甲状旁腺素和活性维生素D在调节肾脏钙结合蛋白中的协同作用

目的:明确甲状旁腺素(PTH)和1,25-二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]在调节肾脏钙结合蛋白中的各自和协同作用.方法:采用免疫组织化学方法观察PTH基因敲除、1α羟化酶基因敲除及双基因敲除对钙结合蛋白D28K和D9K在小鼠肾脏不同部位表达的影响.结果:钙结合蛋白D28K和D9K均定位于肾脏皮质远曲小管及髓质集合管上皮细胞的胞浆内.两种钙结合蛋白在PTH基因敲除小鼠肾脏的表达均明显减少.它们的减少在1α羟化酶基因敲除小鼠更为明显,而以双基因敲除小鼠最为显著.结论:PTH和活性维生素D均能调节钙结合蛋白在肾脏的表达,而且两者具有协同作用.     

活性维生素D缺乏导致脑内加压素表达上调和脑血管功能损伤

目的:本研究探讨1,25二羟维生素D3[1,25(OH)2D3]缺乏在小鼠高血压发病的病理进程中对脑内加压素(VP)表达和脑血管功能的影响?方法:运用尾动脉压体积描记法?免疫组织化学?离体微血管压力肌动描记法分析和比较2月龄25羟化维生素D 1α羟化酶基因敲除[1α(OH)ase-/-]小鼠和同窝野生型小鼠的平均动脉血压?脑内VP的表达和脑微血管反应性的变化?结果:1α(OH)ase-/-小鼠出现高血压表型,下丘脑室旁核和视上核VP表达都高于同窝野生型小鼠,大脑后动脉对乙酰胆碱的舒血管反应和对一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸的缩血管反应较对照组显著降低?结论:1,25(OH)2D3在高血压发病过程中对脑内神经内分泌和脑血管功能起重要调控作用?     

ACVR1对成牙本质细胞极性及牙本质形成的作用

目的 研究Ⅰ型骨形态发生蛋白(BMP)受体活化素A受体1(ACVR1)调节小鼠成牙本质细胞极性及促进牙本质形成的作用机制.方法 通过Cre-loxP系统,以Osterix为启动子激活Cre重组酶,敲除小鼠牙源性间充质细胞的Acvr1基因.于小鼠出生后21 d收集标本,观察成牙本质细胞形态、排列及牙本质的形态;免疫荧光染...     

1α羟化酶基因敲除小鼠的繁殖性能观测

目的对1α羟化酶基因敲除小鼠繁殖和个体生长进行探索。方法采用PCR技术对1α羟化酶基因敲除小鼠进行基因型鉴定。杂合子小鼠用来繁殖和保种,纯合子和野生型用来实验。实验还观察了不同基因型的繁殖能力、生长曲线的变化情况。结果在1α羟化酶基因敲除小鼠中,不同基因型的繁殖能力、个体生长稍有差异,但无统计学意义。结论1α羟化酶基因敲除小鼠野生型和杂合子的一般生物学特性数据没有明显的差异。     

活性维生素D缺乏促进小鼠皮肤衰老

目的:探讨1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]在抗皮肤衰老中的作用及机制。方法:使用组织学、免疫组织化学、免疫印迹和生化指标检测的方法比较同窝10周龄25-羟化维生素D1α-羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]小鼠和野生型小鼠皮肤表型的差异。结果:1α(OH)ase-/-小鼠皮肤衰老相关β-半乳糖苷酶染色增强,出现皮肤变薄、表真皮交界平坦、皮下脂肪和毛囊数目减少等衰老表型;通过细胞增殖性核抗原(PCNA)免疫组织化学染色和TUNEL检测,发现1α(OH)ase-/-小鼠皮肤中PCNA阳性细胞明显减少而TUNEL阳性细胞则显著增多;免疫印迹结果显示p16、p27、p53、NF-κB、活化型Caspase-3在1α(OH)ase-/-小鼠皮肤组织中表达明显升高;生化检测显示1α(OH)ase-/-小鼠皮肤活性氧(ROS)水平明显升高、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)水平降低、丙二醛(MDA)含量增高。结论:1,25(OH)2D3能够通过促进皮肤细胞增殖、抑制皮肤细胞凋亡和抗氧化应激作用发挥抗皮肤衰老的作用。     

