人参皂苷Rg1对白血病干细胞衰老的影响

目的对比健康人群造血干细胞(HSCs)与白血病患者HSCs衰老的生物学特征,并探讨人参皂苷Rg1对促进白血病干细胞衰老的效果,为白血病的防治提供新的思路和方法。方法取正常人骨髓15例(正常组),慢性髓细胞白血病患者骨髓16例(白血病组),正常组与白血病组分别再分为对照组与Rg1组。对照组进行常规培养;Rg1组在培养体系中加10μg/m L的人参皂苷Rg1,其他条件同对照组。2 d后提取各组人骨髓单个核细胞(BMNCs),免疫磁性吸附细胞分选法(MACS)分离纯化出CD34~+/CD38~-细胞群,流式细胞术检测细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活性,流式细胞术检测细胞周期时相,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各组阳性细胞百分比,CCK-8检测各组CD34~+/CD38~-增殖能力。结果分选前每1×106个BMNCs中CD34~+/CD38~-细胞群比例为(1.76±0.34)%;免疫磁性分选后每1×106个细胞中CD34~+/CD38~-细胞群比例为(91.15±2.41)%。白血病Rg1组人骨髓CD34~+/CD38~-细胞的SA-β-gal染色阳性率明显高于白血病对照组,差异具有统计学意义(P0.05);正常对照组与正常Rg1组比较,差异无统计学意义(P0.05),但均高于白血病对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。CCK-8结果显示,白血病对照组CD34~+/CD38~-细胞增殖速度明显增加,高于其余各组,差异具有统计学意义(P0.05)。各组人骨髓CD34~+/CD38~-细胞存活率可达99.1%以上。细胞周期时相结果显示,白血病对照组CD34~+/CD38~-细胞G1期阻滞明显低于其余3组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论慢性髓细胞白血病患者骨髓CD34~+/CD38~-细胞增生活跃,出现明显逆衰老现象,这可能是造成一些慢性髓细胞白血病的原因之一,而人参皂苷Rg1可以通过促进白血病干细胞衰老延缓这一过程。     

急性髓系白血病干细胞NOD/SCID小鼠白血病模型的建立

目的探讨用非肥胖型糖尿病/严重联合免疫缺陷（NOD/SCID）小鼠和经流式细胞仪分选出的KG1a中CD34＋CD38-的干细胞亚群建立白血病干细胞（LSCs）动物模型,为靶向治疗LSCs的药物筛选奠定体内实验基础。方法 18只雌性NOD/SCID小鼠,体质量18～20 g,鼠龄6～8周龄。实验组12只,应用流式细胞仪分选KG1a细胞中具有LSCs特性的CD34＋CD38-亚群,以2×106个/只尾静脉注射经全身X射线照射2Gy的NOD/SCID小鼠;正常对照组6只,只注射磷酸盐缓冲溶液。观察两组小鼠的一般情况和白血病发生情况,应用形态学、组织病理检查、流式细胞术、骨髓染色体检查等检测实验组小鼠的外周血、骨髓、肝脏、脾脏的白血病细胞标志。结果接种2周后实验组小鼠外周血可见白血病细胞,接种30 d实验组小鼠的白血病发病率为100%,无自发缓解;外周血、骨髓、肝、脾中均可发现大量的白血病细胞浸润;实验组小鼠骨髓细胞中CD13抗原阳性率15.47%～23.66%,并可见KG1a细胞的核型特征。结论尾静脉接种流式细胞仪分选后的CD34＋CD38-KG1a细胞于全身亚致死量X射线照射后的NOD/SCID小鼠,能成功建成全身播散的白血病模型,为进一步研究LSCs的靶向治疗药物奠定实验基础。     

