镉对未成年雌性大鼠卵泡发育的影响

目的观察镉对未成年雌性大鼠卵泡发育的影响,探讨其性腺毒性的作用机制。方法取健康清洁级未成年雌性sD大鼠38只,随机分为染镉高、中、低剂量组和对照组,前三组皮下注射氯化镉染毒,1次/d,每周5d,连续6周;对照组注射等体积生理盐水。阴道细胞涂片法连续观察大鼠动情周期,原子吸收光谱法检测卵巢组织镉含量,组织切片图像分析法检测卵巢组织各期卵泡构成比例。结果与对照组相比,各染镉组大鼠卵巢组织镉含量明显增高、动情周期明显延长（P〈0．05或0．01）,且染镉高、中剂量组卵巢组织内次级卵泡构成比例均明显降低、闭锁卵泡构成比例明显升高（P〈0．05或0．01）。结论镉能在未成年雌性大鼠卵巢组织蓄积并影响卵泡的正常发育,通过促进卵泡的闭锁与凋亡进而抑制排卵可能为其性腺毒性的作用机制之一。     

肿瘤抗原冲击致敏的树突状细胞在骨髓移植小鼠中抗白血病的免疫反应

目的 研究肿瘤抗原冲击致敏（pulsed with whole tumor lysates，TP）的树突状细胞（dendritic cells，DC）在骨髓移植（bone marrow transplantation，BMT）小鼠中诱导特异性的抗白血病免疫反应。方法 2002—06～2003—06在山东大学齐鲁医院使用mGM—CSF＋mIL-4培养诱导骨髓细胞分化，将L7212白血病细胞的冻融抗原冲击致敏DC，培养制备肿瘤抗原冲击致敏的树突状细胞（tumor lysates pulsed dendritic cells，TP—DC），将TP—DC重复免疫BMT后615小鼠，同时设立对照组，观察各组小鼠的生存期及存活率。结果 TP—DC能诱导产生针对L7212白血病细胞的特异性细胞毒性，与对照组相比差异显著（F=391，77，P〈0．01）。TP—DC重复免疫组小鼠的生存期及存活率明显高于对照组，差异显著（χ^2=18．14，P〈0．01）。结论 TP—DC重复免疫在BMT小鼠中产生明显的抗白血病免疫反应.     

胸腺肽对免疫性肝损伤并发败血症小鼠免疫功能的影响

47只昆明种鼠，其中7只尾静脉注射生理盐水0．2ml／只（正常对照组），1次／d，连续13d。另40只腹腔注射大肠埃希菌液和卡介苗建立肝损伤模型，分为观察1组和观察2组各20只，观察2组同时腹腔注射胸腺肽，1次／d，连续12d。第13天两组均经尾静脉注射脂多糖（LPS）诱导肝损伤。三组断头处死后测血清肿瘤坏死因子（TNF-α）及白介素-2（IL-2），并观察存活率。结果观察1组血清TNF-α水平明显高于正常对照组和观察2组（P〈0．01），IL-2明显低于上述两组（P分别〈0．01、〈0．05）；观察2组血清TNF-α高于正常对照组（P〈0．01），IL-2与正常对照组比较无显著差异（P〉0．05）。观察2组小鼠存活率显著高于观察1组，但低于正常对照组，P均〈0．01。认为胸腺肽可提高免疫性肝损伤合并败血症小鼠的机体免疫功能。     

液氮保存同种异体血管（动脉）移植的实验研究

目的：通过对经液氮保存的犬同种异体血管体内移植后活性、内皮细胞覆盖及通畅情况的研究，探讨该种血管作为血管材料替代物的优越性。方法：取犬新鲜动脉，经抗生素灭菌后，保存于液氮中８～２９周后，用于同种异体移植２２例，同时分别对冷冻前的血管、复苏血管、移植后的同种异体血管进行组织培养和病理分析，观察低温对血管壁结构、功能和血管活性的影响及经低温保存后供体血管在受体内１～５３周的情况。结果：低温保存的血管，其管壁基本完整。体内移植后累积通畅率为７７．３％，其中６８．２％的移植血管有内皮细胞覆盖。血管栓塞率为１３．６％。体外培养发现移植后有８６．４％的血管有活性。结论：经液氮保存的同种异体血管，保存了血管的活性，移植后内皮细胞重新覆盖，减少了血栓形成，该方法保存的血管为一种较为理想的血管材料替代物。     

