细胞周期蛋白依赖性激酶2及相关蛋白研究进展

在所有真核细胞中,细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase,CDK）调控着细胞周期各个环节的起始与进程,进而控制细胞的增生和凋亡。CDK2在20世纪90年代初鉴定并命名,是目前已发现的11个CDK成员中研究极为深入的细胞周期调控因子之一,在决定细胞周期进程中起着重要作用。     

细胞周期蛋白依赖性激酶1在人结直肠癌组织中的表达意义

目的 验证细胞周期蛋白依赖性激酶1(cyclin-dependent kinases 1,CDK1)在人结直肠癌组织中的表达.方法 以首都医科大学附属北京天坛医院2018年10月至2019年9月诊治的30例病理证实为结直肠癌患者的结直肠癌组织及癌旁组织标本为研究对象,检测CDK1在结肠癌及癌旁正常黏膜组织中的相对表达量...     

三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响

背景:国内外多年的研究表明稀土化合物在体内、外均具有明显的抑瘤性能。目的:观察三氯化镧对大鼠肝癌细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响。设计:对照观察。单位:吉林大学第一临床医院肾病科。材料:实验于2002-06/2003-07吉林大学基础医学院组织胚胎教研室细胞培养室完成。CBRH-7919细胞按三氯化镧剂量不同分为4组,即空白对照组,0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧组,每组分别培养1,3,5d,每组细胞各接种6复孔。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧,培养后1,3,5d观察CBRH-7919细胞生长变化。①运用流式细胞术计算各期细胞所占比例。②四甲基偶氮唑蓝实验测定各孔吸光度值(A值)。③免疫细胞化学检测与G1期调控有关的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的变化情况。主要观察指标:CBRH-7919细胞在不同剂量和不同培养时间的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的表达情况。结果:①三氯化镧对CBRH-7919细胞生长的作用:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后3,5d吸光度值低于空白对照组(3d分别为1.140±0.070,0.706±0.092,1.461±0.087;5d分别为1.888±0.020,0.625±0.037,2.544±0.032),差异有显著性意义(P<0.05,0.001)。②三氯化镧对CBRH-7919细胞G0/G1期百分率的影响:1.0mmol/L三氯化镧组培养后1,3,5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(60.70±0.20)%,(39.49±0.67)%;(61.66±0.97)%,(45.56±1.00)%;(69.92±0.18)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.01,0.001);0.1mmol/L三氯化镧组培养后5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(58.88±0.73)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.05)。③三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4阳性表达的影响:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后1d细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4表达(A)明显低于空白对照组(分别为562±35,453±22,860±82;705±84,680±28,762±16),差异有显著性意义(P<0.05,0.01,0.001)。结论:三氯化镧可通过下调细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。     

人脑胶质瘤细胞周期素D1的表达及意义

目的:探讨细胞周期素D1(cyclinD1)与胶质瘤的增殖和细胞分裂生长的关系,为胶质瘤的发病机理和新的可能治疗途径提供实验依据。方法:用免疫组化方法检测51例不同级别脑胶质瘤组织和10例脑外伤内减压切除脑组织中cyclinD1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达程度。结果:(1)与对照组相比,胶质瘤组织中存在cyclinD1的过度表达现象,有显著差异(P<0.01)。(2)胶质瘤恶性程度越高cyclinD1表达越强(P=0.042)。(3)51例胶质瘤组织中cyclinD1与PCNA均有不同程度的表达,Spearman相关分析显示两者呈正相关(P<0.01)。结论:cyclinD1在胶质瘤组织中呈过度表达并且随着胶质瘤恶性程度的增高而表达增强,cyclinD1可能参与并促进胶质瘤细胞增殖。     

