散发性激素耐药型肾病综合征患儿30例足细胞基因突变分析

目的分析散发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)儿童足细胞基因突变及其特点。方法研究对象为30例散发性SRNS患儿和50例尿检正常的健康志愿者。采用PCR扩增NPHS1、NPHS2和CD2AP基因全部外显子及其周围的部分内含子,WT1基因外显子8和9及其周围的部分内含子;应用DNA序列直接测定法对其PCR产物进行测序。结果在10例应用激素和免疫抑制剂治疗肾病无缓解的SRNS患儿中,发现1例携带WT1基因杂合突变——1180C>T(R394W),1例携带NPHS1基因复合杂合突变——2677A>G(T893A)和*142T>C,1例携带CD2AP基因杂合突变IVS13-137G>A。在20例应用激素或免疫抑制剂治疗肾病缓解的SRNS患儿中,发现4例患儿携带NPHS1基因单杂合突变——928G>A、IVS8+30C>T、IVS21+14G>A和IVS25-23C>T,1例患儿携带CD2AP基因单杂合突变(IVS7-135G>A)。结论对激素和免疫抑制剂均耐药的SRNS患儿需进行足细胞基因突变分析。     

NPHS1基因Fin-minor突变致中国先天性肾病综合征2例报道并文献复习

目的总结2例先天性肾病综合征芬兰型NPHS1基因Fin-minor突变患儿临床资料,提高对该病的认识。方法报道2例先天性肾病综合征患儿的临床特点。对可能致病基因NPHS1、NPHS2、PLCε1、LAMB2、COQ2和LMX1B外显子和WT1基因第8、9外显子,以及外显子相邻附近区域进行直接测序。对该家系相关成员进行NPHS1基因外显子及附近调控区域直接测序,分析突变位点,并文献综述。 结果2例患儿均于出生后1个月内起病,临床表现为肾病综合征。血清病原学检查均为阴性。家系调查未发现家族中有类似疾病的成员。NPHS1、NPHS2、PLCε1、LAMB2、COQ2、LMX1B和WT1基因分析发现,2例患儿存在双NPHS1基因杂合突变,未发现其他基因有致病性突变。1例患儿为NPHS1基因的p.R1109X（c. 3325C>T ,Fin-minor）和IVS26DS-2A>T杂合突变,IVS26DS-2A>T剪切突变为首次报道,其父亲携带IVS26DS-2A>T,其母亲携带p.R1109X。1例患儿为NPHS1基因的p.R1109X （c. 3325C>T ）和p.A1160X （c.3478C>T）杂合突变,其母亲携带p.R1109X突变,未发现p.A1160X突变,其父亲拒绝行NPHS1基因分析。以上发现的突变在100例正常人群中未发现。 结论中国先天性肾病综合征儿童不仅有NPHS1基因突变,而且有经典的Fin-minor突变,为国内首报。本研究新发现的IVS26DS-2A>T剪切突变丰富了NPHS1基因突变谱。     

广东地区原发性激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2、CD2AP基因突变筛查

目的 研究广东地区原发性激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿NPHS2和CD2AP基因变异情况,探讨NPHS2和CD2AP基因变异与SRNS发病的关系,为儿童SRNS的临床诊治提供理论依据.方法 随机选取26例广东地区原发性SRNS患儿和20例健康儿童,对其NPHS2基因8个外显子和CD2AP基因18个外显子的PCR产物进行直接测序,所得结果与美国国立生物技术信息中心(NCBI)的基因数据库进行比对,检测基因变异情况.结果 26例患儿中14例SRNS患儿和4例健康对照组儿童存在NPHS2单核苷酸多态性(288C ＞T,954T＞C,1038A＞ G),均为已报道的单核苷酸多态性,但2组之间的基因型和等位基因频率比较差异均无统计学意义(P均＞0.05);所测SRNS患儿中仅有2例检测出CD2AP基因1个内含子区突变(1917 +20C＞G).结论 NPHS2基因变异可能并非中国广东地区SRNS患儿发病的主要机制;CD2AP基因内含子突变可能增加患儿对早发性SRNS和局灶节段性肾小球硬化的易感性,提示内含子可能参与SRNS的发病.     

