miR-147a靶向ATF2抑制非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移北大核心CSCD

目的:探究miR-147a靶向激活转录因子2(ATF2)对非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法:RT-qPCR检测非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a和ATF2 mRNA表达,Western blot检测ATF2蛋白表达。采用miR-NC、pc-NC、miR-147a mimic、pc-ATF2质粒分别或联合转染H1703细胞,双荧光素酶报告验证其靶向关系,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、间质钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和ATF2蛋白表达。裸鼠分为4组:control组、miR-147a mimic组、pc-ATF2组、miR-147a+pc-ATF2组。裸鼠左腋下皮下注射转染后的非小细胞肺癌H1703细胞,第30天颈椎脱位法处死,完整取出皮下肿瘤,免疫组化检测N-cadherin阳性表达,Western blot检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果:与正常肺组织和细胞相比,非小细胞肺癌组织和细胞miR-147a表达显著下调,ATF2 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01)。miR-147a靶向下调ATF2表达。与对照组相比,miR-147a mimic组H1703细胞ATF2表达显著下调,侵袭数显著减少,划痕闭合率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703细胞的作用。与对照组相比,miR-147a mimic组移植瘤中N-cadherin阳性细胞百分比降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调(P<0.01),共转染pc-ATF2逆转miR-147a mimic对H1703移植瘤的作用。结论:miR-147a靶向ATF2可抑制非小细胞肺癌迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

miR-26b对宫颈癌细胞系迁移及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-26b对宫颈癌细胞迁移及上皮间质转化的影响及其作用机制。方法通过脂质体介导将miR-26b mimic转染C33A宫颈癌细胞系,细胞分为阴性对照组、无义对照组和miR-26b mimic组。用实时荧光定量PCR检测miR-26b及其靶基因的mRNA表达,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,用双荧光素酶基因报告载体检测miR-26b靶基因的表达。结果与正常宫颈上皮细胞相比,miR-26b mRNA在He La、Si Ha、Caski和C33A 4种宫颈癌细胞系中均低表达,其中以C33A细胞系最为明显;转染miR-26b mimic后,C33A细胞中miR-26b mRNA表达水平明显上升;过表达miR-26b可明显抑制C33A细胞的迁移能力,上调E-cadherin蛋白的表达,下调N-cadherin蛋白的表达,抑制上皮间质转化过程的发生;通过Target Scan、Pic Tar和miRDB软件预测显示,CXCL14、Smad4、TRAF5和Eph A2可能为miR-26b潜在的靶基因。双荧光素酶实验证实miR-26b可直接调控Smad4的表达。结论 miR-26b可能通过作用于Smad4的表达调节宫颈癌细胞的迁移和上皮间质转化过程的发生。     

lncRNA LSINCT5 通过 miR-451 调控肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂敏感性的 实验研究

目的：探讨lncRNA LSINCT5调控miR-451对肺癌细胞侵袭、迁移及顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：以肺癌A549细胞为研究对象,使用LSINCT5特异性siRNA、DDP(4μg/ml)、si-LSINCT+DDP+miR-451 inhibitor处理细胞,不经特殊处理的细胞为空白组,qRT-PCR检测LSINCT5和miR-451 mRNA表达;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达;双荧光素酶报告基因检测试剂盒测定LSINCT5和miR-451的靶向关系。结果：在转染LSINCT5 siRNA的A549细胞中,LSINCT基因表达明显降低（P<0.05）。LSINCT5 siRNA及DDP均可明显抑制A549细胞侵袭、迁移能力,上调E-cadherin表达,下调Vimentin和N-cadherin表达（P<0.05）,LSINCT5 siRNA及DDP联合使用对细胞侵袭、迁移及E-cadherin、Vimentin和N-cadherin表达影响明显强于单...     

