不同种属间成纤维细胞生长因子受体1限制片段多态性的初步研究

目的：研究成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）基因在不同种属间的限制片段多态性。方法：提取小鼠、鸡、家兔的基因组DNA,以FGFR1cDNA片段为探针进行Southern杂交分析。结果：各种属的组织分别得到不同形态的带条,即不同种属间的FGFR1限制片段多态性不同。结论：在物种进化过程中FGFR1在基因组水平上发生了变化,其限制性片段多态性的分析可能作为研究物种起源与种间亲源关系的辅助手段。     

DNA微条形码技术在降解检材种属鉴定中的应用及法医学意义

【立题依据】 标准DNA条形码技术是基于COI基因序列分析而建立的一种物种鉴定方法,但由于目的基因扩增片段长达645bp,在法医物证降解检材中的应用受到限制。因此,本研究拟建立DNA微条形码技术,以解决法医物证特殊检材种属鉴定的难题。 【设计思路】 设计分别扩增不同近缘动物COI基因的通用引物,构建相应的复合扩增体系,并从种属特异性、林敏性、稳定性、案件适应性等方面进行验证。 【实验内容】 DNA提取及处理:有机溶剂法提取实验样本的基因组DNA;制备DNA<200bp的降解检材和两种动物DNA不同比例混合的混合检材。引物设计与合成:设计4对种属特异性引物和1对无种属特异性的ND3引物,并合成COI基因的标准引物。PCR扩增:①以10种动物基因组DNA为模板,分别用自行设计的4对引物进行扩增,以检验引物种属特异性;②以10种动物不同浓度基因组DNA为模板,分别用对应种属特异性的引物进行扩增,以检验引物扩增效能;③以降解检材基因组DNA为模板,分别用自行设计引物和标准引物进行扩增,以评估引物应用价值。PCR复合扩增:在确定自行设计引物特异性、扩增灵敏度的基础上,通过调整引物量和退火温度构建含有5对引物的复合扩增体系,并用于单一样本和混合样本基因组DNA的扩增。扩增产物检测:用聚丙烯凝胶电泳结合银染的方法检测各种动物模板DNA的扩增效果,以判定引物的扩增特异性和灵敏度,及降解检材和混合检材的扩增效果;用循环测序的方法获得各扩增产物的碱基序列,并通过BLAST软件与DNA数据库比对及遗传距离分析,判定检材的种属来源。 【实验材料】 常见家禽(鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子)和常见家畜(水牛、黄牛、山羊、绵羊、马、驴、犬)共7科18种动物及人类血液样本各5例。 【可行性】 (1)不同种属动物COI基因序列可从相应DNA数据库获得;(2)熟练掌握引物设计的操作方法和PCR技术;(3)具备本研究所需的各种仪器、设备和试剂。 【创新性】 为法医物证降解检材的种属鉴定提供一种有效的方法。     

适用于天麻AFLP分析用的DNA提取及纯化方法

扩增片段多态性(amplified fragment length polymorphisms,AFLP)是上世纪90年代发展起来的一种检测DNA多态性的新方法,其基本原理是选择性扩增基因组DNA的酶切片段,由于不同材料的DNA酶切片段存在差异,因而便产生了扩增产物的多态性.     

河南省2003年医药卫生科研进展

一、基础医学研究 1.河南汉族群体中短串联重复序列的遗传多态性研究及应用:人类基因组是一个结构十分稳定的体系,同时又是一个变异的体系。在长期的进化过程中,基因组DNA的序列不断地发生变异,导致了不同种族、群体和个体间基因组的差异和多态性。随着分子生物学技术的不断发展,检测基因组DNA多态性已成为可能。河南地处中原,人口众多,河南汉族群体的遗传学特征对中国北方汉族人群有较好的代表性。河南省     

河南省2003年医药卫生科研进展

1．河南汉族群体中短串联重复序列的遗传多态性研究及应用：人类基因组是一个结构十分稳定的体系，同时又是一个变异的体系。在长期的进化过程中，基因组DNA的序列不断地发生变异，导致了不同种族、群体和个体间基因组的差异和多态性。随着分子生物学技术的不断发展，检测基因组DNA多态性已成为可能。河南地处中原，人口众多，河南汉族群体     

