P<0.05)。对照组和实验组侵袭细胞数分别为87.82 ± 9.57和36.65 ± 5.78,BACE2-IT1在体外可抑制BGC-823细胞的侵袭能力(P<0.01)。与对照组比较,BACE2-IT1过表达导致BGC-823细胞中HACE1 在mRNA和蛋白水平的表达上调(P<0.01)。Wnt/β-catenin信号通路的活化被抑制。结论 BACE2-IT1在胃癌组织和细胞株中均呈低表达,BACE2-IT1过表达能抑制胃癌BGC-823细胞的增殖能力和侵袭能力,其分子机制可能是促进HACE1蛋白的表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化。     

敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后,研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 本研究采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况.并在此基础上构建了ATB表达载体shRNA ATB 质粒,利用其转染人胶质瘤U87细胞株,获取低表达ATB的U87细胞.应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响;应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响;应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 qRT-PCR结果显示,与正常人脑胶质细胞HEB相比,人脑胶质瘤细胞系U87中ATB 表达明显上调(P<0.01);与shRNA对照组相比,转染了shRNA-ATB实验组能显著减少ATB 水平(P<0.01);细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较shRNA对照组明显降低(P<0.01);MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率明显低于shRNA对照组(P<0.01).此外,Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01).结论 靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭,表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点.     

长链非编码RNA PVT1对宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨PVT1加重宫颈癌细胞的恶性生物学行为的作用机制.方法 设计shRNA干扰PVT1,接着用sh-PVT1单独或联合miR-484 inhibitor转染SiHa细胞,荧光定量检测PVT1及miR-484的表达水平;荧光素酶报告实验确定PVT1和miR-484的靶向关系;BrdU染色检测PVT1对细胞生长的影响...     

长链非编码RNA BC015134调控胃癌细胞侵袭与迁移的研究

目的 探讨长链非编码RNA BC015134促进胃癌细胞侵袭迁移的作用及机制。方法 通过对GEO数据库中10对胃癌和癌旁组织RNA芯片结果进行分析以及湖州市中心医院2015年1月至2020年12月胃癌根治术患者的临床样本80例验证,筛选胃癌转移相关长链非编码RNA。通过shRNA介导的RNA干扰和质粒介导的过表达技术调节BC015134在胃癌MGC-803细胞中的表达水平,采用Transwell实验检测胃癌细胞侵袭和迁移能力。通过RNA pulldown实验及Western blot法验证BC015134与β-连环蛋白（β-Catenin）能否相互结合。利用qRT-PCR技术检测BC015134在临床样本中的表达水平,并做预后分析。结果 通过对芯片结果进行临床样本验证,发现BC015134在有远处转移的胃癌原发灶中高表达。在MGC-803细胞中过表达BC015134能够促进细胞的侵袭及迁移能力,而敲减BC015134能够抑制细胞的侵袭及迁移能力。BC015134能够与β-Catenin相互结合,过表达β-Catenin后神经型钙黏蛋白（N-cadherin）的表达上调,上皮型钙黏蛋白（...     

YY1通过下调长链非编码RNA SOX2OT抑制胰腺癌细胞的迁移和侵袭

目的:研究转录因子YY1对胰腺癌细胞迁移和侵袭的影响和分子机制.方法:使用定量RT-PCR和Western blot检测YY1和SOX2OT的表达.通过划痕实验和Transwell侵袭实验,研究YY1在胰腺癌细胞迁移和侵袭中的作用.在YY1过表达或YY1敲低的胰腺癌细胞中,通过SOX2OT过表达或RNA干扰进行功能回复...     

