PTSD大鼠海马RGMa的表达变化

目的观察RGMa(repulsive guidancemoleculea)在创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)大鼠海马神经元的表达变化。方法建立连续单一刺激(single prolonged stress,SPS)的Wistar大鼠PTSD模型,随机分为SPS刺激后第7天组(SPS7d)、第14天组(SPS14d)及正常对照组,采用免疫组织化学、Western Blot方法检测各组海马神经元RGMa的表达变化。结果免疫组织化学及Western Blot结果均显示SPS7d组海马神经元RGMa表达水平较正常对照组增加(P<0.01),第14天组降低但仍高于正常对照组(P<0.01)。结论 PTSD模型大鼠海马RGMa蛋白水平变化可能是海马神经元遭遇巨大应激源后修复异常并最终导致神经元凋亡、海马体积缩小的重要分子机制之一。     

PTSD大鼠海马tau蛋白表达的变化

目的观察创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)大鼠海马神经元tau蛋白的表达变化,探讨PTSD对大鼠海马神经元骨架蛋白影响的分子机制。方法采用国际认定的无连续单一刺激(single prolonged stress,SPS)建立大鼠PTSD模型,将成年雌性Wistar大鼠40只,随机分为正常组、4天组、7天组、14天组。予Morris水迷宫的方法,检测大鼠空间记忆能力的变化。采用免疫荧光法,免疫组织化学方法,Westernblot方法,检测tau蛋白,磷酸化tau及β-tubulin及MAP1B的变化。结果 SPS大鼠空间记忆探索能力随刺激时间增加而不断降低。随着刺激后天数的增加,tau、β-tubulin及MAP1B表达水平逐渐增高,而磷酸化tau是逐渐下降的。结论细胞骨架蛋白及相关蛋白的表达变化,可能参与PTSD记忆异常的分子机制。     

PEBP在切割穹窿海马伞大鼠海马中的表达变化

切割大鼠右侧穹窿海马伞,应用Western blot、免疫组化技术,观察切割后海马中磷脂酰乙醇胺结合蛋白(phosphatidyle-thanolamine binding protein,PEBP)的表达的时空变化。Western blot结果显示:PEBP在切割后3 d表达开始上升,7 d达最高水平,随后缓慢下降,28 d时降至正常。免疫组化结果显示:术后各时间点切割侧海马CA1～CA3区的锥体细胞层和齿状回颗粒层的PEBP阳性细胞数与正常侧相比无显著性差异(P>0.05),但切割侧PEBP阳性细胞染色加深,7 d时最为明显,两侧比较灰度值有显著性差异(P<0.01)。切割侧齿状回门区和颗粒下层中可见较多深染的PEBP阳性细胞,其细胞数和灰度值与正常侧相比均有显著性差异(P<0.05)。结合本课题组以往的工作,本结果提示切割穹窿海马伞后PEBP的高表达可能与海马神经再生有关。     

Jagged1在大鼠切割穹窿海马伞后海马内的表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞后不同时相点海马内Jagged1的动态表达变化。方法:切割SD大鼠双侧穹窿海马伞,于切割后第3、7、14、21 d分别提取海马组织总RNA和总蛋白,应用RT-PCR和Western Blot的方法分别检测Jagged1基因和蛋白的表达变化;切割SD大鼠右侧穹窿海马伞,7 d后通过免疫组织化学的方法检测海马齿状回颗粒下层和门区中Jagged1阳性细胞的数目和平均光密度值(MOD)。结果:Jagged1基因和蛋白在切割穹窿海马伞后的第3 d表达开始增高,第7 d时达到最高水平,第14 d后表达下降至正常水平;切割穹窿海马伞后的第7 d,切割侧海马齿状回颗粒下层和门区中Jagged1阳性细胞数为167.89±22.11,平均光密度值为0.11±0.02;正常侧阳性细胞数为140.45±22.63,平均光密度值为0.06±0.01;切割侧阳性细胞数和平均光密度值与正常侧均明显增高(P0.05)。结论:切割穹窿海马伞后Jagged1基因和蛋白的表达呈现出先增高后降低的变化趋势,提示Jagged1是切割穹窿海马伞后海马内微环境的重要组成分子。     