吉西他滨对CD34+CD38-髓系白血病干细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 目的：探讨与阿糖胞苷(Ara-C)结构相似的新型脱氧胞苷相似物和核苷还原酶抑制剂--吉西他滨(gemeitabine,GEM)对CD34+CD38-KG1a髓系白血病干细胞(LSCs)增殖抑制和诱导凋亡的影响。方法：流式细胞术检测急性髓系白血病KG1a细胞表面CD34和CD38的表达; 24 h和持续用药软琼脂克隆形成实验观察不同浓度GEM对KG1a细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同浓度GEM对KG1a细胞周期的影响,Annexin V/PI双染法检测不同浓度GEM对KG1a细胞凋亡的影响。结果：急性髓系白血病KG1a细胞中CD34+ CD38-占(98.02±0.72)%。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L的GEM分别作用KG1a细胞24 h、48 h和72 h后, 0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞高于盐水对照组 (P<0.05),而0.05 mg/L 和0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,G0/G1期细胞与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L和0.5 mg/L GEM作用KG1a细胞24 h后,软琼脂培养第14 d和21d后, 0.1 mg/L和0.5 mg/L组形成的克隆数,低于盐水对照组 (P<0.05), 0.05 mg/L GEM组14 d、21 d的克隆数与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L GEM和Ara-C持续作用组,软琼脂培养14 d和21d均未见集落生长,与对照组相比差异显著(P<0.05)。0.05 mg/L、0.1 mg/L GEM作用KG1a细胞后其凋亡率与盐水对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05）,而0.5 mg/L GEM作用24 h后KG1a细胞凋亡率显著高于盐水对照组（P<0.05）。结论：GEM能抑制CD34+CD38-髓系白血病干细胞增殖和克隆形成,并将CD34+CD38-KG1a细胞阻滞在G0/G1期和诱导其凋亡。     

白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性

目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨.方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力.流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达.流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达.结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P＜0.05).IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义.白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P＞0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关.     

白藜芦醇增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用

目的:观察白藜芦醇作用前后TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用的变化。方法:流式细胞仪检测KG-1a细胞表面CD34和CD38的表达,二甲氧唑黄(XTT)细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测白藜芦醇作用前后TRAIL对KG-1a细胞增殖的影响,AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡变化。流式细胞仪检测白藜芦醇作用前后KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体表达变化。结果:人髓系白血病KG-1a细胞CD34+CD38-占(58.67±2.87)%,10~1 000 ng/ml的TRAIL对KG-1a细胞增殖无明显影响,但对白藜芦醇作用后的KG-1a细胞的增殖有明显抑制作用,白藜芦醇能促进TRAIL诱导KG-1a细胞凋亡,并能上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达。结论:白藜芦醇能增强TRAIL对人髓系白血病KG-1a细胞的细胞毒作用,其机制可能与白藜芦醇上调KG-1a细胞表面TRAIL死亡受体DR5的表达有关。     

IL-15对骨髓增生异常综合征患者CD34+细胞增殖、分化的影响

目的 探讨IL-15对体外培养的骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34+细胞增殖和分化的影响.方法 应用单克隆抗体(mAb)免疫磁珠系统分离CD34+细胞, 将实验分为加IL-15的实验组和不加IL-15的对照组, 分别用液体培养基和甲基纤维素半固体培养基培养.计数培养后的细胞数和CFU-E、BFU-E、CFU-GM和CFU-GEMM的集落形成数,并用MTT比色法检测IL-15对MDS 患者CD34+细胞增殖的抑制作用.用流式细胞术检测上述培养的细胞上各种表型分子CD33、 CD13、 CD71、 CD19和CD3表达的变化和细胞周期的改变.结果 11例MDS患者CD34+细胞的平均回收率为(75.4±5.2)%, CD34+细胞的纯度为(90.3±6.3)%.富集倍数为(83.1±12.5)倍.用MTT比色法检测表明, IL-15抑制CD34+细胞增殖的最佳剂量为20 μg/L, 最佳时间为8 d.将对照组及20 μg/L 的IL-15(实验组)分别与MDS患者的CD34+细胞共培养8 d, 进行细胞计数显示, 增殖倍数对照组为4.6倍, 实验组为6.3倍(P＜0.05, n＝5); 各祖细胞的集落形成率, 实验组均明显多于对照组.CD34+细胞上各种表型分子的表达率(除CD3外), 实验组均明显高于对照组.IL-15作用后, CD34+细胞的细胞周期中G1、S、G2期的比率均有明显变化, 与对照组相比较, 差异显著(P＜0.05, n＝7).结论 IL-15对MDS患者的CD34+细胞具有明显地促增殖和诱导分化的效应, 对MDS患者的治疗可能开阔了广大的前景.     