岩舒注射液对小鼠H22移植瘤p16表达及甲基化状态的影响

目的研究岩舒注射液对小鼠H22移植瘤的作用及其机制。方法用小鼠H22移植瘤模型观察岩舒注射液的抗肿瘤作用，造模成功后分为岩舒注射液组和对照组，测定两组瘤重的差别；采用免疫组化法检测两组p16基因表达；采用限制性内切酶酶切、聚合酶链反应检测两组p16基因启动子区甲基化状态。结果岩舒注射液组与对照组相比抑瘤率为59．49％，有显著差异（P〈0．01），p16蛋白表达增加（P〈0．01），p16基因甲基化状态降低（P〈0．01）。结论岩舒注射液有抑瘤作用，增加p16蛋白表达，降低p16启动子区域甲基化水平可能是其主要的作用机制。     

血红素加氧酶-1表达对HBV复制的反向调控作用

目的评价血红素加氧酶-1（HO-1）对HBV复制的调控作用。方法采用分子克隆的方法分别构建人H（）_1真核表达载体——pH0和HO-1RNA干扰质粒——pHi，同HBV可复制性克隆pHBV1．3体外共转染人肝癌细胞系Huh-7，检测HBV抗原分泌情况和HBV相关mRNA含量。利用HBV急性感染小鼠模型，腹腔注射钴原卟啉（CoPP）IX和锌原卟啉（ZnPP）IX分别诱导和抑制HO-1表达，检测血清HO～1水平、HBV效价，免疫组织化学染色观察HBcAg在肝细胞内表达情况。分别在细胞水平和动物体内水平，评价HO-1表达对HBV复制的调控作用。结果同空载体共转染细胞相比，pHO共转染后HO-1的分泌水平明显上调（P〈0．01），HBsAg／HBeAg的分泌受到抑制（均P〈0．01）；pHi共转染后HO-1的分泌水平下降（P〈0．01），而HBsAg／HBeAg分泌增加（P均〈0．01）；但各组HBV相关RNA水平无明显差异。CoPPIX注射后诱导小鼠血清H0—1高表达（P％0．01），ZnPPIX则有效抑制了HO-1表达（P％0．01）。同对照组相比，CoPPIX组小鼠血清HBVDNA含量降低，肝脏内HBcAg阳性染色信号也随之明显减弱（P均〈0．01）；而ZnPPIX组小鼠血清HBVDNA含量增加，肝脏内HBcAg表达明显增强（均P〈0．01）。结论上调HO-1表达可有效抑制HBV复制，而下调其表达有利于HBV复制，且其可能是在转录后环节上发挥抗HBV作用。     

全氟烷基类化合物对卵巢的毒性作用及其机制研究进展

全氟烷基类化合物（PFASs）是一种环境内分泌干扰物。卵巢是女性的性腺器官，可维持女性的生殖和内分泌功能。PFASs对卵巢的毒性作用主要有延迟月经初潮时间、导致月经周期紊乱、抑制卵巢类固醇激素合成、导致卵巢衰老、多囊卵巢综合征及子宫内膜异位症的发生等。PFASs可能从卵子发生、卵泡发育及卵巢类固醇激素合成过程等方面发挥卵巢毒性作用：PFASs可能通过激活过氧化物酶体增殖物受体信号通路、中断卵母细胞和颗粒细胞胞间通讯以及诱导产生氧化应激等干扰卵子的发生；全氟辛烷磺酸酯可通过抑制类固醇生成急性调节蛋白mRNA表达、抑制KiSS1转移抑制因子（Kiss1）和KISS1受体（Kiss1r）表达，影响卵泡的发育；PFASs可通过调控负责胆固醇转运和卵巢类固醇生成蛋白质的表达，影响卵巢类固醇激素的合成。     

