1株携带野生型鼠疫噬菌体鼠疫菌的纯化及分析

目的对1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌进行判定与纯化。方法分别采用平板划线分离法和动物传代试验从1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌获得形态完整、无自然噬菌迹象且能被诊断用鼠疫噬菌体所裂解的鼠疫菌。结果从1株携带野生型鼠疫噬菌体的疑似鼠疫菌株分离出形态典型、无噬菌迹象且能被诊断用鼠疫噬菌体所裂解的鼠疫菌。结论在野外监测工作或实验室抗鼠疫噬菌体血清缺乏的情况下,利用平板划线分离法和动物传代试验分离携带野生型鼠疫噬菌体样本可获得典型鼠疫菌,其操作简便、实用,同时为及时、准确地判定鼠疫疫情,防止疫情扩大蔓延做好实验室前期的诊断工作。     

鼠疫耶尔森氏菌研究进展

鼠疫耶尔森能导致致病性极强的鼠疫,曾在世界范围内引起3次大流行,可作为生物武器使用。鼠疫耶尔森菌的全基因组序列已测定完成,3个毒性质粒上含有诸多与致病性有关的基因。对鼠疫耶尔森菌遗传特征的研究已进入后基因组时代。本文就鼠疫耶尔森茵的基因组,遗传特征及检测技术等方面作一综述。     

耶尔森菌选择培养基在鼠疫耶尔森菌分离培养中的应用

目的了解大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、鼠疫耶尔森菌等实验菌株在不同培养基上的生长情况。方法将9种实验菌株分别接种营养琼脂培养基、赫氏培养基、耶尔森菌选择培养基进行分离培养。结果 9种实验菌株在营养琼脂培养基、赫氏培养基上生长良好,而在耶尔森菌选择培养基上只有鼠疫耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌生长,其它实验菌株受到抑制未生长。结论耶尔森菌选择培养基在鼠疫耶尔森菌的分离培养中优于营养琼脂培养基和赫氏培养基。     

非典型鼠疫菌经抗鼠疫噬菌体血清作用后的病原学研究及分析

目的研究非典型鼠疫菌经抗鼠疫噬菌体血清作用后的病原学特征。方法对青海、西藏分离的4株特殊鼠疫菌株进行生化试验、毒力测定、毒力因子鉴定、鼠疫菌差异片段(Different Region,DFR)分型等研究。结果 4株经抗鼠疫噬菌体血清作用后的特殊鼠疫菌在28℃条件下均能被诊断用鼠疫噬菌体完全裂解。青海玉树县、天峻县的2株鼠疫菌均为青藏高原型; 1株分离自西藏乃东县的菌株属于冈底斯山型; 1株分离自西藏巴青县的菌株属于青藏高原型。分离于西藏和青海的4株被试菌株均能产生Fl、Pst I和Pgm,而2株青海菌株VW均为阳性,2株西藏菌株VW均为阴性。分离自青海玉树市、西藏乃东县的2株代表株经毒力检测发现均为强毒菌。经DFR鉴定,青海天峻县的被试菌株为8型,青海玉树市的菌株为5型,西藏乃东县、巴青县的菌株均为10型。结论经抗鼠疫噬菌体血清作用后的特殊鼠疫菌,并未因原始样本中鼠疫噬菌体的干扰和实验室抗鼠疫噬菌体血清的作用而使病原学和基因型发生明显突变。     

广西31株鼠疫耶尔森氏菌鉴定及鼠疫疫源地性质的探讨

目的对31株鼠疫耶尔森菌进行系统的鉴定,探讨广西鼠疫自然疫源地的结构及性质,为今后防治措施的制定提供依据。方法采用鼠疫细菌学常规方法和分子生物学手段确定其生物学表型特征及基因组特征。结果31株菌株均具备鼠疫菌的典型形态特征,能被鼠疫噬菌体完全裂解,主要生化特性为阿胶糖（＋）、鼠李糖（-）、麦芽糖（＋）、甘油（＋）、脱氮（＋）,毒力因子（Pgm）呈阳性、弱阳性和阴性的比例为6：5：4;对Lawton和Glu呈半依赖,对Phe依赖;对22种常用的抗生素敏感,有4种抗生素耐药;含有相对分子量为4MD、6MD、45MD、65MD和111MD五种质粒。结论广西鼠疫菌属E群滇闽居民区型,推测广西的鼠疫流行可能是滇黔桂三省区交界地区相同鼠疫自然疫源地的内源性复燃。     

