HIV抗体酶联免疫诊断试剂检测不同基因型抗体的研究

目的 分析不同HIV抗体酶联免疫诊断试剂对检测HIV不同基因型抗体的情况。方法 对不同地区的20份HIV抗体阳性样品中HIV核酸进行扩增，对PCR产物进行测序并进行基因型别分析。用不同试剂对系列稀释的不同基因型样品进行检测。结果 20份样品均为HIV RNA阳性，其中9份样品为HIV B亚型，9份样品为：HIV C或BC重组，2份为HIVAE重组。不同试剂对HIV不同基因型抗体的检测灵敏度无明显差异。结论 我国主要的商业化HIV抗体诊断试剂产品检测不同基因型抗体的能力无明显差异。     

中国百日咳鲍特菌血清型及其相关基因分析

目的 了解我国1955-2005年临床分离百日咳鲍特菌及疫苗株的血清型及其相关基因特征.方法 应用抗菌毛蛋白2(fim2)和3(fim3)单克隆抗体凝集反应分析我国不同时期分离的80株百日咳鲍特菌株和3株疫苗株的血清型,并与相应的多克隆抗体方法进行比较分析;同时应用PCR方法扩增这些菌株fim2和fimd基因,并对这些PCR产物进行DNA测序分析.结果 研究表明,与多克隆抗体分析结果相比较,单克隆抗体玻片凝集方法和微量凝集反应除一株临床分离株的血清型分析结果不同,其余菌株的结果均一致.研究菌株的血清型分析结果显示17株临床分离菌株和CS与P3S10疫苗株的血清型为fim2&3型、48株菌为fim2型、15株分离菌株与18530疫苗株为fim3型.在我国扩大免疫规划前分离菌株的血清型以fim2型和fim2&3型为主,随着大范围的百日咳疫苗接种,临床分离菌株中fimd型血清型细菌所占的比例逐渐增多.分析菌株中fim2和fimd的基因型以fim2-1(92.5%)和fim3-A(95.0%)亚型为主;18530疫苗株基因型为fim2-2和fim3-A,而其他两株疫苗株的基因型均为fim2-1和fim3-A.在2000年以后,分离出现含有fim3-B和fim3-D亚型菌株,这些结果表明随着我国大范围百日咳疫苗免疫接种,百日咳分离菌株表达的血清型及其基因序列也出现适应性变异.结论 本研究证实了抗fim2和fim3单克隆抗体在百日咳血清型分析的特异性和实用性.对我国不同时期分离菌株和疫苗株的血清型分析,为我国百日咳疫苗株的检定、流行病学和细菌进化的研究奠定了基础.     

2019—2020年山西省艾滋病抗病毒治疗失败者HIV-1基因型耐药及其影响因素分析

目的:分析山西省艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS)抗病毒治疗失败者HIV-1耐药检测结果及影响因素。方法:收集2019—2020年HIV/AIDS患者抗病毒治疗满1年的治疗失败者血浆样品,进行耐药基因检测及基因亚型判定,并分析其影响因素。结果:扩增成功率84.18...     

基线极高HIV-1 RNA水平对初治HIV-1感染者外周血total HIV-1 DNA的影响

目的:观察基线HIV-1 RNA > 50万copies/mL的HIV-1感染者,在高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy,HAART）前后外周血totalHIV-1 DNA的变化。方法:从国家十二五科技重大专项课题中选取基线HIV-1 RNA > 50万copi...     

使用不同HIV诊断试剂对献血者检测结果影响分析

目前,艾滋病目前在我国的传播已由高危人群向一般人群扩散,血液传播是艾滋病传播的重要方式.加强献血者的血液HIV检测,是保障血液安全的重中之重.选择高品质和合适的HIV检测诊断试剂盒是血液检测的关键环节.     

