水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

日本医蛭抗凝活性研究

目的:研究分析人工养殖条件下日本医蛭活体、干品的抗凝活性,为日本医蛭合理入药提供参考。方法:根据中国药典规定,采用凝血酶滴定法对不同处理的日本医蛭样品进行测试。结果:发现日本医蛭抗凝活性依次为超低温冻干品、鲜品、晒干品。结论:保证日本医蛭最佳抗凝活性的方法为超低温冻干。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究

目的研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性,为日本医蛭的新药开发提供依据。方法SD大鼠腹主脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）和活化的部分凝血活酶时间（APTT）。结果日本医蛭的总提物能使大鼠PT,TT,APTT时间显著延长;石油醚部位能使大鼠PT,APTT延长。结论中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝活性。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

湿法超微粉碎和水煎煮提取法对鼠妇蛋白溶栓抗凝活性的影响及机制初探

目的比较湿法超微粉碎及水煎煮提取法对鼠妇溶栓抗凝活性蛋白的影响,并探究其溶栓抗凝活性的机理。方法比较两种不同提取法所得鼠妇提取物得率及蛋白含量的差异,并采用硫酸铵分级盐析初步纯化鼠妇活性蛋白,纤维蛋白平板法检测鼠妇活性蛋白对纤维蛋白的降解作用及溶栓机理,全自动凝血因子分析仪测定鼠妇活性蛋白对凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)的影响,考察温度对鼠妇活性蛋白的影响。结果两种不同提取方法在提取物得率、蛋白含量存在较大差异;其中,鼠妇的水煎煮提取物未检测出溶栓活性,而湿法超微粉碎提取的蛋白具有很强的溶栓活性,其活性蛋白主要集中在60%~80%硫酸铵饱和度范围内,通过激活纤溶酶原的方式降解纤维蛋白,并且能明显延迟TT、APTT,但对于PT无明显作用;而水煎煮提取物对TT、PT、APTT均无延迟作用。结论湿法超微粉碎提取法能很好地保留鼠妇溶栓抗凝活性蛋白,而水煎煮提取的鼠妇蛋白无溶栓抗凝活性。     

基于形性与生物活性结合的酒炙丹参炮制程度研究

目的:研究丹参及其不同炮制品的颜色与体外抗凝血活性的相关性,并通过断面木部颜色结合体外抗凝血活性判断酒炙丹参的炮制程度。方法:采用色差仪测定丹参及其不同炮制品的色度值,主成分分析法研究其在炮制过程中的变化规律;并测定丹参及其不同炮制品对新西兰白兔血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(FIB)水平的影响;Pearson相关分析法研究不同样品颜色值与体外抗凝血活性的相关性。结果:丹参随着酒炙程度的加深,色度值呈不同变化趋势;主成分分析可区分和判别炮制品;且炮制适中的酒丹参体外抗凝血活性最佳,APTT、PT、FIB与a~*呈显著或极显著相关性(P0.05或P0.01)。结论:该研究可实现对丹参不同炮制品的区分;饮片颜色与体外抗凝血活性的相关性分析可用于评价酒丹参饮片的质量。     

水蛭抗凝活性检测两种滴定方法比较

目的:比较药典标准凝血酶滴定法和白瓷板法对中药水蛭抗凝活性检测结果的影响。方法:分别采用《中国药典》中凝血酶滴定法和云南省《菲牛蛭冻干粉中药饮片炮制规范征求意见稿》中白瓷板法对水蛭抗凝活性进行多次平行滴定实验。结果:抗凝活性成分含量较高的菲牛蛭其药典法滴定结果重复性更稳定,白瓷板滴定法结果的重复性会随着单次进样量减少而趋于稳定;宽体金线蛭的抗凝活性结果在两种方法的对比检测下均较为稳定。结论:对于吸血水蛭品种抗凝活性的测量,建议保留原凝血酶滴定法;对于抗凝活性较低,实验中凝血酶溶液浓度较小的水蛭品种,两种滴定法均适用,也可同时应用互相验证。另在滴定操作中,将反应试管改换成玻璃液相进样瓶,且在滴定动作后将反应容器呈一定角度倾斜放置,有助于对反应终点进行判断,提高实验结果的准确性和稳定性。     