青海地区汉、回族女性FGFR2基因多态性与乳腺癌相关性的初步研究

目的观测FGFR2基因多态性在青海汉、回族女性乳腺癌患者与健康对照中的表现,初步探讨其与乳腺癌的相关性。方法收集青海汉、回族女性乳腺癌患者（各60例）与健康人群（60例）的外周血标本,提取基因组DNA,采用dHPLC方法对FGFR2基因rs2420946位点分型。结果汉族乳腺癌组FGFR2基因单核苷酸多态性位点rs2420946的基因型（CC,CT,TF）频率分别为16．67％,46．67％、36．66％,对照组为15．00％、45．00％、40．00％,两组间基因型分布差异无统计学意义（P〈0．05）。回族乳腺癌组FGFR2基因rs2420946的基因型（CC,CT,1丫r）频率分别为26．66％、46．67％、26．67％,对照组为38．34％、51．67％、10．00％,两组间基因型分布的差异有统计学意义（P〈0．05）,与C／C型比较,携带cT／TT基因型者乳腺癌发生的危险性增加（OR=1．70,95％CI=0．79—3．70）。两民族间FGFR2基因rs2420946的基因型（CC,CT,TF）频率不同（P〈0．05）。结论FGFR2基因rs2420946位点多态性可能与青海地区汉族人群乳腺癌易感性不存在相关性,与青海地区回族人群乳腺癌易感性存在相关性;两民族间FGFR2基因rs2420946的基因型（CC,CT,TT）分布频率存在差异。     

一种改良的基因组DNA提取方法

限制性片段长度多态性(RFLP)分析法是以DNA水平诊断遗传性疾病和研究疾病的重要手段。在RFLP流程中,从血细胞中提取基因组DNA最为方便。本文介绍一种较易获得纯度高,产量多的基因组DNA提取方法。1 材料和方法1.1 试剂:Proteinase K、Sarcosine、RNase(Boehringer)。酚、氯仿抽提液:酚与氯仿(氯仿:异成醇,24:1,v/v)以1:1(v/v)混合。酚重蒸后用Tris·HCl pH8.0溶液饱     

线粒体基因组全序列研究与动物分子系统发生的关系

线粒体DNA(m tDNA)基因组全序列作为研究动物系统发生的模型系统,是生物学家研究系统进化最有力的工具,它是惟一可以提供基因组水平上进行系统研究的分子标记。本文就目前已知的脊椎动物种属间m tDNA的序列特征、基因组结构特点、碱基组成特征进行对比,阐述在脊椎动物种属间各种群演变的关系,以及各种群进化的相对速率,说明m tDNA序列的比较是生物进化研究中可信度很高的分子证据。1线粒体在动物进化研究中的意义线粒体是真核生物细胞中能执行呼吸机能的一个相对独立的细胞器,线粒体DNA(m tDNA)基因组从它的形成开始,就伴随核基因组…     

原发性肝癌转化基因的RFLP研究(Ⅲ)

以原发性肝癌组织DNA以及作为对照的正常人白细胞DNA和人工流产胎儿绒毛DNA为材料,应用5′侧和3′侧两种N-ras探针以及c-sis探针,通过Southern吸印杂交探查其对特定限制酶的限制性片段长度多态性。结果未发现人癌基因N-ras对限制酶Bam HⅠ、PstⅠ、MspⅠ以及人癌基因c-sis对限制酶Eco RⅠ、HaeⅢ的限制性片段长度多态性;但发现人癌基因c-sis对限制酶Hind Ⅲ、SacⅠ、PstⅠ、PvuⅢ、MspⅠ等都有限制性片段长度多态性。这些等位片段可为进一步结合家系分析,探查致癌的家族素因以及肿瘤的遗传易感性研究中寻找遗传标记提供基础。     

