卵巢和输卵管

051702RLF mRNA在不同阶段大鼠卵巢中的表达/程丹玲…∥哈尔滨医科大学学报·—2005,39(1)·—4~13本实验采用RT-PCR方法检测松驰素样因子(RLF)在啮齿类动物的正常卵巢中有无表达并探讨其与卵巢功能的关系,对RLF在大鼠卵巢动情周期、假孕模型中的表达进行研究。结果在成年大鼠整个动情周期中都有RLF的表达,RLF的表达强度在动情前期、动情期卵巢较强,动情间期和动情后期卵巢较弱;未成年大鼠,激素处理使卵泡发育至窦前期、排卵前期时,RLF呈持续的可表达,在黄体早期RLF的表达明显升高,而黄体中期、黄体晚期中RLF表达下降。作者认…     

转录因子Ets-1在大鼠动情周期卵巢中的表达

目的检测转录因子Ets-1在大鼠动情周期卵巢组织中的表达规律，探讨其在卵泡发育、黄体形成及退化中的作用。方法分别在动情周期的不同时期收集大鼠卵巢标本，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组化的方法观察Ets-1 mRNA在大鼠动情周期各不同时期表达水平的差异，以及Ets-1蛋白在大鼠动情周期卵巢组织中的表达分布情况。结果RT—PCR结果显示，Ets-1 mRNA在大鼠动情周期各不同时期均有表达，卵泡发育过程中Ets-1 mRNA表达逐渐增强，在动情前期表达最强，动情后期最弱；免疫组化结果显示，Ets-1蛋白在卵巢各级卵泡和黄体中表达，主要表达于卵母细胞、颗粒细胞和黄体细胞。结论Ets-1可能在大鼠动情周期中的卵泡发育、黄体生成及退化过程中起着重要的调节作用。     

大鼠运动性动情周期抑制时卵巢结构的研究

以动情周期正常的纯系ＳＤ雌性大鼠为对象进行大负荷游泳训练。当动情周期被抑制时，取双侧卵巢，用中性福尔马林固定，石蜡切片，ＨＥ染色。研究动情周期抑制后卵巢中卵泡的生长发育、排卵及黄体形成等变化。结果：动情周期抑制组大鼠卵巢中新鲜黄体占黄体总数的百分比明显低于对照组（Ｐ＜０．０５）；而囊状卵泡占全体卵泡的百分比２组无明显差异（Ｐ＞０．０５）。结果提示，大负荷运动不影响卵泡的发育。但对卵泡的成熟与排卵则有较大影响。     

生长期大鼠卵巢RLF mRNA的表达

目的：观察RLFmRNA在生长期大鼠卵巢中的表达，初步探讨RLF与卵泡发育的关系。方法：组织切片用苏木素-伊红（HE）染色，显微镜下观察卵泡发育情况；用逆转录聚合酶链方法（RT-PCR）观察RLFmRNA的表达趋势。结果：随着生长发育未成年大鼠大鼠卵巢中RLFmRNA的表达逐渐增强，青春前期达到高峰。结论：RLF可能参与雌性大鼠卵泡的发育过程。     

长爪沙鼠动情周期血清激素水平与卵泡发育的动态研究

目的研究长爪沙鼠动情周期血清催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、促卵泡利激素(FSH)和雌二醇(E2)水平和卵泡黄体数量的变化。方法采用直接镜检法确定长爪沙鼠的动情周期,以ELISA法测定长爪沙鼠血清PRL、E2、FSH和LH水平,并观察动情周期各时相各级卵泡和黄体数量的变化情况。结果直接镜检法计数角化细胞统计阴道脱落细胞的类型及比例,确定长爪沙鼠动情周期的四个时相,发现长爪沙鼠动情周期各级卵泡数量各时相间均差异未见显著性。动情间期黄体数量较其他各时相显著减少(P0.05)。血清PRL和LH水平从动情前期至动情间期逐渐增高,至动情间期达峰值(P0.05),而血清E2和FSH水平均在动情前期最高(P0.05),在动情间期达到最低。结论长爪沙鼠动情周期各时相卵泡和黄体数量与各时相激素的变化密切相关,动情周期各时相卵泡数量差异未见显著性。动情周期中出现的血清FSH和E2峰值的时相与小大鼠一致,而PRL和LH出现峰值的时相与大小鼠有差异,为长爪沙鼠生殖生理特性的进一步研究提供了参考。     

