肿瘤全抗原激活的树突状细胞体外肿瘤的杀伤实验

目的:树突状细胞是功能最强的抗原提呈细胞,能够向T淋巴细胞有效地提呈抗原,发挥特异性的杀伤肿瘤的作用,本实验主要观察树突状细胞的体外抗癌作用。方法:实验于2002-03/2003-03在华北煤炭医学院完成。选取华北煤炭医学院健康志愿者30例,抽取外周血10mL,分离出外周血单个核细胞。联合应用重组人集落细胞刺激因子和重组人白细胞介素-4诱导外周血单个核细胞7d后获取树突状细胞。以肺癌细胞系CALU-6肿瘤细胞全抗原负载的树突状细胞和重组人白细胞介素-2联合活化自体混合T淋巴细胞,使其增殖为树突状细胞活化的杀伤细胞;体外观察树突状细胞活化的杀伤细胞及其培养上清对肿瘤细胞的杀伤活性,并检测不同的树突状细胞对其活化的杀伤细胞杀伤活性的影响。结果:①10mL健康人外周血单个核细胞经重组人集落细胞刺激因子和重组人白细胞介素-4联合培养7d收获的树突状细胞数量为(1.88±0.77)×106个。②树突状细胞活化的杀伤细胞其细胞表型CD8阳性率明显增加。③树突状细胞活化的杀伤细胞对于肿瘤细胞全抗原来源的肺癌细胞系CALU-6肿瘤细胞有明显的特异性杀伤作用。④树突状细胞浓度适中,其活化的杀伤细胞的杀伤肿瘤细胞的能力最强,树突状细胞浓度过高或过低,其活化的杀伤细胞的杀伤力均减弱。⑤树突状细胞活化的杀伤细胞上清液有一定的杀伤活性,并且随着树突状细胞浓度的降低而降低。结论:负载抗原的树突状细胞能诱导自体的混合T淋巴细胞,产生树突状细胞活化的杀伤细胞进而诱导高效而特异性的抗肿瘤免疫作用。树突状细胞诱导的抗肿瘤免疫与其浓度有关,呈双向调节作用。     

自身抗原激活的树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞过继免疫治疗晚期前列腺癌的临床研究

目的 探讨自身癌细胞抗原(Ag)激活的树突状细胞(DC)联合细胞园子诱导杀伤细胞(CIK)在晚期前列腺癌免疫治疗中的临床疗效.方法 回顾性研究48例诊断明确且不再适宜手术或放化疗的晚期激素难治性前列腺癌(HRPC)患者,配对分成两组:对照组24例,接受内科保守治疗;免疫组24例,同时给予内科治疗和Ag-DC-CIK过继...     

树突状细胞

有关树突状细胞在肿瘤及白血病生物治疗中作用的基础和临床研究作为该领域的研究热点受到越来越多学者的重视。近年来关于ＤＣ来源,分布,分离纯化及体外扩增,特别是作为抗原呈递细胞参与免疫系统细胞毒性Ｔ细胞抗肿瘤作用方面的研究取得了一定进展,提示ＤＣ在临床肿瘤治疗中可能具有很大的潜力。     

负载抗原DC-CIK细胞对NDV修饰抗原胃癌细胞杀伤作用

目的探讨负载SGC-7901细胞抗原的DC-CIK细胞对新城疫病毒（NDV）修饰SGC-7901细胞的杀伤作用,探索胃癌新的治疗方法。方法取健康成人外周血分离单个核细胞,用于诱导培养树突状细胞（DC）及细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）。用反复冻融法制备胃癌细胞抗原,用于致敏DC细胞。然后分以下4组进行试验：CIK组、DC-CIK组、CIK＋NDV组、DC-CIK＋NDV组,同时设单独的靶细胞对照（SGC-7901）和效应细胞对照（CIK、NDV、DC-CIK）。并与化疗药（氟尿嘧啶、顺铂）对SGC-7901细胞的杀伤作用进行比较。结果用NDV修饰抗原后,无论是CIK细胞还是DC-CIK细胞对SGC-7901细胞的杀伤率均增高。其中负载胃癌细胞抗原的DC-CIK细胞杀伤率最高,效靶比为20∶1时,达到83.4%。化疗药物作用48 h时的疗效也不如单纯CIK细胞作用24 h的疗效。结论负载SGC-7901细胞抗原的DC-CIK细胞对经NDV修饰抗原的SGC-7901细胞的杀伤效果最佳。胃癌的生物治疗效果优于普通化疗。     