水蛭乙醇提取物体外抗凝血活性研究

目的:研究水蛭不同提取物对人血浆的抗凝活性及作用环节。方法:测定水蛭乙醇提取物不同萃取部位对凝血酶原时间(PT),凝血酶时间(TT),活化的部分凝血活酶时间(APTT),纤维蛋白原凝固时间(FCT)的影响。结果:水蛭的乙酸乙酯部位显著地延长人PT,APTT,TT和FCT;石油醚部位、正丁醇部位、水部位也有较弱抗凝活性。结论:水蛭乙酸乙酯提取部分抗凝作用最强,直接抑制凝血酶催化的纤维蛋白原凝固。     

水蛭不同提取物抗凝活性的体外实验研究

目的:研究水蛭不同提取物的抗凝活性,为水蛭的新药开发提供实验依据.方法:Wistar大鼠腹静脉取血,应用血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT).结果:水蛭的乙酸乙酯部分能使大鼠的PT、TT、APTT显著延长.正己烷部分、水溶液部分能使大鼠的PT显著延长,正丁醇部分能使大鼠的APTT显著延长.结论:水蛭各提取物均有抗凝活性,水蛭中存在不同于水蛭素的新的抗凝血成分.     

不同炮制方法对牡丹皮中丹皮酚、芍药苷、总黄酮及总多糖含量的影响

目的: 探讨不同炮制方法对牡丹皮中主要成分含量的影响,为全面评价牡丹皮的药效与质量提供参考. 方法: 采用RP-HPLC测定丹皮酚和芍药苷含量,流动相分别为甲醇-水(55:45)和乙腈-0.1%磷酸溶液(14:86),检测波长依次为274,230 nm.采用Al(NO₃)₃显色法测定总黄酮含量,检测波长508 nm;硫酸-苯酚比色法测定总多糖含量,检测波长485 nm. 结果: 丹皮酚、芍药苷、总黄酮及总多糖在不同炮制品中含量排序分别为酒炙品>生品>炒黄品>炒焦品>炒炭品,炒黄品>生品>酒炙品>炒焦品>炒炭品,酒炙品>生品>炒黄品>炒焦品>炒炭品,生品>酒炙品>炒黄品>炒焦品>炒炭品. 结论: 多指标成分测定有利于阐释牡丹皮的炮制机制,并有助于牡丹皮炮制品的检测.     

不同炮制方法对僵蚕体外抗氧化活性及其对酪氨酸酶抑制能力的影响

目的： 探讨不同炮制方式对僵蚕提取物体外抗氧化活性及其对酪氨酸酶抑制能力的影响。 方法： 以生品僵蚕为对照,以二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）、羟自由基（·OH）、三价铁离子还原能力及小鼠肝微粒体脂质过氧化为指标,考察不同僵蚕炮制品甲醇提取部位体外抗氧化能力的差异;以L-多巴为底物,考察不同僵蚕炮制品提取物对酪氨酸酶抑制能力的差异;采用HPLC比对和确定甘蒸僵蚕新增成分的归属。 结果： 当提取液生药质量浓度为2~30 g·L^-1时,生品、微波品、甘蒸品和麸炒品对DPPH·的清除率基本一致,清蒸僵蚕的清除率最低;生药质量浓度为20 g·L^-1时,各炮制品对·OH的清除率均达到最大,清除能力顺序为生品 > 甘蒸品 > 微波品 > 麸炒品 > 清蒸品;生药质量浓度为8~80 g·L^-1时,各炮制品的总还原能力大小为甘蒸品 > 微波品 > 生品 > 清蒸品 > 麸炒品;生药质量浓度为80 g·L^-1时,各炮制品对小鼠肝脏微粒体脂质过氧化的抑制率均达到最大,抑制能力顺序为生品 > 甘蒸品 > 微波品 > 麸炒品 > 清蒸品;生药质量浓度为20 g·L^-1时,各炮制品对酪氨酸酶的抑制率达到最大,抑制能力排序为甘蒸品 > 生品 > 清蒸品 > 麸炒品 > 微波品。HPLC图谱比对结果显示,与生品及其他炮制品相比,甘蒸僵蚕甲醇提取部位增加了芹糖甘草苷、甘草苷和甘草酸铵等抗氧化活性成分。 结论： 僵蚕经加热炮制后,体外抗氧化活性与对酪氨酸酶的抑制能力有所降低。甘蒸僵蚕的整体抗氧化活性不低于生品是因为辅料甘草汁中活性物质起到了相应的贡献作用。     