内皮素—1在大鼠卵巢内的分布

在研究用免疫细胞化学的方法观察了内皮素-1（endothelin-1,ET-1）在大鼠卵巢内的分布。结果：在未成年大鼠卵巢可见到ET-1免疫染色阳性颗粒分布在卵泡的外周膜细胞；成年动情前期大鼠卵巢ET-1阳性颗粒主要分布在卵泡或黄体周围的膜细胞，亦分布在卵泡血管内皮细胞中；假孕大鼠和妊娠大鼠卵巢可观察到ET-1免疫染色阳性颗粒分布在膜细胞和黄体中央腔内，妊娠10d大鼠卵巢内膜细胞染色的阳性反应较妊娠5d的大鼠显著增强，黄体中央腔内染色呈较强的阳性反应，提示ET-1可能参与卵泡发育、卵巢颗粒细胞机能和黄体退化过程的调控。     

动情后期应用米非司酮对大鼠下丘脑弓状核和垂体β-内啡肽的影响

目的:探讨动情后期应用米非司酮对大鼠下丘脑弓状核和垂体β-内啡肽(β-EP)的影响. 方法:选择动情周期为4 d的大鼠40只,随机分为正常对照组(NC)和动情后期给药组(AM)各20只,采用免疫组化方法观察用药后的预期间情期和动情前期大鼠下丘脑弓状核和垂体β-EP的变化,以及卵巢和子宫内膜的形态学改变. 结果:①弓状核β-EP细胞计数显示:用药后在随后的预期间情期β-EP细胞数量高于对照组间情期数量(P<0.01),在随后的预期动情前期β-EP细胞数量亦高于对照组动情前期数量(P<0.01). ②垂体前叶β-EP细胞计数:用药后在随后的预期间情期β-EP细胞数量高于对照组间情期数量(P<0.05),在随后的预期动情前期β-EP细胞数量亦高于对照组动情前期数量(P<0.01). ③卵巢形态学变化:对照组间情期卵巢可见多个发育中的卵泡,直径较小,动情前期有数目较多的发育成熟的卵泡;动情后期给药组,在随后的预期间情期(24 h),发育中的卵泡少于对照组,直径较小,在预期的动情前期(48 h),发育卵泡仍然很少,直径较前变化不大,黄体较其他组大. ④对子宫内膜每横断面腺体数、腺腔直径、腺细胞高度和内膜厚度4参数的统计结果:动情后期给药组在随后的预期间情期(24 h),所有参数均高于对照组间情期(P<0.01);在随后的预期动情前期(48 h),所有数值均下降,子宫内膜厚度和腺细胞高度比对照组动情前期低(P<0.05);腺腔直径和腺体数与之无差异(P>0.05). 结论:动情后期单独应用米非司酮可影响大鼠下丘脑弓状核和垂体前叶β-EP神经元的数量,抑制相继的卵泡发育和延迟子宫内膜成熟. 动情后期应用米非司酮在一定剂量上影响性腺轴中枢部位,并可能进而影响卵巢和子宫内膜.     