甲状旁腺素和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)和不同钙磷饮食对活性维生素D合成的影响?方法:使用正常?高钙低磷或低钙低磷饮食喂养2月龄野生型(WT)和PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)小鼠4周,测定血清钙?磷?PTH和1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]水平,并利用RT-PCR方法检测肾1α-羟化酶[1α(OH)ase]基因表达水平?结果:正常饮食PTH-/-小鼠表现为低钙血症?高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达上调,而血清1,25(OH)2D3水平则降低?与正常饮食相同基因型小鼠相比,高钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平降低,肾1α(OH)ase基因表达下调?高钙低磷饮食矫正了PTH-/-小鼠的低钙和高磷血症,肾1α(OH)ase基因表达仍高于WT小鼠,而血清1,25(OH)2D3水平与WT小鼠无差异?与正常饮食相同基因型小鼠相比,低钙低磷饮食WT和PTH-/-小鼠血清PTH和1,25(OH)2D3水平明显升高,肾1α(OH)ase基因表达明显上调?低钙低磷饮食PTH-/-小鼠血清钙严重降低,血清磷仍然较高,肾1α(OH)ase基因表达和血清1,25(OH)2D3水平均较WT小鼠为低?结论:钙磷饮食能够通过PTH依赖性和PTH非依赖性的方式调节活性维生素D的合成?     

甲状旁腺素在胸腺的表达及血钙对其表达的调节

目的:为了证实PTH基因在胸腺的表达,明确PTH蛋白在胸腺组织的定位以及胸腺来源的PTH是否受到血钙水平改变的调节.方法:使用RT-PCR、real-time PCR和免疫组织化学的方法比较分析同窝2周龄PTH基因敲除纯合子(PTH-/-)和野生型(WT)小鼠以及1-α羟化酶基因敲除纯合子[1α(OH)ase-/-]和野生型(WT)小鼠的甲状旁腺和胸腺的PTH表达差异.结果:PTH-/-小鼠的甲状旁腺和胸腺无PTH表达:同窝WT小鼠甲状旁腺和胸腺均有PTH表达,但胸腺表达水平较甲状旁腺低.PTH在胸腺上皮细胞表达,而不在胸腺淋巴细胞表达.1α(OH)ase-/-小鼠表现为低钙血症.与正常血钙的WT小鼠相比,PTH基因和蛋白的表达水平在1α(OH)ase-/-小鼠胸腺组织中均明显升高.结论:胸腺组织不仅是产生PTH的辅助器官,而且其PTH表达也受到血钙水平的调节.     

低氧诱导因子-1α在骨形成过程中对成骨细胞功能的调控

目的探讨低氧诱导因子（HIF）-1α对成骨细胞功能的调控及其在骨形成过程中的作用。方法应用Cre-Loxp重组酶技术,在体内外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因及其上游调控VHL基因,在体外将成骨细胞在2％氧浓度培养48h后检测血管内皮生长因子（VEGF）、核结合因子a1（RunX2）、碱性磷酸酶（ALP）和骨钙素（OC）的表达,在体内取3个月龄小鼠股骨远端骨组织,应用组织切片和Micro-CT方法检测骨组织形态计量学指标和骨矿密度（BMD）。结果体外条件性敲除成骨细胞中的HIF-1α基因后,由于HIF-1α的表达下降导致VEGF、RunX2、ALP、OC的表达水平降低,而敲除VHL基因后由于HIF-1α的表达上调导致上述基因的表达升高。体内条件性敲除HIF-1α基因小鼠骨组织形态计量学指标和BMD均劣于野生型小鼠,而体内条件性敲除VHL基因小鼠以上指标均优于野生型小鼠。结论在生理和病理条件下,由于低氧环境的存在,HIF-1α能够通过促进成骨细胞的功能而调控骨形成过程。     

