Gli2基因沉默逆转肝癌细胞系SMMC-7721的上皮间质转化

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(Gli2)对肝癌细胞系SMMC-7721上皮间质转化(EMT)和侵袭能力的影响及机制。方法合成shRNA-Gli2、shRNA-NC病毒载体,实验设shRNA-Gli2组、shRNA-NC组和空白组,转染SMMC-7721细胞。用Transwell小室和细胞黏附实验观察细胞侵袭及黏附能力;用qRT-PCR和Western blot检测细胞间Gli2、E-cadherin、N-cadherin及vimentin基因和蛋白的表达。结果在不同肝癌细胞系中,随着肝癌细胞系侵袭能力的增强,Gli2的表达逐渐增高,shRNA-Gli2组与对照组相比侵袭能力降低,同种黏附能力增加,异种黏附能力降低(P0.05)。shRNA-Gli2组与对照组相比,E-cadherin表达明显增高而N-cadherin和vimentin表达明显降低(P0.05)。结论沉默Gli2的表达能够促进肝癌细胞SMMC-7721 EMT的反转,并降低其侵袭能力,机制可能与E-cadherin的上调和N-cadherin、vimentin的下调有关。     

高尔基体基质蛋白130通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移

目的　探究高尔基体基质蛋白130（Golgi Matrix Protein 130,GM130）对甲状腺乳头状癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。 方法　RT-PCR检测人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、K1、TPC-1中的GM130 mRNA水平。将细胞分为Control、scramble siRNA（si-scramble）、GM130 siRNA（si-GM130）3组。CCK8检测各组细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western Blot检测GM130、Ki67、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、基质金属蛋白酶-4（Matrix metalloproteinase-4,MMP-4）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、钙依赖性粘附蛋白E（Calcium-dependent adhesion protein E,E-cadherin）、Snail、钙依赖性粘附蛋白N（N-cadherin）及波形蛋白Vinmentin的表达,同时利用免疫荧光检测Vimentin的表达。 结果　GM130在TPC-1细胞中的mRNA水平最高,故利用TPC-1细胞进行后续实验。与Control组比较,si-GM130组中GM130表达显著下调,细胞增殖速率及Ki67、PCNA表达显著降低,细胞划痕闭合率显著下降,侵袭细胞数及MMP-4、MMP-9表达显著减少。此外,与Control组比较,si-GM130组中E-cadherin表达显著升高,Snail、N-cadherin及Vimentin表达显著降低。同时Vimentin荧光值在si-GM130组中显著降低。 结论　GM130可通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移。     

MTA1基因调节神经胶质母细胞瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移

目的评价沉默MTA1基因对神经胶质瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移能力的影响。方法应用慢病毒转染技术沉默MTA1基因的表达,通过Western blot实验与荧光共聚焦实验检测MTA1蛋白与F-actin蛋白的表达;通过Transwell实验评估细胞侵袭与迁移能力;Western blot实验检测E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达。结果沉默MTA1基因可下调F-actin蛋白的表达水平,抑制U-87-MG细胞的侵袭与迁移能力,并且上调N-cadherin蛋白,下调E-cadherin蛋白的表达。结论沉默MTA1基因抑制胶质母细胞瘤细胞系U-87-MG的侵袭与迁移能力与影响F-actin的集聚与EMT相关蛋白N-cadherin与E-cadherin表达相关。     

三叶因子3在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞上皮间质转化中的作用及机制

目的 探讨三叶因子3（TFF3）基因沉默对人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞迁移、侵袭、克隆形成能力以及对上皮间质转化（EMT）的影响及机制。 方法 免疫组织化学技术检测甲状腺乳头状癌组织芯片中Snail与TFF3的表达。划痕实验、侵袭实验和克隆形成实验分别检测TFF3基因对TPC-1细胞迁移、侵袭和克隆能力的影响;实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、免疫印迹法和免疫细胞化学染色检测上皮间质转化标志物及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白的变化。 结果 31例甲状腺乳头状癌组织中,Snail蛋白于癌细胞胞质表达,31例癌旁组织阴性表达;Snail蛋白与TFF3表达呈正相关(r=0.8450,P<0.05)。TFF3基因沉默后,人TPC-1细胞的细胞迁移、侵袭和克隆形成能力均明显降低(P<0.01);TPC-1细胞上皮间质转化标志物及MAPK通路相关蛋白细胞外调节蛋白激酶（ERK）1/2和p-ERK1/2也显著降低(P<0.05)。 结论 沉默TFF3可能通过MAPK通路相关蛋白ERK1/2抑制上皮间质转化,降低TPC-1细胞迁移、侵袭和增殖能力。     

EPAS1 siRNA抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨沉默内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)对抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 将HiMet-ccRCC细胞分为对照(Con)组、阴性对照(NC)组、沉默EPAS1表达组(EPAS1 siRNA组)。用RT-qPCR检测HiMet-ccRCC细胞EPAS1 mRNA水平;MTT法检测HiMet-ccRCC细胞增殖;Transwell小室法检测HiMet-ccRCC细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、PCNA表达。结果 与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞中EPAS1表达水平显著降低(P<0.05),HiMet-ccRCC细胞增殖抑制率明显升高、侵袭及迁移细胞数明显减少(P<0.05);与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、PCNA蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默EPAS1可抑制HiMe...     