FCM技术联合多重PCR技术在慢性淋巴细胞白血病基因异常检测

目的 探讨FCM技术联合多重PCR技术在慢性淋巴细胞白血病(CLL)基因异常检测的意义.方法 收集2008年1月～2010年1月本院CLL患者84例及38例健康正常人的外周血标本和骨髓标本,应用FCM技术联合多重PCR技术进行检验,并注意记录检验结果.结果 CD+19、CD+10细胞百分率明显低于正常对照组,CD+34细胞百分率明显高于正常时照组(P<0.05).而性别、年龄阶段不影响CLL患者外周血细胞亚群的表达水平不同性别、不同年龄组之间的比较,性别、年龄阶段不影响CLL患者外周血T细胞亚群表达水平.在检测的84例CLL标本中45例发现异常甲基化,而38例健康正常对照组无1例检测到异常甲基化.结论 FCM技术联合多重PCR技术为肿瘤的诊断、疗效评价和预后提供了重要的参考指标,可提高慢性淋巴细胞白血痛的诊断水平,特别是基因异常甲基化的检出率,这结果在慢性淋巴细胞白血病中具有一定的检验价值,能准确地为-恪床医生选择治疗方案提供依据,提高治疗效果,避免误诊误治,具有明显的临床使用价值.     

不同来源的人CD34+造血细胞形态学与细胞化学研究

目的探讨不同来源的人CD34+造血细胞形态学与细胞化学.方法采用CD34MultisortKit免疫磁珠分离系统,分离纯化出CD34+造血细胞,流式细胞仪检测纯度,涂片进行瑞氏-姬姆萨染色.观察细胞形态学细胞化学染色观察过氧化物酶(POX)、糖原(PAS)、苏丹黑(SB)及萘酚AS-D氯乙酸酯酶(CE).结果CD34+造血细胞的纯度≥98.8%,形态大小略大于正常淋巴细胞,PAS、CE、SB及POX均呈阴性.结论不同来源的人CD34+造血细胞形态学与细胞化学相似.     

急性髓系白血病干细胞研究进展

急性髓系白血病干细胞多数亚型的干细胞具有相似的免疫表型(CD34+、Cd38-、CD90-、CD117-、CD123+),表达核因子NF-KB。急性髓系白血病干细胞对化疗和放疗均不敏感,是急性髓系白血病复发的原因之一。选择急性髓系白血病干细胞高表达的抗原CD123或核因子NF-KB,作为清除急性髓系白血病干细胞或诱导急性髓系白血病干细胞凋亡的标记,是探索彻底治愈急性髓系白血病的最佳途径。     

人胎盘CD133~+细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的 通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC). 方法 采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28 d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析. 结果 培养28 d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT.CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28 d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少. 结论 人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC.     

miR-1231对结肠癌干细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

BACKGROUND:Previous studies have found that miR-1231 is down-regulated in colon cancer stem cells (CCSCs), but the effect of miR-1231 on CCSCs remains unclear. OBJECTIVE:To explore the effect of miR-1231 on the proliferation, apoptosis and invasion of CCSCs (CD133⁺CD44⁺). METHODS: CD133⁺CD44⁺ cells and CD133^-CD44^- cells were separated from SW1116 cells by immunomagnetic bead separation. The expression level of miR-1231 in CD133⁺CD44⁺ and CD133^-CD44^- cells was detected by qRT-PCR. miR-1231-overexpressing CD133⁺CD44⁺ cells were transfected with miR-1231 mimics or miR-control by lipofection transfection. The effects of miR-1231 on CD133⁺CD44⁺ cell proliferation, apoptosis and invasion were investigated by MTT, flow cytometry and Transwell assays, respectively. In addition, the expression levels of Ki67, Bax, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein in miR-1231-overexpressing CD133+CD44+ cells and control cells were detected by western blot. RESULTS AND CONCLUSION:CD133⁺CD44⁺ and CD133^-CD44^- cells were obtained by the immunomagnetic bead separation. The expression level of miR-1231 in CD133⁺CD44⁺ cells was significantly lower than that in CD133^-CD44^- cells. miR-1231 suppressed CD133⁺CD44⁺ cell proliferation and invasion, but promoted the apoptosis in these cells. Western blot analysis showed that miR-1231-overexpressing CD133⁺CD44⁺ cells had obvious decreases in Ki67, Bcl-2, MMP-2 and MMP-9 protein expression and a significant increase in Bax protein expression compared with control cells. All these results further confirm that miR-1231 inhibits the proliferation and invasion but promotes the apoptosis in CD133⁺CD44⁺ cells. These findings suggest that miR-1231 can be a suppressor of CCSCs, which offers a novel potential therapeutic target for CCSCs and colon cancer.     