白介素1β在大鼠卵泡发育中表达及功血宁Ⅱ号冲剂的影响*

[目的] 观察白介素1β(IL-1β)在大鼠卵泡发育过程中的表达以及功血宁Ⅱ号冲剂对其表达的影响,探讨该药促进卵泡发育诱发排卵的作用机制.[方法] 将未成年雌性大鼠随机分为模型对照组、阳性对照组和功血宁Ⅱ号高、低剂量组,分别给予蒸馏水、安坤赞育丸和功血宁Ⅱ号冲剂,14 d后皮下注射妊马血清促性腺激素(PMSG)+人绒毛膜促性腺激素(hCG)制备诱发排卵大鼠的模型.分别在卵泡发育期和排卵前期处死动物摘取卵巢,常规制备卵巢切片,免疫组化法检测各组动物卵泡不同发育时期IL-1β表达.[结果] IL-1β在模型对照组中的表达,排卵前期的阳性细胞面积、阳性面积率、积分光密度、平均光密度均显著高于卵泡发育期(P＜0.05);功血宁Ⅱ号组在卵泡发育期和排卵前期1L-1β表达的上述指标均明显高于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01),排卵前期的上述指标均明显高于相应卵泡发育期(P＜0.05或P＜0.01),其中高剂量组的作用较低剂量组和阳性对照组显著. [结论] IL-1β在大鼠卵泡发育过程中均有表达并逐渐增强.功血宁Ⅱ号冲剂能够显著提高IL-1β的表达,通过其参与卵母细胞成熟,诱导卵巢排卵因子的产生,在卵泡破裂激发排卵过程中发挥作用,促进卵泡发育诱发排卵.     

核受体NR4A1蛋白在大鼠卵泡发育中的定位及其表达规律

目的：通过研究核受体NR4A1蛋白在正常雌性SD大鼠不同卵巢功能周期和不同发育阶段卵泡及黄体细胞中的表达，推测其在卵泡发育中的生物学作用。方法：利用阴道涂片的方法，按不同的卵巢功能周期将实验大鼠24只分为四组，采集不同时期卵巢标本，采用免疫组织化学方法观察卵巢中NR4A1蛋白的定位及其表达情况。结果：NR4A1蛋白主要表达于卵巢卵泡膜细胞和黄体细胞胞质中，且在成熟卵泡卵泡膜细胞的表达量显著高于生长卵泡（P〈0．01）；在新鲜黄体细胞中表达量最高，显著高于动情前期和动情期的生长卵泡和成熟卵泡以及陈旧黄体细胞中的表达水平（P〈0．01）。结论：核受体NR4A1蛋白表达与卵泡的发育、成熟、闭锁、黄体萎缩有明显的相关性。     

内皮素－1在大鼠卵巢内的分布

本研究用免疫细胞化学的方法观察了内皮素－１（ｅｉｉｄｏｔｈｅｌｉｎ－１，ＥＴ－１）在大鼠卵巢内的分布。结果：在未成年大鼠卵巢可见到ＥＴ－１免疫染色阳性颗粒分布在卵泡的外周膜细胞；成年动情前期大鼠卵巢ＥＴ－１阳性颗粒主要分布在卵泡或黄体周围的膜细胞，亦分布在卵泡血管内皮细胞中；假孕大鼠和妊娠大鼠卵巢可观察到ＥＴ－１免疫染色阳性颗粒分布在膜细胞和黄体中央腔内；妊娠１０ｄ大鼠卵巢内膜细胞染色的阳性反应较妊娠５ｄ的大鼠显著增强，黄体中央腔内染色呈较强的阳性反应。提示ＥＴ－１可能参与卵泡发育、卵巢颗粒细胞机能和黄体退化过程的调控。     

