微小RNA-140-5p通过靶向葡萄糖转运蛋白1抑制食管鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力

目的探讨微小RNA-140-5p(miR-140-5p)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中的表达及其在ESCC细胞增殖和侵袭中的作用。方法即时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR, qPCR)分析ESCC组织和细胞样本中miR-140-5p的表达。将阴性对照和miR-140-5p类似物转染Eca109和KYSE70细胞, 细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)和Transwell分别检测转染后细胞的增殖和侵袭能力的变化, 双荧光素酶报告实验证实miR-140-5p与葡萄糖转运蛋白1(Glut1)的相互作用, Western blot用来检测转染后Glut1蛋白的表达。结果 GEO数据分析结果表明, ESCC组织中miR-140-5p的表达水平显著低于正常组织, 差异均具有统计学意义(P<0.01)。qPCR结果显示, ESCC组织和细胞中miR-140-5p的表达均显著低于正常组织和正常食管上皮细胞Het-1A, 差异均具有统计学意义(P<0.01)。miR-140-5p的表...     

miR-767-5p通过调控TBL1XR1蛋白表达抑制人卵巢癌细胞系侵袭

目的 探索miR-767-5p和转导素β1X连锁受体蛋白1(TBL1XR1)对卵巢癌进展的影响以及作用机制。方法 数据库分析：使用GEO、miRPATH数据库和RStudio对miR-767-5p进行KEGG(京都百科全书)富集分析，并在GEO数据集低表达和高表达microRNA中各选择差异表达倍数TOP5的microRNAs,按照差异倍数由低到高排列；miRDB等数据库预测miR-767-5p可结合的靶基因并取交集，结合Open Target Platform、GEPIA等数据库筛选出目的基因；GEPIA、THPA数据库分析TBL1XR1在人体各器官表达量分析、免疫组化分析以及生存曲线分析。实验验证：双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和TBL1XR1存在结合靶点；Western blot检测卵巢癌细胞系(OC3、SKOV-3、HO-8910)和正常卵巢上皮细胞系(IOSE80)中TBL1XR1的表达；在SKOV-3细胞中转入miR-767-5p过表达质粒与TBL1XR1过表达质粒后，Western blot检测TBL1XR1表达量，Tanswell小室法检测细胞侵袭。结果...     

LncRNA HCG18通过靶向miR-140-3p/PD-L1通路对鼻咽癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长非编码(lncRNA)HCG18通过微小RNA-140-3p(miR-140-3p)/程序性死亡受体配体1(PD-L1)对鼻咽癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法 选择人鼻咽癌CNE2细胞、人正常鼻黏膜上皮细胞HNEpC细胞,将CNE2细胞分为HCG18组、pcDNA3.1组、sh-HCG18组、sh-NC组、miR-140-3p组、miR-NC组、miR-140-3p inhibitor组、Scramble组、HCG18+miR-NC组、HCG18+miR-140-3p组、miR-140-3p inhibitor+sh-NC组及miR-140-3p inhibitor+sh-PD-L1组。用CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭及迁移能力,Western blot检测PD-L1蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1 mRNA水平,生物信息学、双荧光素酶报告实验分析lncRNA HCG18、miR-140-3p及PD-L1的靶向关系。结果 CNE2细胞lncRNA HCG18...     

miR-140-3p通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭

目的:探究微小RNA-140-3p(mi R-140-3p)对程序性细胞死亡配体1(PD-L1)的靶向关系以及对非小细胞肺癌A549细胞的活力、迁移和侵袭的影响。方法:使用RT-qPCR检测HLF-1、A549和H1299不同细胞株中mi R-140-3p的表达水平,选择差异最显著的A549细胞用作后续研究对象; Target Scan软件预测和双萤光素酶报告基因实验验证mi R-140-3p和PD-L1之间的靶向关系; RT-qPCR和Western blot检测转染mi R-140-3p模拟物和抑制剂对PD-L1表达水平的影响; MTT法检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞活力的影响; Transwell实验检测mi R-140-3p和PD-L1对A549细胞迁移和侵袭的影响。结果:mi R-140-3p在人肺癌A549和H1299细胞的表达中显著下调(P 0. 05); mi R-140-3p高表达能够使PD-L1表达下调,对A549细胞的活力、迁移和侵袭具有抑制作用;转染pc DNA3. 0-PD-L1能够阻断mi R-140-3p对A549细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论:mi R-140-3p可通过靶向负调控PD-L1抑制A549细胞的活力、迁移和侵袭。     

健脾化瘀解毒方调控能量代谢抑制肺癌细胞侵袭转移的研究

目的:研究健脾化瘀解毒方的含药血清(JHJRMS)对人肺癌细胞能量代谢的影响.方法:TCGA数据库分析己糖激酶2(HK2)与肺癌患者预后之间的相关性;划痕实验用来检测JHJRMS对肺癌细胞侵袭转移的影响.RT-PCR检测JHJRMS对肺癌细胞中miR-143-3p表达水平的影响.数据库预测miR-143-3p与HK2蛋...     