骨髓基质细胞联合细胞因子对脐血单个核细胞表面抗原表达的影响

背景：课题组已建立胎儿骨髓基质细胞联合细胞因子的造血细胞体外培养体系,该培养体系能否有效扩增各个发育阶段的造血细胞有待验证。 目的：观察骨髓基质细胞联合细胞因子培养体系对脐血单个核细胞表面抗原CD133、CD34表达的影响。 方法：将从脐血标本中分离出来的单个核细胞接种于无血清培养体系,实验分为3组：①F组：干细胞因子+Flt3配体+促血小板生成素+单个核细胞。②S组：基质细胞+单个核细胞。③SF组：基质细胞+干细胞因子+Flt3配体+促血小板生成素+单个核细胞。在第0,6,10,14天检测有核细胞总数、CD133⁺、CD34⁺、CD133⁺CD34⁺细胞数以及集落形成单位数。 结果与结论：SF组有核细胞总数在各个检测时间点均比其他两组高;除了第14天外,第6、10天两个时间点SF组中CD133⁺、CD34⁺、CD133⁺CD34⁺细胞及集落形成单位数均高于其他组;含骨髓基质细胞的S组和SF组中CD133⁺细胞/有核细胞、CD34⁺细胞/有核细胞、CD133⁺CD34⁺细胞/有核细胞的比例保持在较高的水平。结果说明骨髓基质细胞联合细胞因子能有效的扩增脐血单个核细胞及其中的CD133⁺、CD34⁺、CD133⁺CD34⁺细胞,基质细胞对维持造血干细胞的原始性具有重要的作用。     

K562细胞株侧群细胞中部分白细胞分化抗原的表达

背景：白血病侧群细胞表型的研究对于理解肿瘤细胞的异质性和起源、分子标记和靶向治疗等都有积极意义。 目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群中部分白细胞分化抗原的表达差异。 方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并进一步分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间CD34+、CD34+CD38-、CD34+CD38+、HLA-DR+细胞的表达情况。 结果与结论：经Hoechst33342染色,流式细胞仪分析结果显示在K562中存在侧群细胞,这部分细胞比例少,为(2.7±0.5)%;统计学分析侧群细胞和非侧群细胞亚群中CD34⁺、CD34⁺CD38^-细胞表达率差异有显著性意义,而CD34⁺CD38⁺细胞表达率和HLA-DR+细胞表达率差异均无显著性意义;侧群细胞和非侧群细胞相比在分化抗原表达上有异质性。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

磁珠分选U251细胞系中的CD133+细胞及其生物学特性

背景：脑肿瘤干细胞理论认为,脑肿瘤干细胞是脑肿瘤细胞中“种子”细胞,是脑肿瘤发生、浸润和复发的关键细胞。 目的：观察人多形性胶质母细胞瘤U251细胞系中CD133⁺细胞的增殖、分化及体内致瘤性等生物学特性。 方法：运用磁珠分选技术分选U251细胞系中的CD133⁺和CD133^-细胞亚群;MTT法绘制两个亚群细胞的生长曲线;单克隆形成率实验检测2个亚群细胞的增殖能力;免疫荧光检测CD133⁺细胞亚群的多向分化能力;裸鼠移植实验检测2个亚群细胞在裸鼠体内致瘤性的差异。 结果与结论：U251细胞系中只有约4.5%的CD133⁺细胞;分选后的CD133⁺细胞能增殖形成典型的脑肿瘤干细胞球,生长曲线显示CD133⁺细胞增殖能力明显强于CD133^-细胞;单克隆形成率实验显示CD133⁺细胞能形成脑肿瘤干细胞球的细胞比率达到78.5%~92.4%,而CD133^-细胞仅有0.8%~2.4%;CD133⁺细胞能分化为具有GFAP和NeuN成熟表型的肿瘤细胞;CD133⁺的致瘤率为71.42%,而CD133^-细胞无致瘤性。提示U251细胞系中存在少量具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD133⁺细胞,CD133⁺细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。     

