盐酸羟考酮激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激缓解大鼠神经病理性疼痛

目的 探讨盐酸羟考酮对脊髓损伤大鼠氧化应激的影响及神经性病理疼痛的作用。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、脊髓损伤模型组（SCI组）和盐酸羟考酮组（OHI组）,Allen’s方法建立脊髓损伤大鼠模型。于实验开始前1d及造模后1d、3d、7d、14d对各组大鼠进行BBB评分,进行热缩爪潜伏期和机械性缩爪潜伏期的测定;利用HE染色观察脊髓损伤病理变化;免疫荧光法检测活性氧ROS的表达;ELISA检测血清中SOD、MDA、GSH-PX的含量;TUNEL法检测细胞凋亡情况;Western blot法检测Nrf2、Keap1、HO-1的表达水平。结果 盐酸羟考酮抑制SCI大鼠病理损伤,缓解神经病理性疼痛,抑制ROS的释放,抑制MDA的分泌,促进SOD、GSH-PX的释放,上调Nrf2、HO-1的表达,下调Keap1的表达。结论 盐酸羟考酮通过激活Nrf2/Keap1/HO-1信号通路抑制氧化应激,缓解SCI大鼠神经病理性头痛,降低病理损伤。     

蓝莓花青素调控Notch1/Hes-1通路对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的影响及机制研究

目的 探讨蓝莓花青素(BA)对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的影响及可能的作用机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组(NC组,n=10)和造模组,造模组一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg,构建糖尿病模型,造模成功后再随机分为糖尿病模型组(DM组)、蓝莓花青素组(BA组)、DAPT组(Notch1通路抑制剂)和蓝莓花青素+DAPT组(BA+DAPT组),每组10只。BA组每天给予20 mg/kg的BA灌胃,DAPT组给予10μmol/L的DAPT干预,BA+DAPT组给予20 mg/kg的BA灌胃+10μmol/L的DAPT干预,NC组和DM组用等量0.9%氯化钠溶液(生理盐水)灌胃,连续8周。于末次给药24 h后,摘取大鼠眼球,用酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒检测各组大鼠视网膜组织中活性氧(ROS)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜组织病理变化,并进行RGC计数;用荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)测量HO-1和iNOS mRNA表达;Western blot法检...     

连翘苷对肥胖症大鼠脂代谢紊乱和氧化应激的影响及机制研究

目的 探究连翘苷对肥胖症大鼠模型脂代谢紊乱和氧化应激的影响。 方法 采用高脂饲料喂养 建立肥胖症大鼠模型 (将大鼠随机分为 6 组: 对照组、 模型组、 连翘苷 5 mg / kg 组、 连翘苷 10 mg / kg 组、 连翘苷 20 mg / kg 组和二甲双胍组); 检测大鼠体重; 卷尺测量肛鼻长计算 Lee’s 指数; 血糖仪检测血糖水 平; 油红 O 染色检测脂质蓄积程度; 全自动生化分析仪检测 TC、 TG、 LDL-C 和 HDL-C 水平; 试剂盒检测 ALT、 AST、 ALP 水平和 SOD、 MDA、 GSH-Px 含量。 Western 印迹检测 p-Nrf2、 Nrf2、 HO-1 蛋白表达水平。 结果 与对照组相比较, 模型组 Lee’s 指数、 体重增重和血糖水平升高, TC、 TG 和 LDL-C 水平升高, HDL-C 水平降低, ALT、 AST 和 ALP 水平升高, SOD、 GSH-Px 含量降低, MDA 含量升高, p-Nrf2 / Nrf2、 HO-1 蛋白表达水平降低, 差异具有统计学意义 (P< 0. 05)。 与模型组相比较, 连翘苷 10、 20 mg / kg 组和 二甲双胍组 Lee’s 指数、 体重增重和血糖水平降低, 脂质蓄积程度明显改善, TC、 TG 和 LDL-C 水平降低, HDL-C 水平升高, ALT、 AST 和 ALP 水平降低, SOD、 GSH-Px 含量升高, MDA 含量降低, p-Nrf2 / Nrf2、 HO-1 蛋白表达水平升高, 差异具有统计学意义 (P< 0. 05)。 结论 连翘苷可改善肥胖症大鼠模型氧化应激 及脂代谢紊乱, 这可能是通过活化 Nrf2 / HO-1 信号通路实现的。     

