代谢性核受体在结肠癌中的表达及意义

目的 初步探讨代谢性核受体在人结肠癌组织中的表达及意义.方法 分别用RT-PCR和Western blot检测维甲酸受体α(RARα)、孕烷X受体(PXR)、维生素D受体(VDR)、过氧化物酶体增殖体激活受体α(PPARα)和法尼酯衍生物X受体(FXR)在17例结肠癌组织中的表达,并进行半定量统计分析.结果 与相应正常组织比较,除FXR外,结肠癌组织中RARα、PXR、VDR和PPARα mRNA 水平均显著上调,差异有统计学意义(P<0.05);而结肠癌组织RARα和PXR蛋白表达水平也显著高于相应正常组织,差异有统计学意义(P<0.05).结论 结肠癌中RARα、PXR、VDR和PPARα表达上调可能与结肠癌发生发展相关.     

颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性

目的检测颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ的表达,分析其表达量与RA作用效果的相关性,探讨RA靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法 RT-PCR法检测31例体外培养的颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα的表达情况,MTT法测定RA对PPARβ/δ、RARα不同表达的颅咽管瘤细胞的抑制率,分析其表达情况与RA作用是否存在相关性.结果 (1)RT-PCR结果显示,不同颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα表达存在差别.31例原代培养的颅咽管瘤细胞按其核受体表达不同分为PPARβ/δ>RARα、RARα>PPARβ/δ、RARα>>PPARβ/δ3组;(2)MTT结果显示在相同RA药物作用下RARα>>PPARβ/δ组的抑制率明显高于RARα>PPARβ/δ组、PPARβ/δ>RARα和对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)PPARβ/δ、RARα的表达可作为评估RA治疗颅咽管瘤效果的有效指标.PPARβ/δ表达低的颅咽管瘤细胞对RA更敏感;(2)靶向升高RARα或者靶向降低PPARβ/δ的表达都有益于颅咽管瘤的治疗.     

核受体激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF-7细胞芳香化酶的调节作用

目的：探讨各种核受体包括过氧化酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和α(PPARα)、维甲酸受体(RAR)、维甲类X受体(RXR)、维生素D受体(VDR)、甲状腺素受体(TR)和糖皮质激素受体(GR)的激动剂对人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性的调节作用。方法：测定人卵巢颗粒细胞和MCF—7细胞在上述各种核受体激动剂处理前后芳香化酶活性的变化和细胞色素P450芳香化酶(P450arom)mRNA的表达水平。结果：(1)PPARγ和RXR激动剂均能显著抑制人卵巢颗粒细胞芳香化酶活性，两者结合使用抑制作用更进一步增强，并且伴有P450arom mRNA水平下降；(2)RAR和RXR激动剂合用能显著刺激乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性，并使P450arom mRNA表达水平升高。结论：人卵巢颗粒细胞和乳腺癌MCF—7细胞芳香化酶活性受不同的核受体激动剂调节。     

颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ表达与RA作用的相关性

目的检测颅咽管瘤中RARα及PPARβ/δ的表达,分析其表达量与RA作用效果的相关性,探讨RA靶向治疗颅咽管瘤的分子机制.方法 RT-PCR法检测31例体外培养的颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα的表达情况,MTT法测定RA对PPARβ/δ、RARα不同表达的颅咽管瘤细胞的抑制率,分析其表达情况与RA作用是否存在相关性.结果 RT-PCR结果显示,不同颅咽管瘤细胞中PPARβ/δ、RARα表达存在差别.31例原代培养的颅咽管瘤细胞按其核受体表达不同分为PPARβ/δ>RARα、RARα>>PPARβ/δ、RARα>PPARβ/δ3组;MTT结果显示在相同RA药物作用下RARα>PPARβ/δ组的抑制率明显高于RARα>PPARβ/δ组、PPARβ/δ>RARα和对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PPARβ/δ、RARα的表达可作为评估RA治疗颅咽管瘤效果的有效指标.PPARβ/δ表达低的颅咽管瘤细胞对RA更敏感;靶向升高RARα或者靶向降低PPARβ/δ的表达都有益于颅咽管瘤的治疗.     