MiR-4443通过抑制PEBP1的表达促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-4443对乳腺癌转移的影响。方法 使用高通量测序技术测定检测3例乳腺癌患者原位癌组织及其配对的癌旁组织中miR-4443的表达。使用TCGA数据库验证miR-4443在乳腺癌组织以及正常乳腺组织中的表达水平。以MCF-7细胞（低侵袭性乳腺癌细胞）和MDA-MB-231细胞（高侵袭性乳腺癌细胞）为研究对象,采用RT-qPCR验证miR-4443在这两种细胞株中的表达水平。通过电转染法将miR-4443 mimics（miR-4443模拟物）、mimics-NC（miR-4443模拟物的对照物）或miR-4443inhibitors（miR-4443抑制物）、inhibitors-NC（miR-4443 抑制物的对照物）转染至不同的细胞株,利用RT-qPCR检测miR-4443在转染前后的表达水平,使用流式细胞分析仪分析 miR-4443 表达水平的变化对乳腺癌细胞凋亡的影响,使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-4443表达水平的变化对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。使用生物信息学软件预测miR-4443潜在的靶基因,并进一步使用双荧光素酶报告基因系统验证。采用RT-qPCR和Western blot分别检测不同细胞株中PEBP1（重组人磷脂酰乙醇胺结合蛋白1）在mRNA和蛋白水平的表达。结果 高通量测序技术检测发现在乳腺癌组织中miR-4443的表达远高于癌旁组织（P<0.01）。TCGA数据分析显示,与正常乳腺组织想比,miR-4443在乳腺癌组织中的表达升高（P<0.01）。RT-qPCR显示,与MCF-7细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-4443的表达升高（P<0.01）。与转染mimics-NC相比,MCF-7细胞转染miR-4443 mimics后,miR-4443的表达上调（P<0.01）;而转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞,其表达下调（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照差异无统计学意义（P>0.05）,并且转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的凋亡率与阴性对照和空白对照亦差异无统计学意义（P>0.05）。划痕实验及Transwell侵袭实验显示转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞的迁移及侵袭能力减弱（P<0.01）。相反的,转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞迁移及侵袭能力加强（P<0.01）。生物信息学软件预测发现PEBP1可能是miR-4443的潜在靶基因且与转移的相关程度最高。进一步行双荧光素酶报告基因实验,验证PEBP1是miR-4443的靶基因（P<0.01）。RT-qPCR和Western blot显示,MDA-MB-231细胞中PEBP1在mRNA及蛋白中的水平均低于MCF-7细胞（P<0.01）。转染miR-4443 mimics的MCF-7细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均低于对照（P<0.01）;转染miR-4443 inhibitors的MDA-MB-231细胞中,PEBP1 在mRNA及蛋白水平均高于对照（P<0.01）。结论 miR-4443通过抑制PEBP1的表达水平促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭能力,而抑制乳腺癌细胞中miR-4443的表达可能是未来潜在的治疗方法。     

ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力

目的 探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化（EMT）过程的影响。方法 将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及Westen boltting（WB）实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过 WB 实验检测各组细胞中上皮-间质转化（EMT）相关蛋白：Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果 ALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著（P<0.05）;shALKBH5组与未转染组（Control）和无意义序列组（NC）相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著（P<0.05）。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强（P<0.05）,EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。     

miR-300通过负向调控垂体肿瘤转化基因1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭和转移

目的研究miR-300及垂体肿瘤转化基因1（PTTG1）对骨肉瘤侵袭转移的影响，探讨引起骨肉瘤侵袭转移的分子机制。方法Western blot检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中PTTG1的表达情况，并检测转染敲低PTTG1质粒后细胞的转染效率; Transwell侵袭实验和CCK8实验检测敲低PTTG1及过表达miR-300对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响; 网上预测并筛选与PTTG1互补结合的microRNAs（miRNAs）; qRT-PCR检测人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞MG63中miR- 300的表达情况; Western blot检测转染过表达miR-300质粒后PTTG1在骨肉瘤细胞MG63的表达情况; 双荧光素酶实验检测miR-300和PTTG1的靶向结合情况; Transwell侵袭实验和CCK8实验检测过表达miR-300和过表达PTTG1质粒共转后对骨肉瘤细胞MG63侵袭和增殖能力的影响。结果PTTG1在骨肉瘤细胞MG63中表达较高（P=0.0002）; 敲低PTTG1可抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭（P=0.0002）和增殖（P=0.0039）能力; 网上预测软件预测可能与PTTG1互补结合的miRNAs，NCBI数据库下载数据集分析确定研究对象为miR-300;qRT-PCR结果表明miR-300在骨肉瘤细胞MG63中表达降低（P=0.0004）; 采用过表达质粒过表达骨肉瘤细胞MG63中的miR-300，qRT-PCR结果提示转染成功（P < 0.0001）; Western blot发现过表达miR-300后PTTG1的表达明显降低（P=0.0007）; 双荧光素酶实验结果显示miR-300可与PTTG1靶向结合（P=0.0010）; 细胞共转实验显示过表达PTTG1可逆转miR-300对骨肉瘤细胞侵袭（P=0.0003）和增殖（P=0.0077）能力的影响。结论miR-300通过靶向结合PTTG1抑制骨肉瘤细胞MG63的侵袭转移能力。     

miR-324-5p通过抑制Syk/Ras/c-fos通路降低脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖

目的 探讨miR-324-5p调控Syk/Ras/c-fos信号通路对大鼠肾小球系膜（HBZY-1）细胞增殖能力的影响。方法 体外培养HBZY-1 细胞;设计并合成 miR-324-5p mimics,miR-324-5p mimics-NC 片段;采用 Lipo3000 试剂盒瞬时转染 miR-324-5pmimics,miR-324-5p mimics-NC片段至脂多糖（LPS）诱导的HBZY-1细胞内,RT-qPCR验证转染效率;将HBZY-1细胞分为对照组（生理盐水）,LPS 组（LPS 0.5 μg/mL）,LPS+mimics 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics）,LPS+mimics-NC 组（LPS 0.5 μg/mL+miR-324-mimics-NC）;MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖活性;RT-qPCR法检测各组细胞miR-324-5p及Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达;Western blot和免疫荧光法检测各组细胞p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白的表达。结果 MTT结果显示,LPS组细胞增殖水平较正常组显著升高,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组细胞增殖能力降低;RT-qPCR结果显示,LPS+mimics组中miR-324-5p表达明显高于LPS组及LPS+mimics-NC组,且LPS+mimics组中Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-fos mRNA的表达显著低于LPS组及LPS+mimics-NC组,差异具有统计学意义（P<0.05）;Western Blot结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比LPS+mimics组中p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫荧光结果显示,与LPS组及LPS+mimics-NC组相比,LPS+mimics组p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-fos蛋白标记细胞数目明显减少。结论 miR-324-5p可通过抑制Syk/Ras/c-fos信号通路降低LPS诱导的慢性肾小球肾炎细胞的增殖活性,miR-324-5p有望成为慢性肾小球肾炎诊断和治疗的潜在靶标。     

光动力脂质体凝胶协同曲妥珠单抗体外杀伤耐药性乳腺癌细胞的效果

目的制备负载光敏剂二氢卟吩（Ce6）和肿瘤靶向药曲妥珠单抗（Tmab）的脂质体凝胶（Ce6-PC-Tmab@A-Gel），实现对耐药性HER2+乳腺癌的光动力治疗（PDT）和靶向治疗。方法采用旋蒸薄膜水化法制备Ce6-PC-Tmab脂质体，检测其纳米载体一般特性、包封率及近红外光响应性，同时采用冷冻干燥法及搅拌交联法，制备具有剪切响应性脂质体凝胶Ce6-PC-Tmab@A-Gel，通过扫描电镜(SEM)观察其微观结构，通过流变仪评价凝胶的剪切响应性。细胞毒性试验（MTT）检测Ce6-PC-Tmab@A-Gel联合近红外光对于SK-BR-3细胞株的抑制效果。结果制备的Ce6-PC-Tmab粒径为239.7±9.7 nm，电位为-2.03±0.09 mV，Ce6-PCTmab脂质体中Tmab的包封率为（40.22±0.73）%；形成脂质体凝胶后剪切响应性良好；具有优良的近红外光响应释放特性，随近红外光刺激强度增加和时间延长，Tmab释放均增多；Ce6-PC-Tmab@A-Gel在室温下性质稳定，在模拟肿瘤微环境中（pH 6.25）仍然具有稳定的结构；细胞毒性试验中，对耐药性HER2+人源乳腺癌细胞SK-BR-3的增殖有明显抑制作用，Ce6-PC-Tmab@AGel联合近红外光治疗组的SK-BR-3细胞生存率为（31.37±1.73）%，与未治疗组及其他实验组比较差异有统计学意义（P < 0.01），同时具备较高的活性氧（ROS）产生效率，Ce6-PC-Tmab@A-Gel治疗组ROS释放量在光照2 min后达到（22.36±0.11）%；对于耐药性乳腺癌细胞的杀伤具有显著效果（P < 0.01）。结论本研究制备的Ce6-PC-Tmab@A-Gel粒径小，均一性好，有良好的近红外光响应释放特性，保证了Ce6-PC-Tmab@A-Gel中Tmab的高效靶向治疗性，可注射凝胶体系为肿瘤局部的长时释药提供了可能。     