血小板活化因子水解酶基因突变与原发性肾病综合征的相关性

目的研究血小板活化因子水解酶（PAF—AH）基因突变与不同类型原发性肾病综合征（PNS）的相关性。方法94例PNS患儿，依据对激素治疗的效应分为激素敏感型NS（SSNS）组37例,激素耐药型NS（SRNS）组26例，激素依赖型NS（SPNS）组31例，239例健康对照组儿童作为对照，应用聚合酶链反应（PER）及聚丙烯酰胺凝胶电泳分析的方法检测其PAF—AH基因第9外显子-994位点基因型及等位基因频率，同时对各种PAF—AH基因型的PNS患儿的病情反复情况进行对比分析。结果NTNS患儿血浆型-PAF—AH基因-994位点基因突变频率显著高于STNS及健康对照组；所有PNS及SSNS、SRNS与健康对照组儿童比较，PAF—AH基因．第9外显子-994位点基因突变频率差异无统计学意义，SDNS组突变频率显著高于健康对照及SSNS组；PAF—AH基因第9外显子-994位点基因GT型或TT型第1年内反复次数显著高于GG型者。结论血浆型PAF—AH基因第9外显子-994位点基因突变的PNS患儿在临床类型上多为NTNS，且易于在以后的治疗中出现依赖倾向。     

汉族散发性激素耐药型肾病综合征15例NPHS2和WT1基因遗传学变异

近年来的研究证实NPHS2基因(NPHS2)突变可引起散发性激素耐药型肾病综合征(steroid-resistant nephroticsyndrome,SRNS)[1];WT1基因(WT1)突变可引起孤立性SRNS等肾脏疾病[2].我们对15例汉族散发性SRNS患儿进行了NPHS2和WT1基因检测.     

汉族慢性肾衰竭儿童6例NPHS2和WT1基因遗传学变异

目的 分析汉族慢性肾衰竭(CRF)儿童NPHS2和WT1基因遗传学变异及其特点.方法 研究对象为6例汉族CRF儿童和50例尿检正常的汉族成年人.分别取其外周静脉血3 mL,提取基因组DNA.应用PCR方法 扩增NPHS2和WT1基因的全部8个外显子及其周围的部分内含子.通过DNA直接测序法和限制性片段长度多态性/PCR分析法对NPHS2和WT1基因进行遗传学变异分析.结果 未发现NPHS2和WT1基因致病突变,但检测到2个NPHS2基因多态性(102G>A和954T>C)和4个WT1基因变异(5′-UTR-7G>T、126C>T、IVS5-9T>C和903A>G).NPHS2基因多态性(102G>A)在6例CRF儿童与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较均无显著性差异(Pa>0.05).3个WT1基因变异(5′-UTR-7G>T、126C>T和903A>G)在100条正常染色体中也有检出,其在6例CRF儿童与对照人群中的基因型频率和等位基因频率比较均无显著性差异(Pa>0.05).1个WT1基因变异(IVS5-9T>C)在1例患儿及其父亲(尿检正常)中检出,为杂合变异,而在100条正常染色体中未检出.结论 IVS5-9T>C为新发现的WT1基因变异, NPHS2和WT1基因突变不是本研究6例汉族CRF儿童的主要致病原因.     

WT1基因突变致慢性肾功能衰竭1例家系的遗传咨询和产前基因诊断

探讨WT1突变致慢性肾功能衰竭产前基因诊断的方法。方法　北京大学第一医院于2007年12月对1例先证者家系进行详细的遗传咨询和基因突变分析,提取患儿母亲第2胎孕20周羊水细胞基因组DNA,根据先证者基因突变分析,PCR扩增相应基因相应外显子检测胎儿突变情况, PCR扩增SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过3个X染色体微卫星标记（AR、DXS6797和DXS6807）连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。结果　先证者基因突变分析结果为WT1基因IVS9+5G >A杂合突变,同时合并NPHS2第7外显子g. 860A > G杂合突变。核型分析显示,患儿核型为46 XY。家系突变分析显示,患儿母亲携带NPHS2第7外显子g. 860A > G杂合突变,无WT1基因IVS9+5G > A杂合突变,父亲未发现异常。患儿母亲第2胎产前羊水细胞基因组DNA检测显示,胎儿无WT1和NPHS2相应位点突变。PCR扩增SRY基因和核型分析均显示胎儿为女性,连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染。结论　本研究建立了WT1突变所致慢性肾衰竭产前基因诊断的方法。     