鼠疫耶尔森氏菌基因分型的研究进展

鼠疫是一种典型的自然疫源性疾病，鼠疫菌、宿主、媒介之间保持相对的生态平衡，鼠疫菌的生存繁殖依赖于宿主动物，蚤类寄生于宿主动物，并作为传播媒介使鼠疫菌传播循环于宿主动物之间，从而形成稳定的鼠疫自然疫源性。鼠疫的自然疫源性最终取决于自然疫源地的地理景观和生态环境：地理景观和自然生境决定了宿主和媒介的种数及其生态学特征，宿主、媒介、鼠疫菌相互作用的复合体（宿主生态位）决定了鼠疫菌的存在和型别。不同自然疫源地来源的鼠疫菌存在诸多差异，不同型别的鼠疫菌对不同宿主动物的免疫原性和毒力具有明显差异，不同宿主动物对同一型别鼠疫菌表现出不同的感受性和敏感性。因此，鼠疫菌的分型工作可以帮助追溯感染的来源及其与其他近缘微生物的遗传关系，判断其毒力、免疫能力和流行病学特征，追踪其在进化中的系统发育地位。     

鼠疫噬菌体分离技术综述

鼠疫噬菌体作为鼠疫耶尔森菌的细菌病毒,在自然界分布广泛。鼠疫噬菌体的深入认识,将会在鼠疫鉴定与诊断、疾病预防和治疗、生态学研究、微生物进化等方面扮演重要的角色。为了获取更多的鼠疫噬菌体样本,鼠疫自然疫源地不同生物环境因素中鼠疫噬菌体样本的规范采集、处理、保存对其质量有重要影响,鼠疫噬菌体分离培养的优化因素对自然界鼠疫噬菌体数量和种类分离率的提高发挥着重要作用。本文从野生型鼠疫噬菌体采集现场的选择、样本的保存条件、噬菌体的分离方法及其注意事项方面对野生型鼠疫噬菌体的分离技术做一综述。     

应用鼠疫耶尔森菌环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测1例自然携带噬菌体的旱獭脏器

目的 应用鼠疫耶尔森菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术快速检测1例自然携带噬菌体的旱獭脏器.方法 对该样本采用鼠疫细菌培养、鼠疫耶尔森菌反向间接血凝试验(reverse indirect hemagglutination test,RIHA)、...     

鼠疫耶尔森菌选择培养基的筛选试验

目的研究多种鼠疫耶尔森菌选择培养基进行比对验证,筛选出一种可以有效抑制部分常见致病菌以提高分离鼠疫菌效率的选择培养基。方法将5种实验菌株分别接种在改良胆碲铜紫选择溶血培养基、5%大蒜汁选择培养基、0.1%水合氯醛选择培养基、青霉素选择培养基和庆大霉素选择培养基进行鼠疫菌分离培养。结果 5种实验菌株在5%大蒜汁选择培养基、青霉素选择培养基和庆大霉素选择培养基生长良好,改良胆碲铜紫选择溶血培养基上鼠疫耶尔森菌、假结核耶尔森菌、小肠结肠炎耶尔森菌生长良好,其中鼠疫耶尔森菌菌落形态典型,其它试验菌株未生长,变形杆菌在0.1%水合氯醛选择培养基上受抑制未生长。结论改良胆碲铜紫选择溶血培养基是较为理想的选择培养基,0.1%水合氯醛选择培养基可作为抑制变形杆菌的选择培养基。     