过氧化物酶体增殖体活化受体γ、肝脏X受体α、视黄酸X受体α活化对THP-1单核巨噬细胞ABC1mRNA表达的影响及意义

目的探讨核受体过氧化物酶体增殖剂活化受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、肝脏X受体α(Liver X receptor alpha,LXRα)、视黄酸X受体α(Retinoid X receptor alpha,RXRα)活化对THP-1单核巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白(ATP binding cassette transporter 1,ABC1)mRNA表达的影响及意义。方法体外培养的THP-1单核细胞,经佛波酯(PMA)诱导成为巨噬细胞后,与核受体PPARγ、LXRα、RXRα的相应配体曲格列酮(TROG)、22(R)羟化胆固醇(22(R)-HC)、9-顺式视黄酸(9-CRA)作用24小时,提取细胞总RNA,用一步法逆转录聚合酶链反应检测核受体PPARγ、LXRα、RXRα活化剂对ABC1mRNA表达的影响。结果与对照组相比较,曲格列酮组、22(R)-HC组、9-CRA组、TROG+22(R)-HC组、TROG+组、22(R)-HC+9-CRA组ABC1 mRNA的表达均有不同程度增加,联合作用组(即核受体PPARγ、LXRα、RXRα两两活化)ABC1 mRNA增加更为明显。结论通过调控PPARγ、LXRα和RXRα等核受体的活化程度可达到调控ABC1表达的目的,这可能将为动脉粥样硬化的防治提供新的前景和机会。     

PPARγ与肺纤维化

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferators-activated receptor,PPAR)是一类由配体激活的核转录因子超家族成员,属Ⅱ型核受体超家族成员.PPARs有3种表型,即PPARα、VPARβ(亦称PPARδ)和PPARγ.     

雌激素受体作用的分子机制及靶向治疗研究进展

雌激素通过雌激素受体-α(estrogen receptorα,ERα)和雌激素受体-β(estrogen receptor β,ERβ)起作用.此后又发现了一种新的G蛋白偶联的雌激素受体(G protein-coupled receptor 30/G protein-coupled estrogen receptor-1,GPR30/GPER-1).因此,雌激素的信号转导依赖于这3种受体作用的平衡,通过基因组途径或非基因组途径调控细胞的增殖与分化,影响人类的生理、生殖和行为.     

PPARγ在ER+乳腺癌中的表达及对MCF-7细胞生物学行为的影响*

目的：探讨过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxidase proliferator activated receptor γ, PPARγ)在雌激素受体(estrogen receptor, ER)+乳腺癌中的表达和意义及对MCF-7细胞生物学行为的影响。方法：采用免疫组织化学法检测77例ER+乳腺癌组织中PPARγ蛋白的表达情况,结合临床病理特征进行分析;运用阳离子脂质体转染法,分别将myc标记的野生型(PPARγWT)及功能区缺失的突变型PPARγ表达质粒(PPARγMUT)转染ER+乳腺癌MCF-7细胞;Western Blot法观察转染后细胞中Wnt通路相关蛋白的表达;运用流式细胞术和CCK-8法检测转染PPARγWT及PPARγMUT对MCF-7细胞周期、增殖活力的影响。结果：PPARγ蛋白的高表达与ER+乳腺癌的腋窝淋巴结转移、组织学分级、TNM分期、Ki-67有关(P<0.05)。外源性转染PPARγWT与转染PPARγMUT比较,能降低MCF-7中的β连环蛋白(β-Catenin)、T细胞受体4(T cell factor-4, Tcf-4)及Wnt通路靶基因c-myc、cyclin D1蛋白量,明显地抑制MCF-7细胞生长和细胞周期进程。结论：PPARγ与ER+乳腺癌发生发展有关,可抑制人乳腺癌细胞的增殖。     

大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)

目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

人体外周血单个核细胞在体外自发产生淋巴因子的观察

本文应用白细胞趋化性琼脂糖测定法,在未经抗原或分裂原刺激的人外周血单个核细胞的培养上清液中,可测出一种能引起多形核白细胞趋化移动的淋巴因子。实验表明,这种淋巴因子系自发产生,主要来自淋巴细胞。56℃杀死的单个核细胞的培养物和置4℃环境下培育的上清液均缺乏趋化因子的活性。而加入培养液的血清则与趋化性淋巴因子的产生直接有关。因此,它对评价激活剂的作用以及对某些体外细胞免疫测定的结果分析,是一个值得注意的问题。     

杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响

【目的】探讨杜仲对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响。【方法】分别取10日龄SD大鼠胫骨、股骨的骨髓,过滤离心后将所得BMSCs进行体外单层培养、扩增,采用DMEM培养基,37℃、体积分数5%CO2条件培养。在细胞达到80%～90%融合时,使用2.5 g/L胰酶消化传代。将传代细胞分别置于空白血清培养液(对照组)、杜仲水提取物含药血清及杜仲醇提取物含药血清培养液进行培养,观察细胞在3种条件下的形态、贴壁生长、增殖、集落等情况,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法绘制生长曲线,比较3种培养条件下达到100%融合的时间。【结果】杜仲水提取物组、杜仲醇提取物组对大鼠BMSCs增殖的影响显著高于空白血清对照组(P<0.05),且杜仲醇提取物组作用优于杜仲水提取物组(P<0.05)。【结论】杜仲对大鼠BMSCs增殖具有一定促进作用。     

鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株增殖和凋亡的影响

【目的】探讨中药复方鹤蟾片含药血清对人肺腺癌细胞株(LAC)增殖和凋亡的影响。【方法】制备中药复方鹤蟾片含药血清,按常规进行人肺腺癌LAC细胞培养。加入体积分数为30%浓度的含药血清培养液5 mL(含药血清组),另设相同浓度的无含药血清组(空白血清组)和RPMI-1640培养液组(空白对照组)。于倒置相差显微镜下观察细胞生长状态,荧光显微镜下观察细胞核凋亡的形态学改变,并分别采用DNA含量分析法和TUNEL法进行细胞凋亡的流式细胞仪检测。【结果】LAC细胞经鹤蟾片含药血清处理后发生了凋亡特征改变;流式细胞仪DNA含量分析法分析含药血清组凋亡率为5.6%,空白血清组和空白对照组分别为0.9%和0.1%;细胞周期分析结果显示,经体积分数为30%含药血清作用72 h后,LAC细胞S期和G2-M期细胞数减少,低于空白血清组和空白对照组,含药血清组细胞增殖指数低于其他2组;进一步采用TUNEL法检测细胞凋亡的发生情况,发现含药血清作用72 h后,细胞凋亡发生率为12.3%,空白血清组为5.7%,空白对照组为1.2%。【结论】鹤蟾片含药血清对LAC肿瘤细胞增殖具有一定的抑制作用,其机理可能与抑制LAC细胞DNA的合成和分裂,将细胞周期阻滞于G0-G1期,促进LAC肿瘤细胞的凋亡有关。     

雌激素相关受体α特异性抑制剂XCT-790对成骨细胞株MG-63增殖分化的影响

[目的]探讨雌激素相关受体α(ERRα)特异性抑制剂XCT-790对成骨细胞增殖分化的影响.[方法]采用CCK-8试剂检测XCT-790对细胞活力的影响,茜素红染色检测XCT-790对成骨细胞矿化能力的影响,流式细胞仪检测XCT-790对细胞内游离钙离子浓度的影响.[结果]XCT-790可显著降低成骨细胞的活力(P<0...     

牛蒡子苷对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响及其作用机制

【目的】探讨牛蒡子苷(arctiin)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖、分化的影响及其作用机制。【方法】采用不同浓度牛蒡子苷作用于3T3-L1前脂肪细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞增殖的影响;油红O染色及分光光度法分析脂肪细胞的分化程度;实时荧光定量PCR检测细胞过氧化物酶增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators activatedreceptorγ,PPARγ)和CCAAT/增强子结合蛋白α(CCTTA enhancer binging proteinα,C/EBPα)的表达情况。【结果】牛蒡子苷对3T3-L1细胞增殖无显著性影响(P>0.05),但可显著抑制3T3-L1前脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化(P<0.05或P<0.01),且呈一定剂量依赖关系;与空白对照组比较,牛蒡子苷可显著降低PPARγmRNA、C/EBPαmRNA表达水平(P<0.05或P<0.01)。【结论】牛蒡子苷能抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化,其机制可能与其能抑制脂肪细胞分化相关调控因子PPARγ和C/EBPα的表达有关。     

肾康丸对体外大鼠系膜细胞增殖、细胞外基质分泌和细胞周期的影响

【目的】观察肾康丸对体外高糖培养的大鼠系膜细胞(MC)增殖、细胞外基质分泌(ECM)和细胞周期的影响。【方法】将16只Wistar雄性大鼠随机分为4组,即正常血清组,开博通组(剂量为5 mg/kg),肾康丸高、低剂量组(剂量分别为2.4、1.2 g/kg),灌服相应药物7 d,分离制备药物血清。将体外高糖(30 mmol/LGlu)培养的MC分为5组:高糖模型组(30 mmol/LGlu),正常血清组(体积分数5%正常血清),开博通组(体积分数5%开博通含药血清)及肾康丸高、低剂量组(体积分数5%肾康丸高、低剂量含药血清),另设低糖模型组(10 mmol/LGlu)。培养72 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定各组细胞增殖,双抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清纤维连接蛋白(FN)含量,流式细胞仪检测细胞周期。【结果】高糖培养的MC显著性增殖,上清FN含量显著性增加,并出现细胞周期异常,肾康丸能抑制MC增殖,减少FN分泌,并使G0/G1期细胞比例显著性增加,而S期及G2/M期细胞比例减少。【结论】肾康丸可通过调整MC细胞周期异常,进而抑制高糖诱导的MC增殖和ECM分泌。     

