CD147在乳腺癌细胞中的表达及对癌细胞增殖及TGF-β信号通路的影响

摘 要：［目的］ 观察细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)在乳腺癌细胞表达及对癌细胞增殖及转化生长因子-β（TGF-β）信号通路的影响。［方法］ 收集2018年4月至2019年2月我院诊治的50例乳腺癌患者的乳腺癌和癌旁组织样本,CD147表达采用免疫组化检测。采用Western blot检测不同乳腺癌细胞中CD147蛋白表达,乳腺癌细胞HCC1806中转染siRNA后检测乳腺癌细胞增殖能力和TGF-β信号通路蛋白表达。［结果］ 与癌旁组织相比,乳腺癌组织中CD147蛋白表达明显上调（χ2=54.958,P<0.001）。与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞中CD147蛋白表达水平明显上调（F=10.841,P<0.001）。与对照组相比,转染CD147-siRNA后第2d和3d细胞增殖能力明显下降（t=5.029和5.316,P=0.007和0.006）,同时TGF-β、磷酸化SMAD家族成员3（p-Smad3）和转录因子E2F（E2F4）蛋白水平明显升高（t=7.934,10.427和9.985,P=0.001,<0.001和0.001）,而Myc家族蛋白c（c-Myc）蛋白水平明显下降（t=10.137,P=0.001）。［结论］ 乳腺癌中CD147表达明显上调,CD147可能通过抑制TGF-β/Smad3信号通路来促进乳腺癌细胞增殖。乳腺癌中CD147表达在乳腺癌诊断和治疗中具有一定临床意义。     

miR-629对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-629在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取手术切除的胰腺癌组织及其癌旁组织各72例,采用RT-PCR检测miR-629的mRNA表达水平。构建NC-shRNA和miR-629-shRNA慢病毒稳定细胞系,采用CCK-8法检测miR-629对细胞增殖的影响;采用Transwell检测miR-629对细胞迁移的影响;采用双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-629与SIRT3的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织（0.40±0.04）比较,胰腺癌组织中miR-629的mRNA相对表达水平（1.71±0.15）显著增加（t=3.901,P<0.001）;与NC-shRNA细胞比较,miR-629-shRNA细胞的增殖能力均显著下降（F=2.719,P<0.001）;与NC-shRNA细胞（140.22±19.37）比较,miR-629-shRNA细胞的迁移能力（63.91±7.44）显著下降（t=4.612,P<0.001）;荧光素酶报告基因显示,转染SIRT3-WT后,miR-629-shRNA细胞的相对荧光素酶活性（0.33±0.05）较NC-shRNA细胞（1.25±0.12）显著增加（t=4.109,P<0.001）;western blot结果表明miR-629-shRNA细胞中SIRT3的蛋白表达水平（0.44±0.03）较NC-shRNA细胞（1.31±0.11）明显增加（t=3.692,P<0.001）。［结论］ miR-629在胰腺癌组织中高表达,可能通过靶向下调SIRT3的表达促进胰腺癌细胞的增殖和迁移,有望为胰腺癌的临床诊疗提供新的思路。     

CTSB在肝内胆管细胞癌中表达及对癌细胞增殖及NF-κB信号通路的影响

摘 要：［目的］探讨人组织蛋白酶B（CTSB）在肝内胆管细胞癌中表达及对癌细胞增殖及核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。［方法］ 采用Western blot检测肝内胆管癌细胞中CTSB蛋白表达,使用siRNA对CTSB沉默后采用Edu实验检测细胞增殖,同时检测NF-κB信号通路中相应蛋白表达情况。［结果］与正常肝细胞系相比,肝内胆管癌细胞RBE、HCCC9810、HUCCT1中CTSB蛋白表达水平均明显提高（t=7.724、8.839、7.983,P=0.002、0.001、0.002）。与Control组相比,CTSB-siRNA组的CTSB蛋白表达量明显下降（t=6.131,P=0.004）,细胞增殖比例明显下降（t=5.271,P=0.006）,且CTSB-siRNA组的NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）、IκB激酶β（IKK-β）、IKKα和p-NF-κB蛋白水平明显下降（t=6.069、5.433、6.365、5.717,P=0.004、0.006、0.003、0.005）。［结论］ 肝内胆管细胞癌中CTSB蛋白表达水平明显上调,且CTSB能够通过活化NF-κB信号通路促进肿瘤细胞增殖。     