云南省鼠疫静息期家鼠鼠疫疫源地犬中致病耶尔森菌调查

目的 对云南省家鼠鼠疫疫源地鼠疫指示动物-犬中致病性耶尔森菌分布情况调查分析,以探求鼠疫菌微生态状况,为研究鼠疫的流行与静息提供更多线索。方法 2016年7月—2017年8月采用多重分层抽样法在云南省抽取不同时间进入流行静息期、不一样流行强度和不同地理位置的家鼠鼠疫疫源县共10个（历史疫区、近史流行区、复燃疫区、现疫区）作为调查点,采集犬肛门拭子置于改良PBS中,经4 ℃冷增菌15 d后,吸取混匀的培养液1 mL 提取DNA,采用PCR方法检测foxA、inv及caf1基因,并对基因阳性材料采用耶尔森选择培养基分离菌株,提取菌株的DNA并检测其ail毒力基因。结果 云南省10个疫源县共采集犬肛门拭子标本915份,foxA 基因检测阳性率为1.64%（15/915）,未检出inv基因与caf1基因阳性。小肠结肠炎耶尔森菌分离阳性率为1.3%（12/915）,其中2株具有ail 毒力基因;未分离到鼠疫耶尔森菌和假结核耶尔森菌。结论 云南省家鼠鼠疫疫源地犬中存在小肠结肠炎耶尔森菌的分布;未发现鼠疫菌线索,其原因值得进一步探讨。     

鼠疫菌pMT1质粒的序列分析研究进展

鼠疫是由鼠疫耶尔森菌(简称鼠疫菌)引起的烈性传染病。鼠疫菌质粒是鼠疫菌染色体外的遗传物质,3种常规质粒中,pMT1质粒序列变化最大,结构组成最复杂,目前对其研究相对较少。应用BLAST和Mauve软件对已有36株菌株的pMT1质粒序列比对,对鼠疫菌pMT1质粒的序列特征、基因及其功能研究分析。结果显示基因模块存在较大重排,模块排列存在较大差异,同一生物型有可能差异较大,不同生物型也有模块相似,但同一生物型较不同生物型差异相对较小;插入序列数及位置不同,部分菌株pMT1质粒序列上的毒力基因存在基因突变;一些菌株的pMT1质粒序列中含有其他菌株没有的特殊基因,以及其他功能尚不清楚的基因。对鼠疫菌pMT1质粒的序列分析研究,可以增进对鼠疫流行的认识,对疫苗开发及制定合理的防治对策具有重要意义。     

紫外线对鼠疫菌杀菌效果观察

目的探索不同时间段的紫外线照射对鼠疫菌的杀菌效果,寻找紫外线杀灭鼠疫菌的最佳有效时间。方法将28℃24 h鼠疫菌培养物和用其培养物稀释比浊成1×10~4/ml鼠疫菌悬液,接种于赫氏溶血培养基上,对照组37℃24 h培养,实验组分别经过10 min、20 min、30 min的紫外线垂直照射后37℃24 h培养,观察鼠疫菌生长情况。结果通过实验观察发现,10 min、20 min和30 min 3个不同作用时间段的紫外线照射对鼠疫菌的杀菌效果不同,紫外线照射10 min和20 min不能完全杀灭鼠疫菌,有少量鼠疫菌落生长;紫外线照射30 min无鼠疫菌落生长。结论随着紫外线对鼠疫菌照射时间的延长,鼠疫菌的存活率也逐渐降低,紫外线对鼠疫菌的最佳有效作用时间为30 min。     

鼠疫菌培养基的筛选及其应用

阐述鼠疫菌常用培养基类型、制作方法,以及在鼠疫防控领域中的应用,同时对鼠疫菌常用的培养基进行对比分析,从中筛选出适合鼠疫菌生长、繁殖、分纯、抑制其它微生物生长的优质培养基,为更好地开展鼠疫防控和科研工作提供一定依据。     

田鼠型和非田鼠型鼠疫菌感染人外周血淋巴细胞的病理变化

目的用非田鼠型及田鼠型鼠疫菌分别感染人外周血淋巴细胞,观察高倍显微镜下宿主的敏感性和病理改变。方法分离人外周血淋巴细胞,常规计数铺板培养,用不同型别鼠疫菌感染细胞,MOI为10左右,观察高倍镜下细胞病理变化。结果提取的淋巴细胞总量为2×106个/ml(共76 ml),细胞铺板2 ml/孔,12孔/板×3板;非田鼠型鼠疫强毒菌标准株141活菌计数平均为78个菌,感染指数MOI为9.75;田鼠型鼠疫菌201株平均为39.7个菌,感染指数MOI为9.85。结论淋巴细胞对非田鼠型和田鼠型鼠疫菌均表现出高敏感性,而损害程度依感染菌株型别不同而有较大差别,从病理表型方面验证了非田鼠型鼠疫菌对人的强致病性。     