CFTR在超排卵幼龄大鼠卵巢的分布与表达

目的探讨囊性纤维化跨膜转导调节器(CFTR)在超排卵幼龄大鼠各期卵泡和黄体中表达的变化及其意义。方法采用免疫组化和免疫印迹方法检测超排卵幼龄Wistar大鼠注射HCG前,注射HCG后24h、48h及72h卵巢中CFTR的蛋白分布与含量变化。结果CFTR在超排卵幼龄Wistar大鼠的各级卵泡颗粒细胞、黄体细胞均有表达,随着黄体期延长其表达量逐渐下降,各时段卵巢表达量比较有显著性差异。免疫印记法证实各时段卵巢中均存在特异性的、相对分子质量为170KD的CFTR条带。结论卵泡期CFTR表达可能促进卵泡中卵泡液的积聚,卵泡直径增大,利于卵泡成熟;而黄体期CFTR表达下降则可能利于黄体形成,CFTR过多表达可能导致卵泡囊肿和黄体囊肿。     

Expression of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator in Rat Ovary

The protein expression of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator （CFTR）, a cAMP-activated Cl- channel, in ovarian stimulated premature female rat ovary during a cycle of follicle development and corpus luteum formation was investigated. Animals were injected with 10 U pregnant Mare＇s serum gonadotropin （PMSG） and subsequently 10 U hCG 48 h later. Time-dependent immunohistochemistry and Western blotting experiments were performed before and 24, 48, 72 h after hCG treatment. The immunohistochemistry revealed that administration of PMSG stimulated the CFTR expression in thecal cell layer and granulosa cell layer of mature follicles 48 h post injection, coincident with the PMSG-induced peak in follicular estradiol. However, the expression of CFTR in the granulose lutein cell layer and thecal lutein cell layer was time-dependently reduced following hCG injection, in accordance with the gradually increased progestogen level during luteum corpus formation. Western blotting analysis demonstrated that rat ovarian tissue expressed the special CFTR band at 170 kD. It is concluded that cAMP-dependent Cl- channels are involved in regulation of follicle development and luteum formation.     

环磷酰胺作用下成年大鼠卵巢干细胞因子和mRNA的表达

目的 探讨化疗药物对卵巢的损伤及其可能机制.方法 将成年SD大鼠分为两组:生理盐水组和环磷酰胺组.大鼠腹腔注射环磷酰胺;8周后处死,固定一侧卵巢,连续切片,观察卵巢形态学改变并计数卵泡数目.免疫组化方法检测干细胞因子(SCF)蛋白在卵巢的表达,RT-PCR半定量法检测对侧卵巢SCFmRNA的表达.结果 环磷酰胺可引起卵巢间质的严重损害和局部纤维化的发生.SCF可表达于大鼠卵巢原始卵泡和初级卵泡的卵母细胞,次级卵泡和早期窦卵泡的颗粒细胞也可见SCF的表达.环磷酰胺组注射后8周卵泡颗粒细胞SCF蛋白显著升高,卵母细胞SCF蛋白显著减少(P＜0.05);卵巢SCF mRNA显著升高(P＜0.05).结论 SCF在化疗卵巢表达的变化有助于进一步阐释化疗药物损伤卵巢的机制.     

大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达

目的 了解转化生长因子-β超家族(TGF-βs)在调节卵泡发育过程中的信号转导模式,以探讨在不同发育阶段大鼠卵巢中Smad4蛋白及mRNA的表达。方法 选择不同发育时期大鼠卵巢,运用免疫组化方法检测卵巢中Smad4蛋白表达,并进行图像分析;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测Smad4mRNA在卵巢中的表达,以GAPDH作为内对照与特异性Smad4同时进行扩增,并计算Smad4和GAPDH的RT-PCR产物积分吸光度比值来表示Smad4mRNA的含量。结果 Smad4广泛表达于卵巢组织,但主要表达在卵泡中,其表达部位和强度随卵巢的成熟度不同而变化;在卵巢发育早期,Smad4主要在原始卵泡和窦前卵泡中表达,而在间质中的表达较弱;随着卵巢的发育成熟,Smad4在间质中的表达逐渐增强,性成熟后,在窦状及成熟卵泡颗粒细胞和卵泡膜的表达与间质细胞比较无显著差异(P>0.05)。Smad4在卵泡中的表达强度也发生了变化,即随着卵泡的发育,Smad4在窦状及成熟卵泡卵母细胞的表达明显减弱,与窦前卵泡卵母细胞比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);与窦前卵泡比较,Smad4在卵泡膜细胞的表达逐渐增强(P<0.01),而在各级卵泡颗粒细胞中的表达无显著差异(P>0.05)。RT-PCR结果显示各阶段卵巢均有mRNA的表达,从第3周起Smad4mRNA的表达明显增强,Smad4和GAPDH积分吸光度比值与出生后1 d的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 卵巢内存在Smad4,提示TGF-β家族对卵泡发育的调节是通过Smad信号转导模式实现的。     

