miR-132和miR-146a在内侧颞叶癫痫患儿和幼年大鼠海马组织中的表达变化

目的:观察miR-132、miR-146a在内侧颞叶癫痫(mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)患儿及幼年大鼠模型海马组织中的表达变化。方法:收集MTLE患儿海马标本及正常对照人海马标本,Real-time PCR方法检测两组人海马组织中miR-132、miR-146a的表达改变。利用匹罗卡品诱导建立幼年大鼠MTLE模型,收集急性期(造模后2 h)、潜伏期(造模后3周)、慢性期(造模后8周)海马组织标本及相应时间点对照组大鼠海马标本,Real-time PCR方法检测各实验组大鼠海马组织中miR-132、miR-146a的表达改变。结果:miR-132、miR-146a在患儿MTLE海马组织中表达明显升高,分别为2.2±0.1和3.0±0.2,与正常对照组(1.0±0.2)比较差异有统计学意义(P0.05)。miR-132在MTLE大鼠模型急性期、潜伏期及慢性期表达均明显增加,分别为5.2±0.5,2.5±0.2和3.6±0.2,较正常对照组大鼠(1.0±0.1)差异有显著性(P0.05);miR-146a在MTLE大鼠急性期改变不明显,在潜伏期及慢性期表达明显增加(2.8±0.2,1.8±0.2),与对照组大鼠(1.0±0.1)比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:miR-132、miR-146a在MTLE患儿及幼年大鼠模型中存在差异表达,其可能与MTLE中脑组织炎症反应的异常调控有关。     

miR-146a在大鼠缺血再灌注肝损伤中的表达及作用

目的:评价肝组织微小RNA-146a(miR-146a)表达变化与大鼠缺血再灌注(I/R)炎性肝损伤的关系。方法:72只SD大鼠随机分为非手术组(N组)、假手术组(S组)及I/R组,按分组处理后分别检测各组大鼠0、2、12和24 h(每组各时点n=6)血浆丙氨酸转氨酶(ALT)活性及白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,real-time PCR检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、IL-6、TNF-α和miR-146a表达,Western blot分析肝组织中TLR4、IL-6和TNF-α表达。结果:N组大鼠各时点血浆ALT活性及IL-6和TNF-α含量与肝组织中TLR4、IL-6和TNF-α表达量无显著差异。S组大鼠血浆IL-6和TNF-α含量升高(P0.01),但血浆ALT活性与肝组织TLR4、IL-6和TNF-αm RNA及蛋白的表达量却无明显变化。I/R后,大鼠血浆ALT活性及IL-6和TNF-α含量明显升高(P0.01),肝组织TLR4、IL-6和TNF-αm RNA及蛋白的表达量亦显著升高(P0.01),且随着时间延长,各指标仍持续升高;肝组织miR-146a表达量显著下降,其中在缺血12 h时下降最为明显,到24 h表达量再次升高,但始终低于I/R前(P0.01)。N组及S组大鼠各时点肝组织miR-146a表达量显著高于I/R组I/R后相应时点的表达(P0.01)。结论:I/R大鼠肝组织miR-146a表达下降的同时存在TLR4信号通路的激活及炎性肝损伤的发生。     

miR-146a在大鼠神经病理性疼痛模型中的表达及其作用机制

目的 研究miR-146a对神经病理性疼痛的调控机制.方法 将大鼠随机分为:1)na(i)vve组(n=12);2)假手术组(n=12):进行大鼠双侧假手术;3)双侧慢性压迫损伤(bCCI)组(n=12):建立大鼠双侧坐骨神经结扎模型.在建模前1d及后第1、3、7和14天监测机械刺激诱发痛、热刺激诱发痛行为学指标;实时定量PCR法检测背根神经节(L4-L6) miR-146a及TNF-α受体相关因子6(TRAF6)、白介素1受体相关激酶(IRAK1)的mRNA表达水平;Western blot法检测TRAF6及IRAK1蛋白表达.结果 bCCI大鼠双足热刺激诱发痛痛阈、机械刺激诱发痛痛阈较na(i)ve组、假手术组显著降低(P＜0.05).术后第14天bCCI组miR-146a表达水平较na(i)ve组显著下降(P＜0.05).bCCI组TRAF6、IRAK1的mRNA表达水平较na(i)ve组升高(P ＜0.05);TRAF6、IRAKI蛋白表达水平较假手术组和na(i)ve组均显著增加(P＜0.05).结论 神经病理性疼痛大鼠背根神经节miR-146a表达水平下调,miR-146a可能通过过度激活其靶基因TRAF6和IRAK1发挥作用.     