脐血来源树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表型鉴定及其特异性杀伤效应

目的:观察从脐血中提取的树突状细胞负载热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物的细胞表面表型特点及其所激活的细胞毒T淋巴细胞的杀伤活性。方法:实验于2003-10/2005-12在解放军军事医学院兽医研究所完成。①脐血来源于长春市妇产医院足月顺产的非高危妊娠产妇,要求无急慢性感染及血液系统疾病,产妇及其家属均签署知情同意书。热休克蛋白70由本室制备纯化。人骨肉瘤细胞Saos-2(北京肿瘤研究所,批号222RXB013538)。②封闭式采集脐带血,体外分离脐血单个核细胞,调整浓度为1×109L-1,接种于24孔细胞培养板,每孔均加入100μg/L人重组粒-巨噬细胞集落刺激因子、50μg/L白细胞介素4、10μg/L肿瘤坏死因子α。培养14d后,鉴定细胞表面CD1a、HLA-DR的百分率。③用含胎牛血清的IMDM培养Saos-2骨肉瘤细胞至对数生长期,胰酶消化后调整细胞数为5×107L-1。集传20代生长的Saos-2,冻融2次,低渗震荡,离心,上清用盐酸调pH至7.0,过滤后即为肿瘤抗原肽,与热休克蛋白70体外结合。④另取脐血40mL,分离T淋巴细胞,诱导分化至第4天,加入热休克蛋白70-肿瘤抗原肽100μL,促使T淋巴细胞活化为细胞毒T淋巴细胞。⑤效应细胞(细胞毒T淋巴细胞)与靶细胞(Saos-2)按效靶比50∶1,25∶1,12.5∶1,6.25∶1,3.125∶1梯度,四甲基偶氮唑盐法检测细胞毒T淋巴细胞杀伤活性。结果:①细胞形态学观察:细胞因子诱导后第3天,镜下脐血细胞呈均匀散布的细胞聚体,胞体拉长;第7天可见不明显突起;第14天出现具有典型树枝状突起的树突状细胞。②细胞因子诱导后脐血单核细胞表面表型鉴定结果:经细胞因子诱导后,脐血单核细胞CD1a与HLA-DR表达率均较诱导前明显升高[0,(18.43±3.26)%;(4.03±1.66)%,(59.69±8.47)%;P均<0.01]。③细胞毒T淋巴细胞杀伤活性检测结果:培养72h后,细胞毒T淋巴细胞与靶细胞Saos-2效靶比为50∶1时可杀伤决大部分肿瘤细胞,杀伤率为(97.50±11.24)%,效靶比从50∶1至3.125∶1可使靶细胞Saos-2生长呈梯度受到不同程度的抑制。单纯的树突状细胞及未经激活的T淋巴细胞对Saos-2细胞仅有微弱的生长抑制作用。结论:脐血来源的树突状细胞经过热休克蛋白70-肿瘤抗原肽复合物负载致敏后,激活的细胞毒T淋巴细胞对人骨肉瘤细胞Saos-2具有极强的杀伤能力。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对胃癌细胞的杀伤作用的实验研究

目的 研究细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）与树突状细胞（DC）共培养后CIK-DC的抗胃癌细胞活性.方法 正常人外周血单个核细胞诱导培养DC和CIK细胞,再将DC与CIK混合共培养,用台盼蓝活细胞计数计算细胞活率,流式细胞术分析免疫表型.将CIK-DC与胃癌细胞混合,使用MTT法测定对胃癌细胞的杀伤活性.结果 DC、CIK细胞共培养后,与胃癌细胞10：1 ～50：1混合的靶效比范围内,CIK-DC对胃癌细胞的杀伤率显著高于单独的CIK细胞（P＜0.05）,杀伤率与效靶比有关.结论 CIK-DC的抗胃癌细胞活性高于CIK细胞,是细胞免疫治疗非常有前景的治疗方法.     