MiR-152在膀胱癌中的表达以及对ERBB3/AKT2信号通路的调节作用

摘 要：［目的］ 探讨miR-152对ERBB3/Akt信号通路的靶向调控作用以及对膀胱癌细胞UM-UC-3增殖、侵袭和迁移活性的影响。［方法］ 收集2016年7月至2018年6月接受手术治疗的56例膀胱癌患者的肿瘤组织及相应的癌旁组织,提取总RNA,检测miR-152表达水平。体外培养UM-UC-3细胞,转染miR-152 mimics（模拟物组）,同时设置空白对照组（CTL）和空转染组（NC）,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测miR-152的表达。采用MTT法、划痕实验和transwell小室侵袭实验观察CTL组、NC组和模拟物组细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用双荧光素酶报告基因方法验证ERBB3与miR-152的关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹（Western blot）法检测UM-UC-3细胞中Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc表达量。［结果］ MiR-152在肿瘤组织中的表达量明显低于癌旁组织（P<0.05）。与膀胱上皮永生化细胞株SV-HUC-1相比,miR-152在膀胱癌细胞T24、UM-UC-3和J82中的表达量明显降低（P<0.05）,其中在UM-UC-3细胞中表达量最低。经qRT-PCR法检测,模拟物组UM-UC-3细胞miR-152的表达量明显低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。模拟物组UM-UC-3细胞的增殖率、迁移活性以及划痕愈合率均明显低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。经双荧光素酶基因报告分析,ERBB3是miR-152的下游靶基因。模拟物组UM-UC-3细胞Snail、ERBB3、Akt2、p-Akt、c-myc mRNA和蛋白表达水平均低于CTL组和NC组细胞（P<0.05）。且miR-152表达量与ERBB3呈负相关性（r=-0.875,P<0.05）。［结论］ 上调miR-152可抑制ERBB3/Akt/c-myc和ERBB3/Akt/Snail信号通路的异常激活,逆转膀胱癌UM-UC-3细胞上皮—间质转化,从而降低膀胱癌生长、侵袭和迁移的风险。     

MiR-124靶向调控PKM2基因表达抑制乳腺癌细胞的增殖和转移

摘 要：［目的］ 探讨miR-124对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和转移的影响。［方法］ 运用实时荧光定量PCR法、免疫印迹实验检测25例乳腺癌乳腺癌组织及对应癌旁组织中的miR-124、丙酮酸激酶同工酶（PKM2）相对表达量。将pre-miR-124、抗miR-124转染至乳腺癌MDA-MB231细胞中,同时设置阴性对照组,检测三组细胞中miR-124、PKM2基因及蛋白表达量。运用CCK-8法及克隆形成实验检测转染后的MDA-MB231细胞增殖和转移。［结果］ 乳腺癌组织中miR-124（0.92±0.24）的相对表达量显著性少于癌旁组织（1.55±0.28）,PKM2的相对表达量更高（0.69±0.18）。pre-miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124过表达（0.37±0.08）,且其可以反向调控PKM2基因（0.52±0.11）及蛋白表达量（0.19±0.04）,抑制细胞的增殖与转移能力。抗miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124抑制表达（0.06±0.03）,其PKM2基因（2.09±0.08）及蛋白表达量（0.47±0.10）显著性上升,促进细胞增殖与转移（P＜0.05）. ［结论］ miR-124可以通过下调PKM2基因的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和转移。     

miR-155-5p通过调控hMLH1促进甲状腺乳头状癌增殖侵袭的研究

摘 要：［目的］ 探讨microRNA-155-5p（miR-155-5p）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）中的表达及作用,验证其对靶基因错配修复酶人类mutL同系物1（human mutL homologue 1,hMLH1）的调控作用。［方法］采用实时定量PCR法检测miR-155-5p在PTC组织和细胞中的表达水平。采用MTT增殖实验、Transwell侵袭实验观察miR-155-5p对PTC细胞增殖和侵袭能力的影响。采用蛋白免疫印迹技术（Western blot）和荧光素酶报告实验验证miR-155-5p对hMLH1的表达调控。［结果］与癌旁正常组织相比,miR-155-5p在PTC组织中的表达水平明显增加,差异有统计学意义（t=3.492,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中miR-155-5p的表达水平相比对照组明显增加,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=4.214,P=0.002,BCPAP细胞株：t=4.268,P=0.002）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞相比对照组增殖能力明显增强,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：48h t=4.378,P=0.012;BCPAP细胞株：48h t=22.106,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics组通过Matrigel基质胶的细胞数量明显多于对照组,差异具有统计学意义（TPC-1细胞株：t=3.182,P=0.013;BCPAP细胞株：t=7.872,P<0.001）;转染miR-155-5p mimics的PTC细胞中hMLH1蛋白表达明显低于对照组,差异有统计学意义（TPC-1细胞株：t=5.137,P=0.007;BCPAP细胞株：t=3.684,P=0.021）。［结论］ miR-155-5p促进PTC增殖侵袭,其机制可能是通过调控hMLH1实现,这为PTC的治疗提供新的靶点。     