大鼠卵巢发育过程中Smad4的表达

OBJECTIVE: To clarify the signal transduction pathway of transforming growth factor-betasuperfamily (TGF-betas) in the regulation of follicle growth by investigating the expressions of Smad4 protein and mRNA in rat ovaries in different developmental stages. METHODS: Rat ovaries of different developmental stages were obtained to determine the expression of Smad4 protein by immunohistochemistry and image analysis system, with Smad4 mRNA measured by semi-quantitative RT-PCR. Specific primers of Smad4 and GAPDH (internal control) were used for amplification by RT-PCR, and the ratios of their integrated optical densities were calculated to estimate the relative quantity of Smad4 mRNA expression. RESULTS: Smad4 protein was widely expressed in the ovary, mainly in the follicles, and the location and intensity of Smad4 expression varied with the degree of maturation of the ovary. In the early developmental stages, Smad4 protein expressed mainly in the primordial and preantral follicles, but little in the stromal cells, and its expression intensity in the stroma increased gradually in the course of ovarian maturation. After sexual maturity, Smad4 expression intensity varied only insignificantly among the granulosa cells, theca cells and stromal cells of the antral and mature follicles (P>0.05). The staining intensity of Smad4 in the follicles also underwent changes in relation with their development, being less intense in the oocytes of the antral and matured follicles as compared to the preantral follicles (P<0.05 and P<0.01, respectively) but markedly greater in the theca cells of the antral and matured follicles than in the preantral follicles (P<0.01). No significant difference in Smad4 expression was found in the granulosa cells of different developmental stages (P>0.05). RT-PCR demonstrated that Smad4 mRNA was expressed in all the developmental stages of the rat ovary; and from the 3rd week on, the integrated optical density of Smad4 and GAPDH was significantly higher than that in 1-day-old neonatal rats. CONCLUSION: The expression patterns of Smad4 protein and mRNA in rat ovary in the course of its development indicate that Smad signal transduction may play a role in the folliculogenesis.     

PCOS大鼠卵巢中 kisspeptin／kiss1r 系统的表达变化及对卵泡发育的影响

目的：对多囊卵巢综合征（PCOS）大鼠卵巢中kisspeptin／kiss1r系统的表达变化及对卵泡发育的影响进行研究。方法采用腹腔注射来曲唑构建PCOS大鼠模型,酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清中性激素水平,苏木精‐伊红（H‐E）染色检测卵巢的形态学改变,免疫组化检测卵巢中kisspeptin／kiss1r、卵泡刺激素受体（FSHR）的蛋白水平变化。结果从灌胃后第10天开始,PCOS组大鼠体重明显增加,血清中睾酮（T）、黄体生成素（LH）的水平明显升高,卵泡刺激素（FSH）水平无明显改变;大鼠卵巢皮质中含有较多的小卵泡及闭锁卵泡,多数卵泡成囊性扩张,颗粒细胞层数明显减少;卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR均在细胞质表达,kisspeptin／kiss1r主要在颗粒细胞、膜细胞和黄体中表达,而FSHR仅表达在颗粒细胞。PCOS组卵巢中kisspeptin／kiss1r、FSHR表达明显减少。结论在PCOS卵泡发育中,卵巢表达的kisspeptin／kiss1r系统发挥重要的作用,为PCOS的临床治疗和基础研究提供新思路。     