微小RNA-146a在大黄素对脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用

目的：探讨微小RNA-146a(miR-146a)在大黄素对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用。方法将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组、LPS处理组和大黄素+LPS处理组,细胞培养6 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a的表达,Western blot法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达。结果与空白对照组相比较,LPS作用后细胞中miR-146a、TNF-α和IL-6表达量明显升高;与LPS处理组相比较,大黄素+LPS处理组中miR-146a表达量显著上调,而TNF-α和IL-6表达量显著下调。结论大黄素可上调肺泡巨噬细胞中miR-146a的表达,大黄素可抑制巨噬细胞中TNF-α和IL-6的表达,miR-146a可能参与调控大黄素抗肺泡巨噬细胞炎症反应过程。     

甲状腺乳头状癌患者外周血miR-146a、miR-146b表达水平与预后的关系研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)患者血清miR-146a、miR-146b的表达水平及其与临床病理特征、预后的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选取2018年6月至2020年2月本院收治的PTC患者80例为研究对象,50例同期健康人群作为对照组.荧光定量PCR检测外周血中miR-146a、miR-146b的表达水平,分析PTC患者血清miR-146a、miR-146b水平与临床病理、预后的关系.结果 PTC患者血清miR-146a、miR-146b表达水平(5.18±0.04、2.59±0.13)高于正常人群(1.01±0.01、1.12±0.03)(t=23.091、8.431,P<0.001、<0.001).miR-146a、miR-146b表达与TNM分期、分化程度、淋巴结转移和组织学亚型有显著相关性(P<0.05).miR-146a低表达组患者累积生存率高于miR-146a高表达组(P=0.001);miR-146b低表达组患者累积生存率高于miR-146b高表达组(P<0.001).结论 miR-146a、miR-146b在PTC患者血清中高水平表达,与肿瘤的进展、预后不良有关.     

MicroRNA-146a通过靶向TAK1诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的:观察微小RNA-146a(miR-146a)对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:将miR-146a mimic(上调miR-146a表达)和miR-146a inhibitor(下调miR-146a表达)分别转染至人胃癌SGC-7901细胞中,同时设置miRNA无义序列转染为阴性对照组(NC组)。RT-q PCR检测转染后胃癌细胞miR-146a的表达水平;CCK-8法和流式细胞术检测miR-146a对SGC-7901胃癌细胞生长活力和凋亡的影响;RT-q PCR和Western blot法检测miR-146a上调或下调对转化生长因子β激活激酶1(TAK1)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。结果:在SGC-7901细胞中,上调miR-146a表达显著促进细胞凋亡,而下调miR-146a表达则显著抑制细胞凋亡。与NC组相比,miR-146a mimics转染SGC-7901细胞后,TAK1的mRNA和蛋白表达均明显下降,差异均有统计学显著性(P0.05),而miR-146a inhibitors转染组TAK1的mRNA和蛋白质表达则显著增加(P0.05),提示miR-146a负调控TAK1表达。敲低TAK1促进SGC-7901细胞凋亡(P0.01),而TAK1过表达TAKI则抑制SGC-7901细胞凋亡(P0.01)。此外,过表达miR-146a和敲低TAK1均能显著上调NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和下调B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达。结论:本研究结果表明miR-146a通过靶向TAK1抑制NF-κB途径,从而诱导胃癌细胞凋亡。     

miR-146a介导PI3K/Akt信号通路抑制肝星状细胞诱导的肝纤维化

目的探讨微小RNA(miR)-146a在转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导的肝星状细胞活化中的作用,并通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)通路观察其对肝纤维化的影响。方法采用四氯化碳(CC1_4)建立肝纤维化大鼠模型,检测大鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅰ型胶原(Ⅰ-C)水平,Masson染色观察肝组织病变,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织miR-146a表达,蛋白免疫印迹实验(Westem blot)检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PI3K和磷酸化(P)-Akt蛋白表达。HSC (肝星状细胞)-T6细胞分为Normal组、TGF-β1组、TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组。TGF-β1+miR-NC组和TGF-β1+miR-M组分别转染miR-146a mimics阴性对照物和miR-146a mimics,然后除Normal组外,其余各组采用TGF-β1诱导HSC-T6细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞增殖情况,Real-time PCR法检测miR-146a表达,Western blot法检测α-SMA、Ⅲ-C、Ⅰ-C、PI3K和p-Akt蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原沉积明显增加,纤维增生显著;血清HA、LN、PCⅢ和Ⅳ-C水平显著升高;肝组织miR-146a表达明显降低;而PI3K和P-Akt蛋白表达明显增加。TGF-β1组和TGF-β1+miR-NC组HSC-T6细胞各指标差异均无统计学意义。与TGF-β1+miR-NC组比较,TGF-β1+miR-M组miR-14表达明显增加,细胞活性、α-SMA表达、Ⅲ-C和Ⅰ-C均明显降低,PI3K和P-Akt蛋白表达明显下调。结论 miR-146a能够抑制TGF-β1诱导的肝星状细胞活化,其抗肝纤维化机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