脑胶质瘤中细胞周期素D1的表达及其对细胞增殖活性的影响

目的 研究脑胶质瘤中细胞周期素D1（cyclinD1）表达与胶质瘤细胞恶性程度及细胞增殖活性的关系。方法 采用免疫组化方法检测46例脑胶质瘤和7例正常脑组织标本中cyclinD1和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平，观察并分析各病理等级中两者表达的阳性率和标记指数。结果 脑胶质瘤组cyclin D1蛋白阳性表达率60、9％（28／46），显著高于正常脑组织组的14．3％（1／7）（P〈0、05）。随着人脑胶质瘤病理分级的增高，cyclin D1的阳性率明显升高，在高、低恶性度组间差异具有统计学意义（64．2％vs45．5％，P〈0．05）。经Spearman相关性分析发现cyclin D1与PCNA的平均标记指数呈明显正相关（r=0．576，P〈0、05）。结论 人脑胶质瘤中cyclin D1的表达与细胞增殖活性和病理学分级关系密切，可能对肿瘤细胞的增殖和恶性转化产生重要的推动作用。     

细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A与肾细胞癌患者临床及预后指标相关性研究

目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白2A(CDKN2A)与肾细胞癌（RCC）各参数的相关性。方法 在TCGA数据库中筛选出差异表达基因CDKN2A,并在TCGA数据库中验证CDKN2A的表达以及与RCC患者预后情况的相关性。采用Cox回归法进行多因素分析,然后在此基础上构建列线图,进行内部验证。在TIMER数据库中分析CDKN2A与免疫细胞之间的相关性。采用GSEA富集分析,探讨可能的作用机制。结果 数据库筛选得到差异表达分子为CDKN2A,CDKN2A在癌组织中的表达高于癌旁组织。TCGA和KM-plotter数据库显示,CDKN2A低表达的RCC患者有更好的预后。列线图C-指数为0.749(0.721～0.776),预测模型具有较好的准确性。TIMER数据库显示CDKN2A的表达与免疫浸润显著相关。结论 CDKN2A的表达降低可以显著延长RCC患者的总体生存期、疾病特异性生存期和无进展间隔期,可以用作RCC的新型预测性生物标志物,同时,可能与RCC的免疫浸润相关,在RCC微环境中对于肿瘤细胞发生免疫逃逸可能起重要的促进作用。干扰CDKN2A可能通过参与TP53调节RCC的周期阻...     

海洋单细胞海藻体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响

背景:海藻具有广阔的药理活性前景,加强其研究对有目的进行应用开发有重要的指导意义。目的:观察海洋单细胞海藻在体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响。方法:以酶消化法培养人脑胶质瘤干细胞,流式细胞分选出CD133阳性细胞,细胞传代获得第3代细胞。流式细胞仪检测海洋单细胞海藻作用前后细胞CD133表达变化,免疫组织化学检测贴壁细胞巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达。实验组分别加入不同质量浓度的海洋单细胞海藻,阴性对照加不含药的PBS,将稀释成4,6,8,10g/L的海洋单细胞海藻加入细胞培养液中并作用24,48,72h,流式细胞仪检测胶质瘤干细胞生长周期,应用酶标仪检测细胞生长抑制情况。结果与结论:随着浓度和时间的增加,与对照组相比倒置显微镜下可见实验组胶质瘤干细胞不易聚团成球,出现贴壁分化,并逐渐明显;加药后胶质瘤干细胞CD133表达量明显减少;出现的贴壁细胞免疫组织化学染色巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达阳性;流式细胞仪检测显示,停滞在S、G2/M期细胞数增加,而G0/G1期细胞数减少;随着浓度和时间的增加,胶质瘤干细胞增殖明显抑制,与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05～0.01)。提示海洋单细胞海藻能够抑制人脑胶质瘤干细胞的增殖,并促进其分化,且作用具有浓度和时间依赖性。     