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目的探讨WT1突变致慢性肾功能衰竭产前基因诊断的方法。方法北京大学第一医院于2007年12月对1例先证者家系进行详细的遗传咨询和基因突变分析,提取患儿母亲第2胎孕20周羊水细胞基因组DNA,根据先证者基因突变分析,PCR扩增相应基因相应外显子检测胎儿突变情况,PCR扩增SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过3个X染色体微卫星标记(AR、DXS6797和DXS6807)连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能。结果先证者基因突变分析结果为WT1基因IVS9+5G>A杂合突变,同时合并NPHS2第7外显子g.860A>G杂合突变。核型分析显示,患儿核型为46XY。家系突变分析显示,患儿母亲携带NPHS2第7外显子g.860A>G杂合突变,无WT1基因IVS9+5G>A杂合突变,父亲未发现异常。患儿母亲第2胎产前羊水细胞基因组DNA检测显示,胎儿无WT1和NPHS2相应位点突变。PCR扩增SRY基因和核型分析均显示胎儿为女性,连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染。结论本研究建立了WT1突变所致慢性肾衰竭产前基因诊断的方法。     

中国南方汉族人3个家族性激素耐药型肾病综合征家系CD2AP和NPHS1基因突变分析

目的 分析中国南方汉族人家族性激素耐药型肾病综合征(SRNS)家系CD2AP和NPHS1基因突变及其特点.方法 研究对象为A、B、C 3个南方汉族SRNS家系先证者及其父母,A、B 2个家系先证者的姐姐和50例尿检正常的南方汉族成年人.取所有研究对象外周静脉血,提取基因组DNA,PCR方法扩增CD2AP基因全部18个外显子和NPHS1基因全部29个外显子及其周围的部分内含子,对PCR产物直接进行DNA序列测定.结果 在3个SRNS家系先证者未检测出CD2AP基因致病突变.在B家系的先证者检测出NPHS1基因2398C＞T(R800C)杂合突变,先证者父亲亦携带此杂合突变,但先证者母亲及姐姐未发现该突变.在50例对照人群中未发现2398C＞T突变.此外,在3个先证者及50例对照人群还检测出9种已报道的CD2AP基因多态性--IVS4-25G＞A、IVS8-95G＞A、IVS10+36C＞A、IVS10-153A＞T、IVS10-110A＞G、IVS11+82T＞C、1204C＞T、IVS16+24G＞A、IVS17-66T＞C和4种已报道的NPHS1基因多态性--349G＞A、IVS24+36C＞T、3315G＞A和IVS27+45C＞T.结论 在1个中国南方汉族SRNS家系先证者检测出NPHS1基因突变--2398C＞T,证实中国南方汉族人家族性SRNS儿童存在NPHS1基因突变,提示对其需进行NPHS1基因突变分析.     

激素耐药型肾病综合征患儿NPHS2基因多态性变异研究

目的分析激素耐药型肾病综合征(SRNS)患儿NPHS2基因突变及其特点。方法收集30例SRNS患儿(男19例,女11例)和20例健康儿童病例资料。采集SRNS患儿外周血2～4 mL,采用盐析法提取其基因组DNA。采用PCR方法扩增NPHS2基因,对PCR产物进行测序。结果受试者均未检测到NPHS2基因突变;其中发现11例SRNS患儿和4例健康儿童存在单核苷酸多态性(SNP),均为已报道的SNP:288C>T的等位基因频率(C/T)分别为93%、7%;954T>C的等位基因频率(T/C)分别为80%、20%;1038A>G的等位基因频率(A/G)分别为90%、10%,2组间各SNP的基因频率和基因型比较差异均无统计学意义(Pa>0.05);检测出SNP的患儿与未检出SNP的患儿其临床特征亦无统计学差异(P>0.05)。结论 NPHS2基因多态性可能不是中国南方儿童SRNS的遗传学基础。     

Monogene Ursachen des nephrotischen Syndroms

Steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) represents a frequent cause of end-stage renal disease in children. Renal histology shows focal segmental glomerulosclerosis in about 80% of cases. Recently, it became apparent that up to 28% of all cases of childhood nephrotic syndrome are caused by recessive mutations of podocin (NPHS2). Additional monogenic causes are mutations of nephrin (NPHS1), WT1, PLCE1, or LAMB2. The related gene products are expressed in the glomerular podocyte and are essential for development and maintenance of the glomerular filtration barrier. These genetic insights have led to a better understanding of the pathogenesis of SRNS and will allow for unequivocal molecular genetic diagnostics and for stratification in therapeutic studies.     