miR-149-3p 靶向FOXM1 抑制人胃癌细胞SGC-7901 生长和迁移

目的:探究miR-149-3p靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901生长和迁移的机制。方法:体外培养人胃癌细胞SGC-7901,并分为:Ctrl组、miR-NC组、miR-149-3p mimic组、pLV-FOXM1组和pLV-FOXM1+miR-149-3p mimic组;使用RT-PCR分别检测正常组织、原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织中miR-149-3p和FOXM1 mRNA的表达水平并分析miR-149-3p与FOXM1的线性关系;使用miR-NC、miR-149-3p mimic转染细胞后检测miR-149-3p和FOXM1 mRNA表达水平;双荧光素酶检测miR-149-3p与FOXM1的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖情况,体外侵袭实验检测细胞侵袭情况,划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白质印迹检测N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9、FOXM1、PCNA、p21的表达水平。结果:相比原位肿瘤组织和转移后肿瘤组织,正常组织中FOXM1 mRNA表达较低、miR-149-3p表达较高。荧光素酶报告实验表明miR-149-3p序列上有FOXM1的结合位点。相比空白对照组(Ctrl),miR-149-3p mimic组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。相比Ctrl组,pLV-FOXM1组细胞生长受到促进,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著升高(P0.05)。相比pLV-FOXM1组,miR-149-3p+pLV-FOXM1组细胞增长受到显著抑制,FOXM1、P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05);单位面积细胞侵袭数目、细胞迁移能力、PCNA、N-cadherin、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论:miR-149-3p可以靶向FOXM1抑制人胃癌细胞SGC-7901的生长侵袭和迁移,其机制与调控细胞生长侵袭和迁移的蛋白有关。     

miR-377靶向ZEB2调节结肠癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-377对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620和HCT116和人小肠上皮细胞HIEC miR-377表达。将miR-377 mimic、阴性对照物、pmirGLO-wt-ZEB2、pmirGLO-mut-ZEB2转染至HCT116细胞,双荧光素酶报告实验检测miR-377与ZEB2的靶向作用,伤口愈合实验、Transwell、Western blot检测miR-377和ZEB2对细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:与HIEC细胞相比,结肠癌细胞系miR-377表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-377 mimic和pmirGLO-WT-ZEB2共转染的HCT116细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),但ZEB2结合位点突变逆转了miR-377 mimic对荧光素酶活性的抑制作用(P>0.05);miR-377 mimic显著降低了HCT116细胞ZEB2蛋白表达(P<0.05)。与NC+Vector组相比,miR-377+Vector组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P>0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-377+Vector组相比,miR-377+ZEB2组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著高于miR-377+Vector组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-377+ZEB2组与NC+Vector组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-377通过靶向作用于ZEB2调节结肠癌细胞上皮-间质转化相关蛋白表达,进而影响结肠癌细胞迁移、侵袭,为结肠癌临床治疗提供了新的策略。     

miR-551b-3p在胃癌组织中低表达并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-551b-3p在胃癌中的表达变化情况,及其对胃癌细胞功能的影响。方法用real-time PCR的方法检测60例胃癌组织及其对应的癌旁组织中miR-551b-3p的表达量,使用miR-551b-3p模拟物(miR-551b-3p mimic)转染胃癌细胞系HGC-27,CCK-8法检测细胞增殖;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell法检测细胞侵袭。结果 1)miR-551b-3p在胃癌癌症组织中的表达明显低于癌旁组织(P0.05)。2)过表达miR-551b-3p mimic可以明显减弱胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭能力。结论 miR-551b-3p在胃癌组织中低表达,并且抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭,可能与胃癌发生发展密切相关。     

过表达miR-299-3p抑制人肾癌细胞系增殖和迁移

目的探讨miR-299-3p在肾癌细胞系增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法 RT-qPCR检测肾癌细胞系(786-O、769-P、ACHN和A498)和人正常肾小管上皮细胞系(HK-2)中miR-299-3p的表达;MTT法、细胞划痕实验、Transwell小室法检测miR-299-3p mimic对肾癌786-O细胞系增殖、迁移和侵袭的影响;在线生物信息学数据库对miR-299-3p的靶基因进行了预测。Western blot检测E-cadherin,N-cadherin、vimentin和MAP3K12的蛋白表达。结果 miR-299-3p在肾癌细胞系中均低表达(P0.05),且在786-O细胞中表达最低。过表达miR-299-3p可显著抑制肾癌细胞系786-O增殖、迁移、侵袭、体外成瘤和上皮间质转化(EMT),综合4个数据库的结果,发现预测的miR-299-3p的共同靶基为MAP3K12,荧光素酶报告基因验证了miR-299-3p与MAP3K12的靶向关系。miR-299-3p+MAP3K12共转染786-O细胞后,能够有效降低miR-299-3p mimic诱导的细胞迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-299-3p在肾癌细胞中的作用机制可能是通过miR-299-3p靶向下调MAP3K12表达,调控EMT途径影响肾癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