沙利度胺治疗原发性干燥综合征合并轻中度非特异性间质性肺炎疗效观察

关于原发性干燥综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)继发间质性肺炎的治疗,目前尚无统一共识,治疗常以激素和免疫抑制剂为主,其中环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)应用最为广泛.但因CTX具有骨髓抑制、肝功能损伤、潜在致肿瘤风险、生殖毒性、出血性膀胱炎等副作用限制了其在部分患者中的应用.近年来已有多项研究发现,沙利度胺具有调节免疫、抗炎和抑制血管增生的作用,可以改善间质性肺炎患者的临床症状和肺功能[1-2].本研究通过临床对照实验,观察沙利度胺治疗pSS继发轻中度非特异性间质性肺炎(nonspecific interstitial pneumonia,NSIP)的疗效.     

阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p和下调Notch1/Hes1通路促进哮喘大鼠BMSCs归巢

目的 观察阳和平喘颗粒对哮喘miR-139-5p、Notch1/Hes1信号通路及骨髓源性间充质干细胞（BMSCs）归巢的影响。方法 50 只 SD 大鼠随机均分为 5 组：正常对照（NC）组、模型对照（MC）组、BMSCs 移植（BMSCs）组、BMSCs+地塞米松（BMSCs+DXM）组[地塞米松 0.0625 mg/ （kg·d）]、BMSCs+阳和平喘组[阳和平喘颗粒3.5 g/ （kg·d）]。采用卵清蛋白致敏激发建立大鼠哮喘模型,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组大鼠在激发最后1 d经尾静脉移植入1×106/mL BMSCs悬液。NC组、MC组以生理盐水灌胃,药物干预组分别予相应药物灌胃,灌胃量为1 mL/100 g,均持续1周。HE染色观察肺组织病理形态学,流式细胞术检测肺组织中CXCR4蛋白表达,酶联免疫吸附法检测肺组织γ干扰素（IFN-γ）、白介素-4（IL-4）表达。免疫荧光观察支气管上皮细胞CXCR4、Notch1、Hes1表达。RT-PCR法检测肺组织miR-139-5p、Notch1、Jagged1、RBP-J、Hes1基因表达,免疫印迹法检测肺组织 Notch1、Jagged1、Hes1 蛋白表达。结果 （1）与 NC 组比较,MC 组肺组织 CXCR4、IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达升高,INF-γ、miR-139-5p mRNA表达降低（P<0.05）;（2）与MC组比较,BMSCs组、BMSCs+DXM组、BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA升高,IL-4、Notch1mRNA、Jagged1mRNA、RBP-JmRNA、Hes1mRNA及Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达降低（P<0.05）;（3）与BMSCs组比较,BMSCs+阳和平喘组CXCR4、IFN-γ、miR-139-5pmRNA表达升高,IL-4、Notch1mRNA表达量降低（P<0.05）。结论 阳和平喘颗粒通过上调miR-139-5p,下调Notch1/Hes1通路,强化BMSCs归巢对Th2炎症反应的抑制作用。     

垂体肿瘤转化基因1在系统性硬化症中的表达及作用

目的 研究垂体肿瘤转化基因（PTTG1）在系统性硬化症（SSc）中的表达及其对成纤维细胞的作用。方法 收集皮肤活检组织,其中SSc患者组21例,正常组22例。分别应用实时荧光定量聚合酶链式反应法（Real-time PCR）检测皮肤组织中PTTG1基因表达水平;应用免疫组化方法检测皮肤组织中PTTG1蛋白表达水平;应用小干扰RNA（siRNA）降低成纤维细胞中PTTG1基因表达,通过 Real-time PCR 方法检测细胞中 PTTG1 及与细胞纤维化密切相关的几个基因α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1的表达变化;通过细胞实时增殖检测系统检测细胞增殖。结果 与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中PTTG1的表达水平明显升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中阳性细胞增多,PTTG1蛋白表达明显升高;原代皮肤成纤维细胞中PTTG1表达水平和α-SMA、COL1A1、COL1A2、COL3A1均存在正相关,差异具有统计学意义（R²=0.8192,P<0.05;R²=0.6398,P<0.05;R²=0.316,P<0.05;R²=0.3723,P<0.05）;同时,原代皮肤成纤维细胞中PTTG1干扰后,细胞增殖被显著抑制,纤维化相关基因（COL1A1、COL1A2、PAI-1）表达下降,胶原蛋白的基因表达降低。结论 SSc患者中存在PTTG1过度表达,干扰PTTG1可降低成纤维细胞活性,提示PTTG1与SSc纤维化程度密切相关。     