Mutations in the Wilms' tumor 1 gene cause isolated steroid resistant nephrotic syndrome and occur in exons 8 and 9

Primary steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) is characterized by childhood onset of proteinuria and progression to end-stage renal disease. Approximately 10-25% of familial and sporadic cases are caused by mutations in NPHS2 (podocin). Mutations in exons 8 and 9 of the WT1 gene have been found in patients with isolated SRNS and in SRNS associated with Wilms' tumor (WT) or urogenital malformations. However, no large studies have been performed to date to examine whether WT1 mutations in isolated SRNS are restricted to exons 8 and 9. To address this question, we screened a worldwide cohort of 164 cases of sporadic SRNS for mutations in all 10 exons of the WT1 gene by multiplex capillary heteroduplex analysis and direct sequencing. NPHS2 mutations had been excluded by direct sequencing. Fifteen patients exhibited seven different mutations exclusively in exons 8 and 9 of WT1. Although it is possible that pathogenic mutations of WT1 may also reside in the introns, regions of the gene that were not able to be screened in this study, these data together with our previous results (Ruf et al.: Kidney Int 66: 564-570, 2004) indicate that screening of WT1 exons 8 and 9 in patients with sporadic SRNS is sufficient to detect pathogenic WT1 mutations and may open inroads into differential therapy of SRNS.     

足细胞相关突变基因致激素耐药型肾病综合征的机制研究进展

激素耐药型肾病综合征的治疗十分棘手,其发病机制尚未完全阐明。近年来,相关研究发现一些足细胞突变基因可能在激素耐药型肾病综合征病例的发病过程中起到了重要作用,研究较为深入的突变基因有NPHS2、NPHS1、WT1、TRPC6、MDR-1、PLCE1、LMX1B、LAMB2等,本文就以上突变基因的致病特性加以概述,以期为早期明确肾病类型并采取正确治疗措施,同时对预后判断和产前诊断提供帮助。     

Broad and unexpected phenotypic expression in Greek children with steroid-resistant nephrotic syndrome due to mutations in the Wilms’ tumor 1 (<Emphasis Type="Italic">WT1</Emphasis>) gene

Mutations in the Wilms’ tumor suppressor gene 1 (WT1), most commonly within exons 8 or 9 or intron 9, are found in cases with the overlapping conditions of Denys–Drash and Frasier syndromes, as well as in patients with steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS). This study investigated the presence of WT1 gene mutations in cases with childhood SRNS, along with an evaluation of their clinical outcome. Twenty-seven Greek children with sporadic (19 cases) and familial (8 cases) SRNS were tested. Four phenotypically female patients with sporadic SRNS were found to carry de novo WT1 mutations, including two cases with p.R394W, and one case each with p.R366H, or n.1228+5G>A. Karyotype analysis found 46XX in three cases, but 46XY in one. No phenotype–genotype correlations were apparent in the WT1 gene positive cases since their clinical presentation varied broadly. Interestingly, one patient with a pathological WT1 nucleotide variation responded fully to combined therapy with cyclosporine A and corticosteroids. This study further illustrates that investigation of WT1 gene mutations is clinically useful to support definitive diagnosis in children presenting with SRNS in order to direct the most appropriate clinical management.     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内地塞米松浓度与细胞膜表面P-糖蛋白170表达的相关性研究