卵巢癌中SMS1对细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默神经鞘磷脂合成酶1(sphingomyelin synthase 1, SMS1)对卵巢癌细胞HO8910增殖、侵袭和迁移的影响。方法体外培养卵巢癌HO8910细胞株,设计siRNA-SMS1序列,转染细胞,分为阴性对照组(negative control, NC)、空白对照组(blank control, BC)、siRNA组;利用qRT-PCR技术检测各组细胞SMS1 mRNA相对表达量。MTT法检测HO8910细胞增殖情况、划痕实验检测转染后HO8910细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞侵袭能力。薄层层析法检测HO8910细胞中SMS1活性、Cer水平。酸性神经鞘磷脂(sphingomyelin, SM)酶试剂盒、卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)试剂盒分别检测HO8910细胞中SM、PC水平。结果卵巢癌细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量比正常卵巢细胞显著升高(P0.05);转染48 h后,siRNA组细胞中SMS1 mRMA及蛋白相对表达量、SMS1酶活性比NC组与BC组均显著降低(P0.05);siRNA-SMS1组A570比BC组与NC组显著降低(P0.05);迁移指数、侵袭细胞数较BC组与NC组显著降低(P0.05);与NC、BC组相比,siRNA组HO8910细胞中SM水平显著降低(P0.05),Cer水平显著升高(P0.05)。结论 SMS1基因沉默可抑制卵巢癌HO8910细胞增殖、迁移及侵袭能力,可能与下调细胞中SM水平、上调Cer水平有关。     

SIRT2在浆液性卵巢癌细胞系中的表达及其对增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究SIRT2在卵巢表层上皮(ovarian surface epithelium,OSE)及浆液性卵巢癌(serous ovarian carcinoma,SOC)细胞系中的表达情况并从细胞增殖、迁移和侵袭这3个方面探讨SIRT2对SOC恶性生物学行为的影响。方法:运用Western blot技术检测OSE和SOC细胞系中SIRT2蛋白的表达水平;设计靶向SIRT2的siRNA,构建SIRT2过表达载体,分别瞬时转染OSE细胞系HOSEpi C和SOC细胞系HO8910,平板克隆形成实验和CCK-8实验研究SIRT2对细胞生长的影响;细胞划痕实验考察SIRT2在SOC细胞迁移中的作用;Transwell实验研究SIRT2对SOC细胞侵袭能力的影响。结果:5株SOC细胞系中SIRT2的表达水平显著低于OSE细胞系。在HOSEpi C细胞中沉默SIRT2,细胞克隆形成数增多,细胞活力增强。相反,在HO8910细胞中过表达SIRT2,细胞克隆形成数减少,细胞活力降低。沉默SIRT2促进HOSEpi C细胞的迁移,而过表达SIRT2则抑制HO8910细胞的迁移。沉默SIRT2的HOSEpi C细胞侵袭能力明显增加,而过表达SIRT2的HO8910细胞侵袭能力则显著降低。结论:SIRT2在SOC细胞中表达显著下调。SIRT2在OSE细胞中是肿瘤抑制蛋白,抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨调节Ubc9基因对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响,探讨其作用机制。方法应用体外Transwell细胞侵袭实验检测调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞侵袭能力影响,以稳定转染Ubc9的HO8910-Ubc9细胞为Ubc9组,对照组为未转染的HO8910细胞(normal)及转染空质粒的HO8910细胞(vector);另以转染Ubc9特异性siRNA的HO8910-Ubc9细胞为siRNA1、siRNA2组,对照组为未被Ubc9特异性siRNA转染HO8910-Ubc9细胞(normal)及转染无关序列RNA的HO8910-Ubc9细胞(negative control)。应用划痕实验观察调节Ubc9基因对卵巢癌HO8910细胞迁移能力的影响。结果 HO8910-Ubc9组穿过Matrigel胶的细胞数量明显高于空白对照组和空质粒组(P0.05),Ubc9-siRNAs转染48h后,HO8910-Ubc9细胞穿过人工基底膜的细胞数目明显低于对照组(P0.05)。HO8910-Ubc9细胞在6、12、24h愈合率明显高于HO8910组(P0.05),转染Ubc9-siRNA的HO8910-Ubc9细胞于划痕后在24h,细胞愈合率明显低于对照组(P0.05)。结论 Ubc9促进HO8910细胞侵袭、迁移,可能成为临床治疗的新靶点。     