南方鲇16S rRNA基因扩增片段的RFLP研究

目的分析南方鲇不同地理种群16S rRNA基因扩增片段多态性.方法利用PCR技术扩增获得南方鲇(Silurus meridionalis)线粒体DNA 16S rRNA基因片段,并用10种限制性内切酶酶切.结果 Hind Ⅲ、MspⅠ、DraⅠ、TaqⅠ、Hae Ⅲ在该片段上有限制性位点,但只有Hae Ⅲ在野生种群和养殖品种之间表现限制性片段长度多态性.结论不同野生地理种群间不存在限制性片段长度多态性,养殖品种与各野生种群间在该基因片段上存在一定程度的多态性变异.     

bFGF促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经元转化及机制

目的探讨碱性成纤维生长因子对大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的作用及信号通路.方法利用bFGF与不同生长因子和化学诱导剂组合诱导间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向神经元转化,观察分化过程中细胞形态、数目的变化,观察免疫细胞化学检测分化后细胞神经细胞标志蛋白和部分神经功能相关蛋白以及FGFR的表达情况,并计算转化率.结果①3组不同条件诱导后,MSCs均能分化为具有典型神经元形态的细胞,并明显表达NSE、MAP2和5-HT1D,但不表达GFAP;②bFGF预诱导组的转化率明显高于未预诱导组;③诱导后的神经元样细胞FGFR3表达明显增强.结论以DMSO和BHA为基础诱导剂,bFGF预处理可明显提高MSCs跨胚层分化为神经元样细胞的转化率,浓度为10 ng/ml的bFGF主要是通过FGFR3作用于MSCs.     

人成纤维细胞生长因子1-Ⅲb受体亚型在胰腺导管细胞增殖中的作用及对蛋白激酶的调节

目的探讨人类成纤维细胞生长因子受体1的Ⅲb亚型（FGFR1-Ⅲb）在TAKA-1胰腺导管细胞增殖中的作用及对有丝分裂激活的蛋白激酶（MAPK）的调节。方法以脂质体法将人类全长FGFR1-Ⅲb表达质粒pSVK4／FGFR1-Ⅲb稳定转染入TAKA-1胰腺导管细胞,采用Western印迹、Northern印迹、免疫荧光和糖基化分析等方法鉴定FGFR1-Ⅲb在TAKA-1细胞中的表达、分布和结构特征,并以生长因子刺激转染细胞,通过MTY法及MAPK分析,观察FGFR1-HIb受体在胰腺导管细胞中的功能及作用机理。结果FGFR1-Ⅲb受体是位于120000和130～150000之间的糖基化受体,在细胞膜表面和胞浆中为中等强度表达,在胞浆的核周围区为高表达,细胞核内不表达。FGF-1、-2和-4能够明显促进转染FGFR1-Ⅲb基因的TAKA-1细胞的生长,同时能够明显增强p44／p42MAPK的磷酸化。结论人类FGFR1-Ⅲb受体在胰腺导管细胞中为功能性受体,FGF-1、-2和4能够促进转染FGFR1-Ⅲb基因的TAKA-1细胞的增殖,其机制为促进p44／p42MAPK的磷酸化。     

成纤维细胞生长因子受体各亚型与小鼠肺纤维化及衰老的关系

目的观察成纤维细胞生长因子受体（FGFR）各亚型与肺组织的纤维化及衰老之间的关系。方法应用荧光定量聚合酶
链反应方法,分别检测不同鼠龄的小鼠肺组织FGFR1-4的表达水平;同时,采用常规病理切片（HE染色和Masson染色）观察不
同鼠龄小鼠肺组织的纤维化状况。结果（1）FGFR各亚型在小鼠肺组织中表达水平不均匀,FGFR2的含量高于其他几个亚型;
（2）8月龄小鼠肺组织中FGFR亚型表达水平均显著低于5周龄小鼠肺组织中FGFR的表达;（3）8月龄的小鼠肺组织表现出肺纤
维化的变化。结论小鼠肺组织中FGFR水平的下降可能与年龄的增加相关;不同年龄组均以FGFR2的含量为高;小鼠肺组织
随着鼠龄增加呈现不同程度的纤维化,可能与FGFR的表达下降相关;提示FGFs/FGFR可能参与衰老的发生及肺纤维化调节。
     