多囊卵巢小鼠卵泡GDF-9 mRNA的表达及意义

采用原位杂交的方法检测雄激素致不孕小鼠卵巢生长分化因子-9（GDF-9）mRNA的表达，认为高雄激素可减弱GDF-9mRNA的表达强度，表达强度降低的GDF-9可能与多囊卵巢综合征（PCOS）卵泡发育成熟障碍及优势卵泡的选择有关。     

脱氢表雄酮对小鼠成骨细胞增殖周期与凋亡的影响

目的 探讨脱氢表雄酮（DHEA）对小鼠成骨细胞（OB）增殖周期与凋亡的调控作用。方法 颅骨酶解法分离OB和体外培养OB，体外模拟雌激素撤退现象，分为对照组、10^-10moL／L E2组、10^-7moL／L DHEA组共3组，流式细胞仪分析DNA含量，Annexin V-FITC／PI双标记流式细胞仪分析细胞早期凋亡，透射电镜观察OB超微结构。结果 DNA含量分析显示，DHEA组的S期和G2／M期细胞百分率比对照组明显增加，细胞增殖指数显著增加（P〈0．01）；DHEA和E2对OB还具有显著的抗凋亡作用（P〈0．01或P〈0．05）：透射电镜可见经10^-7moL／L DHEA诱导后的OB细胞器明显增多，内质网扩张，线粒体丰富等形态学改变。结论 DHEA在体外可直接促进小鼠OB的增殖并抑制其凋亡。     

自体外周血干细胞移植对急性心肌梗死患者左室重构和心功能的影响

目的评价自体外周血干细胞移植对急性心肌梗死患者左室重构和心功能的影响。方法共有65例急性心肌梗死患者入选本项前瞻性、非随机、开放试验（其中35例患者为细胞移植组，30例为对照组）。两组患者均接受标准的介入治疗和药物治疗，细胞移植组的35例患者同时接受自体外周血干细胞移植。两组患者在移植前及移植后6个月应用超声心动观察左室形态、室壁运动情况及左室功能指标的变化。结果6个月后干细胞移植组术前后比较左室舒张末期容LVEDV）明显缩小[（136．4±14．9）ml比（120．6±19．6）ml，P〈0．01]，左室收缩末期容量（LVESV）明显缩小[（84．5±18．9）ml比（70．5±14．9）ml，P〈0，01]，左室射血分数（LVEF）明显增高[（48．8±7．2）％比（56．5±7．4）％，P〈0．01]。左室壁节段性运动指数（WMSI）明显降低[（1．41±0．21）比（1．10±0．15），P〈0．01]；左室射血前时间／射血时间比值显著降低[（0．46±0．08）比（0．40±0．07），P〈0．01]，左室舒张功能指标：舒张早期峰值速度（Em）增高，舒张晚期峰值速度（Am）降低，Em／Am增高。对照组治疗前后比较上述指标均有改善，但差异无统计学意义，两组术后上述指标比较差异有统计学意义。结论经皮经腔冠状动脉内自体干细胞移植术能明显改善急性心肌梗死患者的左室功能，减小左室容量，阻止或延缓左室重构，改善心功能。     