circUBE2D2 靶向 miR-376a-3p 调控结直肠癌 SW620 细胞的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨 circUBE2D2 对结直肠癌 SW620 细胞增殖、 迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。 方法 收集 2020 年 1 月至 2020 年 5 月大连大学附属新华医院肛肠外科收治的 45 例结直肠癌患者的癌组织及 其相应癌旁组织标本, 采用 qRT-PCR 法检测 circUBE2D2、 miR-376a-3p 的表达量; 以人结直肠癌细胞 SW620 为研究对象, 随机分为 si-NC 组、 si-circUBE2D2 组、 miR-NC 组、 miR-376a-3p 组、 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组和 si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组; CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭; 双荧光素酶报告实验检测 miR-376a-3p 过表达对野 生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性; Western 印迹法检测上皮型钙黏蛋白 (E-cadherin)、 神经型钙 黏蛋白 (N-cadherin) 蛋白表达量。 结果 与癌旁组织比较, 结直肠癌组织中 circUBE2D2 的表达量升高 (P< 0. 05), miR-376a-3p 的表达量降低 (P< 0. 05); 与 si-NC 组比较, si-circUBE2D2 组细胞活力、 划痕愈 合率和 N-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋 白水平升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平 降低 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05); miR-376a-3p 过表达可抑制野生型载体 WT-circUBE2D2 的荧光素酶活性 (P< 0. 05); 与 si-circUBE2D2 + anti-miR-NC 组比较, si-circUBE2D2 + anti-miR-376a-3p 组细胞活力、 划痕愈合率和 N-cadherin 蛋白水平升高 (P< 0. 05), 细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多 (P< 0. 05), E-cadherin 蛋白水平降低 (P< 0. 05)。 结论 干扰 circUBE2D2 表达可通过靶向调控 miR-376a-3p 表达而降低结直肠癌细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭 能力。     

β-连环蛋白与卵巢癌转移的相关性及调节机制

目的 探讨β-连环蛋白(β-catenin)与卵巢癌转移的相关性及其可能的调节机制. 方法 采用免疫荧光法、免疫印迹法及反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测人卵巢浆液性囊腺癌高、低转移细胞系(HO-8910PM及HO-8910)中β-catenin基因的表达差异.为进一步探讨β-catenin调节卵巢癌转移的可能机制,将低转移卵巢癌HO-8910细胞经肝细胞生长因子(HGF)处理,应用上述方法检测β-catenin基因表达的改变;同时经Transwell小室法和划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变. 结果 β-catenin在HO-8910细胞中为高表达,在HO-8910PM细胞中为低表达,差异具有显著性(P<0.05).HGF可明显降低HO-8910细胞中β-catenin基因的表达(P<0.05)并促进细胞侵袭(P<0.05)和迁移. 结论 卵巢癌细胞的侵袭、迁移等恶性行为可能与β-catenin基因表达下降有关.经由HGF/c-Met的信号很可能是β-catenin介导的黏附功能的重要调节者.     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

白蛋白结合型紫杉醇调控SLC25A25-AS1对肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨白蛋白结合型紫杉醇是否调控SLC25A25-AS1影响肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭.方法 将A549细胞分为对照组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组、高剂量药物+si-NC组、高剂量药物+si-SLC25A25-AS1组.细胞计数试剂盒(CCK-8)法、集落形成实验检测细胞增殖;划痕实验和Tran...     