袖状胃减容术对2型糖尿病大鼠肝脏Nrf2介导的氧化应激反应的影响

目的观察袖状胃减容术对2型糖尿病大鼠肝脏的保护作用,初步探讨其作用机制。方法 SPF级SD大鼠45只,采用腹腔注射STZ法诱导2型糖尿病大鼠模型,模型成功后随机分为2型糖尿病大鼠模型组(DM组)、袖状胃减容术干预组(SG组),假手术组(Sham组),术后连续观察8周,ELISA法检测各组大鼠肝损伤标志物ALT、AST及氧化应激细胞因子MDA、SOD、GSH表达水平,HE染色观察病理学变化,Western blot及qPCR法检测Nrf2、HO-1表达水平。结果 STZ诱导后的糖尿病大鼠,于8w后出现明显的肝功能损伤及氧化应激反应,血清ALT、AST、MDA含量明显升高,SOD、GSH含量明显降低,病理学可见肝脏组织结构模糊,肝小叶内出现局灶性坏死,部分肝细胞颗粒样变性。袖状胃减容术术后8w,SG组大鼠肝功能明显得到改善,血清ALT、AST、MDA含量明显降低,SOD、GSHSD明显升高,同时上调Nrf2、HO-1的表达水平。结论袖状胃减容术改善糖尿病大鼠机体内高糖环境下肝功能损伤,与其上调Nrf2、HO-1的表达,抑制肝脏氧化应激反应相关。     

勿动蛋白受体对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的影响

目的探讨勿动蛋白受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)SD大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及可能机制。方法链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组:对照组,DM组,siNgR组(玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列),siRNA空白组(玻璃体内给予阴性核苷酸序列)。1个月后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.69±0.51、7.18±0.87、6.52±1.27及3.08±0.48 nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(p0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(p0.05)。结论 NgR过表达是糖尿病视网膜RGC凋亡的原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达相关。     

莱菔硫烷对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用

目的:研究莱菔硫烷(SF)对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应,并初步探讨其作用机制。方法:通过一次性腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型;通过测定活性氧簇(ROS)的生成、TUNEL法检测视网膜细胞的凋亡和计数存活的视网膜神经节细胞(RGCs)等方法作为指标观察SF对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护效应;以免疫组织化学染色和Western blot法检测视网膜核因子E2相关因子2(Nrf2)的核转移和血红素加氧酶1(HO-1)的表达变化。结果:SF能抑制糖尿病大鼠视网膜ROS的生成,抑制视网膜神经细胞的凋亡并增加糖尿病大鼠视网膜RGCs的存活数量;同时SF还可促进Nrf2的激活及HO-1蛋白表达;使用HO-1抑制剂锌原卟啉可明显减弱SF对糖尿病大鼠视网膜RGCs凋亡的抑制作用。结论:SF可能通过激活Nrf2/HO-1抗氧化通路改善糖尿病大鼠视网膜氧化应激状态,减少视网膜神经细胞凋亡,减轻糖尿病大鼠的视网膜损伤。     

HO-1对糖尿病大鼠早期肾损伤的影响

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)水平的变化对糖尿病肾损伤时肾脏内皮功能及肾损伤的影响。方法链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,分成4组:对照组、糖尿病(DM)组、Hemin(HO-1诱导剂)+DM组、ZnPP(HO-1抑制剂)+DM组。在5、10、15周时收集标本;IHC及RT-PCR法观察肾组织HO-1的表达,检测MDA含量、SOD活性、NO及iNOS、eNOS水平的变化。同时收集各组大鼠24 h尿液测尿白蛋白排泄率(UAER)指标。结果与对照组比较,DM时大鼠肾脏局部MDA增加,HO-1的表达在5周时即增强,10周时有显著性差异(P<0.05)。在对照组肾组织中iNOS高于eNOS、DM时,iNOS下降而eNOS明显升高;与DM5周组比较,Hemin+DM组HO-1表达明显增强(P<0.05),MDA含量下降,eNOS升高受抑制,UAER减少(P<0.05);ZnPP+DM组HO-1表达减弱,MDA含量升高(P<0.01),eNOS增加,NO、UAER明显增加(P<0.05)。结论提高肾脏HO-1表达水平可减缓DM早期肾脏损伤。     