葛根素对多囊卵巢综合征大鼠卵巢转化生长因子-β1表达的影响

目的:探讨葛根素对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法:40只SD雌性大鼠采用硫酸普拉睾酮钠皮下注射建立PCOS模型成功后随机分为模型对照组,葛根素高、低剂量组[120 mg/(kg.d)、80 mg/(kg.d)],另取20只健康雌性大鼠作为空白对照组。放射免疫法测定血清雄激素(Testosterone)水平变化观察卵巢组织形态学改变及排卵情况,免疫组化法测定卵巢TGF-β1表达水平。结果:与模型对照组相比,葛根素高、低剂量组血清雄激素水平和卵巢TGF-β1表达较低,但组间比较无显著差异(P均<0.05);2组卵泡膜及间质细胞增生明显改善,卵泡颗粒细胞层数明显增多,且囊性扩张卵泡及闭锁卵泡减少,有优势卵泡和黄体形成。结论:葛根素可能通过下调卵巢局部TGF-β1表达水平从而降低PCOS大鼠雄激素水平,减轻卵巢多囊样改变。     

Localization of cystathionine β synthase in mice ovaries and its expression profile during follicular development

Background In vitro fertilization (IVF) researches have suggested that cystathionine β synthase (CBS) is involved in oocyte development. However, little is known about the regional and cellular expression patterns of CBS in the ovary. The purpose of this study was to analyze the localization of CBS in mice ovaries and to investigate the expression profile during follicular development. Methods We used in situ hybridization and immunohistochemical analysis to determine CBS expression in the ovaries of female Balb/c mice. Then the follicles were collected from F1 (C57BL×Balb/c) mice and cultured in vitro. With the method of semi-quantitative RT-PCR, we also investigated the expression profile of CBS during follicular development. Results CBS was absent in the oocytes, although it was ubiquitously expressed in the ovary with the strongest expression in follicular cells at all stages. In late antral follicles, CBS expression was markedly higher in granulosa cells located close to the antrum and in cumulus cells around the oocyte. The semi-quantitative RT-PCR showed that CBS mRNA was detected in follicles at all stages in vitro. In cumulus-oocyte complexes superovulated, CBS expression also increased rapidly. Conclusions CBS was located mainly in the follicular cells in the ovaries. The level of CBS expression is high in follicles during folliculogenesis in mice. Differences in the CBS expression profile between oocyte and follicular cells suggest a role for CBS as a mediator in interactions between oocyte and granulosa cells.     

育泡饮对小鼠自身免疫性卵巢损伤保护作用的实验研究

目的探讨中药复方育泡饮对实验性自身免疫性卵巢早衰(POF)小鼠卵巢功能的影响。方法以成熟的SD雌性大鼠卵巢组织制备卵巢抗原,皮下多点注射免疫BALB/C雌性小鼠,建立卵巢早衰模型。在3次免疫后连续灌服中药复方,以强的松为阳性对照,酶联免疫法检测外周血雌二醇水平(E2)、卵泡刺激素(FSH)、外周血抗卵巢抗体(AoAb),IL-4、IL-10,观察卵巢的形态学变化,并计数各级卵泡及黄体数目。结果POF小鼠外周血E2下降,FSH升高,AoAb阳性,IL-4、IL-10明显提高,卵巢内有大量淋巴细胞浸润,各级卵泡及黄体数目减少。育泡饮能提高体内E2水平,减缓POF小鼠外周血FSH升高,抑制AoAb产生,降低IL-4与IL-10水平,减轻卵巢内淋巴细胞浸润,使各级卵泡及黄体数增加,育泡饮高剂量组比中剂量、低剂量组作用显著。结论育泡饮能减轻卵巢自身免疫性炎症损伤,对自身免疫性卵巢早衰具有治疗作用。