Participation of tumor suppressors long non-coding RNA MEG3, microRNA-377 and PTEN in glioma cell invasion and migration

PurposeGlioma is a common and fatal intracranial tumor. Both miR-377 and lncRNA MEG3 are tumor suppressors. This study was performed to investigate the association between miR-377 and lncRNA MEG3 in glioma cells.MethodsU118 and U251 cell lines were incubated in Dulbecco's modified Eagle's medium supplemented with miR-377 mimics, MEG3 siRNA (si-MEG3) and/or MEG3 overexpression plasmids (pc-MEG3) for 48 h. Cell migration, invasion, apoptosis, cell cycle distribution and the expression of E26 tansformation-specific-1 (ETS-1), phosphatase and tensin homologue (PTEN), E-cadherin, N-cadherin and β-catenin were detected.ResultsMiR-377 mimics increased MEG3 expression and decreased the number of migrated and invaded U118 and U251 cells, without influence on apoptosis in both cell lines. Si-MEG3 transfection increased U118 cell migration and invasion and rescued miR-377 mimics-induced inhibitory in cell migration and invasion. Si-MEG3 decreased U118 cell apoptosis and induced G0/G1 cell cycle arrest, and pc-MEG3 increased U251 cell apoptosis via arresting cell cycle at G2/M phage. MiR-377 mimics and si-MEG3 increased the relative expression level of N-cadherin mRNA, and both si-MEG3 and pc-MEG3 increased E-cadherin in glioma cells. MiR-377 mimics increased ETS-1 mRNA in U118 cells, but decreased it in U251 cells. PTEN was increased by miR-377 mimics and si-MEG3 and decreased by pc-MEG3 in glioma cells.ConclusionsThese results suggested the link interaction of MEG3 with miR-377 and PTEN, but not functioning as the competing endogenous RNA. MiR-377 mimics and MEG3 were tumor suppressors in glioma cells through regulating PTEN expression.     

Inhibition of ovarian cancer proliferation and invasion by pachymic acid

To determine the effect of pachymic acid (PA) on proliferation, cell cycle, and invasion in human ovarian carcinoma cell lines HO-8910 and explore some possible mechanisms, HO-8910 cells was treated with different concentrations of PA (0.5, 1, 2 μM). CCK-8 assay, propidium iodide staining, was applied to measuring the growth inhibiting rates of HO-8910 cells. Cell cycle was measured by flow cytometry. In addition, the activity of PA against HO-8910 cells invasion was evaluated in transwell assay. Western blot detected the proteins expression of E-cadherin, β-catenin and COX-2 of different groups treated with PA in different concentrations (0.5, 1, 2 μM) for 48 h. Our results showed that PA could effectively inhibit the in vitro growth of HO-8910 cells in dose-dependent manners in 72 h, suppressed migration and invasion of HO-8910 cells in concentration-dependent manners at 24 h, caused the increased accumulation of G1 phase cells, and caused down-regulation of β-catenin and COX-2 and up-regulation of E-cadherin expression level. Taken together, it could conclude that PA might inhibit proliferation and invasion of ovarian carcinoma cell through decreasing β-catenin and COX-2 expression and increasing E-cadherin exprssion.     