比索洛尔激活Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激缓解急性心肌梗死大鼠心肌损伤

目的 探索比索洛尔对急性心肌梗死大鼠氧化应激损伤的影响及可能机制.方法 大鼠随机分为假手术组(Sham)、急性心肌梗死大鼠模型组(AMI)、比索洛尔治疗组(Bis)和比索洛尔+锌原卟啉9组(Bis+ZnPP),每组10只.造模后第8天,超声检测各组大鼠心功能;TTC染色后计算心肌梗死面积;HE和MASSON染色观察心肌损伤和纤维化程度;ELISA检测各组大鼠血清中磷酸肌酸激酶(CK)、磷酸肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH-Px)含量;Western blot检测各组大鼠心肌中核因子E2相关因子2(Nrf2)及HO-1蛋白表达情况.结果 比索洛尔显著提升心肌梗死大鼠缩短分数(FS％)及射血分数(EF％),降低左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVEDs)及左室舒张末期后壁厚度(LVPWd),减少心肌梗死面积,减轻心肌损伤,抑制纤维化,降低血清中CK、CK-MB、LDH含量,降低心肌组织中MDA含量,并升高SOD、GSH-Px活性,上调心肌中Nrf2与HO-1蛋白的表达(P＜0.05).而给予HO-1抑制剂ZnPP后,Bis的上述作用均被减弱或抑制.结论 比索洛尔减轻急性心肌梗死大鼠氧化应激,与激活Nrf2/HO-1信号通路有关.     

益气养阴方通过激活ERK/Nrf2/HO-1通路减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:探究益气养阴方对糖尿病(DM)大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用及可能的机制。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为:正常(control)组,DM假手术(DM-S组)组,DM+MIRI组,益气养阴方低、中和高剂量组(灌胃7.5、15和30 g/kg益气养阴方水煎液),Nrf2激活剂(bardoxolone methyl)组(每天灌胃大鼠30 mg/kg bardoxolone methyl,灌胃量1 mL/kg)。每组均15只大鼠,连续给药7 d。末次给药结束后采集尾静脉血,对大鼠血糖血脂水平进行检测;ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-10的水平;血液采集后,采用超声检测大鼠心脏功能的变化;心功能检测后,处死大鼠获取心脏组织,采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色评估心肌梗死体积变化;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理形态学变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况; Western blot检测心肌组织磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)的蛋白水平;氮蓝四唑显色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活力,硫代巴比妥酸比色法检测丙二醛(MDA)水平,铁离子还原法检测活性氧簇(ROS)的水平。结果:与control组相比,DM-S组和DM+MIRI组的空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低(P0.05);与DM-S组和DM+MIRI组相比,益气养阴方各组与bardoxolone methyl组的FBG、TC和TG水平显著降低,HDL-C水平显著升高(P0.05)。与control组和DM-S组相比,DM+MIRI组的心率(HR)和左心室舒张末压(LVEDP)升高,平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)和左室射血分数(LVEF)降低,血清cTnI、TNF-α、IL-1β和IL-10水平升高,心肌梗死体积百分比升高,大鼠心肌细胞破碎、坏死数量增多,心肌细胞凋亡率升高,p-ERK1/2、Nrf2和HO-1蛋白水平均降低,MDA和ROS水平均升高,SOD活力降低(P0.05)。与DM+MIRI组相比,益气养阴方各组与bardoxolone methyl组的HR和LVEDP降低,MAP、LVSP和LVEF升高,血清cTnI、TNF-α、IL-1β和IL-10水平降低,心肌梗死体积百分比降低,大鼠心肌细胞破碎、坏死减少,心肌细胞凋亡率降低,p-ERK1/2、Nrf2和HO-1的蛋白水平均升高,MDA和ROS水平降低,SOD活力升高(P0.05)。结论:益气养阴方可保护DM+MIRI大鼠的心肌组织,减轻组织氧化应激水平,其效应可能是通过激活ERK/Nrf2/HO-1通路实现的。     