树突细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞对耐药K562细胞的体外杀伤作用

目的研究细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞与同源树突细胞(DC)共培养后CIK细胞的增殖活性及表型的变化,并观察其对K562、K562/ADM细胞毒作用的影响。方法采集健康供者外周血单个核细胞(MNC)用于诱导培养CIK细胞及成熟DC,将成熟DC和CIK细胞混合培养,用MTT法检测DCCIK共培养细胞杀伤K562细胞及其耐药株的活性。结果在2.5～20.0效靶比范围内,CIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(20.0±1.2)%～(61.1±2.2)%和(17.5±2.1)%～(45.2±3.3)%;DCCIK共培养细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤率分别为(25.2±2.3)%～(70.9±4.1)%和(22.4±2.7)%～(62.3±5.0)%。CIK细胞对K562敏感株和耐药株杀伤率的差异无统计学意义,DCCIK细胞对敏感株和耐药株的杀伤作用差异亦无统计学意义;DCCIK细胞对K562和K562/ADM细胞的杀伤活性均高于单纯CIK细胞组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DC与CIK共培养细胞的增殖活性和细胞毒活性高于CIK细胞。     

树突细胞为基础的肿瘤免疫治疗策略

树突状细胞（Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｓ）是专职的抗原提呈细胞（ＤＣ）,在宿主的免疫反应中起着重要作用。不同的肿瘤存在肿瘤相关抗原（ＴＡＡ）,肿瘤自发性消失的出现证明了特异性抗肿瘤免疫的存在,但绝大多数恶性肿瘤呈进行性生长又表明免疫机制不能完全有效地保...     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗肿瘤的研究进展

肿瘤的过继细胞治疗是肿瘤生物治疗中最活跃的研究领域之一,细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在肿瘤的治疗中逐渐成为焦点。CIK细胞是一群异质性细胞群,由多种细胞因子共同作用诱导而来,因其强大的增殖活性和杀瘤活性,非MHC限制性及低毒副作用等优点,自发现就得到了广泛的关注。目前CIK细胞已经用于恶性肿瘤的治疗,并有望成为恶性肿瘤综合治疗的新方向。本文就CIK的表型、扩增、抗肿瘤作用机制、临床应用和副作用等方面的进展作一综述。     

高强度聚焦超声制备抗原致敏树突状细胞及其诱导细胞毒性T淋巴细胞杀伤效应的研究

目的 探讨高强度聚焦超声(HIFU)制备抗原致敏树突状细胞(DC)及其诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤效应.方法 应用小鼠重组GM-CSF和IL-4培养小鼠骨髓DC,用HIFU制备CT26肿瘤细胞抗原致敏DC疫苗,用3H-TdR法检测T细胞增殖反应的能力,标准的4 h 51Cr 释放测定法检测CTL杀伤活性.结果 HIFU组、肿瘤细胞冻融组、肿瘤上清组和PBS组的DC在体外均可以诱导CTL增殖,但HIFU组、肿瘤细胞冻融组的DC体外诱导CTL增殖能力明显高于肿瘤上清组和PBS组(P＜0.05).HIFU组和肿瘤细胞冻融组DC体外诱导的CTL对CT26结肠癌均有明显的细胞毒性作用,与肿瘤上清组DC和PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05),HIFU组体外诱导的CTL杀伤活性与肿瘤细胞冻融组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HIFU制备抗原致敏DC可以诱导CTL大量增殖,并能诱导出杀伤效应较强的CTL.     