miR-140-5p靶向调控HAND2影响TGF-β1诱导肾小管上皮细胞生长

目的探讨miR-140-5p调控心脏神经脊衍生物表达转录因子2(HAND2)对转化生长因子β1(TGF-β1诱导肾小管上皮细胞生长的影响。方法实验设置TGF-β1组、对照(NC)组、miR-NC组、miR-140-5p组、anti-miRNC组、anti-miR-140-5p组、miR-NC+TGF-β1组、miR-140-5p+TGF-β1组、si-NC+TGF-β1组、si-HAND2+TGF-β1组、miR-140-5p+pcDNA-NC+TGF-β1组、miR-140-5p+pcDNA-HAND2+TGF-β1组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-140-5p和HAND2 mRNA表达水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测HAND2、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved-caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验验证miR-140-5p和HAND2的靶向关系。结果 TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞中miR-140-5p低表达,HAND2高表达。高表达miR-140-5p或低表达HAND2,TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞中CyclinD1表达水平升高,Cleaved-caspase-3表达水平降低,细胞增殖率升高,细胞凋亡率降低(P0.05)。miR-140-5p靶向调控HAND2,高表达HAND2可以逆转miR-140-5p对TGF-β1处理的肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。高表达miR-140-5p,p-PI3K、p-AKT表达水平升高;而高表达HAND2逆转了miR-140-5p对PI3K/AKT信号通路的促进作用。结论过表达miR-140-5p通过靶向下调HAND2激活PI3K/AKT信号通路促进肾小管上皮细胞增殖,抑制响TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞凋亡。     

miR-99a-5p靶向SLC44A1对肺癌细胞系A549增殖的影响

目的 探讨miR-99a-5p通过靶点SLC44A1对肺腺癌(LUAD)细胞系增殖的抑制作用及可能机制.方法 从基因表达综合数据库(GEO)中检索并筛选GPL18058的microRNA(miRNA)表达阵列,筛选出肺癌与正常组织差异表达的miR-99a-5p后,通过Target Scan Human数据库预测其下游靶点SLC44A1,并利用UALCAN分析SLC44A1在肺癌组织中的表达情况和LUAD预后关系.利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肺腺癌细胞系miR-99a-5p和SLC44A1的表达水平.在A549细胞中转染miR-99a-5p模拟物,通过CCK-8试验、克隆形成实验检测A549的增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测SLC44A1的表达.在A549细胞中过表达SLC44A1,评估其对肺癌调节中的miR-99a-5p的选择性作用.结果 在LUAD组织和细胞系中,miR-99a-5p的表达异常下调,过度异位表达的miR-99a-5p抑制A549细胞的增殖(P＜0.05).在LUAD组织和细胞系的基因和蛋白质水平上,miR-99a-5p负性调控SLC44A1(P＜0.05).SLC44A1过度表达有效地逆转了miR-99a-5p在体外对A549细胞增殖的抑制作用.SLC44A1的低表达有利于患者生存率的提高(P＜0.05).结论 miR-99a-5p抑制LUAD中A549细胞系的增殖,并通过负性调控SLC44A1发挥作用.     

miR-140-5p 调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭机制的研究

目的:研究microRNA-140-5p(miR-140-5p)对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、侵袭的调控作用机制。方法:体外分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs),分为空白对照组、脂质体对照组及miR-140-5p mimic组。脂质体对照组将脂质体2000转染入滑膜细胞; miR-140-5p mimic组使用脂质体2000为载体将miR-140-5p转染入滑膜细胞。分别采用MTT法、Transwell小室法检测三组RASFs增殖、侵袭的情况; q PCR和Western blot检测miR-140-5p对RASFs Toll样受体4(TLR4)表达的影响。结果:MTT及Transwell法检测结果显示:脂质体空白转染对RASFs增殖及侵袭能力均无显著影响(P0. 05)。miR-140-5p转染后呈过表达,RASFs吸光度值为0. 42±0. 03,穿膜细胞数为49. 27±6. 18,均明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。q PCR及Western blot分析结果显示,miR-140-5p mimic组RASFs中TLR4 mRNA、TLR4蛋白表达水平明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P0. 05)。结论:miR-140-5p可有效抑制RASFs增殖及侵袭能力,在RA的发生中起着重要作用,其机制可能与下调TLR4的表达有关。     

基于GEO/TCGA卵巢癌数据库的预后相关miRNA筛选及机制研究

目的 探索卵巢癌组织中差异性miRNAs并通过基础实验探索其分子机制。方法 使用R语言获取GEO数据库中GSE61485(癌旁组织5例，癌组织5例),GSE71477(癌旁组织4例，癌组织4例)和GSE106817(癌旁组织65例，癌组织325例)表达谱数据，癌旁作为对照组，做差异分析，Starbase工具做生存分析。选取卵巢癌SKOV3细胞系，构建miR-150-5p过表达、敲低和阴性对照细胞模型，并用CCK8实验对增殖能力评估，通过LinkedOmics做miR-150-5p的相关性分析以及富集分析。结果 分别对GSE61485,GSE71477和GSE106817表达谱数据差异分析和卵巢癌的预后分析发现，miR-150-5p是唯一共有的肿瘤组织下调基因；并且miR-150-5p过表达SKOV3细胞的增殖能力明显下降(P<0.01),而抑制miR-150-5p表达后，SKOV3细胞增殖能力增强(P<0.01);进一步通过LinkedOmics工具对miR-150-5p相关性基因分析发现负相关基因中PTCH1相关性最强(P<0.01,R=-0.47),正相关基因中I...     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