海洋单细胞海藻体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响

背景：海藻具有广阔的药理活性前景,加强其研究对有目的进行应用开发有重要的指导意义。目的：观察海洋单细胞海藻在体外对人脑胶质瘤干细胞生物学活性的影响。方法：以酶消化法培养人脑胶质瘤干细胞,流式细胞分选出CD133阳性细胞,细胞传代获得第3代细胞。流式细胞仪检测海洋单细胞海藻作用前后细胞CD133表达变化,免疫组织化学检测贴壁细胞巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白的表达。实验组分别加入不同质量浓度的海洋单细胞海藻,阴性对照加不含药的PBS,将稀释成4,6,8,10g/L的海洋单细胞海藻加入细胞培养液中并作用24,48,72h,流式细胞仪检测胶质瘤干细胞生长周期,应用酶标仪检测细胞生长抑制情况。结果与结论：随着浓度和时间的增加,与对照组相比倒置显微镜下可见实验组胶质瘤干细胞不易聚团成球,出现贴壁分化,并逐渐明显;加药后胶质瘤干细胞CD133表达量明显减少;出现的贴壁细胞免疫组织化学染色巢蛋白及胶质纤维酸性蛋白表达阳性;流式细胞仪检测显示,停滞在S、G2/M期细胞数增加,而G0/G1期细胞数减少;随着浓度和时间的增加,胶质瘤干细胞增殖明显抑制,与对照组相比差异有显著性意义（P〈0.05～0.01）。提示海洋单细胞海藻能够抑制人脑胶质瘤干细胞的增殖,并促进其分化,且作用具有浓度和时间依赖性。     

汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1及诱导Treg细胞的影响

目的观察汉黄芩素对胃癌细胞分泌TGF-β1的影响,明确汉黄芩素是否可抑制幼稚T细胞向Treg细胞的转化。方法分别在缺氧及常氧条件下培养胃癌细胞株AGS、BGC823,并在其培养体系中加入汉黄芩素。以ELISA法检测胃癌细胞培养上清中TGF-β1的浓度。以胃癌细胞培养上清制备条件培养基,分别培养磁珠分选的CD4+CD25-T细胞72 h,流式检测Foxp3+Treg细胞的比例。结果常氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞分泌TGF-β1无明显抑制作用,而对BGC823细胞分泌TGF-β1有抑制作用;缺氧条件下,汉黄芩素对AGS细胞和BGC823分泌TGF-β1均有抑制作用。以常氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组与溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例无明显差异;以缺氧培养的AGS细胞培养上清为条件培养基,汉黄芩素组较溶媒组CD4+Foxp3+T细胞比例明显降低。结论汉黄芩素可抑制缺氧导致的胃癌细胞TGF-β1高表达,并可抑制其诱导Treg细胞的能力。     

ATM缺失介导的U937细胞凋亡敏感性与异常细胞周期蛋白依赖性激酶活性的关系

探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因(ATM)定向灭活增强细胞凋亡敏感性的关键蛋白分子。以U937的变异细胞系U937—ASPl3K(ATM阴性)和U937—pELSV2( )(野生型ATM阳性)作为细胞模型。用核小体免疫酶联检测试剂盒定量分析细胞凋亡。用Western blotting分析总p34cdc2、161位苏氨酸(THRl61)磷酸化的p34cdc2和14位苏氨胺(Thr14)、15位酪氢酸(Tyrl5)磷酸化的p34cdc2，并检测细胞核内(cdc25A、cdc25B、cdc25C的蛋白丰度。用RT—PCR方法分析cdc25A、cdc25B、cdc25C转录水平的表达。蛋白合成抑制剂不能阻断U937—ASP13K因ATM缺失诱导的细胞凋亡敏感性增强效应。而蛋白丝氨酸—苏氨酸磷酸酣酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)抑制剂可阻断该凋亡敏感性增强效应。U937—pZEOSV2( )细胞经放射线服射后，p34cdc2 Thr14和Tyrl5被磷酸化而处于灭活状态，该磷酸化修饰U937-pZEOSV2( ）胞核内三种酸酯酶cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白水平受照后呈现显的反应性降低有关。在U937-ASP13K细胞，ATM缺失抑制后受照后细胞cdc25A、cdc25B、cdc25C蛋白反应性降低，p34cdc2激酶Thr14和Tyr15低磷酸化而处于激活状态，这种抑制效应发生在转录水平上。ATM缺失使受照后细胞核内cdc25蛋白反应性降低被阻断，进而导致CDK的异常激活是ATM缺失介导凋亡敏感性增强的关键环节。     