神经病理性痛大鼠海马CA1区锥体神经元树突及树突棘的变化

目的:观察神经病理性痛条件下大鼠海马CA1区锥体神经元树突形态和树突棘密度的变化。方法:建立大鼠腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)神经病理性痛模型,对照组为假手术组即只暴露腰5脊神经,不结扎。利用Von Frey纤维丝检测其50%机械性缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT),判断SNL模型是否成功。通过高尔基(Golgi)染色的方法观察SNL模型后14 d海马CA1区锥体神经元树突形态和树突棘密度的变化。结果:SNL模型组大鼠CA1区锥体神经元树突棘密度升高,与对照组相比有统计学差异(P0.05),而锥体神经元树突分支数无明显差异。结论:神经病理性痛会导致海马CA1区锥体神经元树突棘密度升高。     

切割穹窿海马伞大鼠海马内BLBP的表达变化

为了观察切割大鼠右侧穹窿海马伞后,切割侧与正常侧海马齿状回内脑脂结合蛋白(BLBP)的表达变化,本研究应用Western blot和免疫组织化学方法检测双侧海马内BLBP蛋白表达水平的变化,以及海马齿状回门区和颗粒下层中BLBP免疫阳性细胞数和灰度值。结果显示:正常大鼠双侧海马各区和颗粒下层细胞BLBP仅有微量表达,切割穹窿海马伞后第1 d双侧差异不明显;3 d时切割侧颗粒下层阳性细胞及染色深度较正常侧加深;5 d时切割侧颗粒下层阳性细胞数量明显增多,染色较深,并达到最高水平;7 d后BLBP免疫阳性细胞的数量和染色深度开始降低,14 d时接近正常侧水平。而切割后3、5 d时双侧门区BLBP免疫阳性细胞的数量差异不大,但切割侧染色较深,7 d后也逐渐降低,14 d时降至正常侧水平。上述结果提示,切割穹窿海马伞阻断了隔区与海马齿状回的纤维联系后,可引起海马齿状回门区和颗粒下层BLBP表达增强,可能引发了放射状胶质细胞的增殖和激活,构成的支架有助于神经干细胞的迁移和向神经元的分化。     

谷氨酸钠致痫大鼠海马mGluR5的表达变化

本研究目的为探讨谷氨酸钠(GluNa)诱导大鼠癫痫发作时海马mGluR5的表达变化。将动物随机分为正常对照组、Glu—Na致痫组及D—AP-5(非竞争性：NMDA受体拮抗剂) GluNa组。通过免疫组织化学方法观察了多克隆抗体抗mGluR5在海马各区及齿状回的免疫反应阳性细胞的变化，同时观察并记录各组大鼠的行为变化。结果证明：GluNa注射后的大鼠均出现严重的癫痫发作。正常组大鼠海马中有丰富的mGluR5表达，以齿状回颗粒细胞层和CA1锥体细胞层的表达为最高，而GluNa致痫组海马各区mGluR5表达明显下调。D—AP-5 GluNa组海马各区mGluR5表达较之GluNa致痫组又上调。同时观察到三个组的mGluR5的表达主要集中在细胞膜上。结果提示mGluR5在癫痫发作后表达下降可能在癫痫诱导过程中具有重要作用，其作用机制可能为NMDA受体依赖性的。     

穹窿海马伞切割大鼠海马内Brn-4 mRNA 的表达变化

目的探讨切割穹窿海马伞大鼠海马与正常海马内Brn-4 mRNA表达的差异。方法42只SD大鼠随机分成正常对照组和切割海马伞后1、3、7、14、21及28d组。取各组大鼠的海马组织,提取总RNA,采用半定量RT-PCR法分析穹窿海马伞切割后海马内Brn-4 mRNA表达水平的变化。结果海马内Brn-4 mRNA的表达量在切割后第3d开始升高,14d达到最高水平,随后下降,28d左右恢复至正常水平。结论切割穹窿海马伞后海马内Brn-4 mRNA表达明显上调,可能与促进神经干细胞更多地向神经元和AChE阳性神经元分化有关。     