雷公藤甲素对外周血单个核细胞分泌促炎、抑炎细胞因子的影响

【目的】探讨雷公藤甲素(triptolide A,TA)对健康人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)分泌促炎、抑炎细胞因子的影响。【方法】分离培养健康人PBMC,采用脂多糖(LPS,终浓度为1μg/mL)或LPS 植物血凝素(PHA,终浓度为25μg/mL)刺激培养细胞,并给予TA(终浓度为5.4 ng/mL)处理,收集培养上清液,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测上清液中肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor-,αTNF-α)、白介素4(interleukin-4,IL-4)、白介素10(interleukin-10,IL-10)的含量。【结果】TA能抑制LPS或LPS PHA刺激的PBMC分泌TNF-α和IL-10,且对正常人PBMC分泌IL-10的抑制作用强于对TNF-α的抑制作用,但对IL-4的分泌无显著性影响。【结论】雷公藤甲素可不同程度地抑制促炎性细胞因子TNF-α及抑炎性细胞因子IL-10,使促炎、抑炎两种作用趋于平衡。     

人参皂苷对Aβ25-35蛋白诱导的老年性痴呆体外模型NG108-15神经元细胞凋亡的抑制作用

【目的】探讨在以NG108-15细胞作为神经元代表、β-淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默病体外细胞模型中,人参皂苷Rg1保护神经元的作用及其机制。【方法】采用倒置显微镜观察细胞形态,结合流式细胞仪检测凋亡率,进行Aβ25-35造模浓度与时间的选择以及Rg1预处理最佳浓度时间的选择;在此基础上,采用荧光显微镜和数据处理系统(DMR)图像分析仪检测免疫细胞化学法标记的核因子-κB(NF-κB)的活性;采用免疫组化染色法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达;采用酶标光度计、半胱氨酸/天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)比色检测试剂盒检测caspase-3活性。【结果】20μmol/L Aβ25-35作用24 h可诱导NG108-15细胞凋亡,2μmol/L Rg1组的NF-κB活性与模型组比较显著性提高(P<0.01),Rg1预处理组Bcl-2表达呈阳性,且caspase-3活性较模型组显著性降低(P<0.01)。【结论】高浓度聚焦状的Aβ25-35可下调神经元内NF-κB的活性,诱导细胞凋亡,Rg1通过启动神经元中NF-κB的活化从而上调Bcl-2表达,抑制caspase-3活性而发挥保护神经元的作用。     

亚砷酸对人肺腺癌细胞的体外抑制作用及机制研究

【目的】探讨中药砒霜有效成分亚砷酸的体外抑瘤作用及机理。【方法】以体外培养的人肺腺癌细胞株(LAC)细胞为研究对象,选用对数生长期细胞,培养24 h后,分别加入不同浓度的亚砷酸(0.75、1.0、1.5、2.0 mg/L),并设模型对照组;采用倒置相差显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测LAC细胞的生长抑制率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测p53基因的表达变化情况。【结果】各浓度亚砷酸均能使LAC细胞发生凋亡特征性形态改变,能显著性抑制LAC株的增殖,且呈现一定的时间效应关系,并能显著性升高p53基因的含量(均P<0.05或P<0.01)。【结论】亚砷酸抗肺癌的作用可能是通过上调p53基因的表达来诱导LAC肿瘤细胞凋亡,从而抑制LAC细胞的增殖,这可能也是中药砒霜能治疗肿瘤的机理之一。     

银屑灵全方及拆方对角质形成细胞HaCaT增殖的影响

[目的]观察银屑灵全方及拆方时角质形成细胞HaCat增殖的影响,寻找银屑灵的有效组成.[方法]采用正交试验法将银屑灵全方拆分为12个组合方,选用脂多糖(LPS)为刺激因子,建立人角质形成细胞HacaT体外过度增殖模型,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测银屑灵全方及各拆方组不同浓度及作用时间对HacaT细胞增殖的影响.[...