川芎嗪通过增强糖尿病大鼠的抗氧化和抗炎作用减轻下颌下腺组织损伤

目的研究川芎嗪对糖尿病(DM)大鼠下颌下腺组织血红素加氧酶1/一氧化碳(HO-1/CO)、诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮(iNOS/NO)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响及意义。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、 DM组和川芎嗪组,每组10只。对照组大鼠不进行任何处理。DM组和川芎嗪组大鼠用高脂饮食8周并1次性腹腔注射20 g/L链尿佐菌素(35 mg/kg)复制2型DM模型。1周后,两组大鼠禁食12 h,从尾静脉抽血测空腹血糖(FBG)水平,FBG7.0 mmol/L提示造模成功。川芎嗪组采用腹腔注射川芎嗪[150 mg/(kg·d)],持续8周,期间所有大鼠都普通饮食喂养。采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血清FBG、甘油三酯(TG)和总胆固醇(TC)含量;血气分析法测定各组动脉血CO含量;比色法检测各组血清NO、下颌下腺丙二醛(MAD)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;HE染色观察各组下颌下腺病理变化;免疫组织化学染色检测下颌下腺HO-1、 iNOS和TNF-α的表达。结果 HE显示DM组下颌下腺组织轻微萎缩,细胞排列紊乱;川芎嗪组下颌下腺病理变化明显减轻。与对照组比较,DM组和川芎嗪组的FBG、 TG和TC显著升高;CO和SOD含量均显著下降;NO和MDA含量均显著增加;HO-1表达显著下降,iNOS和TNF-α表达显著增加。与DM组比较,川芎嗪组FBG显著下降,CO和SOD含量均显著增加,NO和MDA含量显著减少;HO-1表达显著增加、 iNOS和TNF-α表达显著下降。结论川芎嗪能上调HO-1/CO表达,下调iNOS/NO、 TNF-α表达,提示川芎嗪可以通过增强机体的抗氧化、抗炎作用,对DM大鼠下颌下腺起保护作用。     

Comprehensive sequence analysis of HLA-DQA1 and -DQB1 alleles and characterization of DRB1-QAP-DQA1-DQB1 haplotypes

It is well known that both chain and β chain of HLA-DQ are highly polymorphic. However the polymorphisms outside the hypervariable region were not fully examined so far. To further clarify the polymorphisms in DQ genes, we determined the nucleotide sequences of full length cDNA, spanning from the leader sequence to the stop codon, from 15 DQA1 alleles and 15 DQB1 alleles. We identified several new DQ alleles which had identical exon 2 sequence and were different in other exons. On the basis of the sequence analyses, a comprehensive PCR-based oligotyping system for DQA1 gene was established. We then characterized DRB1-QAP(DQA1 promoter)-DQA1-DQB1 haplotypes of B-lymphoblastoid cell lines homozygous for HLA and healthy unrelated Japanese and Norwegian populations. It was revealed that DQA1 alleles, which were identical in exon 2 but different in other exons, showed close linkage disequilibrium with diferent characteristic DRB1, QAP and DQB1 alleles. These results suggest that DR-DQ haplotypes have been generated in the early stage of molecular evolution.     

Initial Changes of Rat Leukemia Induced by 1-Ethyl-1-Nitrosourea and 1-Butyl-1-Nitrosourea

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl- 1-nitrosourea and 1 butyl 1 nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen. Acta Pathol Jpn 42: 158–165, 1992.     

Initial changes of rat leukemia induced by 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea.

The initial histological changes of leukemia were investigated in rats to which 1-ethyl-1-nitrosourea and 1-butyl-1-nitrosourea were orally administered. The appearance of orthochromatic erythroblasts in the peripheral blood was used as the index of the initial stage of leukemia. The rat leukemia progressed from solitary lesions to scattered and further diffuse lesions. These leukemias are thought to begin as one, or only a few nodular foci, mainly in the bone marrow and partly in the spleen.     