PCR与RFLP相结合对临床标本真菌鉴定的研究

探讨快速、准确检测临床常用标本真菌分离、鉴定方法。方法PCR与RFLP相结合,应用9种临床重要真菌的通用引物,对常用临床标本(痰、BALF、胸水、尿、血)224份进行分离、鉴定,并对19例进行痰与非痰标本结果一致性、敏感性比较。 结果224份标本共检出真菌83株,阳性率37.03％,其中白色念珠菌35株(42.3％),假热带念珠菌30株(36.1％),热带念珠菌10株(12％),光滑念珠菌8株(9.6％)。19例痰与非痰标本47次检测,一致性、敏感性良好。结论PCR结合RFLP对真菌检测具有敏感、快速的特点,值得临床推广应用。     

Discrimination between epidemiological cycles of rabies in Mexico.

BACKGROUND: The design of efficient rabies control programs within a geographic area requires an appropriate knowledge of the local epidemiological cycles. In Latin America, there is a geographical overlap of the two main epidemiological cycles: (a) the terrestrial cycle, where the dog is the main terrestrial vector and the principal cause of human transmission; and (b) the aerial cycle, in which the vampire bat Desmodus rotundus is representative in Mexico. This bat is the major sylvatic rabies vector transmitting rabies to cattle. The purpose of this study was to distinguish between the epidemiological cycles of rabies virus (aerial and terrestrial) circulating in Mexico, using restriction fragment length polymorphism (RFLP). METHODS: Thirty positive rabies isolates were obtained from different species (including humans, domestic, and wildlife animals) and geographical regions. The methodology included the extraction of RNA, and synthesis of cDNA, PCR, and RFLP using four restriction endonucleases. To determine the aerial cycle, BsaW I and BsrG I were utilized, and for terrestrial cycle, BamH I and Stu I. Most of the samples belonged to the aerial and terrestrial cycles, except for two skunk isolates from Northwestern Mexico, which were not cut by any of the enzymes. RESULTS: Three different migration patterns were detected: (a) the first was observed in six amplicons, which were cut by BsaW I and BsrG I (aerial cycle); (b) 19 amplified samples were digested with BamH I and Stu I enzymes (terrestrial cycle); and (c) two skunk isolates from Northwest Mexico, were not cut by any of the enzymes utilized in the experiments (hypervariable cycle). CONCLUSIONS: This concludes that RFLP can be used for the classification of rabies field samples in epidemiological studies. Moreover, it has demonstrated its usefulness, not only for differentiating between the main epidemiological rabies cycles present in Mexico, but also to detect new cycles in wildlife species.     

继发性甲状旁腺功能亢进症患者FGFR1与Klotho蛋白在不同增生类型甲状旁腺组织中的表达及其意义

 目的  探讨成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor 1, FGFR1)与Klotho蛋白在慢性肾衰竭继发性甲状旁腺功能亢进症(secondary hyperparathyroidism, SHPT)患者甲状旁腺细胞不同增生类型中的表达水平及临床意义。方法  选取在苏州九龙医院肾内科住院行甲状旁腺全切术的SHPT患者25例为治疗组,以同期内该院体检中心的健康志愿者10例作为对照组。采用酶联免疫吸附技术测定对照组及治疗组患者手术前后血清磷、血清全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone, iPTH)、成纤维细胞生长因子-23(fibroblast growth factor-23, FGF-23)和Klotho指标。治疗组病例依据手术切除甲状旁腺大小形态,对甲状旁腺增生参差明显的患者进行亚组分析,分为无明显增生组、弥漫性增生组和结节性增生组3个亚组,采用光镜及电镜观察其组织改变,并采用实时定量荧光Real-time PCR法检测各组甲状旁腺组织中的FGFR1和KLotho mRNA的表达,采用Western blot法检测其FGFR1和Klotho水平。结果  治疗组血清FGF-23及血磷水平明显高于对照组,血清Klotho水平明显低于对照组。切除甲状旁腺组织的总质量与iPTH呈正相关。术后48 h治疗组血清iPTH较术前明显下降,术后48 h治疗组血清FGF-23水平与术前相比无明显下降。亚组分析显示,无明显增生组的甲状旁腺组织中FGFR1和Klotho蛋白水平高于弥漫性增生组和结节性增生组;相对于弥漫性增生组,结节性增生组的甲状旁腺组织中FGFR1和Klotho蛋白水平更低;各亚组中FGFR1和Klotho mRNA表达差异无统计学意义。结论  尿毒症患者增生的甲状旁腺组织中FGFR1和Klotho 蛋白表达明显减少,可能在肾性继发性甲状旁腺功能亢进的发生、发展过程中起重要作用。     