多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗诱导的保护力观察

目的探讨多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG-EmⅡ／3）疫苗免疫对Em原头节攻击感染的保护性作用。方法Balb／c小鼠随机分为疫苗皮下注射组、鼻腔接种组、空载体对照组、卡介苗（BCG）对照组和磷酸缓冲液（PBS）对照组。接种免疫8周，用Em原头节进行攻击感染，感染后18周剖杀小鼠，称取检获泡球蚴质量，计算减蚴率，并用ELISA法测定血清中IgG及其亚类和IgE水平。结果与PBS对照组比较，疫苗皮下注射组和鼻腔内接种组小鼠检获泡球蚴质量均降低（q=2．65、3．68，P〈0．05或〈0．01），疫苗鼻腔内接种组与皮下注射组比较，检获泡球蚴质量降低（q=2．78，P〈0．05），疫苗接种组的减蚴率为63．23％～74．70％；与疫苗鼻腔内接种前比较．接种后和Em原头节攻击后小鼠血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平均明显升高（P〈0．05或〈o．01），IsG1降低（P〈0．01），IgG3未见明显改变（P〉0．05）。结论重组BCG-EmⅡ／3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径．IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用。     

日本血吸虫云南品系SIEA对小鼠感染皖鄂品系血吸虫的免疫保护作用

目的观察日本血吸虫云南品系未成熟卵可溶性抗原SIEA免疫小鼠后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,是否也能诱导出免疫保护效果。方法20只ICR小鼠随机分为免疫组和对照组,经日本血吸虫云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴,感染后46d观察减虫率、粪卵减少率、雌虫子宫内虫卵数、肝表面虫卵结节数、肝脏各期虫卵数及各期虫卵构成比。结果SIEA免疫后粪卵及雌虫子宫内虫卵减少率分别为34．45％,23．69％（P〈0．05）;肝表面虫卵结节密度下降29．03％（P〈0．05）;肝组织内虫卵减少29．07％（P〈0．05）,成熟虫卵减少48．41％（P〈0．05）。肝组织内成熟虫卵比例下降,未成熟卵比例增加（P〈0．05）。结论日本血吸虫（云南品系）未成熟卵可溶性抗原（SIEA）的抗原性较强,小鼠经云南品系SIEA免疫后攻击感染皖鄂品系血吸虫尾蚴也诱导小鼠产生了抗卵胚发育及抗雌虫生殖免疫力,结果提示将来在中国大陆使用SIEA疫苗时,似可不必考虑血吸虫品系的影响。     

牛肝细胞再生刺激因子对重症肝炎存活率的影响

从新生牛肝脏提取肝细胞再生刺激因子（ｃＨＳＳ），观察其对ＣＣｌ４致小鼠急性肝衰竭与人重症病毒性肝炎的作用。结果显示，ｃＨＳＳ组中毒性肝坏死小鼠的存活率为６０％，显著高于对照组的１０％（Ｐ〈０．０１）。采用ｃＨＳＳ治疗重症肝炎４３例，存活率为６２．８％，一般综合治疗组４０例，存活率３７．５％（Ｐ〈０．０５）。提示ｃＨＳＳ能提高ＣＣｌ４致急性肝衰竭小鼠与重症肝炎病人的存活率。     

OHSS患者卵泡液及血清VEGF、NO、淋巴细胞CD25变化及其临床意义

收集体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期中的12例中、重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）患者（OHSS组）和26例无OHSS患者（对照组）的卵泡液及取卵日血样（S1）和取卵后第7天血样（S7），检测其血管内皮细胞生长因子（VEGF）、一氧化氮（No）水平和淋巴细胞CD25。绪果OHSS组卵泡液和S1中VEGF含量及GD25与对照组比较，P〉0．05，NO水平比较，P〈0．01；S7中与对照组三者比较，P均〈0．01。表明三者与OHSS的发病有关，其变化有助于判断病情，指导治疗。     