去神经支配大鼠海马内MTSS1的表达变化

目的:探讨切割穹窿海马伞去神经支配大鼠海马内转移抑制蛋白1(metastasis suppressor 1,MTSS1)的表达变化。方法:SD大鼠随机分成正常组和切割穹窿海马伞后1、3、5、7、14 d组,采用Real-time PCR和免疫荧光组织化学技术观察穹窿海马伞切割后海马内MTSS1 mRNA的表达变化和MTSS1阳性细胞的分布情况。结果:(1)Real-time PCR结果显示:海马内MTSS1 mRNA的相对表达量在切割后3 d开始升高(P<0.05),5 d达到最高水平(P<0.01),7 d恢复至正常水平;(2)免疫荧光组织化学染色结果显示:MTSS1阳性细胞主要表达于海马齿状回门区及颗粒下层中,切割后5 d MTSS1阳性细胞数开始增多(P<0.01),7 d继续增多并达到高峰(P<0.01),14 d时开始下降至正常水平。结论:结合本课题组以往的工作,上述结果提示切割穹窿海马伞后MTSS1的高表达可能与海马神经再生过程中神经干细胞向神经元的分化有关。     

NOV蛋白在切割海马伞大鼠海马中表达的变化

通过切割右侧海马伞制备大鼠海马伞损伤模型,应用Westernblotting、免疫组织化学技术,观察切割海马伞后不同时程海马中肾母细胞瘤过度表达基因(NOV)蛋白表达的变化,并对结果进行图像处理和统计学分析。Westernblotting结果显示,NOV蛋白在切割海马伞后3d表达开始上升,14d达高峰后缓慢下降。切割海马伞后14d切割侧和正常侧相比较,海马CA1-CA3区的锥体细胞层及齿状回颗粒层NOV阳性细胞数目无显著性差异(P>0.05),但切割侧NOV阳性细胞明显比正常侧深染,两侧比较平均灰度值有显著性差异(P<0.01)。结合本课题组以往的工作,本研究结果提示,切割海马伞后海马中高表达的NOV蛋白可能参与了诱导神经干细胞迁移和向神经元分化的过程。     

卒中后抑郁大鼠外周血及海马中IL-1β的表达

目的观察卒中后抑郁(post-stroke depression, PSD)大鼠外周血及海马中IL-1β的表达,探讨IL-1β在PSD发病中的作用。方法 250-300g雄性SD大鼠,分为对照组、PSD组。PSD组分三个阶段连续监测:缺血性脑卒中(Ischemic stroke,IS)再灌注24h后、PSD造模2周末、PSD造模4周末。预饲养一周后线栓法制备IS模型,恢复一周后给予大鼠温和不可预知性刺激,持续4周,制备PSD模型。分别用ELISA法和免疫组化法检测血清和海马中IL-1β的表达。结果与对照组相比,IS大鼠血清中IL-1β表达增高,PSD组造模2周末、PSD组造模4周末时持续增高。与对照组相比,IS大鼠海马中IL-1β显著升高,24h达高峰,在PSD造模2周末和PSD造模4周末时,海马内IL-1β的表达相对于IS降低,但依然高于正常对照组。结论 IL-1β可能参与PSD发病的病理过程。     