高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞

目的:探讨用高强度聚焦超声辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞的可行性,为高强度聚焦超声开辟新的应用领域。方法:实验于2004-01/2005-04在泰安市中心医院中心实验室完成。①实验材料:BALB/C清洁级小鼠20只。CT-26肿瘤细胞为BALB/C小鼠来源的结肠癌细胞,由解放军第二军医大学免疫学研究所惠赠。②实验方法:应用白细胞介素4 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子联合诱导培养小鼠骨髓细胞。设立4组:高强度聚焦超声辐照组将CT-26细胞置于含10%小牛血清的RPMI1640培养液中,进入对数生长期后调整细胞浓度为5×109L-1,采用1000W/cm2×30s剂量辐照CT-26细胞,离心,取上清过滤除菌。冻融组将CT-26细胞调整浓度至5×109L-1,-80℃冷冻,35℃水浴复温,循环4次,裂解离心,取上清过滤除菌。单纯CT-26细胞组将CT-26细胞调整浓度至5×109L-1,细胞不经其他任何处理。空白对照组将树突状细胞与抗原按1∶10接种,培养4～6h。从小鼠脾脏制备脾细胞,分离纯化T细胞,调整浓度至2×109L-1,T细胞与上述4组负载的树突状细胞按20∶1接种,培养基中加入白细胞介素2,共孵育48h。③实验评估:对扩增培养的树突状细胞首先进行形态学观察,再采用流式细胞仪分析细胞表型。锥虫蓝染色观察高强度聚焦超声辐照后CT-26细胞拒染率和形态学变化。ELISA法检测各组致敏树突状细胞诱导T细胞分泌白细胞介素12及干扰素-γ的含量。结果:①骨髓源性树突状细胞形态及细胞表面表型分析:体外培养小鼠骨髓细胞6～8d,细胞表面出现较多毛刺样突起,拉长,为典型的树突状细胞特征。流式细胞仪检测树突状细胞表面分子CD80、CD86、H-2Kd及I-Ad呈高表达。②高强度聚焦超声辐照后细胞拒染率和形态学的变化:超声辐照剂量为1000W/cm2×30s时,无细胞存活,完全失去细胞形态,全部被撕裂成碎片。③致敏树突状细胞诱导T细胞分泌细胞因子情况:与空白对照组比较,高强度聚焦超声辐照组、冻融组、单纯CT-26细胞组分泌的白细胞介素12及干扰素-γ含量均明显升高(P均<0.05);且高强度聚焦超声辐照组、冻融组升高幅度大于单纯CT-26细胞组,但此两组比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:高强度聚焦超声能使肿瘤细胞灭活、破碎,其制备的肿瘤抗原可体外致敏树突状细胞,并使树突状细胞分泌白细胞介素12,诱导T细胞分泌干扰素-γ。     

负载肿瘤抗原的DC疫苗体外诱导的特异性抗膀胱癌效应研究

目的探讨负载膀胱癌抗原成分树突状细胞（dendritic cells,DC）疫苗的制备和体外诱导T淋巴细胞特异性杀伤膀胱癌细胞的作用。方法冻融法制备EJ细胞裂解物抗原成分,体外培养的人外周血单个核细胞（hu-PBMC）在rhGM-CSF、rhIL-4、TNF-α诱导下分化出DC,负载EJ细胞裂解物抗原后制备膀胱癌DC疫苗;免疫磁珠分离法从人免疫重建Balb/c裸小鼠脾脏组织中分离CD3＋T淋巴细胞,3H-TdR掺入试验测定DC疫苗刺激自体T淋巴细胞增殖的能力,51Cr释放试验检测DC疫苗诱导的T细胞对EJ细胞的杀伤作用。结果 Hu-PBMC在细胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的刺激下分化为成熟DC,负载EJ抗原的DC疫苗体外可使同源T淋巴细胞活化,增殖指数增加,活化的T淋巴细胞对EJ细胞的杀伤率为（62.58±6.13）%,和对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论负载膀胱癌冻融抗原的DC疫苗体外可诱导人T淋巴细胞活化增殖,对EJ细胞有明显的杀伤作用。     

Comparative analysis of antigen loading strategies of dendritic cells for tumor immunotherapy

Dendritic cells (DCs) loaded with antigens can effectively stimulate host immune responses to syngeneic tumors, but there is considerable controversy as to which forms of antigen-loading are most immunogenic. Here, the authors compared immunotherapeutic reactivities of DCs loaded with a variety of antigen preparations. Because DC maturation stages affect their capacities of antigen processing and presentation, two DC populations were used for the current analysis: in vivo Flt-3 ligand-induced mature DCs and in vitro bone marrow-derived DCs, which were less mature. To facilitate a direct comparison, the LacZ gene-transduced B16 melanoma model system was used, where beta-galactosidase served as the surrogate tumor-rejection antigen. DC loading strategies included pulsing with the beta-galactosidase protein, H-2K restricted peptide, tumor cell lysate, and irradiated tumor cells and fusion of DCs with tumor cells. Our results demonstrated that electrofusion of DCs and tumor cells generated a therapeutic vaccine far superior to other methods of DC loading. For the treatment of 3-day established pulmonary tumor nodules, a single intranodal vaccination plus IL-12 resulted in a significant reduction of metastatic nodules, while other DC preparations were only marginally effective. Immunotherapy mediated by the fusion cells was tumor antigen-specific. Consistent with their therapeutic activity, fusion hybrids were the most potent stimulators to induce specific IFN-gamma secretion from immune T cells. Furthermore, fusion cells also stimulated a small amount of IL-10 production from immune T cells. However, this IL-10 secretion was also induced by other DC preparations and did not correlate with in vivo therapeutic reactivity.     