青海省格尔木市鼠疫耶尔森菌生化特征及基因分型研究

目的 了解青海省格尔木市鼠疫耶尔森菌（Yersinia pestis）的生化特征,进行规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPR）基因分型和差异区段（DFR）研究,为青海省格尔木市鼠疫菌鉴定溯源、鼠疫科学防控提供理论依据。方法 选取1967年以来青海省格尔木市境内从人尸、宿主动物及媒介昆虫体内分离出28株鼠疫菌,通过糖醇酵解实验,研究其生化特征。采用十二烷基磺酸钠裂解和苯酚-氯仿法提取鼠疫菌DNA。分别对CRISPR的YPa、YPb和YPc3个位点进行PCR扩增并测序,然后将所测得CRISPR序列与文献最新报道的CRISPR Dictionary和NCBI数据库检索比对,以鉴定CRISPR spacer阵列。最后根据CRISPR spacer阵列的多态性对青海省格尔木市鼠疫菌进行基因分型。采用23对DFR(DFR01-DFR23)分型引物和质粒验证引物（PMT1）对试验菌株DNA进行分型验证。结果 鼠疫菌糖醇类酵解表型特征研究结果显示,28株鼠疫菌对甘油、阿胶糖、麦芽糖的酵解均为阳性,对鼠李糖、蜜二糖、脱氮的酵解均为阴性。CRISPR分型发现10种spacer,包括YPa 5种、YPb...     

Rapid Detection of Yersinia pestis by Real-time Recombinase- aided Amplification

Yersinia pestis, the causative agent of bubonic and pneumonic plague, is considered to be one of the most dangerous and deadly pathogenic bacteria in the world[1]. Y. pestis? is classified as a category A pathogen by the United States Center for Disease Control and Prevention because of its ease of aerosol-to-human transmission, high lethality, and potential for mass casualties as a biological warfare agent[2]. Therefore, both prevention and treatment require the development of a rapid, sensitive, and specific?method?to?detect?Y. pestis.     

鼠疫耶尔森氏菌 YopD 抗原基因在大肠杆菌中的克隆表达

目的：利用 DNA 重组技术,在大肠杆菌中获得融合表达的鼠疫耶尔森氏菌 YopD 抗原基因。方法根据查找文献及基因比对选取了鼠疫菌重要功能蛋白-YopD 蛋白。利用分子克隆技术克隆后,在原核系统中进行表达。根据云南玉龙菌株（D106004）全基因组序列设计引物,PCR 扩增目的基因片段。采用 pET-32a（＋）作为表达载体,通过双酶切和连接反应,将目的基因片段定向插入载体中,构建重组表达质粒。IPTG 诱导,使重组质粒在其宿主菌 E ．coli BL21（DE3）中表达。结果在大肠杆菌中成功获得了融合表达蛋白,即重组 YopD 蛋白。结论以质粒 pET-32a（＋）作为表达载体,鼠疫菌重要功能蛋白 YopD 能够在大肠杆菌 E ．coli BL21（DE3）中稳定高效地表达,为鼠疫潜在诊断靶点及新型疫苗选择的可能性奠定了基础。     

云南省鼠疫菌株脉冲场电泳分析

目的:对云南不同片区及不同类型的鼠疫菌株进行基因分型。方法:采用脉冲场电泳(PFGE)对菌株进行分析。结果:1.云南省鼠疫菌株被分为5个型,所有鼠疫菌株在680kb和330kb有两条共同的带;2.大部分家鼠鼠疫具有一致图谱;3.云南家、野两型鼠疫菌的脉冲场电泳图谱存在差异。结论:脉冲场电泳分析可用于云南鼠疫分子流行病学研究。