免疫印迹法与免疫荧光法检测寻常型天疱疮自身抗体的比较

比较免疫印迹法与免疫荧光法对检测寻常型天疱疮抗体的临床应用价值。利用重组寻常型天疱疮抗原 (PVAEC1 2 )进行寻常型天疱疮 (PV )患者的免疫印迹法 (IBT )检测 ,并同时应用直接免疫荧光法 (DIF )和间接免疫荧光法 (IIF )检测 2 5例PV患者。IBT 2 1例阳性 (84 % ) ,DIF 2 0例阳性 (80 % ) ,IIF 18例阳性 (72 % )。正常对照 10例均为阴性。免疫荧光技术在PV的诊断与鉴别诊断中有其重要作用。利用重组PVAEC1 2行IBT以检测PV患者血清中抗PVA抗体 ,与免疫荧光法敏感性无统计学差异     

含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制

目的:探讨含蟾酥胶囊血清诱导人肝癌BEL-7402细胞株凋亡的机制.方法:用血清药理学方法,把含不同浓度蟾酥胶囊的血清加入体外培养的人肝癌BEL-7402细胞,分别孵育24、48 h,显微镜下观察细胞形态学改变;MTT比色检测细胞的存活率;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;琼脂糖凝胶电泳测定DNA条带;免疫细胞化学显色检测Bcl-2蛋白的表达.结果:实验组部分细胞凋亡,形态学改变;细胞存活率降低,增殖受到抑制;流式细胞仪检测,可见凋亡峰;孵育48 h,琼脂糖凝胶电泳呈梯状条带(DNA Ladder);免疫细胞化学检测,Bcl-2表达明显降低.结论:蟾酥胶囊诱导人肝癌细胞BEL-7402株凋亡的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关.     

特异性小干扰RNA沉默CHOP对肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:研究C/EBP同源蛋白(CHOP)对肾小管上皮HK2细胞凋亡的影响。方法:采用qPCR法检测急性肾损伤患者及健康对照者血清中CHOP的mRNA水平。体外培养肾小管上皮HK2细胞,随机分为对照组、阴性组和si-CHOP组,si-CHOP组和阴性组分别转染CHOP小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,通过转化生长因子β1(TGF-β1)诱导细胞损伤。MTT法检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞的凋亡率, Western blot检测细胞中细胞核抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与健康对照者相比,急性肾损伤患者血清中CHOP的表达量显著增加(P0.05);转染CHOP siRNA显著降低肾小管上皮细胞HK2中CHOP的水平,与对照组相比差异具有统计学意义(P0.05)。敲减CHOP的表达显著增加肾小管上皮HK2细胞的活力(P0.05),降低其凋亡率(P0.05),增加Ki-67和PCNA的表达量(P0.05),下调cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。结论:在急性肾损伤患者血清中CHOP的水平增加。敲减CHOP表达通过调节增殖和凋亡相关蛋白的表达抑制肾小管上皮HK2细胞的凋亡。     

应用免疫印迹技术检测天疱疮 抗体方法的建立

目的　建立应用免疫印迹技术检测天疱疮抗体方法。方法　环切包皮分离表皮后提取天疱疮抗原,进行印迹反应。对27份寻常型天疱疮（pemphigusvulgaris,PV）患者血清进行检测,并与间接免疫荧光（indirectimmunofluorescence，IIF）比较。结果　在26份血清中检出与表皮分离抗原结合的IgG抗体(96.3%)，其中24份与相对分子质量（Mr）为130×10     

寻常型天疱疮自身抗原Dsg3片段的重组表达和特异性细胞反应

目的 :探讨寻常型天疱疮自身抗原Dsg3在特异性T细胞反应中的作用 ,为自身免疫性疾病机制的研究提供依据。方法 :根据Genbank中的Dsg3序列分析 ,采用RT PCR法克隆自身抗原Dsg3E1,E2 ,E3,E4,E5多肽片段的cDNA ,定向插入表达载体PGEX 2T ,导入大肠杆菌JM10 9中表达重组融合蛋白并经GST层析柱纯化 ;进一步与PV患者及疾病对照组、正常对照组T细胞混合培养 ,观察T细胞增殖反应。结果 :Dsg3E1,E2和E4,E5可刺激PV患者T细胞反应 ,而不与疾病对照组、正常对照组反应。结论 :Dsg3E1,E2和E4,E5中包含T B细胞作用相关的抗原表位 ,在PV发病中起重要作用。     

食醋干预下大鼠血清对食管癌EC109细胞凋亡及Survivin表达的影响

目的研究长期高醋饮食SD大鼠血清诱导食管癌EC109细胞凋亡及其对Survivin蛋白表达的影响。方法采用普通SD大鼠血清和长期高醋饮食条件下SD大鼠血清培养食管癌EC109细胞。I组:以含20%灭活普通SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;II组:以含20%灭活长期高醋饮食干预条件下SD大鼠血清培养液培养食管癌EC109细胞;应用流式细胞仪分别采用Annexin V-EGFP/PI双染法和亚倍体峰法检测两组食管癌细胞早期和中晚期凋亡率;应用Western blot方法检测Survivin蛋白的表达水平。结果 II组细胞凋亡率明显高于I组,有统计学差异(P0.05);II组细胞中Survivin蛋白的表达水平明显低于I组,差异有统计学显著意义(P0.05)。结论长期高醋饮食SD大鼠血清能促进食管癌EC109细胞的凋亡并抑制Survivin蛋白的表达。     

骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡

背景：骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变。近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明。 目的：观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制。 方法：通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15%胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养   48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组。使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化。 结果与结论：无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P < 0.05)。p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P < 0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P < 0.05)。结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制.方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿...     

强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的探讨强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡相关蛋白的表达以及T细胞凋亡状况,分析其在疾病免疫发病机制的作用。方法CT检查患者骶髂关节并分级。尼龙棉柱法分离患者外周血T细胞,PI染色结合流式细胞术检测T细胞凋亡率,免疫组化法检测T细胞促凋亡蛋白FADD、Caspase．3、Caspase-8和抗凋亡蛋白FLIP表达。结果与健康对照相比,强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡率明显降低（P〈0．05）;促凋亡蛋白FADD、Caspase-3、Caspase-8百分率均明显降低（P〈0．05）,抗凋亡蛋白FLIP百分率明显升高（P〈0．05）。结论强直性脊柱炎患者外周血T细胞凋亡蛋白及抗凋亡蛋白表达异常和T细胞凋亡不足与患者免疫学发病机制相关。     

四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用

目的 研究由四环素调控的反义bcl-2的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK－N－MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制。方法 非定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1^CMV/Asbcl-2;应用脂质体Lipofectamine^TM介导转染SK－N－MC细胞,同时以空载体转染细胞作为对照。MTT法研究细胞的生长和增殖状况,提取DNA梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞。逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）研究细胞凋亡中bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达的变化。Western杂交检测bcl-2及其上下游相关基因caspase-3、PARP的变化。结果 转染反义bcl-2的细胞生长增殖缓慢,在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞,提前出现DNA梯带。在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase-3酶原蛋白减少并检测到bcl-2、PARP蛋白的降解产物条带。但bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达无明显变化。结论 反义bcl-2 mRNA可抑制SK－N－MC细胞的生长和增殖,促进去血清培养所诱导的SK－N－MC细胞的凋亡。大细胞凋亡过程中caspase-3被激活,bcl-2和PARP蛋白被裂解,但bcl-xL/bcl-xS在反义bcl-2 mRNA诱导的SK－N－MC细胞的凋亡过程中无变化。