奥美沙坦对大鼠树突细胞抗原递呈功能作用的研究

目的:探讨奥美沙坦对大鼠树突细胞（dendritic cells,DCs）抗原递呈功能的影响。方法:取雌性Lewis大鼠髓源DCs,加入奥美沙坦（终浓度10 μmol/L）和等体积的DMSO,分别记为奥美沙坦修饰的DCs（olmesartan modified dendritic cells,OLM-DCs）和未经奥美沙坦修饰的DCs（control DCs,Con-DCs）。使用流式细胞仪分别测定DCs表面CD80、CD86和MHC Ⅱ平均荧光强度（mean fluorescence intensity, MFI）及DCs中IL-10和TGF-β的表达。OLM-DCs和Con-DCs分别与卵白蛋白（OVA）致敏的淋巴结CD4 + T细胞共培养,流式细胞仪检测T淋巴细胞增殖,ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ、IL-10水平。 结果:奥美沙坦抑制了DCs表面MHC Ⅱ分子的表达,促进了IL-10的产生。与Con-DCs组比较,OLM-DCs抑制了T淋巴细胞增殖反应和IFN-γ的产生。结论:在体外,奥美沙坦能够诱导产生耐受性DCs,后者能够抑制T淋巴细胞增殖、抑制Th1细胞因子的水平。     

高强度聚焦超声制备肿瘤抗原致敏树突状细胞及其体外诱导T细胞产生IFN-γ的研究

目的 探讨采用高强度聚焦超声（HIFU）辐照肿瘤细胞制备肿瘤抗原致敏树突状细胞（DD）和制备DD肿瘤疫苗的可行性。方法 （1）采用1ng／ml IL-4和10ng/ml GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞产生DC，并用流式细胞仪检测DC的CD80、CD86、H-2K^d和I-A^d表达情况；（2）固定辐照时间或超声声强，应用不同声强或辐照时间的HIFU辐照CT26细胞株后，用台盼蓝染色、MTT法检测活肿瘤细胞数，同时用台盼蓝染色观察肿瘤细胞的形态学变化，分析HIFU剂量与肿瘤细胞存活率的关系，了解剂量-效应关系；（3）固定辐照时间和超声强度，HIFU辐照CT26细胞悬液，制备肿瘤细胞抗原并致敏DC，致敏DC与T细胞共孵育48h后提取上清液，通过ELISA法检测上清中IL-12、γ干扰素（IFN-γ）的含量，并与冻融组、单纯CT26、对照组进行比较。结果 （1）采用IL-4和GM-CSF联合诱导小鼠骨髓细胞可培养出典型的DC；（2）固定辐照时间，随着HIFU辐照剂量的增加肿瘤细胞的存活率迅速减少，肿瘤细胞的碎片逐渐增多，当声强为1000W／cm^2，辐照30s时，无细胞存活，肿瘤细胞失去正常形态，全部被撕裂成碎片；（3）通过ELISA法检测HIFU、冻融及单纯CT26组上清液中IL-12、IFN-γ的含量显著高于对照组（P均〈0．05），HIFU及冻融组上清液中IL-12、IFN-γ的含量高于单纯CT26组（P均〈0．05），但HIFU、冻融组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 HIFU能灭活肿瘤细胞并能使肿瘤细胞破碎，HIFU制备的肿瘤抗原可体外致敏DC，并可使DC成熟分泌大量IL-12，同时诱导T细胞分泌大量IFN-γ。     

