SAPK/JNK信号通路在脑梗死后神经元凋亡中的作用

目的: 观察脑梗死后SAPK/JNK及Bcl-2/Bax信号途径中关键蛋白质的变化,以探寻各种病理因素引发神经元凋亡的分子机制。 方法: SD大鼠36只随机分为脑梗死组和假手术组。光化学法制作大脑皮层局灶缺血梗死模型, 称作光血栓皮层损伤(PCI)。7 d后取梗死灶同侧的大脑皮层行电镜检查,以Western blotting分析p-JNK1、p-JNK2、p-c-Jun、p-ATF-2、total JNK1、total JNK2、Bcl-2和Bax等关键蛋白的水平变化。结果: 光化学法可以成功复制大脑皮层局灶缺血梗死模型。在PCI后7 d,脑梗死组可见到神经元细胞凋亡和广泛的细胞器病变,p-JNK-1、p-JNK-2以及其下游的p-c-Jun、p-ATF-2的水平较假手术组显著升高,Bcl-2/Bax的比值显著降低 (P<0.05)。结论: 脑梗死发生后在较长的一段时间内都存在着以神经元凋亡为表现形式的迟发性神经细胞死亡,而这一过程可能与缺血缺氧性损伤激活了SAPK/JNK信号通路,及调节凋亡相关蛋白(如Bcl-2/Bax)等机制有关。     

蛇床子素激活wnt/β-catenin信号通路抑制急性脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡

目的探讨蛇床子素对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响及可能机制。方法将45只SD大鼠平均分为假手术组(Sham)、脊髓损伤组(SCI)与蛇床子素治疗组(Ost),采用Allen法建立大鼠SCI模型。建模7d后评估各组大鼠后肢运动功能,并检测脊髓含水量。TUNEL方法检测脊髓神经细胞凋亡;Western blot和qRTPCR检测Wnt-1、GSK-3β、β-catenin表达。结果急性脊髓损伤导致大鼠后肢功能障碍,脊髓细胞发生凋亡,蛇床子素可以减少急性脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡,抑制炎症反应,改善后肢功能,减轻脊髓损伤,同时可以下调GSK-3β表达水平,上调Wnt-1和β-catenin蛋白表达水平。结论蛇床子素通过激活wnt/β-catenin信号通路抑制神经细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复。     

Notch/JNK信号在低氧致大鼠皮层神经元损伤中的作用研究

目的:探讨Notch1/JNK信号通路在缺氧引起的神经元损伤中的作用。方法:原代培养新生SD大鼠皮层神经元,利用低氧条件培养建立缺氧模型。利用CCK-8实验检测在低氧诱导的不同时间,神经元的活性及siRNA干扰后神经元的活性;利用RT-q PCR与Western Blot检测对照组与低氧组神经元中NICD,p-JNK,Caspase-3mRNA与蛋白的表达情况;利用siRNA转染技术转染Notch1 siRNA或JNK siRNA至神经元中后,利用Western Blot检测低氧组与转染组神经元中NICD,p-JNK,Caspase-3蛋白的表达情况。结果:缺氧情况下神经元活性较低,具有时间依赖性;缺氧情况下,神经元的NICD,p-JNK,Caspase-3 mRNA及蛋白的表达均显著升高。抑制神经元中Notch1的活性,可进一步抑制JNK,Caspase-3的表达,改善神经元活性。结论:缺氧导致神经元Notch1信号被激活,Notch信号调节JNK的磷酸化,磷酸化的JNK进一步促进Caspase-3的激活,从而降低神经细胞的活性或促进神经细胞的死亡。     

依达拉奉通过抑制JAK2/STAT3信号通路减少大鼠急性脊髓损伤后的细胞凋亡

目的 研究依达拉奉对大鼠急性脊髓损伤后JAK2/STAT3信号通路活化的影响,探讨依达拉奉保护神经的相关机制。方法 96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）,脊髓损伤组（SCI组）,3mg/kg依达拉奉组（SCI+EDA组）和15mg/kg酪氨酸激酶抑制剂组（SCI+AG490组）,每组24只。分别在各组术后6,12,24和72h取材,利用TUNEL法检测细胞凋亡水平;Western blot法检测p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化;免疫组化法检测各组脊髓组织Caspase-3阳性细胞表达。结果 与Sham组相比,损伤脊髓的各组中脊髓组织中凋亡细胞数量明显增加,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显增高,Caspase-3阳性细胞表达水平明显增加。与SCI组对比,SCI+EDA组与SCI+AG490组脊髓组织中凋亡细胞数量明显减少,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平明显降低,Caspase-3阳性细胞表达水平明显下降（P<0.05）。SCI+EDA组与SCI+AG490组相比较无统计学差异。结论 依达拉奉能够抑制JAK2/STAT3信号通路的激活,降...     