神经干细胞在基因治疗胶质瘤中的研究进展

神经干细胞是近几年的研究热点之一,其作为基因治疗的载体更是引起了广泛的关注和深刻研究。本文就神经干细胞在基因治疗胶质瘤方面的优点、缺点,研究现状和发展方向做一综述。     

胶质瘤细胞系SHG44中肿瘤干细胞存在的可能性

目的:探讨人类胶质瘤细胞系SHG44中干细胞存在的可能性。方法:应用N2无血清培养基进行培养,碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞扩增,观察其增殖生长情况;应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果:胶质瘤细胞系SHG44在无血清的培养条件下细胞的形态发生改变,部分细胞聚集成类似神经干细胞的神经球,呈悬浮状态生长。免疫组织化学检查,细胞表达巢蛋白、波形蛋白和CD117这三种神经干细胞的标志物;分化后部分细胞表达神经元的标志物βⅢ型管蛋白、NF200、NSE和TrkC;大部分细胞表达星形胶质细胞的标志物胶质纤维酸性蛋白。结论:体外培养条件下,细胞表达神经干细胞的标志物,分化后同时表达神经元和星形胶质细胞表型,具有干细胞的性质。     

流式细胞术研究间充质干细胞对人Th1细胞的作用

本研究应用流式细胞术(FCM)探究胚胎骨髓来源的间充质干细胞(FBM-MSC)对人Th1细胞的作用。体外分离、培养、扩增人FBM-MSC,并对其进行免疫表型及分化潜能的鉴定。CD4+T细胞单独培养或与FBM-MSC共培养(FBM-MSC/CD4),通过FCM和酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别测定单独培养的CD4+T细胞和FBM-MSC/CD4中Th1细胞(干扰素-γ+)的数量。结果表明,FBM-MSC的免疫表型及分化潜能均符合间充质干细胞(MSC)的标准。FBM-MSC对Th1细胞的发育具有抑制作用。FCM检测发现,FBM-MSC/CD4中Th1细胞数量明显低于单独培养的CD4+T细胞。ELISA检测结果表明,IFN-γ的蛋白水平在FBM-MSC/CD4中亦低于单独培养的CD4+T细胞;同时,FBM-MSC/CD4中IL-6的表达水平明显高于单独培养的CD4+T细胞或FBM-MSC细胞中的水平。而IL-6中和抗体能够增加FBM-MSC/CD4中的Th1细胞数量和IFN-γ的水平。结论:FBM-MSC对人Th1细胞具有抑制作用,IL-6信号通路可能是该抑制作用的机制之一。     

Notch信号通路阻断剂对人脐带间充质干细胞软骨分化的影响

背景：Notch信号通路作为一条在细胞增殖和分化过程中起重要作用的信号通路,目前它在人脐带间充质干细胞在体外向软骨细胞诱导分化过程中的作用仍然未知。目的：首次探讨Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑（DAPT）对人脐带间充质干细胞向软骨细胞诱导分化的影响。方法：从人脐带中分离获得间充质干细胞,体外向软骨细胞诱导分化。实验分4组：①无诱导组换成含体积分数5%胎牛血清和1%双抗的DMEM高糖培养基培养。②单纯诱导组换成终浓度为6.25 mg/L胰岛素、6.25 mg/L转铁蛋白、10μg/L转化生长因子β1、0.1μmol/L地塞米松、50 mg/L维生素C、体积分数5%胎牛血清和1%双抗的软骨诱导培养基培养。③二甲基亚砜组在软骨诱导培养基中加入终浓度为0.1%的二甲基亚砜培养。④2,4-二氨基-5-苯噻唑组在软骨诱导培养基中加入终浓度为5μmol/L的2,4-二氨基-5-苯噻唑（溶于二甲基亚砜）培养,二甲基亚砜终浓度为0.1%。结果与结论：诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,细胞形态由长梭形变为多边形,且甲苯胺蓝染色和免疫荧光染色均呈现阳性;软骨诱导分化后Jag-1、PS-1、Notch-1、Hes-1的基因表达均明显下降（P〈0.01）;添加2,4-二氨基-5-苯噻唑后,与单纯诱导组相比,人脐带间充质干细胞中Jag-1、PS-1、Hes-1（P〈0.01）和Notch-1（P〈0.05）的基因表达显著降低;蛋白聚糖和Ⅱ型胶原蛋白含量均降低（P〈0.01）;蛋白聚糖的基因表达显著降低（P〈0.01）,Ⅱ型胶原蛋白的基因表达也出现一定程度的下降。提示Notch信号存在于人脐带间充质干细胞中,诱导人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化后,这种信号强度迅速减弱;2,4-二氨基-5-苯噻唑可能通过Jag-1-Notch-1-Hes-1途径抑制人脐带间充质干细胞向软骨细胞分化。     