Whole CanA Gene Amplification of Helicobacter pylori and Its Fingerprinting by Restriction Fragment Length Polymorphism

To set up a method of amplification for the whole CagA gene of Helicobacter pylori and its fingerprinting by restriction fragment length polymorphism(RFLP),nested PCR was employed in combination with TD-PCR to amplify the gene and EcoRI and Hind Ⅲ were used to generate the RFLP fingerprinting.Target DNA fragments from 13 of 20 samples were successfully amplified and the relevant RFLP fingerprintings were obtained.It is concluded that the method can be used to amplify the whole CagA gene and CagA gene has apparent diversity of RFLP profile.     

成纤维细胞生长因子受体1在小鼠肾发育中的表达

目的:观察成纤维细胞生长因子受体1(Fibroblast growthfactor receptors 1,FGFR1)在小鼠肾发育中的时空性表达,探讨FGFR1与肾发育的关系.方法:应用免疫组织化学技术结合体视学方法和免疫印迹法,测定不同胚龄(E)11.5、13.5、15.5 d和17.5 d及生后日龄(P)1、7、14、21d和40d小鼠肾组织内FGFR1的表达及其含量变化.结果:免疫组织化学结果显示FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管内均有表达,但在各期远端小管和集合管表达较强,而在各期肾小体表达较弱.体视学测量和免疫印迹结果均显示随着胚日龄的增加,FGFR1在各期肾小体、远端小管及集合管的表达量逐渐增加.结论:FGFR1可能对肾各结构的发育以及成熟肾的形态维持起重要作用.     

肾透明细胞癌中FGFR1的表达及其临床意义

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子受体1(fibroblast growth factor receptor1,FGFR1)在肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)中的表达及其临床意义。方法:采用SP免疫组化方法检测45例RCCC组织中FGFR1的表达。同时,用原位杂交方法检测20例RCCC组织中FGFR1mR-NA的表达。结果:在RCCC中FGFR1蛋白及FGFR1mRNA表达的阳性率分别为68.9%(31/45)、80.0%(16/20),明显高于癌旁正常肾组织(P<0.01)。FGFR1蛋白表达与FGFR1mRNA的表达呈一致性(P<0.05)。FGFR1蛋白表达与病理组织学分级和临床TNM分期相关(P<0.05)。结论:FG-FR1与肾透明细胞癌的发生发展和转移密切相关,对判断预后具有一定临床意义。     

FGF受体在增生退化期血管瘤中表达的定量分析及意义

目的：探讨成纤维细胞生长因子受体与血管瘤增生退化的关系。方法：采用免疫组织化学ＳＰ法及图像分析技术,对４０例增生期血管瘤、３０例退化期血管瘤组织中的成纤维细胞生长因子（ＦＧＦ）受体表达进行了定量分析。结果：ＦＧＦ受体以增生期血管瘤含量最多;退化期血管瘤单个ＦＧＦ受体阳性细胞上所含受体的量多于增生期血管瘤。结论增生期血管瘤组织中ＦＧＦ的功能活性强于退化的期血管瘤：ＦＧＦ与血管瘤的增生退化过程有密切关