25-羟维生素D_3-1α-羟化酶质粒转染对角质形成细胞增殖分化和凋亡的影响

目的:研究25-羟维生素D3-1α-羟化酶(1α-羟化酶)质粒转染对角质形成细胞增殖、分化和凋亡的影响.方法:体外培养小鼠角质形成细胞(KC)转染1α-羟化酶后,观察细胞在形态上的变化对分化进行研究;利用Giemsa染色法和Tunel荧光素原位末端标记法对凋亡诱导作用进行观察.利用小鼠阴道上皮有丝分裂模型和小鼠尾部鳞片表皮模型对1α-羟化酶质粒转染对KC增殖和分化的影响进行研究.结果:携带1α-羟化酶的质粒转染KC可以非常显著的促进其分化,剂量与效应呈正相关;10-6mol/L的维生素D3和0.015 μg/μL 1α-羟化酶质粒转染联合应用即可诱导KC细胞凋亡.1α-羟化酶质粒转染可以非常显著的抑制小鼠阴道上皮有丝分裂(P<0.01),显著促进小鼠尾部鳞片表皮模型中颗粒层的形成(P<0.05).结论:1α-羟化酶质粒转染角质形成细胞可以明显抑制其增殖,促进其分化,诱导其凋亡.1α-羟化酶质粒转染为以增殖过渡分化不全为特征的皮肤病比如银屑病以及某些肿瘤的基因治疗提供了新思路.     

1，25二羟维生素D3在甲状腺未分化癌肿瘤干细胞增殖和上皮细胞间质转化中的作用

目的: 研究1,25二羟维生素D3在甲状腺未分化癌肿瘤干细胞（cancer stem cells, CSCs）的增殖及上皮细胞间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)中的作用。方法: 以甲状腺未分化癌细胞株HTh74为研究对象,采用体外细胞增殖实验观察1,25二羟维生素D3对野生型HTh74及其多柔比星耐药株的作用。采用细胞球形成实验观察1,25二羟维生素D3对甲状腺CSCs增殖能力的作用。实时荧光定量PCR检测HTh74野生型细胞、HTh74类CSCs以及1,25二羟维生素D3干预后的HTh74类CSCs中EMT相关基因的表达。结果： 1,25二羟维生素D3抑制HTh74野生型和多柔比星耐药株细胞的增殖,并且对耐药株具有更明显的生长抑制作用。1,25二羟维生素D3抑制HTh74类CSCs的增殖,并显著下调HTh74类CSCs中EMT相关基因N 钙黏蛋白和Slug的表达（P<0.05）。E 钙黏蛋白在HTh74类CSCs中未检出。结论： 1,25二羟维生素D3抑制甲状腺CSCs的增殖,并抑制甲状腺CSCs的EMT过程。     

中枢多巴胺D1和D3受体在运动调控中的作用

目的 研究多巴胺D1和D3受体在运动调控中发挥的不同作用.方法 60只小鼠随机分为多巴胺D3受体基因敲除组、多巴胺D1受体基因敲除组和野生型对照组,每组各20只;通过旷场实验和转棒实验,观察多巴胺D1和D3受体基因敲除小鼠运动能力的改变.结果 在旷场实验和转棒实验中,多巴胺D1受体基因敲除组小鼠与野生型对照组比较,运动协调能力显著减弱(P＜0.01);多巴胺D3受体基因敲除组小鼠与野生型对照组比较,运动行为能力改变不明显.结论 多巴胺D1受体在运动调控中起着比较重要的作用,D3受体在运动调控中的作用不很明显.     

维生素D与肥胖的研究进展

近年的研究显示,血清维生素D水平与肥胖、糖尿病、代谢综合征以及心血管疾病有密切关系[1-4].本文就维生素D与肥胖的研究进展综述如下.1 维生素D的代谢与生物学功能维生素D是一种脂溶性维生素,其来源主要分为内源性及外源性两种.人体皮肤含有7-脱氢胆固醇,经紫外线照射转化成维生素D原,然后再进一步转化为维生素D[5].一些食物如动物肝脏、蛋黄、海鱼等是维生素D的重要来源.维生素D无生物活性,必须首先在肝脏经25-羟化酶作用转化成25-羟维生素D[25(OH)D],然后在近端肾小管1α-羟化酶的催化下进一步转化为1,25-二羟维生素D[1,25(OH)2D][6].1,25(OH)2D是活性最强的维生素D代谢衍生物,通过作用于小肠、骨骼和肾脏,调节钙、磷代谢,维持体内钙、磷平衡,调节骨重建.维生素D通过与细胞质内维生素D受体(VDR)结合形成激素-受体复合物,然后与细胞核的维生素D反应元件相结合,激活或抑制含有维生素D反应元件的基因,从而发挥其生物学作用[7].     