RANTES和MIP-1α基因对HIV-1核酸疫苗诱导免疫应答的影响

目的　研究RANTES(活化T细胞调节的、正常T细胞表达和分泌的分子 )、MIP 1α(巨噬细胞炎症蛋白 1α)基因对HIV 1核酸疫苗诱导免疫应答的影响 ,以探求HIV 1核酸疫苗的新策略。方法　pCI neoGAG联合RANTES、MIP 1α基因或者pCI neoGAG单独免疫BALB c小鼠 ,采用ELISA检测免疫小鼠的特异性抗体和IFN γ水平 ,以MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖 ,用乳酸脱氢酶 (LDH)试验检测小鼠特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)的应答。结果　与pCI neoGAG免疫组比较 ,pCI neoGAG联合RANTES、MIP基因免疫组小鼠血清的抗HIV 1p2 4抗体滴度升高 ,IFN γ升高 ,小鼠的脾淋巴细胞增殖实验刺激指数 (SI)以及特异性CTL活性均高 ,差异都有显著性 (P <0 .0 1)。结论　RANTES、MIP 1α基因联合HIV 1核酸疫苗免疫小鼠 ,可能增强特异性TH1细胞和CTL反应 ,RANTES、MIP 1α基因对体液免疫有加强作用。因此 ,RANTES、MIP 1α基因对于HIV 1核酸疫苗是具有较好应用前景的免疫佐剂。     

MAL表达对HIV感染者疾病进展的影响及相关机制研究

目的研究T淋巴细胞成熟相关蛋白(MAL)对HIV感染者疾病进展的影响,并探索其相关分子机制。方法利用流式细胞术检测MAL在HIV感染不同阶段T细胞上的表达,分析MAL表达水平与疾病进展的相关性;通过细胞系和体外刺激模型研究MAL对细胞因子分泌、细胞增殖的影响;利用细胞系模型检测MAL对HIV病毒包装的影响。结果 MAL表达水平与HIV感染者CD4~+T细胞绝对数和CD4~+T/CD8~+T比值呈显著正相关,高CD4~+T细胞组MAL的表达显著高于低CD4~+T细胞组;MAL敲除下调T细胞IL-2分泌,对细胞增殖影响不明显;MAL过表达对病毒总量无影响,但可提高HIV在细胞内的感染效率。结论本研究发现MAL表达水平与HIV感染者疾病进展呈显著负相关,其下调表达可抑制IL-2分泌,从而影响T细胞活性;MAL过表达可提高HIV的感染效率,机制有待进一步研究。     

Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响

目的:观察靶向Wip1基因的特异性siRNA序列对结肠癌细胞Wip1基因的抑制效应,探讨Wip1基因沉默对结肠癌细胞化疗敏感性的影响。方法:将Wip1-811 siRNA转染入Wip1高表达的RKO结肠癌细胞株,采用real-time PCR法检测Wip1 mRNA的表达,采用Western blotting方法检测Wip1蛋白表达,采用MTS方法检测结肠癌细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果:Wip1-811 siRNA明显抑制Wip1的表达。抑制Wip1基因表达后,转染组RKO结肠癌细胞对抗肿瘤药物的敏感性增加,5-氟尿嘧啶处理组RKO结肠癌细胞活力由(89.4±6.6)%降至(74.7±3.9)%(P0.05),奥沙利铂处理组细胞活力由(77.9±2.4)%降至(66.7±2.9)%(P0.05)。转染Wip1-811 siRNA后,5-氟尿嘧啶处理组细胞凋亡比例由(7.7±0.5)%升至(12.3±3.2)%(P0.05);奥沙利铂处理组细胞凋亡比例由(14.7±2.1)%升至(34.0±2.1)%(P0.05)。结论:沉默Wip1基因表达能增强结肠癌细胞的化疗敏感性。     