旋毛虫成囊前期幼虫抗原保护性免疫的研究

目的比较旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原对小鼠产生的免疫保护作用。方法分别用旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原免疫小鼠,同时设佐剂组和阴性对照组,间隔7d免疫1次,共3次。末次免疫后7d,每只小鼠用200条旋毛虫感染期幼虫经口进行攻击感染。感染后7d和30d分别检查各组小鼠肠道成虫数和肌幼虫数;用ELISA测血清中抗旋毛虫肌幼虫IgG抗体。结果虫体抗原、排泄分泌抗原、表面抗原和佐剂组的成虫减虫率分别为84．89％、89．73％、85．65％、2．57％;肌幼虫减虫率分别为71．71％、80．98％、73．66％、5．60％。排泄分泌抗原组、表面抗原组的成虫减虫率（P均〈0．05）及肌幼虫减虫率（P均〈0．01）均高于虫体抗原组。各免疫组小鼠血清IgG抗体滴度明显升高,虫体抗原组、排泄分泌抗原组和表面抗原组的几何平均倒数滴度分别为2798．89、3474．51、2984．83,分别为阴性对照组（459．32）的6．09、7．56、6．50倍。结论旋毛虫成囊前期幼虫虫体抗原、排泄分泌抗原和表面抗原均能诱导宿主产生较强的抗攻击感染保护力。成囊前期幼虫的排泄分泌抗原显示出更强的免疫原性。     

体外非酒精性脂肪肝细胞模型线粒体通透转换孔的变化及其与细胞凋亡的关系

目的探讨线粒体通透转换孔（PT孔）与肝细胞脂肪变和细胞凋亡的关系。方法采用油酸诱导肝细胞株L02细胞建立非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）体外模型，油红O染色观察细胞脂肪变情况，应用荧光显微镜法观察各组荧光下降百分比（反映PT孔的开放程度），流式细胞仪Annexin V／P1法检测细胞凋亡情况。结果荧光显微镜观察结果显示，油酸可诱导L02细胞PT孔开放（72．58％±2．78％），与对照组（8．28％±4．98％）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；并可于24h后引起肝细胞脂肪变，至72h后肝细胞脂肪变持续存在；随NAFLD体外模型造模时间延长，细胞凋亡比例逐渐增加，以48h和72h（分别为11．09％±4．95％和15．24％±2．45％）最为显著，与对照组（4．56％±1．25％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论PT孔开放程度与NAFLD体外模型细胞凋亡密切相关，并与肝细胞脂肪变有一定关系。     

大鼠自体皮下移植卵巢的冻存剂选择

目的观察不同冻存剂对大鼠卵巢组织的冻存效果,以选择良好的卵巢组织冻存剂。方法 48只成年雌性Wistar大鼠随机分为实验组和对照组。实验组大鼠切除卵巢后于不同的冻存液中冻存,根据选用冻存剂不同将实验组分为A、B、C、D组,A组冻存剂为二甲基亚砜（DMSO）＋丙二醇（PROH）＋胎牛血清（FBS）＋蔗糖（S）＋乙酰胺（AC）、B组为DMSO＋PROH＋FBS＋S、C组为DMSO＋PROH＋FBS、D组为PROH＋S＋AC。各组卵巢在液氮中冻存2周后解冻并行自体皮下移植,3个月后自腹主动脉取血检测血清雌二醇（E2）并进行移植卵巢组织切片观察。对照组为E和F组,E组为正常对照组,F组为新鲜卵巢移植组。结果 A、B、C、D组与E组相比,各级卵泡均有不同程度的损伤和数量减少;A组卵巢组织中具有完整结构的初级卵泡和次级卵泡数量多于B、C、D组。A、B、C、D组血清E2水平低于E组（P均〈0.01）,B、C、D三组血清E2水平低于F组（P均〈0.01）,A组血清E2水平明显高于B、C、D三组（P均〈0.05）。结论冻存剂DMSO＋PROH＋FBS＋S＋AC对大鼠卵巢的冷冻效果较好,移植后的卵巢组织有较好的功能。     