EZH1、LKB1在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的:目的探讨脑股质瘤组织中的Zeste增强子同系物(EZH1)蛋白、肝激酶B1(LKB1)蛋白的表达及其临床意义。方法:选取2015年6月~2018年6月我院收集的80例术后脑胶质瘤标本、外伤术后正常脑组织标本(正常组)80例,采用免疫组化染色方法检测两组标未中EZH1蛋白、LKB1蛋白的表达,并分析不同年龄、性别、WHO分级、瘤周脑组织水肿的肿瘤组织中EZH1蛋白、LKB1蛋白表达差异。结果:脑胶质瘤组织中的EZH1蛋白、LKB1蛋白阳性表达率分别为76.25%、52.50%,正常组的EZH1蛋白、LKB1蛋白阳性表达率分别为18.75%、80.00%,脑胶质瘤组与正常组比较差异具有统计学意义(P<0.05);脑胶质瘤组织中的EZH1蛋白、LKB1蛋白阳性表达率经秩相关分析,二者无相关性(r=0.116,P=0.305);脑胶质瘤组织中的EZH1蛋白在WHO分级为Ⅲ级和Ⅳ级组织中的阳性表达率高于Ⅰ级和Ⅱ级组织,差异具有统计学意义(P<0.05);脑胶质瘤组织中的LKB1蛋白在WHO分级为Ⅲ级和Ⅳ级、瘤周脑组织水肿的肿瘤组织+的阳性表达率低于Ⅰ级和Ⅱ级、无瘤周脑组织水肿的肿瘤组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:脑胶质瘤组织中的LKB1蛋白表达下调、EZH1蛋白表达上调,并且与肿瘤的恶性程度有关。     

前列腺素E1对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

背景：目前还缺乏前列腺素E1对骨髓间充质干细胞增殖影响的研究。目的：观察前列腺素E1与骨髓间充质干细胞共培养对细胞增殖作用的影响。方法：体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞。取第3代细胞利用流式细胞仪鉴定细胞表面表型。以每孔1×104数量接种于96孔板,将前列腺素E1分别以O（对照组）,1,2,5,10,20,40,100pg／L的浓度作用骨髓间充质干细胞72h,以CCK-8法检测细胞增殖情况,观察最佳增殖浓度10％的前列腺素E1在不同时间（24,48,72h）对骨髓间充质干细胞增殖的影响。结果与结论：P3代骨髓间充质干细胞表面阳性率CDl1b／c为4．93％,CD29为99．93％,CD45为O．1％,CD90为99．58％,符合骨髓间充质干细胞特征。质量浓度为1,2,5,10,20,40,100t~g／L的前列腺素E1均可以促进骨髓问充质干细胞在体外的增殖,以10pg／L的作用最强。10pg／L前列腺素E1在作用48h后能显著促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖（P〈0．05）,其作用呈一定程度的时间依赖性,72h达最高。     