核心钟基因Bmal1通过JNK/caspase-3信号通路抑制缺血再灌注损伤PC12细胞的炎症及凋亡

目的：探讨核心钟基因Bmal1(brain and muscle Arnt-like 1)对脑缺血再灌注损伤后细胞炎症反应及凋亡的影响。方法：通过慢病毒转染建立Bmal1基因沉默（si-Bmal1）及阴性对照（si-NC）的稳定大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞株,将细胞分为空白（blank）组、氧糖剥夺/复氧（OGD/R）组、OGD/R+si-NC组及OGD/R+si-Bmal1组。通过OGD/R诱导建立脑缺血再灌注损伤体外模型,CCK-8法检测沉默Bmal1基因对细胞活力及OGD/R后细胞活力的影响;Western blot法检测Bmal1、磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）及cleaved caspase-3蛋白水平;RT-qPCR法检测Bmal1、JNK及caspase-3的mRNA表达水平;ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术及TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率;免疫荧光检测JNK核内表达情况。结果：沉默Bmal1基因使PC12细胞活力及OGD/R后PC12细胞活力均显著下降（P<0.05或P<0...     

PSMA对JNK/SAPK通路的激活及对前列腺癌细胞凋亡的调控*

 目的：探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)是否通过c-Jun氨基末端激酶/应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)通路对前列腺癌细胞凋亡进行调控。方法：利用前期研究中建立的高效阻断PSMA表达的shRNA慢病毒载体,阻断前列腺癌细胞中PSMA的表达作为实验的干扰组;同时利用构建的PSMA载体转染前列腺癌细胞,促进前列腺癌细胞中PSMA的表达作为阳性实验组;不做任何处理的细胞株作为空白组;加入JNK/SAPK抑制剂SP600125作为阴性对照。Western blotting及免疫细胞化学方法观察各组细胞p-JNK/SAPK的表达量,CCK-8法检测细胞生长情况、流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果：Western blotting及细胞免疫化学提示抑制PSMA表达后,p-JNK/SAPK表达水平下降;增强PSMA表达后p-JNK/SAPK表达水平上升;在SP600125作用下,3组细胞p-JNK/SAPK均处于较低水平,且彼此无明显差异。CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期提示PSMA表达受抑制后细胞增殖能力下降,细胞S期百分比减少;增加PSMA表达,细胞增殖能力增强,S期百分比增加;在SP600125作用下,3组细胞增殖和S期百分比均处于低水平,无明显差异。在抑制PSMA表达组中,前列腺癌细胞的凋亡率明显升高;而在增强PSMA表达组,细胞凋亡率明显降低;加入SP600125后,细胞凋亡率均低于常规培养组。结论：PSMA通过上调JNK/SAPK信号通路对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及凋亡产生影响,但JNK/SAPK并不是唯一通路。     

曲古抑菌素A通过JNK/MAPK信号通路介导乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡

目的　探讨TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。 方法　采用MTT、克隆形成、流式细胞术检测TSA对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学功能的影响;Western Blot 和qRT-PCR 检测细胞增殖、凋亡和MAPK信号通路蛋白及mRNA 的表达水平的影响;抑制JNK通路检测可能的作用机制。 结果　TSA呈剂量依赖性抑制细胞增殖和诱导凋亡,使细胞阻滞于G1期;TSA可上调P21、Caspase-3、Bax、p-JNK蛋白及mRNA表达,下调Cyclin D1、Cdk4、Bcl-2蛋白及mRNA表达;抑制JNK通路后,p-JNK蛋白和细胞总凋亡率降低,Caspase-3、Bax蛋白及mRNA表达减少,Bcl-2蛋白及mRNA表达增多。 结论　TSA通过MAPK信号通路介导JNK的磷酸化,调控乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡。     

3,4-二羟基苯乙酮调控JNK/Nrf2信号通路减轻ox-LDL诱导的内皮细胞损伤的作用研究

目的：观察3,4-二羟基苯乙酮（3,4-DHAP）减轻氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞损伤的作用,并从c-Jun氨基末端激酶（JNK）/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路来探讨其可能的作用机制。方法：将常规培养的EA. hy926细胞随机分为空白对照（CON）组、3,4-DHAP(0.1 mmol/L)对照（3,4-DHAP-C）组、ox-LDL(100 mg/L)组,ox-LDL+低剂量（0.01 mmol/L）3,4-DHAP(3,4-DHAP-L)组及ox-LDL+高剂量（0.1 mmol/L）3,4-DHAP(3,4-DHAP-H)组。通过免疫荧光法观察细胞活性氧（ROS）的生成,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力,硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）水平;酶联免疫吸附法（ELISA）检测内皮素1(ET-1)水平,CCK-8法检测细胞活力,TUNEL法检测细胞凋亡情况;RT-qPCR法检测Nrf2和血红素加氧酶1(HO-1)的mRNA表达;Western blot法检测JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、Nrf2和HO-1蛋白水平。结果：与ox-L...     

甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤模型wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响

目的:研究甲基强的松龙对急性脊髓损伤(SCI)大鼠模型wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。方法:SD大鼠48只随机分为,甲基强的松龙处理组(Meth)、生理盐水处理组(Salin)和假手术组(Sham,仅进行椎板切除术)。Meth(甲基强的松龙,30 mg/kg)和Saline(生理盐水,等量)组通过Allens法建立急性SCI模型后经尾静脉立即注射,并在SCI后的1 d和2 d相同时间点各注射1次。SCI模型建立后用尼氏染色(Nissl)观察神经细胞变化,用Western Blot检测wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和GSK-3β的表达,用免疫荧光技术观察凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-6表达,进行统计学处理。结果:实验组SCI后7 d,尼氏染色观察到Meth组前角运动神经元形态和数量得到明显改善(P0.01),同时对损伤区域修复有明显促进作用。SCI后3 d和7 d,Western Blot显示β-catenin表达水平明显(P0.05),而GSK-3β蛋白表达则降低(P0.05);免疫荧光观察到,甲基强的松龙处理组凋亡活动被明显抑制,表现为凋亡蛋白caspase-3和caspase-6降低(P0.01)。结论:结果表明,甲基强的松龙可能通过激活wnt/β-catenin信号通路影响一些相关蛋白表达,从而抑制大鼠急性SCI神经细胞的凋亡和促进运动功能恢复。     

丹参酮ⅡA通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞凋亡

目的:探究丹参酮ⅡA对人骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用CCK-8实验考察丹参酮ⅡA对HOS细胞活力的影响,并确定给药剂量。集落形成实验与细胞迁移实验研究丹参酮ⅡA对肿瘤细胞增殖与迁移能力的影响。Hoechst 33258染色、透射电镜与流式细胞技术检测丹参酮ⅡA对肿瘤细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与JNK通路相关蛋白的变化;并通过JNK抑制剂验证肿瘤细胞中上述通路与凋亡的关系。结果:一定剂量的丹参酮ⅡA能抑制HOS细胞的增殖与迁移能力,且效应呈浓度依赖与作用时间依赖性,并能诱导凋亡发生。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白水平上升,Bcl-2蛋白表达下降,JNK通路相关蛋白表达上升,这些变化可被JNK抑制剂SP600125缓解。CCK-8实验结果显示,抑制JNK通路可减少药物导致的细胞活力抑制。结论:丹参酮ⅡA可通过JNK通路诱导人骨肉瘤HOS细胞发生凋亡,具有显著抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

大鼠慢性间歇性低氧后氧自由基/JNK信号通路介导神经损伤的机制

目的　探讨氧自由基/JNK信号通路在慢性间歇性低氧大鼠神经损伤中的作用。 方法 　160只雄性SD大鼠随机分成对照组（n=40）、轻度间歇低氧组（n=40）、中度间歇低氧组（n=40）、重度间歇低氧组（n=40）。对照组暴露于空气中,间歇低氧组分别暴露于不同低氧条件下（100 ml/L、75 ml/L和50 ml/L,暴露时间每天8 h,持续时间2、4、6、8周）,电镜观察海马区神经细胞超微结构,采用硫代巴比妥酸法检测大脑组织丙二醛(MDA)水平;免疫印迹和免疫组化法检海马区磷酸化JNK和c-fos蛋白表达水平,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。 结果　与对照组比较,随低氧时间的延长,三组间歇性低氧组大鼠海马神经元结构损伤;MDA水平、磷酸化JNK及c-fos表达增多,TUNEL阳性细胞增多（P＜　0.05）;上述变化在重度间歇性低氧组最为显著（P＜0.05）;轻中度间歇性低氧组中MDA水平、磷酸化　JNK及c-fos和TUNEL阳性细胞6周达高峰,两组比较二者差异无统计学意义;重度间歇性低氧组MDA水平、磷酸化JNK及c-fos和TUNEL阳性细胞8周达高峰,与轻中度间歇性低氧组比较,差异显著。 结论　慢性间歇性低氧后氧自由基激活的JNK信号通路,通过调控c-fos表达介导神经细胞凋亡。     