阴虚体质对鼻咽癌放疗敏感性的影响及其机制探讨

目的　探讨阴虚体质对鼻咽癌放射敏感性的影响及其作用机制。 方法　于南方医院古中医科门诊诊治的鼻咽癌患者中选取符合标准的150例进行分组及体质辨识，甲基化特异性PCR检测样品组织中抑癌基因（RASSF1A、TP53、PTEN）启动子区域CpG岛的甲基状态，实时荧光定量检测其表达。 结果　经中医体质问卷结合中医四诊辨识患者体质，在112例放射敏感患者中，属于阴虚质者17.86%（20人），在追踪复发患者（放射抗拒）38人中，阴虚质73.68%（28人）；与其他体质患者相比，阴虚体质患者中的抑癌基因（RASSF1A、TP53、PTEN）甲基化比例增加，基因表达下调。 结论　阴虚体质更易出现放射抗拒性，高甲基化导致的抑癌基因失活可能是阴虚质鼻咽癌患者出现放射抗拒的内在机制。     

中国HIV-1 B'/C亚型感染者对异体病毒中和作用与疾病进展关系研究

目的 探讨中国HIV-1 B'/C亚型感染者对异体病毒中和作用与疾病进展的关系.方法 根据CD4 T淋巴细胞数量和有尤临床症状将HIV-1 B'/C亚型感染者分为HIV慢性感染组和AIDS组.将HIV-1感染者血清稀释(1/10～1/320)后,与在基因结构特点上同源性很低的3株HIV-1作用,以检测其中和作用.同时以正常人血清加病毒悬液为对照孔,能够抑制对照孔50%病毒复制的血清为中和作用阳性.将某个HIV-1感染者血浆能够中和异体病毒的个数占3个异体病毒的百分率定义为HIV-1感染者中和异体病毒的宽度;将某个HIV-1感染者血浆中和3个异体病毒抗体滴度的几何平均滴度定义为HIV-1感染者中和异体病毒的强度.结果 HIV-1慢性感染组与AIDS组之间中和异体病毒的宽度和强度差异有统计学意义,HIV-1慢性感染组显著高于AIDS组.HIV-1慢性感染组中和异体病毒的宽度和强度与病毒载量呈正相关,而AIDS组巾和异体病毒的宽度和强度与病毒载量没有显著的相关性.HIV-1慢性感染组和AIDS组中和异体病毒的宽度和强度与CD4 T淋巴细胞数均没有显著的相关性.结论 中国HIV-1B'/C亚型感染者不同疾病进展阶段针对异体病毒中和作用能力不同,HIV慢性感染组显著高于AIDS组,当疾病进展到AIDS期时,失去对异体病毒的中和作用,提示针对异体病毒的中和抗体与疾病进程有关.     

河北省输血后艾滋病病毒感染暴发的追踪监测

目的 研究河北省输血后艾滋病暴发流行特征及家庭传播情况.方法 在全省范围内,通过艾滋病监测网络和输血感染重点区域的疫情普查,对在河北省某市发现的输血感染艾滋病及其导致的家庭传播进行分析,用ELISA法初筛HIV抗体,用Western-blot进行确认试验,用套式PCR进行HIV env基因扩增.对扩增产物进行亚型分析.结果 发现在河北省某市医疗机构输血后HIV感染173例,占全省输血感染的68.7%(173/252),其中医院发现89例,疾病预防控制中心发现84例.家庭传播率为32.0%(49/153),夫妻家庭传播率为17.0%(26/153),母婴家庭传播率为32.7%(32/98).输血感染者以青壮年为主,女性多于男性,输血原因以怀孕分娩及妇女病为主,其次是外伤手术.输血时间为1990年至1999年,高峰为1995年;发现时间为1999年至2009年,高峰为2003年,输血后感染者主要分布于该市境内的某康泰医院和某煤矿医院,分别占45.1%(78/173)和42.2%(73/173).病原型别为HIV-1 B'亚型.结论 该市基层医疗机构由于不对有偿供血者筛查HIV抗体,导致了输血者HIV感染的暴发.     