肝癌干细胞分离及其细胞生物学特性

背景：正常干细胞和肿瘤干细胞在基因表达和依赖的细胞信号通路上应该存在不同,如何发现能选择性杀伤肿瘤干细胞的治疗手段是一个仍然需要大量研究的课题。 目的：分离人肝癌细胞系肿瘤干细胞MHCC97,分析其细胞生物学特性。 方法：采用流式细胞技术在人高转移肝癌细胞系MHCC97中筛选肿瘤干细胞,分离正常人肝脏干细胞CD133^-CD34^- MHCC97和人肝癌细胞系肿瘤干细胞CD133⁺CD34⁺ MHCC97,分别检测其表型、生长曲线、细胞周期和多系分化能力。 结果与结论：人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97肿瘤干细胞的表型为CD133⁺CD34⁺ ,人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97具有与CD133^-CD34^- MHCC97相似的细胞曲线和生长周期,可以向上皮和内皮细胞分化,并表达相应特异性的分子标志。提示人肝癌细胞系中CD133⁺CD34⁺MHCC97细胞具有肿瘤干细胞的特性,可以向内皮和上皮细胞分化,同时具有肿瘤干细胞的生物学特性,是肿瘤复发转移的根源,也是临床治疗的靶点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

帕金森病患者外周血中骨髓来源抑制性细胞的检测及临床意义

目的:检测帕金森病患者外周血中2群骨髓来源抑制性细胞及相关临床意义。方法:选择2016年1月~2017年3月于我院收治并确诊为帕金森病的患者80人和健康志愿者20人为研究对象。按照HoehnYahr分期法将80名患者进行分期,其中Ⅰ级22人,Ⅱ级24人,Ⅲ级20人, Ⅳ级14人,Ⅴ级0人。分别收集帕金森病患者和健康志愿者的外周血各5 mL,分离获得单个核细胞,采用流式细胞术检测外周血中CD14~+CD11b~+和CD14~-CD11b~+细胞的水平,磁珠分选2群细胞,通过q PCR检测2群细胞中免疫抑制相关因子精氨酸酶1(ARG1)、白细胞介素10(IL~-10)和环氧合酶2(COX-2)的mRNA水平,Western blot法和ELISA法检测2群细胞表面膜蛋白CD14和CD11b,以及ARG1、IL~-10和COX~-2蛋白表达水平。结果:帕金森病患者外周血中CD14~+CD11b~+细胞比例与正常人相比无明显变化,而CD14~-CD11b~+细胞比例显著增加(P0.05);不同分期的帕金森病患者外周血中CD14~-CD11b~+细胞比例与Hoehn~-Yahr分期呈正相关,且CD14~-CD11b~+和CD14~+CD11b~+细胞共同高表达IL~-10和COX~-2,仅CD14~-CD11b~+细胞中高表达ARG1,与CD14~+CD11b~+细胞和正常人的2群细胞比较具有显著差异(P0.05)。结论:帕金森病患者外周血中CD14~-CD11b~+细胞和ARG1的高水平表达可以作为帕金森病发病和分期的参考依据。免疫抑制在帕金森病的发生和发展中具有重要的意义。     

THE PERIPHERAL BLOOD LEUKOCYTE PHENOTYPE IN PATIENTS WITH BREAST CANCER: EFFECT OF DOXORUBICIN/PACLITAXEL COMBINATION CHEMOTHERAPY

Presence of functional immune system is critical for any attempt aimed at improving survival of breast cancer patients by strategies based on immune system manipulation. We evaluated by flow cytometry the phenotype of peripheral blood leukocyte of 43 breast cancer patients. In 11 patients, the phenotype was evaluated before and during the chemotherapy by combination of doxorubicin and paclitaxel (AT). Compared with controls breast cancer patients had significantly higher relative and absolute numbers of CD3^-HLADR⁺, CD3^-CD69⁺ and CD14⁺CD16^-, and significantly lower percentages of CD3^- and CD8^-CD28⁺ cells. After one cycle of AT, the absolute numbers of CD3⁺, CD3^-CD4^-, CD3⁺CD8⁺ and CD8^-CD28⁺ cells increased significantly. Present data show a presence of T-cell activation in breast cancer patients. Administration of AT may lead to an increase in functional T-cells in peripheral blood, indicating a potential for combining chemotherapy with immunotherapy in the treatment of breast cancer patients.     

EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢而不能促进其增殖

目的:探讨前列腺素E_2受体2激动剂(EP_2A)在体外对人CD34~+细胞的归巢与增殖作用。方法:收集健康供者经粒细胞集落刺激因子动员后的外周血,免疫磁珠法分选出人CD34~+细胞;同时收集健康供者动员前骨髓液,分离单个核细胞,并行骨髓间充质干细胞(BMMSC)培养。人CD34~+细胞和BMMSC经前列腺素E_2(阳性对照)、DMSO(阴性对照)、EP_2A和EP_2A+前列腺素E_2受体2拮抗剂(EP_2AA)处理后,对人CD34~+细胞用CCK-8法检测细胞活力,集落形成实验检测集落形成数目,流式细胞术检测G_2/M期细胞比例,Western blot检测细胞中survivin、β-catenin及CXC趋化因子受体4(CXCR4)的蛋白表达;ELISA法检测BMMSC中基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)的含量。结果:EP_2A组与阴性对照组相比,人CD34~+细胞在细胞活力、集落形成数目、G_2/M期比例及survivin和β-catenin蛋白表达方面均无明显差别。但EP_2A组人CD34~+细胞CXCR4及BMMSC SDF-1α的表达均明显高于阴性对照组。结论:EP_2A体外可促进人CD34~+细胞归巢但不能促进其增殖。     

Differential STAT5 activation and phenotypic marker expression by immune cells following low levels of ethanol consumption in mice

Ethanol has been recognized as an immunosuppressive agent for many years. Effects of high levels of ethanol consumption on immune functions have been extensively studied, but little is known about the effects of low levels (scuh as 5% ethanol) of ethanol consumption. Herein we report that exposure of mice to 5% ethanol for 4-8 weeks decreases IL-2-augmented splenic NK cell activity, decreases the numbers of NK cells in spleen and liver, decreases the number of granulocytes (Gr-1⁺) in bone marrow and spleen, and decreases the percentages of B cells in liver. In contrast, the percentages of CD4⁺CD8⁺ thymocytes, CD4⁺CD8^- splenocytes, CD4⁺CD8^- liver nonparenchymal cells, CD3⁺ splenocytes, and CD3⁺ bone marrow cells were increased. Furthermore, exposure to 5% ethanol increases STAT5 activation in T cells and liver cells while decreases STAT5 activation in NK cells. Taken together, these findings suggest that low levels of ethanol consumption can differentially modulate immune cells in thymus, spleen, bone marrow and liver, which may be due to differential regulation of STAT5 activation by ethanol.     

恶性肿瘤干细胞标记物CD34在鼻咽癌细胞系的表达

BACKGROUND:Previous research have confirmed that CD34 is closely related to oncogenesis, progress, recurrence, metastasis and drug-resistance of various cancers, but its role in nasopharyngeal carcinoma remains unclear. OBJECTIVE:To sort cells positive and negative for CD34 in nasopharyngeal carcinoma cell lines and to detect cell proliferation and migration. METHODS:Expressions of CD34 in nasopharyngeal carcinoma cell lines 5-8F, 6-10B, CNE1 and CNE2 were detected by flow cytometry. And CD34+ and CD34^- cells were sorted based on cell surface markers for purity identification. Afterwards, proliferation and migration of CD34⁺ and CD34^- cells were detected by MTT assay, colony-formation assay and scratch assay. RESULTS AND CONCLUSION:All four nasopharyngeal carcinoma cell lines expressed CD34 in 0.1%-0.2%, and the level of CD34 was closely related to the cell growth density. The purity of CD34⁺ cell was more than 98% in the sorted CD34⁺ cell populations, but no CD34⁺ cells were found in the sorted CD34^- cell populations. At 1, 3, 5 and 7 days the proliferation rate of CD34⁺ cell, populations was significantly higher than that of CD34^- cells (P < 0.05). Consistently, the colony-formation efficiency of CD34⁺ cell was significantly higher than that of CD34^- cells (P < 0.05). Moreover, CD34⁺ cells migrated significantly faster than CD34^- cells by scratch assay (P < 0.05). In conclusion, CD34⁺ cells cultured in vitro display higher proliferation and migration capacities, indicating that CD34⁺ cells have the potential of nasopharyngeal carcinoma stem cells.