时间因素对PAMAM诱导牙本质再矿化的影响

目的：探讨不同时间羧基改性的聚酰胺-胺型（PAMAM）对牙本质再矿化的影响.方法：选取20个牙本质块,随机分成A、B、C、D、E组,经37％的磷酸凝胶酸蚀后,A组作为空白对照不做任何处理,B～E组放置于羧基改性的PAMAM溶液中处理20min,再放置于饱和Ca（OH）2溶液中预处理30min,然后分别浸泡在人工唾液中矿化1,3,5,7d.利用扫描电镜（SEM）评估牙本质再矿化的效果.结果：SEM显示各组牙本质小管的矿化程度不同,随矿化时间延长,小管内矿化物逐渐形成,矿化物与牙本质小管的结合逐渐紧密.结论：PAMAM诱导牙本质形成的矿化物随着时间的增加而增加,提示了PAMAM在牙本质敏感的治疗方面有一定的潜在应用价值.     

新生大鼠成牙本质细胞及牙本质形成的光、电镜观察

目的:探讨成牙本质细胞的发育变化以及牙本质的结构发育特点.方法:取不同日龄新生大鼠的下颌切牙牙胚进行光、电镜观察.结果:成牙本质细胞由低柱状变为高柱状,并发生极化,细胞器渐增多,有分泌颗粒出现,细胞突起逐渐形成;形成的前期牙本质和牙本质在6～9 d达最厚,且胶原纤维较丰富而密集,牙本质小管多;成牙本质细胞突起贯穿前期牙本质和牙本质,并进入牙釉质中.结论:0～9 d日龄大鼠的下颌切牙牙胚正处于牙体组织的分泌形成期,是研究牙齿发育过程的很好的动物模型.     

SRC-1蛋白缺失对严重烧伤小鼠肝脏NF-κB表达及核转位的影响

目的 研究类固醇受体辅活化子-1(SRC-1)基因敲除小鼠严重烧伤早期肝脏核因子-κB(NF-κB)表达及核转位的变化.方法 以SRC-1基因敲除小鼠为实验组,以野生型小鼠为对照组,以小鼠15%～20%TBSAⅢ度烧伤为实验模型,观察两组在严重烧伤前及烧伤后1、6、12h肝脏总蛋白NF-κB表达及伤后核转位的变化,同时提取致伤前、致伤后1、6h血清标本,观察炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB出水平有所增加,而野生型小鼠有所下降.从核转位的情况来看,SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-κB的入核能力明显强于野生型小鼠,6h差别最大.两组致伤后炎性细胞因子TNF-α、IL-1βIL-6均升高,但SRC-1基因敲除小鼠升高更为显著.结论 SRC-1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用,缺失SRC-1蛋白使NF-κB功能增强更显著,致炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6更大量产生,使整体伤情征象更重. -1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB出水平有所增加,而野生型 鼠有所下降.从核转位的情况来看,SRC-1基因敲除小鼠致伤后NF-κB的入核能力明显强于野生型小鼠,6h差别最大.两组致伤后炎性细胞因子TNF-α、IL-1βIL-6均升高,但SRC-1基因敲除小鼠升高更为显著.结论 SRC-1蛋白对严重烧伤具应激性保护作用,缺失SRC-1蛋白使NF-κB功能增强更显著,致炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6更大量产生,使整体伤情征象更重. -1β、IL-6的变化.结果 与野生型小鼠相比,SRC-1基因敲除小鼠严重烧伤后肝脏总蛋白NF-κB     