siRNA介导S100A4基因沉默对胃癌细胞中MMP-2和E-cadherin表达及细胞侵袭能力的影响

目的观察用RNA干扰技术沉默人胃癌细胞株MGC-803中钙结合蛋白S100A4的基因,对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)表达变化,探讨S100A4对胃癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法采用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的si RNA转染至人胃癌MGC-803细胞,利用荧光实时定量RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测S100A4基因和蛋白的表达,筛选S100A4基因沉默组和阴性对照组细胞。采用Western Blot方法检测MMP-2和E-cadherin蛋白表达。利用Transwell Matrigel方法检测各实验组中MGC-803细胞体外侵袭能力。结果成功建立S100A4基因沉默的人胃癌MGC-803细胞。S100A4基因沉默的胃癌MGC-803细胞中MMP-2蛋白表达降低,而E-cadherin蛋白表达明显上调;细胞体外侵袭能力亦显著下降。结论 S100A4能通过调控MMP-2和E-cadherin的表达影响胃癌细胞MGC-803的侵袭能力。     

敲低干细胞关键转录因子FoxD3对胃癌细胞SGC-7901的影响

目的 探究shRNA Fox D3对胃癌细胞SGC-7901生长、运动及上皮间质转化的影响。方法 将shRNA Fox D3载体和空质粒载体转染至SGC-7901细胞,根据处理方式不同,将细胞分为Control组、shRNA-NC组和Fox D3-shRNA2组。克隆形成实验检测细胞克隆形成率; Transwell检测侵袭细胞数;划痕实验检测细胞划痕愈合率;显微镜观察上皮间质转化形态学变化; Western blot检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平。结果 与Control组比较,Fox D3-shRNA2组克隆形成率降低(P 0. 05),Ki67、PCNA蛋白表达降低(P 0. 05),侵袭细胞数减少(P 0. 05),划痕愈合率降低(P 0. 05),上皮间质转化受到抑制,E-cadherin蛋白表达升高(P 0. 05),N-cadherin和Vimentin蛋白表达降低(P 0. 05)。结论 shRNA Fox D3可抑制SGC-7901细胞的增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化。     

敲低长链非编码RNA MIAT对视网膜母细胞瘤肿瘤成球、侵袭及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探究敲低长链非编码RNA MIAT(lncRNA MIAT)对视网膜母细胞瘤(RB) SO-RB50细胞系成球、侵袭能力及裸鼠移植瘤生长的影响。方法选择襄阳市中心医院2015年3月至2017年3月38例RB患者,并收集RB组织38例。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,分析lncRNA MIAT高表达和低表达患者生存率。将SO-RB50细胞随机分为对照组、shRNA-NC组、sh-MIAT组,构建sh-MIAT及shRNA-NC载体并转染对应细胞组。RT-PCR检测MIAT、E-cadherin和N-cadherin的表达。通过细胞成球、克隆形成试验、Transwell分别检测细胞成球、增殖、侵袭能力。Western blot检测VEGF、MMP-16、E-cadherin、N-cadherin的表达情况。构建裸鼠移植瘤模型,比较肿瘤生长情况,并通过免疫组化检测VEGF的表达情况。结果 lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者。与对照组相比,shRNA-NC组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量、VEGF、MMP-16、N-cadherin和E-cadherin表达量均无明显差异。与对照组相比,sh-MIAT组细胞成球直径、细胞成球数、克隆形成数、侵袭数量和VEGF、MMP-16、N-cadherin表达量均较小/少/低,而E-cadherin表达量较高,裸鼠模型的肿瘤质量较低,且VEGF阳性细胞数较少,差异均具有统计学意义(P 0. 05)。结论 lncRNA MIAT低表达患者生存率高于高表达患者,且敲低lncRNA MIAT可抑制SO-RB50细胞成球、增殖、侵袭和裸鼠移植瘤的生长。     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

lncRNA LSINCT5 通过 miR-451 调控肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂敏感性的 实验研究

目的：探讨lncRNA LSINCT5调控miR-451对肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以肺癌A549细胞为研究对象,使用LSINCT5特异性siRNA、DDP(4μg/ml)、si-LSINCT+DDP+miR-451 inhibitor处理细胞,不经特殊处理的细胞为空白组,qRT-PCR检测LSINCT5和miR-451 mRNA表达;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达;双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定LSINCT5和miR-451的靶向关系。结果：在转染LSINCT5 siRNA的A549细胞中,LSINCT基因表达明显降低（P<0.05）。LSINCT5 siRNA及DDP均可明显抑制A549细胞侵袭、迁移能力,上调E-cadherin表达,下调Vimentin和N-cadherin表达（P<0.05）,LSINCT5 siRNA及DDP联合使用对细胞侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达影响明显强于单...     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.