他克莫司后处理诱导缺血脊髓对再灌注损伤的耐受*

目的探讨他克莫司后处理能否诱导大鼠缺血脊髓对再灌注损伤的耐受。方法成年雄性SD大鼠30只,随机分为假手术（s0）组、缺血再灌注（IR）组和他克莫司后处理（TP）组,每组10只大鼠,采用经股动脉置管球囊扩张制备脊髓缺血模型,SO组仅行置管,IR组在脊髓缺血20分钟后行再灌注,TP组在脊髓缺血20分钟后再灌注,即刻经左颈总动脉一次性注射他克莫司0．5mg／kg。再灌注后7、14天采用Tarlov评分法检测大鼠后肢运动功能,脊髓组织切片HE染色观察病理学改变。结果SO组大鼠各时间点后肢Tarlov评分均为5分,形态学检测显示脊髓组织结构正常;IR组大鼠Tarlov评分明显降低,脊髓组织呈现出坏死、水肿、空腔形成等缺血再灌注损伤表现;TP组大鼠Tarlov评分结果显著优于IR组,脊髓组织病理变化较IR组为轻。结论建立大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,并初步证实他克莫司后处理能诱导缺血脊髓对再灌注损伤的耐受。     

血清miR-146a变化与强直性脊柱炎的相关性

目的:探究强直性脊柱炎血清miR-146a表达情况,从而发现潜在的强直性脊柱炎的生物标记分子。方法:qRTPCR检测强直性脊柱炎患者和正常人血清miR-146a表达水平。根据脊柱后凸的程度将患者分为A(后凸畸形70%)和B(后凸畸形≥70%)两组。疾病的活性以及患者功能状态分别由强直性脊椎炎疾病活动度指数(BASDAI)和强直性脊椎炎功能指数(BASFI)来表示。采用qRT-PCR检测A和B两组血清miR-146a表达水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清中miR-146a对强直性脊柱炎的诊断价值,同时将miR-146a表达量与临床指标进行相关性分析。结果:miR-146a在强直性脊柱炎血清组表达明显上调(P0.05)。miR-146a的ROC曲线下面积值为0.917;且B组强直性脊柱炎患者血清中miR-146a表达水平显著高于A组(P0.05)。此外,miR-146a表达水平同BASDAI之间存在显著相关性(r=0.5,P0.05)。结论:血清中miR-146a表达检测可作为强直性脊柱炎诊断的辅助性生物标记。miR-146a表达水平也可能与疾病活性和胸腰椎后凸畸形的严重程度成一定的相关性。     

微小RNA-146a 上调cyclin D1 表达诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖

目的:采用基因芯片技术研究小分子RNA-146a(miR-146a)促进血管平滑肌细胞增殖的作用靶点并进行验证。方法:原代培养大鼠血管平滑肌细胞,分成mimics 组、inhibitor 组、control 组、sham 组,分别体外转染miR-146a mimics(50nmol/ L)、miR-146a inhibitor(50 nmol/ L)、miR-146a 错义链(50 nmol/ L)、PBS,Real time PCR 测定转染后miR-146a 水平,CCK8法检测转染后血管平滑肌细胞增殖情况。采用基因芯片检测inhibitor 组和control 组基因表达谱,通过生物信息学技术筛选出差异基因和调控的信号通路。对筛选出来的信号通路用Real time PCR 和Western blot 进行验证。结果:转染48 h后,inhibitor 组血管平滑肌细胞的miR-146a 水平明显低于control 组和sham 组(P<0.01),inhibitor 组血管平滑肌细胞的OD 值明显低于control 组、sham 组(P<0.05)。通过对基因表达谱分析发现,p53 信号通路被miR-146a 上调。用Real time PCR 和Western blot进行检测发现,p53 信号通路中关键分子p53、caspase3、PTEN 的mRNA 和蛋白水平无明显变化(P>0.05),而mimics 组VSMC中cyclin D1 的mRNA 和蛋白水平增加(与sham 相比,P<0.05),inhibitor 组VSMC 中cyclin D1 的mRNA 和蛋白水平下降(与sham相比,P<0.05)。结论: miR-146a 可能通过上调细胞周期蛋白cyclin D1 的表达促进大鼠血管平滑肌细胞的增殖。