5'-FITC标记的PCNA反义寡核苷酸在人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325中的分布和稳定性分析

目的 观察修饰型和非修饰型PCNA反义寡核苷酸在阳离子脂质体介导下或直接转染人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325后在细胞内的分布及其稳定性,探讨其机理。方法 将异硫氰酸荧光素(5’-FTTC)标记的18mer硫代磷酸化修饰型及未修饰型PCNA反义寡核苷酸在脂质体介导下或直接转染人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325,应用荧光显微镜动态观察荧光在转染细胞内的时相分布。结果 修饰型反义寡核苷酸直接转染细胞30min后,荧光在胞浆内呈现离散型点状分布,6h后胞浆荧光较强但仅有极少数细胞核有荧光积聚。在脂质体介导下,荧光细胞数目明显增加,2h后几乎所有细胞核内均出现荧光,持续24h后核内荧光逐渐减弱。而未修饰型反义寡苷酸在直接转染或脂质体介导下均发现荧光在数小时后消散。结论 阳离子脂质体DOSPER不仅能促进PCNA反义寡核苷酸进入BT325细胞核,而且其与反义寡核苷酸形成的脂质体/反义寡核苷酸复合物对反义寡核苷酸有一定的保护作用;硫代磷酸化修饰能增加PCNA反义寡核苷酸在BT325中的稳定性。     

bFGF反义寡核苷酸诱导胶质瘤细胞的凋亡

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:将硫代磷酸修饰的bFGF反义寡核苷酸转染人脑胶质瘤细胞系TJ905,采用原位细胞死亡检测方法和电子显微镜,观察胶质瘤细胞凋亡的形态学变化,并用免疫组化法检测了增殖细胞核抗原(PCNA)的变化。结果:胶质瘤细胞呈现凋亡的形态改变,PCNA的表达明显降低。结论:bFGF反义寡核苷酸可诱导胶质瘤细胞的凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖。bFGF基因可作为反义治疗的目的基因。     

PCNA反义脱氧寡核苷酸体外抑制BT325细胞增殖的实验研究

目的 观察增殖细胞核抗原(PCNA)基因反义脱氧寡核苷酸对人多形性胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法 采用人工合成的PCNA反义和正义脱氧寡核苷酸经阳离子脂质体包裹后转染人多形性胶质母细胞瘤细胞BT325。用MTT比色法检测转染后瘤细胞的生长抑制率;~3H-TdR法检测细胞DNA合成速率;流式细胞仪检测细胞周期分布;RT-PCR检测PCNA mRNA表达;免疫组化方法检测PCNA蛋白表达水平。结果 PCNA反义寡核苷酸可明显抑制BT325细胞的生长;明显减慢其DNA合成速率,阻滞细胞由GO/G1期→S期,PCNA mRNA及其蛋白质表达也同时受到抑制。抑制效应在转染后12h即出现,24h达到高峰,48h后逐渐减弱。抑制作用随反义寡核苷酸浓度的升高而增强,0.8μM PCNA反义寡核苷酸的细胞生长抑制率达84.6％。同样浓度的正义寡核苷酸和脂质体则无明显的细胞生长抑制作用。结论 PCNA反义寡核苷酸在体外能明显抑制人脑多形性胶质母细胞瘤细胞BT325生长、DNA合成、mRNA和PCNA蛋白表达。PCNA基因可望成为胶质瘤基因治疗的新靶点。     

c—fos反义寡核苷酸对谷氨酸处理培养海马神经元的保护作用

目的 :探讨反义寡核苷酸c fos对谷氨酸处理培养海马神经元的保护作用。方法 :应用MTT法 (四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )检测c fos反义寡核苷酸在不同浓度和时间对谷氨酸处理原代培养海马神经细胞的光密度值。结果 :c fos反义寡核苷酸在不同浓度和时间下对谷氨酸处理原代培养海马神经细胞光密度值均有增加。结论 :c fos反义寡核苷酸对谷氨酸毒性损伤的培养海马神经元有保护作用     

c—fos反义寡核苷酸对谷氨酸诱导PC12及海马神经元凋亡的影响

目的：探讨反义寡核苷酸c-fos对谷氨酸诱导培养的海马神经元及PC12凋亡的影响。方法：应用TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end labeling)法和免疫细胞学方法检测了c-fos反义寡核苷酸对谷氨酸诱导原代培养的海马神经元及PC12细胞凋亡以及对凋亡蛋白Bax表达的影响。结果：与对照组相比,c-fos反义寡核苷酸谷氨酸谷氨酸诱导原供培养的海马神经元及PC12细胞的凋亡率减少和凋亡蛋白Bax表达量下降,差异有显著意义,结论：c-fos反义寡核苷酸对谷氨酸诱导的细胞凋亡有保护作用。     

p53,CerbB—2和PCNA在脑胶质瘤中表达的意义及其 …

目的 研究７６例脑质瘤的ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ表达意义及其相关性。方法 应用ＳＰ微波免疫组化技术和统计学分析。结果 （１）在７６例脑胶质瘤组织中；ｐ５３，ＣｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ的阳性表达率分别是４４．７４％（３４／７６），３４．２１％（２６／７６）和８０．２６％（６１／７６）。（２）ｐ５３的表达强度与胶质瘤的组织学类型和恶性程度呈显著正相关（Ｐ〈０．０１）。（３）ｐ５３ＣｅｒｂＢ－２和Ｐ