1,25-二羟维生素D3处理树突状细胞在过敏性气道炎症中的作用

目的 研究1,25-二羟维生素D3对树突状细胞(dendritic cells,DC)表型和功能的影响及其处理后DC在过敏性气道炎症中的作用.方法 体外扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞,采用流式细胞术和ELISA检测1,25-二羟维生素D3对DC表型和分泌细胞因子IL-10和IL-12的影响;观察1,25-二羟维生素D3处理DC过继卵蛋白致敏小鼠肺组织病理特点和支气管肺泡灌洗液细胞类型.结果 经1,25-二羟维生素D3处理后,DC表达CD80和MHC Ⅱ均明显降低,而CD11c变化不明显;分泌IL-10显著增加,而分泌IL-12显著降低.过继小鼠肺组织未见典型的哮喘样病理改变,支气管肺泡灌洗液细胞类型与空白对照组无显著差异.结论 1,25-二羟维生素D3可抑制DC成熟,经其处理后DC过继致敏小鼠可诱导对抗原的免疫耐受,避免过敏性气道炎症的发生.     

中枢多巴胺D1和D3受体在运动调控中的作用

目的研究多巴胺D1和D3受体在运动调控中发挥的不同作用。方法60只小鼠随机分为多巴胺D3受体基因敲除组、多巴胺D1受体基因敲除组和野生型对照组,每组各20只;通过旷场实验和转棒实验,观察多巴胺D1和D3受体基因敲除小鼠运动能力的改变。结果在旷场实验和转棒实验中,多巴胺D1受体基因敲除组小鼠与野生型对照组比较,运动协调能力显著减弱(P<0.01);多巴胺D3受体基因敲除组小鼠与野生型对照组比较,运动行为能力改变不明显。结论多巴胺D1受体在运动调控中起着比较重要的作用,D3受体在运动调控中的作用不很明显。     

1,25-二羟维生素D_3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探讨1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法:1,25-二羟维生素D3作用于MGC-803细胞后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖能力、平板克隆试验测定细胞集落形成率、流式细胞仪测定细胞周期。结果:1,25-二羟维生素D3作用后胃腺癌细胞生长受抑制,细胞集落形成率明显下降(P<0.05);处理48 h后细胞周期出现向G0/G1期移行的特征性动力学改变。结论:1,25-二羟维生素D3对人胃腺癌细胞有抑制增殖、诱导分化作用。     

胆钙化醇在治疗3期和4期慢性肾脏疾病患者维生素D不足的临床研究

<正>维生素D是维持血清钙稳态和骨骼健康的重要元素,维生素D的主要循环形式是25-羟基维生素D,其需要通过肾脏的1α-羟化酶活化成具有代谢活性的1,25-二羟维生素D。甲状旁腺激素(PTH)在人体处于低钙水平时可增加肾1α-羟化酶的活性[1]。当慢性肾脏疾病(CKD)导致肾1α-羟化酶降低时,PTH代偿性升高,从而导致肾性骨营养不良,增加心血管疾病的风险[2]。研究显示,高达86%的CKD患者维生素D不     

核心结合因子α1对牙本质涎磷蛋白基因启动子不同片段启动活性的影响

目的:观察核心结合因子α1(cbfα1)对牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因启动子不同片段启动活性的影响. 方法:选择小鼠成牙本质细胞样细胞MDPC-23为实验细胞,利用含DSPP基因启动子不同片段的真核表达载体,采用报告基因方法观察cbfα1对DSPP基因启动子不同片段启动活性的影响. 结果:在MDPC-23细胞中,pcDNA3-cbfα1共转染组相对于pcDNA3共转染组,Pgl3-Enhancer-1 (-4 496～-3 499 bp)、Pgl3-Enhancer-2 (-3 519～-2 515 bp)、Pgl3-Enhancer-2-3、Pgl3-Enhancer-95 (-95～54 bp) 活性增强(P<0.05);Pgl3-Enhancer-1-3、Pgl3-Enhancer-2.6 K (-2 475～53 bp) 活性降低(P<0.05). 结论:cbfα1可以调控DSPP基因的表达,cbfα1对DSPP基因启动子不同片段的启动活性有不同的调节作用.