miR-454-3p靶向BPTF表达调控肺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-454-3p对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法采用RT-PCR技术检测miR-454-3p在肺癌组织以及肺癌细胞株中的表达,以表达量最低的肺癌细胞A549为后续分析对象,将miR-454-3p mimic转入A549细胞,RT-PCR验证miR-454-3p的过表达效率;采用CCK-8、迁移、侵袭等实验,观察转染组与对照组肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭情况;生物信息学预测BPTF是miR-454-3p的靶标,构建BPTF 3′UTR荧光素酶载体,通过双荧光素酶报告基因验证miR-454-3p和BPTF的靶向关系;应用Western blot法检测BPTF的表达及迁移、侵袭相关蛋白的变化。结果RT-PCR实验表明miR-454-3p在肺癌组织和细胞中表达下调,且在A549细胞中表达最低(P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-454-3p的肺癌细胞A549增殖能力明显降低,迁移和侵袭能力均受到抑制(P<0.05)。生物信息学软件分析BPTF为miR-454-3p的潜在靶基因,过表达miR-454-3p后BPTF的表达水平明显受到抑制。同时,迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9表达明显下调,E-cadhern表达明显上调,而E-cadherin的负性调控N-cadherin表达下降。结论miR-454-3p可能通过靶向下调BPTF的表达,抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,为肺癌的靶向治疗提供潜在靶标。     

MiR-138-5p suppresses lung adenocarcinoma cell epithelial-mesenchymal transition,proliferation and metastasis by targeting ZEB2

Background

MiR-138-5p is regarded as a tumour suppressor in many cancers. Transforming growth factor beta (TGF-β) often acts as a tumor promotor at the late stages of human cancers. However, the function of miR-138-5p on lung adenocarcinoma cells induced by TGF-β remains to be further confirmed.

抑制lncRNA LINC01503通过靶向调控miR-335-5p对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01503对肺癌细胞活力、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:将人肺癌H1299细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-LINC01503组(转染si-LINC01503)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-LINC01503组(转染pcDNA-LINC01503)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-335-5p组(转染miR-335-5p mimics)、si-LINC01503+anti-miR-NC组(共转染si-LINC01503和anti-miR-NC)、si-LINC01503+anti-miR-335-5p组(共转染si-LINC01503和anti-miR-335-5p)、miR-NC+WT-LINC01503组(共转染miR-NC和WT-LINC01503)、miR-NC+MUT-LINC01503组(共转染miR-NC和MUT-LINC01503)、miR-335-5p+WT-LINC01503组(共转染miR-335-5p和WT-LINC01503)和miR-335-5p+MUT-LINC...     

lncRNA SNHG17 靶向 miR-525-5p 对人绒毛膜滋养层细胞增殖、 迁移和侵袭的影响

目的 探讨 lncRNA SNHG17 对人绒毛膜滋养层细胞生长及转移的影响及其可能作用机制。 方法 qRT-PCR 检测正常胎盘组织、 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 和 miR-525-5p 表达。 体外培养人绒 毛膜滋养层细胞 HTR-8 / SVneo, 分别转染 si-SNHG17、 anti-miR-525-5p 及其阴性对照; 采用平板克隆形成实 验、 划痕实验与 Transwell 实验分别检测细胞增殖、 迁移及侵袭能力; 双荧光素酶报告实验检测 miR-525-5p 与 SNHG17 的靶向关系。 结果 与正常胎盘组织比较, 子痫前期胎盘组织中 lncRNA SNHG17 表达升高, miR-525-5p 表达降低 (P< 0. 05)。 转染 si-SNHG17 后细胞克隆形成数和侵袭细胞数增多, 划痕愈合率升高 (P< 0. 05)。 lncRNA SNHG17 靶向调控 miR-525-5p; 共转染 si-SNHG17 和 anti-miR-525-5p 后细胞克隆形成数 和侵袭细胞数减少, 划痕愈合率降低 (P< 0. 05)。 结论 沉默 lncRNA SNHG17 可通过促进 miR-525-5p 表 达而促进人绒毛膜滋养层细胞增殖、 迁移及侵袭。     

microRNA-181b suppresses the metastasis of lung cancer cells by targeting sex determining region Y-related high mobility group-box 6 (Sox6)

Background

The aim of the study was to measure the expression of microRNA (miR)-181b in patients with lung cancer, investigate its biological function and elucidate the underlying mechanisms associated with the development of lung cancer.

环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。     

LncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p调控人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡

目的 旨在研究lncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549;将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-339-5p mimics、si-UNC5B-AS1与anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1与anti...