FoxO1 基因对Jurkat 细胞FoxO1-KLF2-S1P1 通路的调节作用

目的:通过构建FoxO1 表达和干扰慢病毒载体,建立细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控研究模型,观察FoxO1 过表达、干扰表达在Jurkat 细胞内对其下游分子表达及功能的影响。方法:构建FoxO1 表达和干扰表达慢病毒载体,分别感染Jurkat 细胞,采用荧光定量PCR、Western blot 和流式细胞术检测S1P1、CD62L、CCR7、CD69 mRNA 水平和蛋白分子的表达。结果:FoxO1 过表达组于感染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平显著增高(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平增高,S1P1+细胞和CD62L+ 细胞比率增高(P<0.05),CCR7+ 细胞和CD69+ 细胞未见显著改变(P>0.05)。FoxO1 干扰组于转染后120 h FoxO1、KLF2、S1P1 和CD62L mRNA 水平降低(P<0.05),FoxO1、FoxO1-p 和KLF2 胞浆蛋白水平低于对照组,S1P1+细胞百分比增多(P<0.05) ,但S1P1+细胞和CD62L+细胞在72 h 时减少(P<0.05)。结论:FoxO1 表达和干扰慢病毒载体转染Jurkat 细胞并调节KLF2、S1P1 和CD62L 等分子的表达,为开展细胞内FoxO1-KLF2-S1P1 信号通路调控和细胞相关功能的研究打下了基础。     

韩国人CYP450 1A1、CYP450 2E1和GSTM1、GSTT1、GSTP1基因座遗传多态性分析

目的 调查代谢相关的CYP4501A1、CYP4502E1和GSTM1、GSIT1、GSTP1基因座在韩国人群中的遗传多态性分布状况。方法 采用多重聚合酶链式反应、聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术，分析300名韩国健康大学生的CYP1A1基因3′端限制性内切酶Msp Ⅰ位点、CYP2E1基因5′端转录调节区Pst Ⅰ位点和GSTM1、GSTT1缺失与存在、GSTP1基因第5外显子BsmA Ⅰ位点的基因型，计算基因型和基因频率。结果 CYP1A1基因型频率为ml／ml型39．7％、ml／m2型49．7％、m2／m2型10．7％，基因频率为ml 0．645、m2 0．355。CYP2E1基因型频率为cl／cl型66．7％、cl／c2型30％、c2／c2型3．3％，基因频率为C1 0．818、C2 0．182。GSTM1基因缺失型频率为53．3％。GSTT1基因缺失型频率为54．7％。GSTP1基因型频率为Ile／Ile型62％、Ile／Val型34．3％、VaL／Val型3．7％，基因频率为Ile 0．792、Val 0．208。基因分布符合Hardy-Weirtberg平衡定律。结论 韩国人CYP1A1、CYP2E1、GSTM1、GSTT1基因分布与我国人群较为相近，半数以上人缺乏GSTM1和GSTT1基因，纯合缺失型频率超过印度人的3倍。     

Differential regulation of CYP1A1 and CYP1B1 expression in resveratrol-treated human medulloblastoma cells

Resveratrol induces differentiation and Fas-independent apoptosis of medulloblastoma cells by a largely unknown mechanism. CYP1A1 and 1B1 are involved in resveratrol-mediated tumor suppression but their expression in medulloblastoma cells and their relevance to anti-medulloblastoma activity of resveratrol have not been described. The statuses of CYP1A1 and 1B1 in UW228-3 medulloblastoma cells without and with resveratrol treatments were elucidated in this study with ethoxyresorufin O-deethylation assay, followed by RT-PCR, immunocytochemical staining and Western blot hybridization. CYP1A1/1B1 enzymatic activity was low in UW228-3 cells but became several folds higher upon resveratrol treatments. CYP1A1 was undetectable and CYP1B1 was expressed in normally cultured cells. Accompanied by the increased fraction of apoptosis, enhanced CYP1A1 and downregulated CYP1B1 were observed in resveratrol-treated cells in time- and dose-related fashions. Our results demonstrate for the first time that in the medulloblastoma cell system, CYP1A1 upregulation is paralleled with resveratrol-induced differentiation and apoptosis, while CYP1B1 may not be an essential element in metabolic activation of resveratrol in those cells. CYP1A1 and 1B1 are resveratrol response genes and potential chemosensitive markers of medulloblastoma cells.