人外周血单核细胞来源树突状细胞转染重组腺相关病毒诱导特异性T细胞的效应

目的:观察人外周血单核细胞来源的树突状细胞转染含前列腺特异性抗原片段的重组腺相关病毒后,其所诱导的特异性T细胞对前列腺癌细胞株LNCaP和DU145的体外杀伤抑制作用。方法:实验于2006-05/10在南方医院肿瘤科生物室完成。①对象:HLA-A2基因亚型的健康自愿供血者1名,对本实验知情同意,实验经医院医学伦理委员会批准。作为靶细胞的前列腺癌细胞株LNCaP、DU145以及携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒由美国阿肯色大学生物治疗中心刘勇教授惠赠。②实验方法:抽取HLA表型为A2的健康自愿供血者外周血50mL,Ficoll法分离单核细胞体外培养,磷酸盐缓冲液洗涤6孔板,收集悬浮细胞作为效应T细胞,贴壁细胞即为树突状细胞。向6孔板内加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒,第4天加入白细胞介素4,第6天加入肿瘤坏死因子α,至培养第7天收获悬浮细胞即为成熟的树突状细胞。③实验评估:应用流式细胞仪检测树突状细胞表面分子标记的表达。以ELISA法检测树突状细胞分泌白细胞介素12的含量。将成熟树突状细胞与效应T细胞分别按1:10、1:20、1:40进行共培养,将未经过树突状细胞共育的T细胞设置为空白对照组,ELISA法检测效应T细胞分泌干扰素γ的含量。LNCaP、DU145靶细胞分别与效应T细胞按效靶比5:1、10:1、20:1、40:1进行共培养,MTT法检测效应T细胞对两种靶细胞的杀伤作用。结果:①树突状细胞表面分子标记的表达:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒致敏后的树突状细胞,培养8d后高表达CD83.CD40.HLA-DR,CD80,CD1a,CD86,分别为65.8%,66.0%,96.7%,70.0%,61.9%.79.0%。②树突状细胞释放白细胞介素12含量检测:与培养第1天比较,第7天成熟树突状细胞释放白细胞介素12的含量显著升高(P<0.05)。③效应T细胞释放干扰素γ含量检测:与空白对照组比较,树突状细胞:T细胞按1:10、1:20、1:40共培养后所释放的干扰素γ含量均明显升高(P<0.01.0.01,0.05),且随树突状细胞加入比例的提高有所增加。④效应T细胞的细胞毒性作用检测:效应T细胞可有效识别并杀伤HLA-A2阳性的LNCaP细胞,其抑制作用在效靶比为10:1、20:1、40:1时均显著强于DU145细胞株(P<0.01)。结论:经携带前列腺特异性抗原基因的重组腺相关病毒转染后的树突状细胞,其细胞表型和刺激淋巴细胞增殖、分化的功能无明显改变,可诱导自体效应T细胞增殖,该效应T细胞对LNCaP细胞具有明显杀伤作用。     

The effect of dendritic cells activated by OK-432 and pulsed with antigens on cytokine induced killers.

AIM: To study the effect of OK-432 on the maturation and function of human peripheral blood monocyte-derived dendritic cells, and the effect of these dendritic cells on the proliferation and anti-tumor function of cytokine induced killers. METHODS: Through the analysis of DCs' surface molecules, the detection of the proliferation and anti-tumor function of CIKs activated by DCs, we researched the influence of OK-432 on DCs and CIKs. RESULTS: OK-432 have the potential of promoting DCs to express CD1a, CD80, CD83, HLA-DR highly, which is stronger than LPS; DCs activated by OK-432 can facilitate the proliferation and function of CIKs. CONCLUSION: OK-432 can induce DCs' maturation and can thus promote CIKs' functions.     

Induction of CD4(+) T cell-dependent antitumor immunity by TAT-mediated tumor antigen delivery into dendritic cells

Dendritic cell-based (DC-based) immunotherapy represents a promising approach to the prevention and treatment of many diseases, including cancer, but current strategies have met with only limited success in clinical and preclinical studies. Previous studies have demonstrated that a TAT peptide derived from the HIV TAT protein has the ability to transduce peptides or proteins into various cells. Here, we describe the use of TAT-mediated delivery of T cell peptides into DCs to prolong antigen presentation and enhance T cell responses. While immunization of mice with DCs pulsed with an antigenic peptide derived from the human TRP2 protein generated partial protective immunity against B16 tumor, immunization with DCs loaded with a TAT-TRP2 peptide resulted in complete protective immunity, as well as significant inhibition of lung metastases in a 3-day tumor model. Although both DC/TRP2 and DC/TAT-TRP2 immunization increased the number of TRP2-specific CD8(+) T cells detected by K(b)/TRP2 tetramers, T cell activity elicited by DC/TAT-TRP2 was three- to tenfold higher than that induced by DC/TRP2. Furthermore, both CD4(+) and CD8(+) T cells were required for antitumor immunity demonstrated by experiments with antibody depletion of subsets of T cells, as well as with various knockout mice. These results suggest that a TAT-mediated antigen delivery system may have important clinical applications for cancer therapy.