实验性犬气管照射与深低温保存后同种异体移植的研究

目的 探讨气管大剂量照射与深低温保存后同种异体节段性气管移植的可行性。方法 健康杂种狗22只，分两组：对照组供体气管不做任何处理。实验组供体气管照射100000cGy后液氮深低温（－196℃）保存，同种异体气管移植长度为4cm(5-6个环）。移植后两组动物均不使用免疫抑制剂。结果 对照组动物均于移植后2－3周因气管狭窄窒息死亡或处死，肉眼标本见移植段气管明显狭窄，挛缩，部分软骨脱落。照射与深低温保存组动物于移植后1个月内无狭窄症状，但半数动物于术后1．5－2个月出现不同程度的狭窄，其中3只动物气管内置管后临床症状缓解。半数实验组动物移植段气管无狭窄发生，内膜光滑，吻合端愈合良好，动物长期生存。结论 气管大剂量照射与深低温保存方法可降低同种异体移植的免疫原性，经此法处理的气管移植后可不使用免疫抑制剂，是一种值得继续探讨、有临床应用前景的方法。     

移植培养人肝细胞对急性肝衰竭小鼠的保护作用

目的探讨腹腔移植微载体粘附培养人肝细胞对Ｄ氨基半乳糖（ＤＧａｌ）诱导的急性肝衰竭小鼠的保护作用．方法采用胶原酶灌流法分离人肝细胞，胶原被覆的微载体Ｃｙｔｏｄｅｘ３加以培养，经腹腔注射２×１０６个肝细胞及载体，观察急性肝衰竭小鼠（ｎ＝３２，２５ｇ／ｋｇＤＧａｌ诱导４ｈ）７２ｈ存活率、血清ＡＬＴ、总胆红素以及肝脏病理变化．结果与只接受微载体而无粘附肝细胞的对照组比较，腹腔移植培养肝细胞对肝衰竭小鼠的存活率有明显改善（６５％ｖｓ０％），其血清ＡＬＴ（ＩＵ／Ｌ，２１７４４±２６３０ｖｓ４２６３１±４９２８，Ｐ＜００５）及总胆红素（ｍｍｏｌ／Ｌ，２６９１±３７６ｖｓ４１６８±３８３，Ｐ＜００５）较低．肝组织病理改变较轻．结论腹腔移植微载体粘附培养肝细胞可提供代谢支持，使ＤＧａｌ损伤的小鼠肝功能恢复．     

慢传输运动小鼠结肠组织中Cajal间质细胞的改变

背景：慢传输型便秘的发病机制尚不清楚。近年Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal，ICC）对胃肠平滑肌的起搏作用和介导神经递质的作用已被人们所认识，且在一些胃肠动力障碍性疾病中存在ICC数量和结构的异常改变。目的：探讨ICC在慢传输运动小鼠结肠组织中的改变。方法：经吗啡诱导建立结肠慢传输运动小鼠模型，采用免疫组化法观察各组小鼠结肠组织ICC的表达和分布；采用Western blot蛋白印迹试验和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析各组小鼠结肠组织c-Kit蛋白和c-kit mRNA的表达。结果：①45天后两实验组小鼠近端结肠组织免疫组化c—kit阳性细胞较对照组显著减少（P〈0．01），实验组Ⅱ较实验组Ⅰc-kit阳性细胞减少更明显（P〈0．01）；60天后停吗啡组的c-kit阳性细胞较纳洛酮阻断组和对照组显著减少（P〈0．01）。小鼠远端结肠组织c—kit阳性细胞在所有组别之间无显著差异。②45天后两实验组小鼠近端结肠组织c-Kit蛋白和c-kit mRNA的表达较对照组均显著减少（P均〈0．01）；60天后停吗啡组近端结肠组织c-Kit蛋白和c-kit mRNA的表达仍较纳洛酮阻断组和对照组显著减少（P〈0．05和P〈0．01）。结论：吗啡诱导的慢传输运动小鼠近端结肠组织中ICC数量下降，c—Kit蛋白和c-kit mRNA的表达明显减少，提示近端结肠ICC减少可能是结肠慢传输运动的原因之一；停用吗啡未能逆转ICC的变化，结肠慢传输运动也无改善。纳洛酮阻断后．ICC的变化基本恢复，结肠动力改善，纳洛酮可能阻止和恢复吗啡诱导的ICC数量的变化。