癫痫持续状态大鼠海马Bim与Caspase-3的表达

目的:探讨在匹罗卡品致痫的癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)大鼠模型中,Bcl-2-相互作用细胞死亡介导因子(Bim)与Caspase-3在大鼠海马组织中的表达。方法:雄性成年Sprague-Dawley(SD)大鼠,应用匹罗卡品产生SE 60 min后终止发作,24 h后取材,行HE染色及TUNEL染色,观察海马神经元的损伤及凋亡情况,Western Blot测定海马组织中Bim的表达,免疫组化检测Caspase-3的表达。采用Pearson相关分析法分析Bim与Caspase-3表达的相关性。结果:SE后24 h,海马组织HE染色见神经元数量减少,TUNEL染色阳性细胞数明显增加,Western Blot中Bim出现相对分子量26kD的条带,免疫组化染色可见大量Caspase-3阳性神经元。结论:大鼠SE后24 h,Bim与Caspase-3在海马组织神经元表达增加,且二者的表达呈正相关(r=0.901,P=0.001),海马神经元出现凋亡。     

依那普利增加糖尿病大鼠海马组织内突触素的表达

目的 观察依拉普利对糖尿病大鼠空间学习和记忆能力,以及海马组织内突触素表达的影响。方法 随机将40只大鼠分为对照组、糖尿病组、糖尿病+依拉普利组。建立STZ糖尿病大鼠模型,依拉普利干预12周,Morris水迷宫测试大鼠的空间学习和记忆能力,并用免疫组化和RT-PCR技术分别检测大鼠海马组织内突触素的蛋白和mRNA表达。结果 与糖尿病组比较,依拉普利组大鼠在Morris水迷宫测试中逃避潜伏期明显缩短（P<0.05）,中心区停留时间百分比和通过原平台位置次数显著增加（P<0.05）,大鼠海马组织内突触素蛋白和mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。结论 依拉普利改善糖尿病大鼠空间学习和记忆的能力可能与海马组织内突触素表达增加有关。     

吗氯贝胺早期干预对创伤后应激障碍大鼠行为及前额皮质pCREB水平的影响

目的探讨吗氯贝胺(Moclobemide,Moc)早期干预对创伤后应激障碍(posttraumatic stress disorder,PTSD)模型大鼠行为及内侧前额皮质pCREB水平的影响。方法采用单一连续刺激(single prolonged stress,SPS)建立大鼠PTSD模型。取成年健康雄性Wistar大鼠48只,随机分为N+sham组(正常对照组),SPS+sham组(SPS刺激后腹腔注射与抑制剂等体积的生理盐水),SPS+Moc组(SPS刺激后腹腔注射吗氯贝胺),N+Moc组(正常大鼠腹腔注射吗氯贝胺)。吗氯贝胺按8mg/kg腹腔注射给药,每日一次,连续14d。采用旷场试验和高架十字迷宫检测大鼠行为表现,并于行为学实验完成后处死大鼠,取前额内侧皮质,采用Western blot检测pCREB的表达水平。结果SPS引起大鼠进入中央区次数减少和总的运动距离缩短,给予Moc后大鼠进入中央区次数增多和总的运动距离增加。SPS引起大鼠进入开臂次数的百分比和开臂停留时间百分比均显著降低,给予Moc后大鼠进入开臂次数的百分比和开臂停留时间百分比明显升高。SPS引起大鼠内侧前额皮质pCREB的表达水平降低,Moc干预后pCREB的表达量增加。结论吗氯贝胺对PTSD大鼠行为改善的作用,可能是与上调前额内侧皮质pCREB水平相关。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12在实验性淋巴滞留性脑病大鼠脑皮层及海马中的表达研究

目的探讨Caspase-12 mRNA在淋巴滞留性脑病大鼠模型脑皮层及海马中的表达情况,及其与神经元凋亡之间的关系。方法健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为手术组、假手术组和对照组,手术组建立淋巴滞留性脑病实验动物模型,在脑淋巴阻滞后不同时间点（1、3、5、7、14d）取颞顶皮层、海马区脑组织,用半定量RT—PCR方法观察淋巴滞留性脑病大鼠损伤后Caspase-12 mRNA的表达情况。用假手术组、对照组观察并对比上述指标。结果在颞顶皮层,Caspase-12 mRNA的表达在术后1d即升高,3d时达到高峰,5d时开始下降,但仍高于正常对照组及假手术组,且有统计学意义（P〈0．05）,术后7d、14d降至接近正常对照及假手术组水平。在海马,淋巴阻滞后3d内Caspase-12 mRNA的表达升高,且以第一天时为最高,5d后逐渐接近正常对照组及假手术组。结论凋亡的发生可能与内质网应激有关。     