Anti-HIV-1 humoral immune response in Brazilian patients

Data on humoral immune response against Brazilian human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) isolates have been collected and reviewed in reference to data published in the international literature. The results obtained up to now indicate that the Brazilian humoral immune response can be divided into at least three antibody binding serotypes: anti-Bbr, anti -B/F and anti-C/F. No neutralization serotypes have been distinguished up to now, just different degrees of resistance to neutralizing antibody (NAb), similar to data obtained by neutralization analyses of European/North American HIV-1isolates. No correlation between V3 binding antibodies, genotype and HIV-1 NAb could be observed.     

补体调节蛋白CD59在HIV感染者外周血T细胞上的表达研究

目的 观察补体调节蛋白CD59在HIV感染者外周血T细胞上的表达情况,并进一步探讨高效抗逆转录病毒治疗（Highly Active Antiretroviral Therapy,HARRT）前后CD59在外周血T细胞上的表达变化及其意义.方法 收集48例确诊HIV感染者外周血,根据是否HARRT分为未治疗组（23例）及治疗组（25例）,并收集14例健康志愿者外周血,全血细胞表面染色后使用BD FACSCanto 流式仪检测CD59在外周血T细胞上的表达情况,并进一步检测CD59在CD45RO＋记忆型CD4T细胞表面的表达情况;同时用定量PCR技术检测HIV感染者的血浆病毒载量及CD4细胞绝对计数,将结果进行统计学分析并比较各组间差异.结果 与健康对照者比较,CD59在HIV感染者CD4＋T细胞上的表达水平明显增高（P＜0.05）,其中以在CD45RO＋记忆型CD4T细胞上增高为主（P＜0.05）;治疗组CD4＋T细胞上CD59的表达较未治疗组明显下降（P＜0.05）,但与健康对照组比较其表达仍处于较高水平（P＜0.05）,进一步分析发现CD59的这种变化主要发生在CD45RO＋（记忆型）CD4＋T细胞上;CD59在CD4＋T细胞上的表达变化与病毒载量及外周血CD4＋T细胞绝对计数均有一定的相关性（R2=0.2181,P=0.0247;R2=0.1586,P=0.0486）.结论 HIV感染可引起补体调节蛋白CD59在CD4＋T细胞上表达增加,HARRT可使其表达水平有所下降.这种表达增加可能与病毒免疫逃逸及CD4＋T细胞的功能抑制有关,HARRT治疗可部分逆转这种免疫紊乱现象.     

HIV/AIDS患者CCR5、CXCR4的表达与疾病进展的关系

目的　了解HIV AIDS患者淋巴细胞表面第二受体CCR5、CXCR4的表达 ,分析其与疾病进展的关系 ,探讨HIV感染的免疫基础。方法　收集 33例HIV AIDS患者及 13例健康对照的抗凝全血 ,用流式细胞仪检测第二受体CCR5、CXCR4的表达 ,并分析第二受体表达与病毒载量、CD4 + T淋巴细胞绝对值及T淋巴细胞活化 (HLA DR+ CD38+ )的相关性。结果　艾滋病组CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5表达高于无症状HIV 1感染组及健康对照 (P <0 .0 0 1) ;艾滋病组CD8+ T淋巴细胞表面CXCR4表达低于健康对照 (P <0 .0 1)。HIV AIDS患者CD4 + 、CD8+ T淋巴细胞表面CCR5的表达与病毒载量明显正相关 (P <0 .0 1) ;与CD4 + T淋巴细胞绝对值明显负相关 (P <0 .0 1) ,与T淋巴细胞活化(HLA DR+ CD38+ )水平明显正相关 (P <0 .0 0 1)。结论　HIV 1感染者第二受体CCR5的表达与机体对HIV的免疫反应及疾病进展密切相关。     

HIV-1流行毒株HIV DNA的研究

目的 了解HIV－1流行毒株中HIV DNA的变异特性。方法 用逆转录PCR（RT－PCR）,长片段PCR（Long-Distance PCR LD-PCR)、分子克隆、杂交和测序等对63例HIV－1感染者外周血单个核细胞（PBMC）HIV DNA进行研究。结果 57例标本可明确定型,其中B亚型43例,C亚型5例,E亚型9例。57例中31例既存在完整又存在不完整的HIV－1 DNA,19例只存在不完整的HIV－1 DNA片段,7例只有完整的HIV－1 DNA,缺失的最大范围为7759个碱基,最小范围71个碱基,以多片段缺损最为常见。结论 HIV DNA基因片段变异在HIV感染和流行传播中是非常重要的。     