NOB1影响胶质瘤细胞增殖、凋亡的实验研究

目的 利用RNA干扰（RNAi）在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中沉默NOB1基因的表达,探讨NOB1对恶性胶质瘤细胞增殖以及凋亡的影响.方法 构建NOB1基因的短发卡（shRNA）慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒并感染人胶质瘤U251和U87-MG细胞,采用实时定量聚合酶链反应检测NOB1在恶性胶质瘤细胞系中的表达.采用甲基噻唑基四唑（MTT）比色法和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力情况;同时利用PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况,观察NOB1基因对U251和U87-MG细胞增殖、凋亡的影响.结果 NOB1基因在人胶质瘤U251、U87-MG细胞系中均明显高表达.NOB1-shRNA慢病毒能有效感染胶质瘤细胞,实验结果显示感染后U251和U87-MG细胞的增殖能力明显下降;U251克隆形成能力明显受到抑制;细胞周期在G0/G1停滞,而且细胞出现显著性凋亡;上述差异均具有统计学意义（P＜0.05）.结论 NOB1在人胶质瘤U251和U87-MG细胞中高表达;降低NOB1基因的表达,可以显著降低胶质瘤细胞的增殖,并促进胶质瘤细胞凋亡;NOB1基因在体外对胶质瘤细胞的发生发展可能具有癌基因的调节作用.     

人胚胎骨髓MSC及其突变株F6细胞DAPK基因表达及启动子甲基化检测

摘要：目的：研究人胚胎骨髓间充质干细胞（fetal mesenchymal stem cells, FMSC）及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶（deathassociated protein kinase,DAPK）基因的表达及启动子区域甲基化。 方法：用RT-PCR和甲基化特异性PCR（methylationspecific PCR, MS-PCR）技术对FMSC及F6细胞系DAPK 基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定。 结果：DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达。通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化。 结论：DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用。     

人多能干细胞的冷冻与保存

背景：人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破。但其在基础，临床研究中的广泛应用还有诸多限制，建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战。目的：回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展，探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式，致力于促进新的更有效的冷冻方案形成。方法：以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词，以“humanpluripotentstemcells，humanembryonicstemcell，humanintroducedpluripotentstemcell，vitrification，programmedcryopreservation，slow-freezing，cryopreservation”为英文检索词，应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普（viP）期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献，排除与研究目的无关及重复文献，保留58篇文献进一步总结分析。结果与结论：了解人多能干细胞冷冻过程中造成冷冻损伤的原因和机制，是寻找高效的冻存方案的关键。需要更清晰的了解冷冻过程中损伤的原理，改进和创新低温生物技术来避免各种冷冻损伤的发生并致力于探讨可重复的，高效的，符合GMP要求的，能大规模冻人多能干细胞的方案。     

周期素依赖激酶抑制剂对大鼠局灶性脑梗死后胶质增生的影响

目的　通过抑制细胞周期素依赖激酶 (cyclin dependentkinase ,CDKs) ,对星形胶。质细胞增殖进行干预 ,以探讨其对胶质增生的影响。方法　建立大鼠大脑中动脉阻塞 (middlecerebralarteryocclusion ,MCAO)再灌流模型 ,随机分为脑缺血对照组和干预组 (分别于再灌流后第 3天、第 5天腹腔注射CDKs抑制剂 ) ,应用免疫印迹和免疫组织化学方法检测各组MCAO后第 4周损伤侧皮层胶质纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)的表达 ;并通过HE染色对皮层中风囊体积进行测定 ,观察CDKs抑制剂对胶质增生的影响。结果　MCAO后第 4周 ,皮层可形成明显的中风囊 ,并且在胶质瘢痕附近存在密集、活化的星形胶质细胞 ;损伤侧皮层GFAP蛋白的表达明显增强。经给予CDKs抑制剂处理后 ,可明显缩小中风囊体积 (P <0 0 5 ) ,并部分抑制了GFAP蛋白的表达 (P <0 0 5 )以及星形胶质细胞的过度增殖。结论　通过对细胞周期蛋白的调控 ,可部分抑制胶质增生 ,从而有可能为神经再生和功能重建提供更有利的生存环境。