Circ_0001946靶向miR-671-5p调控Wnt/β-catenin通路对结直肠癌细胞恶性进展的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001946对结直肠癌细胞恶性进展的影响。［方法］培养结直肠癌HCT116、SW480、Colo320、HT29细胞和正常结直肠CCC-HIE-2细胞,实时定量PCR检测circ_0001946、miR-671-5p表达量。miRcode和双荧光素酶报告实验分析circ_0001946和miR-671-5p的关系。circ_0001946、miR-671-5p在HCT116细胞中的表达量被上调或下调后,分别检测HCT116细胞生长活性、细胞凋亡率及细胞迁移能力。免疫蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。［结果］ HCT116（4.76±0.47）、HT29（2.85±0.57）、SW480（2.75±0.62）、Colo320（3.12±0.68）细胞中circ_0001946表达水平高于CCC-HIE-2细胞（1.24±0.09）（t=7.238、8.129、6.893、6.875,P均<0.05）。下调circ_0001946表达显著降低了HCT116细胞增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.05）,促进了细胞凋亡（P<0.01）; circ_0001946靶向miR-671-5p; circ_0001946表达被上调或miR-671-5p表达被下调后,HCT116细胞增殖和迁移能力显著上升,细胞凋亡率明显降低,Wnt/β-catenin信号通路被激活。［结论］ circ_0001946靶向miR-671-5p激活了Wnt/β-catenin信号通路,促进了结直肠癌细胞恶性进展。     

MiR-451靶向调控SIRT1通路对胃癌细胞增殖的作用机制研究

摘 要：［目的］ 探讨miR-451靶向调控SIRT1通路对胃癌细胞增殖的作用机制研究。［方法］ 通过转染胃癌HepG2细胞实验进行分组,胃癌组、模拟物组和抑制物组,采用RT-PCR法检测HepG2细胞中miR-451、SIRT1 mRNA表达,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡,Western blot检测细胞中SIRT1蛋白水平,细胞克隆测定细胞存活率,裸鼠皮下成瘤实验检测小鼠肿瘤体积。［结果］模拟物组miR-451表达量高于其他两组,与抑制物组相比,胃癌组miR-451表达水平较高（t=8.651,P＜0.001）。胃癌组SIRT1表达高于模拟物组,与抑制物组相比,胃癌组和模拟物组SIRT1表达水平明显降低（t=6.362,P＜0.001）,三组比较差异有显著性（F=3.565,P＜0.001）。与胃癌组相比,模拟物组HepG2细胞凋亡明显增加,胃癌组和抑制物组细胞凋亡情况均弱于模拟物组,三组比较差异有显著性（?字2=9.797,P=0.007）。胃癌组和抑制物组HepG2细胞单克隆形成率有上升趋势,模拟物组明显下降,三组比较组间差异有显著性（F=6.031,P＜0.001）。模拟物组小鼠肿瘤体积较抑制物组明显变小,与胃癌组相比,抑制物组肿瘤体积增加,三组比较差异有显著性（F=9.967,P＜0.001）。［结论］ miR-451过表达可以抑制SIRT1通路相关蛋白活性,促进胃癌HepG2细胞凋亡,抑制其增殖和发展。     

MicroRNA-1254靶向组蛋白去乙酰化酶7调控胃癌细胞增殖和侵袭

摘 要：［目的］ 探究microRNA-1254（miR-1254）对胃癌细胞增殖、侵袭的调控作用及分子机制。［方法］ 使用TargetScan7.1工具预测分析miR-1254对组蛋白去乙酰化酶7（histone deacetylase 7,HDAC7）的靶向作用位点;miR-1254 mimics和miR-1254 inhibitor转染胃癌细胞系SGC-7901,用实时荧光定量PCR检测miR-1254及HDAC7 mRNA表达;CCK-8法检测胃癌细胞增殖活性;Transwell法检测胃癌细胞侵袭能力;蛋白质免疫印迹实验检测STAT3、磷酸化STAT3的表达水平。［结果］ MiR-1254可以靶向结合HDAC7 mRNA 3′UTR区域。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组miR-1254表达水平升高（t=13.51,P=0.0002）,HDAC7 mRNA表达水平显著性降低（t=4.667,P=0.0095）,而转染miR-1254 inhibitor组miR-1254表达水平显著性降低（t=10.41,P=0.0005）,HDAC7 mRNA表达水平显著性升高（t=4.008,P=0.016）。与对照组相比,转染miR-1254 mimics组细胞增殖活性显著性下降（F=30.4,P<0.0001）,细胞侵袭能力显著性减弱（t=6.284,P=0.0033）;与转染miR-1254 mimics组相比,miR-1254 mimics+HDAC7组细胞增殖活性升高（F=22.16,P=0.0002）,且侵袭能力增强（t=5.842,P=0.0043）。转染miR-1254 mimics抑制了STAT3的磷酸化,转染HDAC7表达载体可以减弱miR-1254对STAT3磷酸化的抑制作用。［结论］ MiR-1254可以通过靶向HDAC7抑制胃癌细胞STAT3的活化,并抑制细胞的增殖和侵袭。     

MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

摘 要：［目的］ 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用，并进一步探讨其机制。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平，Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化，用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡，并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。［结果］ 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比，乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高（P<0.001），PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低（P<0.001），而p-AKT蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.001），并促进其凋亡的发生（P<0.001），降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平（P<0.001）的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9（P<0.001）。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路，miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低（P<0.001），而miR-374a抑制剂处理后，PTEN蛋白水平显著性升高（P<0.001），p-AKT表达降低（P<0.001）。［结论］ miR-374a在乳腺癌细胞高表达，并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖，促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。