川楝素对人卵巢癌细胞侵袭和迁移的影响

目的:探讨川楝素(toosendanin,TSN)对人卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的影响及相关机制。方法:用不同浓度川楝素处理人卵巢癌CAVO-3和SKVO-3细胞,采用CCK-8法检测TSN处理12、24、48、72和96 h后的细胞存活率;通过细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测TSN对人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测核因子κB(NF-κB)p65、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail蛋白的表达情况。结果:TSN抑制CAVO-3和SKVO-3细胞活力(P0.05)。与对照组相比,TSN组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力明显降低,且NF-κB p65和E-cadherin表达升高,N-cadherin、vimentin和Snail表达下降(P0.05);而加入NF-κB抑制剂BAY11-7082至TSN处理的细胞后明显逆转了以上效应,与TSN组相比,TSN+BAY11-7082组CAVO-3细胞的迁移和侵袭能力显著升高,且E-cadherin表达下降,N-cadherin、vimentin和Snail表达升高(P0.05)。结论:川楝素能抑制人卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制由NF-κB/Snail信号通路所介导的上皮-间充质转化过程有关。     

微小RNA-138-5p抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的机制研究

目的:探讨微小RNA-138-5p(miR-138-5p)抑制肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的相关机制。方法:以肺癌细胞A549和H460作为研究对象,分别转染miR-NC(对照组)或miR-138-5p(实验组);生物信息学技术预测miR-138-5p的靶基因;RT-qPCR检测转染后细胞miR-138-5p、叉头框蛋白C1(FOXC1)mRNA和波形蛋白(vimentin)mRNA的相对表达量;Western blot法检测FOXC1、vimentin、E-cadherin、N-cadherin和β-catenin蛋白表达变化;MTS法和集落形成实验分别检测细胞的增殖能力;划痕愈合实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力。结果:miR-138-5p过表达显著降低FOXC1和vimentin的mRNA及蛋白的表达(P0.05),E-cadherin和β-catenin蛋白表达上调,N-cadherin蛋白表达下调,显著抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P0.05)。结论:miR-138-5p可以通过靶向干扰FOXC1和vimentin的表达抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,可能是肺癌基因治疗的潜在靶点。     

长链非编码RNA PVT1调控miR-551通过Wnt信号通路对卵巢癌迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA PVT1在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌细胞迁移和侵袭过程中的作用及机制。方法:q PCR检测卵巢癌和正常卵巢组织及不同卵巢癌细胞中PVT1的表达情况;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的变化;双萤光素酶报告基因检测PVT1与微小RNA(miR)-551的相互作用;Transwell侵袭实验和细胞划痕实验分别检测沉默PVT1后miR-551-inhibitor对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响;Western blot法检测沉默PVT1后Wnt信号通路相关蛋白的表达情况。裸鼠皮下成瘤实验检测沉默PVT1对卵巢癌成瘤重量及体积的影响。结果:与正常卵巢组织相比,卵巢瘤组织中PVT1表达明显增高(P0.05);卵巢癌细胞株ES-2中PVT1表达水平最高(P0.05);沉默PVT1可以抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;PVT1能与miR-551的位点特异性结合;沉默PVT1后,miR-551-inhibitor可以促进卵巢癌细胞侵袭和迁移能力;沉默PVT1后Wnt信号通路蛋白的表达相应下调;与阴性对照组相比,PVT1-siRNA组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显减小(P0.05)。结论:PVT1在卵巢癌发生发展过程中起重要作用,它可以靶向调节miR-551,通过Wnt信号通路调控卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力。     

紫草素对HGF诱导的人肺癌细胞上皮-间充质转化的逆转作用

目的:探讨紫草素(shikonin)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的人非小细胞肺癌PC9细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:用HGF诱导PC9细胞建立EMT模型,采用不同剂量的shikonin干预24 h后,MTT法检测细胞活力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平。结果:Shikonin可显著抑制PC9细胞的活力(P0.01),随着给药剂量的增加,shikonin对细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,IC_(50)为9.364μmol/L。HGF可诱导PC9细胞发生迁移和侵袭;划痕愈合实验和Transwell小室实验显示,shikonin能明显抑制由HGF诱导的肺癌PC9细胞迁移和侵袭(P0.01)。Western blot检测结果显示HGF可诱导PC9细胞的EMT标志物E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin和vimentin蛋白表达上调,使其发生EMT;shikonin则可逆转由HGF诱导的PC9细胞E-cadherin蛋白表达下调及N-cadherin和vimentin蛋白表达上调(P0.01)。结论:Shikonin能逆转由HGF诱导的肺癌PC9细胞EMT,同时抑制其迁移和侵袭。