慢性HIV/AIDS患者T淋巴细胞凋亡与疾病进展关系的研究

目的 探讨慢性未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者T淋巴细胞及各亚群凋亡与疾病进展的相关性.方法 以36例慢性未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者为研究对象,根据CD4细胞计数分为3组:<200个/μl组,200～350个/μl组,>350个/μl组,同时选取16例健康志愿者作对照,分离外周血单核细胞(PBMC)后,采用CD45RO及CD27标记T细胞亚群,Annexin V标记细胞凋亡,用流式细胞仪检测各项指标.其中4例患者及4例健康志愿者的PBMC在体外培养,比较分析体外培养0、3、6、12、24 h不同时间点T细胞凋亡的变化情况.结果 (1)HIV/AIDS患者CD4~+、CD8~+T细胞及各亚群上Annexin V表达百分比均显著高于健康人(P<0.05),但3组患者之间比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)HIV/AIDS患者CD4~+、CD8~+T细胞及各业群上Annexin V表达百分比与CD4~+T细胞计数及病毒载显均无显著相关性(P>0.05);(3)随着体外细胞培养时间的延长,HIV/AIDS患者CD4~+T细胞的凋亡及死亡细胞百分比均显著高于健康人(P<0.05),并且HIV/AIDS患者CD4~+T细胞较CD8~+T细胞更易发生凋亡和死亡.结论 HIV/AIDS患者的T细胞凋亡水平显著高于健康人,并且CD4~+T细胞较CD8~+T细胞更易发生凋亡和死亡,但是T细胞凋亡水平与HIV的疾病进展程度并没有相关性.     

Temporal analysis of HIV envelope sequence evolution and antibody escape in a subtype A-infected individual with a broad neutralizing antibody response

The origin of broadly neutralizing HIV-specific antibodies and their relation to HIV evolution are not well defined. Here we examined virus evolution and neutralizing antibody escape in a subtype A infected individual with a broad, cross subtype, antibody response. The majority of envelope variants isolated over the first ∼ 5 years after infection were poorly neutralized by contemporaneous plasma that neutralized variants from earlier in infection, consistent with a dynamic process of escape. The majority of variants could be neutralized by later plasma, suggesting these evolving variants may have contributed to the elicitation of new antibody responses. However, some variants from later in infection were recognized by plasma from earlier in infection, including one notably neutralization-sensitive variant that was sensitive due to a proline at position 199 in V2. These studies suggest a complex pattern of virus evolution in this individual with a broad NAb response, including persistence of neutralization-sensitive viruses.     

Neutralizing antibody responses to subtype B and C adjuvanted HIV envelope protein vaccination in rabbits

Improving the potency, breadth, and durability of neutralizing antibody responses to HIV are major challenges for HIV vaccine development. To address these challenges, the studies described evaluate in rabbits the titers, breadth, and epitope specificities of antibody responses elicited by HIV envelope subunit vaccines adjuvanted with MF59 with or without CpG oligodeoxynucleotide (ODN). Animals were immunized with trimeric o-gp140ΔV2 derived from subtype B HIV-1_SF162 or subtype C HIV-1_TV1, or proteins from both strains. Immunization with SF162 or TV1 with MF59/CpG elicited higher titers of binding and neutralizing antibodies to SF162 than monovalent immunization with MF59 alone (P < 0.01). Bivalent immunization increased binding and neutralizing antibody titers over single envelope immunization in MF59 (P < 0.01). Bivalent immunization also improved neutralization breadth. Epitope mapping indicated neutralizing activity in rabbits was directed to V3 and V4. Overall, our data suggests that a multivalent vaccination approach with MF59 and CpG can enhance humoral responses to HIV-1.