Phrenic nerve stimulation in patients with spinal cord injury

Phrenic nerve pacing (PNP) is a clinically useful technique to restore inspiratory muscle function in patients with respiratory failure secondary to cervical spinal cord injury. In this review, patient evaluation, equipment, methods of implementation, clinical outcomes, and the complications and side effects of PNP are discussed. Despite considerable technical development, and clinical success, however, current PNP systems have significant limitations. Even in patients with intact phrenic nerve function, PNP is successful in achieving full-time support in ～50% of patients. Inadequate inspired volume generation may arise secondary to incomplete diaphragm activation, reversed recruitment order of motor units, fiber type conversion resulting in reduced force generating capacity and lack of coincident intercostal muscle activation. A novel method of pacing is under development which involves stimulating spinal cord tracts which synapse with the inspiratory motoneuron pools. This technique results in combined activation of the intercostal muscles and diaphragm in concert and holds promise to provide a more physiologic and effective method of PNP.     

Shh/Gli1信号参与小鼠脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性改变及运动功能恢复

目的:探讨sonic hedgehog/Gli1(Shh/Gli1)信号在小鼠脊髓损伤后病理变化及运动功能恢复中的作用。方法:成年雄性C57野生型、Gli1lz和Gli1lz/lz小鼠行T8节段脊髓夹伤及假手术。Gli1lz小鼠脊髓损伤及假手术后3 d行X-gal染色;7 d行Shh/PDGFr-α、Shh/GFAP、LacZ/GFAP染色,观察Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后的激活。C57野生型和Gli1lz/lz小鼠脊髓夹伤后7 d行GFAP染色和实时定量RT-PCR,观察星形胶质细胞反应;术后14 d尾静脉注射伊文氏兰观察血-脊髓屏障改变;术后1、3、5 d和7 d行BMS评分评价小鼠后肢运动功能。结果:脊髓损伤7 d后,损伤区Shh表达升高;Shh/Gli1信号报告基因LacZ表达升高,主要表达于反应性星形胶质细胞;免疫组织化学及实时定量RT-PCR结果显示Gli1基因敲除不影响脊髓损伤后GFAP表达;伊文氏兰染色及其定量分析显示Gli1lz/lz小鼠脊髓损伤后脊髓组织伊文氏兰外渗增加。BMS评分显示Gli1lz/lz小鼠运动功能恢复显著差于野生型小鼠。结论:Shh/Gli1信号在小鼠脊髓损伤后激活,可能参与脊髓损伤后血-脊髓屏障渗透性的改变,并影响脊髓损伤后的运动功能恢复。     

睾酮对小鼠坐骨神经损伤后脊髓前角运动神经元的保护作用

目的探讨睾酮对坐骨神经损伤后脊髓运动神经元的保护作用。方法12只性成熟C57雄性小鼠随机分为:芝麻油对照组(n=6)和睾酮实验组(n=6)。采用单侧坐骨神经切断损伤模型,手术后分别隔日皮下注射芝麻油和睾酮。两周后通过尼氏染色统计腰骶髓坐骨神经损伤侧的前角运动神经元数量和截面积。结果睾酮实验组腰骶髓前角运动神经元状态要好于芝麻油对照组,胞体饱满,突起较多。神经元数量和平均截面积明显大于芝麻油对照组(P0.01)。结论坐骨神经损伤后,睾酮对支配该神经的运动神经元具有明显的保护作用,增加存活运动神经元的数量和截面积。     

活性氧在脊髓损伤中的作用

脊髓损伤(spinal cord injury，SCI)治疗的实验性研究在18世纪就已经开始，研究者发现兴奋性毒性、Ca2+超载、神经元凋亡与氧化应激参与了神经损伤病理过程。近期研究中活性氧学说在脊髓损伤中的作用越来越受到研究者的重视，并有研究表明线粒体呼吸链、炎症反应中的呼吸爆发等多种途径参与了SCI后活性氧生成。本文在阐述活性氧生物学作用的同时，并结合近年来以活性氧为靶点的SCI治疗策略做一小结。     