广西特色壮药金边蚂蟥抗痛风活性成分研究

目的：研究金边蚂蟥中具有抗痛风作用的活性成分。方法：采用次黄嘌呤复制小鼠高尿酸血症模型,二甲苯诱导小鼠耳郭肿胀模型,热板法、扭体法筛选金边蚂蟥的活性部位,筛选金边蚂蟥活性成分,观察金边蚂蟥抗抗痛风作用的物质基础。结果：金边蚂蟥水溶性部位是其抗痛风的活性部位,可降低次黄嘌呤诱导的高尿酸血症小鼠的血清尿酸水平,可抑制二甲苯诱导的小鼠耳郭肿胀,可减少醋酸诱导的小鼠扭体反应和增加小鼠热板痛阈;水溶性部位中水蛭素是主要活性成分。金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg和0.4 g/kg及金边 蚂蟥续滤粉2.0 g/kg 可显著降低血清尿酸水平,血清尿酸水平由模型组的232.73±50.93 umol/L 分别下降到140.70±25.97 umol/L、149.07±39.28 umol/L、176.45±44.33 umol/L（P ＜ 0.01）;金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg、0.4 g/kg和0.2 g/kg及金边蚂蟥续滤粉2.0 g/kg可明显抑制二甲苯引起小鼠耳郭肿胀,肿胀度由22.80±2.86 mg分别抑制到20.10±2.18 mg、19.80±2.57 mg、20.10±1.66 mg、20.85±1.60 mg（P ＜ 0.05）;金边蚂蟥活性成分（水蛭素）0.8 g/kg,可明显降低醋酸引起的小鼠扭体次数,次数由22.80±2.86次降到20.10±2.18次（P ＜ 0.05）。结论：金边蚂蟥抗痛风的活性部位是水溶性部分,其中水蛭素是其主要活性成分。     

酒制丹参、大黄对大鼠血小板功能及抗凝血作用的研究

目的：探讨酒制对丹参、大黄活血祛阏作用的影响。方法：采用肾上腺素（Adr)致怒及寒冷造成大鼠血瘀模型,比较丹参、大黄各炮制品对血小板粘附与聚集、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、凝血活酶时间（PTT）等指标的影响。结果：黄酒与白酒炙丹参与生丹参、酒炖大黄均可显著降低血小板粘附与聚集的作用,使PT、TT、PTT等显著延长,酒炙丹参和酒炖大黄均比其生品作用显著增强（P＜0．05或P＜0．01）。结论：酒制丹参、大黄可增强活血祛瘀作用,白酒制较黄酒制好。     

鼠尾藻多酚的抗凝血活性研究

目的探讨鼠尾藻多酚STP-1和STP-2的抗凝血活性。方法体内实验分别以毛细管法、剪尾法测定鼠尾藻多酚对小鼠凝血时间、出血时间的影响;体外实验分别测定鼠尾藻多酚对新西兰兔血浆活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间、血浆凝血酶时间的影响。结果鼠尾藻多酚STP-1在体内、体外均有显著的抗凝血作用,而且中剂量组(1.0mg/mL)抗凝血活性最佳。结论鼠尾藻多酚STP-1在体内、外均有抗凝血活性。     

湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白可行性考察

目的:考察湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白的可行性。方法:利用大鼠体内抗凝血、抗血栓药效试验比较湿法超微粉碎-超滤法、胃蛋白酶酶解法2种提取工艺所得全蝎蛋白的药效差异,以考察湿法超微粉碎-超滤法用于全蝎蛋白提取浓缩的可行性。结果:2种提取方法所得全蝎蛋白均能明显延长大鼠凝血时间、血浆活化部分凝血酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间,并对大鼠动静脉血栓干、湿重均有明显减轻作用,与生理盐水对照组比较,均有统计学差异。结论:经大鼠体内抗凝血、抗血栓药效试验验证,采用湿法超微粉碎-超滤法快速提取浓缩全蝎蛋白是可行的。