银杏叶提取物对血管性痴呆大鼠海马突触素表达的影响

目的：研究银杏叶提取物(EGb761)对血管性痴呆模型大鼠海马突触素表达的影响。方法:以双侧颈总动脉反复夹闭再通同时腹腔注射硝普钠建立血管性痴呆模型大鼠，采用Morris 水迷宫和免疫组化方法分别观察大鼠空间学习记忆能力及海马突触素(SYN)表达情况。结果:模型组大鼠在1月、2月和4月不同时点测得的Morris水迷宫逃避潜伏期(EL)均较假手术组明显延长(P<0.01)，药物组EL均显著短于模型组，但仍长于假手术组(P<0.05或P<0.01)；模型组海马SYN表达弱于假手术组，而药物组海马SYN表达高于模型组(P<0.01)。结论:EGb761增加海马结构SYN表达可能是其改善VD大鼠学习记忆障碍的重要机制。     

肝性脑病大鼠海马CA3区神经元形态和一氧化氮合酶表达的变化

目的观察肝性脑病模型组和正常对照组大鼠脑海马CA3区神经元的变化及一氧化氮合酶(NOS)的表达;探讨海马CA3区神经元的形态学改变及一氧化氮(NO)在肝性脑病发病机制中的作用。方法雄性大鼠50只,实验开始前所有动物均进行莫里斯水迷宫测试,之后将动物分为对照组和实验组。9周后建立CCL4肝性脑病模型,分别取两组大鼠海马组织进行尼氏染色及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸-黄递酶(NADPH-d),染色。结果尼氏染色发现,实验组大鼠海马神经元数目减少、染色较浅,胞质内尼氏体减少或消失;NADPH-d染色发现,实验组可见粗大轴突着色,树突联系广泛;对照组则少有粗大轴突着色,树突间联系不如实验组广泛。实验组NOS阳性神经元染色较对照组深,为紫蓝或深蓝色(强阳性及阳性),且阳性神经元数目较多;而对照组染色浅淡,呈浅蓝或与背景同色,为弱阳性。结论肝性脑病时海马受到损伤,NO可能介导了神经元的损伤并参与了肝硬化和肝性脑病的发病,血氨升高是肝性脑病(HE)致病因素之一。     

催产素抑制外周刺激诱发的大鼠海马LTP及Fos蛋白表达

 目的 探讨催产素对外周刺激诱发的大鼠海马LTP及Fos蛋白表达的影响。方法 单刺激诱发海马CA1区场电位；强直刺激坐骨神经，诱发海马CA1区长时程增强场电位（LTP）。在强直刺激前于侧脑室内微量注入催产素(Oxytocin，OT)及催产素受体拮抗剂－Atosiban，观察其对LTP的影响。用免疫组化法检测海马Fos蛋白表达。结果 单刺激坐骨神经在海马CA1区诱发出潜伏期固定(171.9±33.1) ms且可重复出现的以正波为主的场电位，平均幅度(25.7±8.4) μV。强直刺激诱导LTP产生，催产素可抑制海马LTP的诱导，但预先注射Atosiban后，海马CA1区仍能出现LTP，但持续时间比对照组短。强直刺激前，海马内c-fos表达为阴性；强直刺激后，表达增强，催产素组表达则较弱，催产素加拮抗剂组也呈强阳性表达。结论 催产素抑制海马LTP的诱导，减弱c-fos的表达，而Atosiban对该效应有一定的抑制作用。提示催产素可能是通过其受体发挥作用的。