氢盐水可抑制脊髓缺血再灌注损伤兔模型运动神经元的凋亡

背景：脊髓缺血再灌注损伤是一种严重的继发性脊髓损伤,其损伤机制是多因素综合作用的结果,其治疗上也有多种措施,但治疗效果不甚理想。 目的：探讨氢盐水对脊髓缺血再灌注损伤兔模型运动神经元的保护作用及机制。 方法：采用ZIVIN法制备脊髓缺血再灌注损伤兔模型,并采用氢盐水治疗(设为氢盐水组),同时设模型组和假手术组为对照。 结果与结论：氢盐水组兔后肢运动功能Tarlov评分于再灌注后6,12,24,72 h明显优于模型组(P < 0.01)。再灌注后72 h,与模型组相比,氢盐水组丙二醛浓度降低(P < 0.05),过氧化氢酶活性升高(P < 0.05)。苏木精-伊红染色显示,假手术组脊髓前角运动神经元细胞结构完整,模型组脊髓前角大量运动神经元细胞坏死,胞浆内颗粒变性和空泡变性。氢盐水组脊髓前角运动神经元细胞结构基本完整,仅有少量运动神经元细胞空泡变性。原位末端标记染色显示,假手术组未见运动神经元细胞凋亡;模型组见大量凋亡的运动神经元及大量炎性细胞浸润;氢盐水组见脊髓前角少量凋亡的运动神经元及少量炎性细胞浸润。结果证实,氢盐水可抑制兔缺血再灌注损伤脊髓运动神经元的凋亡,其机制与其抗氧化作用有关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

甲强龙、电针联合羊膜上皮细胞移植对脊髓损伤大鼠神经传导通路的影响

目的:探讨甲强龙、电针与羊膜上皮细胞(AECs)联合治疗对脊髓损伤(SCI)大鼠神经传导通路的影响。方法:成年雌性Wistar大鼠随机分成5组:SCI损伤对照组、甲强龙(MP)治疗组、MP+电针治疗组、MP+电针+AECs移植治疗组和假手术组。各组术后30 d行荧光红(FR)逆行示踪和神经电生理检测。结果:荧光红逆行示踪显示MP+电针+AECs移植治疗组脊髓损伤处可见大量有序的FR阳性神经纤维,在对应大脑皮质运动区和脊髓灰质后角追踪到数量较多的FR阳性神经元胞体,结构清晰。神经电生理检测显示该组感觉诱发电位与运动诱发电位的峰-峰值都有明显增加,潜伏期均明显缩短,与其他组比较,差异有统计学意义。结论:甲强龙、电针与AECs联合治疗大鼠脊髓损伤能够有效恢复神经传导通路,促进神经纤维再生。     

小鼠脊髓损伤后Aβ蛋白的表达与细胞凋亡

目的:观察小鼠急性脊髓损伤后不同时间点Aβ蛋白的变化与损伤周围区神经细胞的凋亡情况,进一步了解脊髓损伤后相关的病理生理变化。方法:130只昆明(KM)小鼠随机分为模型组60只、假手术组60只、对照组10只。模型组和假手术组均在脊髓胸8~12节段打开椎板,暴露脊髓。模型组采用改良Allen法打击脊髓后缝合伤口;假手术组打开椎板暴露脊髓后直接缝合。模型组和假手术组分别于2 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d六个时间点进行模型制作,脊髓损伤部位取材。对照组直接取相同脊髓节段,免疫荧光组织化学和Western Blot方法观察Aβ蛋白与细胞凋亡的变化。结果:脊髓损伤后模型组各个时间点的Aβ蛋白的含量和阳性细胞的数量较假手术组各时间点和对照组明显增加(P0.05),模型组各个时间点的Aβ蛋白的含量和阳性细胞的数量随术后时间的增长而增加,3~7 d达到高峰,呈现一定的规律性。假手术组各个时间点的结果均无明显变化;细胞凋亡的百分比在脊髓损伤后随时间改变逐渐增加,模型组较对照组增加明显(P0.05)。结论:脊髓损伤后Aβ蛋白的表达随时间的变化呈规律性改变;细胞的凋亡具有相似的趋势。     

腓肠神经移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤的作用

目的:探讨利用自体周围神经组织移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤病理机制,为临床应用提供实验依据。方法:利用改良Allens撞击方法建立脊髓打击损伤模型,12周后,将大鼠分为2组,实验组切取后肢腓肠神经,利用显微外科技术去除神经外膜,将其修剪成小段,游离移植于脊髓损伤处,对照组不作处理。分别于术后2、4、12周,在光镜及电镜下观察脊髓损伤段及移植周围神经再生情况。术后4、8及12周分别对两组动物进行脊髓诱发电位检查。结果:对照组脊髓变性,可见瘢痕和空洞,实验组术后12周,损伤区脊髓与周围神经融合良好。脊髓诱发电位检查神经移植组优于对照组。结论:周围神经组织游离移植修复大鼠陈旧性脊髓损伤后,存活良好,为再生轴突跨越损伤段脊髓提供通道。