Palbociclib可诱导人肾小管上皮细胞周期阻滞及衰老

目的 探讨Palbociclib药物对肾小管上皮细胞周期进展及细胞增殖的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞HK-2分别给予不同浓度（0、1、5、10、20 μmol/L）的Palbociclib进行处理,通过细胞计数和CCK8法检测不同浓度及时间下Palbociclib对HK-2细胞增殖及细胞活力的影响。EDU染色检测不同浓度下Palbiciclib对HK-2细胞作用5 d后的细胞增殖情况。流式分析检测Palbociclib对HK-2细胞生长周期分布的影响。采用SA-β-Gal、C12FDG等衰老染色技术检测不同浓度下Palbociclib作用于HK-2细胞5 d后其对衰老表型的诱导情况。RT-PCR检测P16、P21、P53及衰老相关分泌表型的mRNA相对表达水平,Western blot检测P16、P21和P53的蛋白表达情况。结果 Palbociclib抑制HK-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞于G1期。相比于对照组而言,高剂量（10 μmol/L）的 Palbociclib 可明显抑制 HK-2 细胞增殖活性,且在第 5 天时增殖抑制效果最为明显（P<0.01）。Palbociclib诱导HK-2细胞生长周期主要阻滞于G1期,而进入S期的细胞数相比于对照组来说明显减少（P<0.01）。Palbociclib可诱导HK-2细胞发生衰老,通过SA-β-Gal和C12FDG衰老染色检测,结果表明在Palbociclib作用下,HK-2细胞的胞内衰老相关半乳糖苷酶活性明显升高。RT-PCR及Western blot结果显示Palbociclib可明显上调HK-2细胞中P16、P21、P53等衰老相关因子的基因和蛋白表达水平（P<0.01）。与对照组相比,RT-PCR检测Palbociclib作用下的HK-2细胞中衰老相关分泌因子的基因表达水平也升高（P<0.01）。结论 Palbociclib可通过抑制HK-2细胞生长并阻滞其细胞周期进程进而诱导HK-2细胞发生衰老。     

小乌桂汤治疗小鼠胶原诱导性关节炎的作用机制

目的 以胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠为模型,探讨小乌桂汤治疗类风湿关节炎的免疫学机制。方法 构建DBA/1小鼠CIA模型,将关节炎指数（AI）评分相近的30只CIA小鼠随机分为正常对照组、模型组（CIA）、甲氨蝶呤组、小乌桂汤低剂量组（0.975 g/mL）、小乌桂汤中剂量组（1.95 g/mL）、小乌桂汤高剂量组（3.9 g/mL）,5只/组。其中,正常对照组和CIA组给予生理盐水,甲氨蝶呤组给予0.1 mg/mL甲氨蝶呤溶液,3个小乌桂汤处理组按照规定剂量分别给予小乌桂汤药液（0.2 mL/10 g体质量）连续灌胃28 d处理。使用AI评分和HE染色评价小乌桂汤对CIA模型小鼠关节的影响。利用流式细胞术观察小乌桂汤对CIA小鼠脾脏Th1、Th17、MDSC、G-MDSC、M-MDSC细胞亚群的影响。结果 甲氨蝶呤和不同剂量组小乌桂汤治疗后小鼠AI评分降低,炎症程度比其他组明显缓解,踝关节损伤得到有效修复,且随着小乌桂汤剂量增高,其治疗效果呈现出逐渐增强的趋势（P<0.05）。与模型组相比,甲氨蝶呤组和不同剂量组小乌桂汤组脾脏中Th1、Th17和M-MDSC细胞比例降低（P<0.05）,GMDSC细胞比例显著增加,且随着小乌桂汤剂量增高,细胞比例变化呈现逐渐明显的趋势（P<0.01）。相关分析结果显示,Th1、Th17细胞比例与M-MDSC细胞比例呈正相关,而与G-MDSC细胞比例呈负相关（P<0.01）。结论 小乌桂汤可通过调节MDSC细胞亚群水平,升高G-MDSC细胞比例和降低M-MDSC、Th1、Th17细胞比例改善CIA小鼠关节损伤,高剂量小乌桂汤其作用与甲氨蝶呤等效,且安全性更高。