目的分析对糖皮质激素（GC）敏感（SS）和耐药（SR）的原发性肾病综合征（NS）患儿的外周血单个核细胞（PBMC）内地塞米松浓度和P-糖蛋白170（P-gp170）表达与GC耐药的关系,探讨P-gp170在GC耐药NS患儿中的作用及介导耐药的可能机制。方法收集2006年1至10月在中南大学湘雅二医院儿科诊断为原发性NS的初治患儿为研究对象,依据对GC的反应分为SSNS亚组和SRNS亚组,并设同期行查体的健康儿童为对照组。应用地塞米松刺激SSNS和SRSS亚组患儿的PBMC并进行培养,以高效液相色谱法测定培养前（0 h ）及培养后12、24和36 h时PBMC内地塞米松浓度;蛋白质免疫印迹检测培养各时间点PBMC膜表面P-gp170的表达量;分别对不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170的表达量行相关性分析。结果研究期间SSNS亚组纳入16例,SRNS亚组纳入8例,对照组纳10例。①PBMC内地塞米松浓度随培养时间延长SSNS亚组呈增高趋势（P<0.05）, SRNS亚组变化不显著（P>0.05）;各培养时间点PBMC内地塞米松浓度SSNS亚组和SRNS亚组均高于对照组（P<0.05）。②SSNS亚组P-gp170表达随培养时间的延长而逐渐降低,各培养时间点差异有统计学意义（P<0.05）,且均高于对照组（P<0.05）。SRNS亚组各培养时间点P-gp170表达差异无统计学意义（P>0.05）,但高于SSRN亚组（P<0.05）。③对照组不同培养时间点PBMC内地塞米松浓度与P-gp170表达呈显著负相关（12 h：r＝-0.852,24 h：r＝-0.794,36 h：r＝-0.847;P均<0.05）;SSNS亚组也呈显著负相关（12 h：r＝-0.728,24 h:r＝- 0.785,36 h:r＝-0.842;P均<0.05）; SRNS亚组无显著相关性。结论①PBMC膜表面P-gp170表达增高与NS患儿GC耐药有,P-gp170表达增高介导了部分NS患儿的GC耐药;②应用GC可诱导NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高,部分GC耐药患儿与GC应用所致P-gp170增高有关;③NS患儿PBMC膜表面P-gp170的表达增高为GC耐药标志之一。     

<Emphasis Type="Italic">NPHS2</Emphasis> mutations

Objective  To uncover the frequency and the spectrum of NPHS2 mutations in Egyptian children with non familial steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS). Methods  Sixteen patients were screened by PCR-single-strand conformation polymorphism analysis of NPHS2 gene followed by direct sequencing. Results   NPHS2 mutations were evident in four patients (25%) who were bearing four novel mutations including two frame shift mutations (R238fs and P45fs) and two missense mutations (I136L and F216Y). There were no phenotypic or histological characteristics of patients bearing NPHS2 mutations, apart from the earlier onset of the disease, compared to those who were not bearing mutations. Conclusion   NPHS2 mutations are prevalent in Egyptian children with non-familial SRNS and this may in part explain the less favorable prognosis reported in these patients.     

线粒体相关肾病2例病例报告及文献复习

目的 总结2例线粒体相关肾病患儿临床特征及基因突变的特点,提高对该病的认识。方法 收集2例线粒体相关肾病患儿的病史特点、肾脏病理、相关实验室检查和家族史等资料。采用外显子捕获的方法对4 000种人类单基因病的相关致病基因进行高通量测序,包括线粒体DNA A3243G等37个基因和ADCK4等13个参与辅酶Q10生物合成的基因,利用生物信息学对测序结果进行分析,用Sanger法对高通量测序结果进行验证,并在家系中进行突变分析。并进行相关文献复习。结果 2例患儿男女各1例。女性患儿11.7岁起病,主要临床表现为蛋白尿和肾功能异常,无肾外症状,肾脏病理为局灶节段性肾小球硬化(FSGS),检测到NPHS1基因已报道的p.E447K和p.G601A杂合突变,ADCK4基因纯合p.D209H错义突变,为新发现的突变。家系突变分析发现,NPHS1基因p.E447K和p.G601A杂合突变均来自父亲,其哥哥也有相同的基因型,其母亲不携带该2个突变;患儿父母和哥哥分别携带p.D209H杂合突变。男性患儿出生后起病,多个系统受累,表现为精神、运动发育落后,心脏和大血管多发畸形,肾病综合征。检测到COQ6基因的纯合p.R360W错义突变,为新发现的突变。家系突变分析显示,患儿父母分别携带杂合p.R360W错义突变。ADCK4基因p.D209H错义突变和COQ6基因p.R360W错义突变经在线软件PolyPhen和SIFT预测为有害性突变,经多物种蛋白序列比对,2个突变位点均具有保守性。结论 2例患儿肾脏表型分别由辅酶Q10合成基因ADCK4和COQ6突变引起的线粒体相关肾病。新发现p.D209H和p.R360W突变分别丰富了ADCK4和COQ6基因突变谱。