体外基因扩增技术检测上呼吸道炎症局部脱落细胞中肺炎衣原体DNA

为快捷诊断上呼吸道肺炎衣原体感染，用肺炎衣原体ＰｓｔＩ４７４片段特异性聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测了急性上呼吸道炎症患者局部拭子标本。同时以微量免疫荧光法检测了血清中肺炎衣原体特异性抗体。结果在１７５例患者拭子标本中，ＰＣＲ阳性４９例，阳性率２８％；荧光抗体阳性４５例，阳性率２５．７％。两者相符率９１．８％。表明肺炎衣原Ｐｓｔ Ｉ４７４片段特异性ＰＣＲ法检测鼻咽喉部肺炎衣原体感染是一个较敏感和特     

分泌性中耳炎与肺炎衣原体感染相关研究

为了了解分泌性中耳炎与衣原体的关系,文中报告用多聚酶链反应(PCR)法对31例分泌性中耳炎患者的中耳渗液进行肺炎衣原体检测,6例呈阳性反应,阳性率为19.3%,通过对照可排除假阴性和假阳性.用PCR法检测中耳渗液中沛炎衣原体简便、快速、待异性高、敏感性强,优于其他检测方法.     

衣原体感染与分泌性中耳炎关系的初步研究

目的了解衣原体感染与分泌性中耳炎的关系,初步建立临床上鼓室抽吸液衣原体的检测方法。方法收集４４例（５０耳）分泌性中耳炎患者的血清及鼓室抽吸液,分别以微量免疫荧光法检测衣原体特异性抗体,聚合酶链反应法（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ）检测衣原体特异性ＤＮＡ,用Ｈｅｐ２细胞进行鼓室抽吸液中肺炎衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ,Ｃｐｎ）培养。结果１例Ｃｐｎ培养阳性,且其血清及鼓室抽吸液特异性ＩｇＧ抗体达到诊断水平,ＰＣＲ检测特异性ＤＮＡ阳性;１４例血清及鼓室抽吸中沙眼衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ,Ｃｔ）特异性ＩｇＧ增高,同时ＰＣＲ检测鼓室抽吸液Ｃｔ特异性质粒ＤＮＡ阳性。结论衣原体是分泌性中耳炎的重要的致病微生物。     

人类颞骨火棉胶切片中线粒体DNA的扩增及重组测序

目的应用分子生物学技术建立人类颞骨火棉胶切片中的ＤＮＡ分析方法。方法采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）配合不同的引物、扩增方式及酶切技术检测长期保存的７例（９侧）颞骨火棉胶切片中微量线粒体ＤＮＡ的片段缺失及点突变，ｐＧＥＭＴ载体进行扩增片段的重组与克隆。结果９侧颞骨ＤＮＡ提取液中均可见正常的１３５ｂｐ扩增片段，巢式ＰＣＲ检出其中２例生前患老年聋者（各查１侧）有线粒体ＤＮＡ大片段缺失，测序结果证实扩增的准确性。结论分子生物学技术在颞骨切片研究中的应用对于提高其回顾性研究水平有重要意义，目前可在耳科疾病的研究中发现相关的基因突变或病原体。     

用聚合酶链反应检测鼻咽癌脱落细胞中EB病毒DNA

应用聚合酶连反应技术检测３５例鼻咽癌患者（２４例刚进行＾６０Ｃｏ放疗或未治疗，１１例放疗接近结束或刚结束）的鼻咽部脱落细胞中的ＥＢ病毒ＤＮＡ，１２例急、慢性扁桃体炎或咽炎患者为正常对照组，另有４例鼻咽癌的活检组织。结果：２４例鼻咽癌未治疗或刚治疗组中脱落细胞ＥＢ病毒ＤＮＡ阳性２０例（８３．３％），阴性４例（１６．７％）；１１例鼻咽癌放疗将近结束或刚结束组ＥＢ病毒阳性１例（９．１％），阴性１０例（９     

多聚酶链反应法检测中耳渗液中沙眼衣原体

报告用多聚酶链反应（ＰＣＲ）法对３６例渗出性中耳炎患者的中耳渗液进行沙眼衣原体检测，１６例呈阳性反应，阳性率为４４．４％。表明用ＰＣＲ法检测中耳渗液中沙眼衣原体特异性高，敏感性强，对于由沙眼衣原体引起的中耳炎的诊断有实用价值。     

呼吸道乳头状瘤HPV DNA定量检测与临床特征分析

目的探讨幼年型呼吸道乳头状瘤病(juvenile onset recurrent respiratory papillomatosis,JORRP)的临床特点及病程的相关影响因素,研究JORRP瘤体中人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)的基因含量及其临床意义。方法收集55例JORRP患儿的临床资料,应用荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测肿瘤组织中的HPV6/11含量,并进行临床随访观察复发情况。结果JORRP发病高峰在3～4岁,2～7岁组患儿的手术间隔时间小于大于7岁以上组患儿;行气管切开术的患儿的手术次数明显多于未行气管切开手术的患儿;55例JORRP标本经荧光定量PCR检测后35例(63.6%)为HPV6/11型阳性,其DNA中位拷贝数为2.2E 07,其拷贝数与JORRP病程无明显相关性。结论2～7岁为JORRP好发及易复发年龄段,气管切开会增加患儿手术次数与风险,JORRP患儿的病程变化与HPV6/11 DNA含量无明显相关。     

鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤人类乳头状瘤病毒DNA检测

为了解鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤与人类乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）之间的关系，采用聚合酶链反应，对３８例患者的４４个鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤的病理组织蜡块进行ＨＰＶ－ＤＮＡ的检测。结果显示，３８例中３０例患者的３０个瘤组织蜡块呈ＨＰＶ阳性，总感染率为６８．２％，其中３０例次ＨＰＶ１１型阳性（６８．２％），１８例次ＨＰＶ１６型阳性（４０．９％），２例次ＨＰＶ１８型阳性（４．５％），其中１８例ＨＰＶ１１，１６、２例ＨＰＶ１１，１８呈双重感染。试验表明，ＨＰＶ与鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤在病因上有一定的相关性。     

头颈部鳞状细胞癌中人乳头状瘤病毒DNA的表达

为探讨头颈部鳞癌与人乳头状瘤病毒（HPV）感染的关系和HPV在头颈癌中基因组型的分布与表达,应用聚合酶链反应技术制备非放射性探针标记物-地高辛标记HPV共有引物探针,对103树头颈部鳞癌（喉癌68例,鼻腔和上颌窦癌21例,鼻咽癌14例）和15例正常喉组织新鲜组织标本,进行HPV6,11,16,18,31,33,35,42,58共9型HPVDNA感染的检测;阳性者用多重引物PCR方法分型。喉癌HPV感染阳性率45.6％（31／68）,鼻腔和上颌窦癌阳性率为38．1％（8／21）,鼻咽癌阳性率14．3％（2／14）,15例癌周正常喉组织为HPVDNA阴性。HPVDNA型别分布在头颈部鳞癌中以HPV16、18型为主。头颈部鳞癌发生与HPV感染有相关性,喉癌发生与HPV感染尤为相关。     

PCR技术对大鼠内耳膜迷路线粒体DNA的检测

目的：建立灵敏、可靠的大鼠内耳膜迷路线粒体ＤＮＡ提取和检测方法。方法：结合ＰＣＲ技术扩增ｍｔＤＮＡ编码ＮＤ１－１６ＳｒＲＮＡ基因的６０１ｂｐ片段,检测大听泡内耳膜迷路线粒体ＤＮＡ方法,并对两种ｍｔＤＮＡ获取方法进行比较。结果：采用Ｓｅｉｄｍａｎ的方法,将１只大鼠的以侧听泡内耳膜迷路作为一个样品,检测１０个样品均成功扩增出编码ＮＤ１－１６ＳｒＲＮＡ基因的６０１ｂｐ片段;而采用ＥｄｒｉｓｍｔＤＮＡ提取     

婴幼儿呼吸道乳头瘤病人乳头瘤病毒的检测

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与婴幼儿呼吸道乳头瘤病临床病理特征之间的关系。方法应聚合酶链式反应－限制性片段长度多态性技术,对１３例婴幼儿呼吸道乳头瘤病组织中的ＨＰＶ进行定型分析。结果：ＨＰＶ阳性率为１００％,其中ＨＰＶ６占６１．５％（８／１３）,ＨＰＶ１１占３０．８％（４／１３）,ＨＰＶ１５占７．７％（１／１３）。无一例ＨＰＶ１６、３１、３３、５２、５８阳性。每例患者多次手术标本检测结果一致。     

蒿属花粉过敏变应性鼻炎与HLA-DQA1、 DQB1基因的关系

目的 :研究北京地区蒿属花粉过敏变应性鼻炎 (AR)患者HLA DQA1、DQB1基因与蒿属花粉过敏易感性的关系。方法 :用聚合酶链反应 序列特异性引物技术 (PCR SSP) ,检测HLA DQA1、DQB1基因型在 4 1例以蒿属花粉过敏为主的AR患者及 4 1例对照组间的分布 ,并统计分析了二者间的分布差异。结果 :4 1例变应性鼻炎患者DQA1 0 2 0 1、DQB1 0 6 0 2基因频率 (2 4 .39%、4 .88% )明显低于对照者 (46 .34%、2 6 .83% ) ,而DQA1 0 30 2基因频率 (5 8.5 4 % )明显高于对照者 (14 .6 3% ) ,具有统计学意义。结论 :提示HLA DQA1 0 2 0 1、DQB1 0 6 0 2基因可能是AR发病的抗性基因 ,而DQA1 0 30 2可能是AR发病的易感性基因。     

中国东北汉族人群变应性鼻炎患者HLA-DRB1基因多态性分析

目的分析中国东北地区汉族人变应性鼻炎（ａｌｅｒｇｉｃｒｈｉｎｉｔｉｓ,ＡＲ）患者与ＨＬＡ（ｈｕｍａｎｌｅｕｋｏｃｙｔｅＡｓｙｓｔｅｍ）ＤＲＢ１等位基因的关联。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物技术对３５例东北汉族变应性鼻炎患者的ＨＬＡＤＲＢ１等位基因进行检测,对照组为同地区９４例健康者。结果统计学分析结果显示患者组ＨＬＡＤＲＢ１０１０１．２和０３０２等位基因比正常对照组明显增高,基因频率分别为１２．８６％（相对危险性为１５．９２,校正Ｐ值＜０．０００４）和５．７１％（相对危险性为１２．００,校正Ｐ值＜０．０５）,其它等位基因频率在实验组和对照组之间差异无显著性。结论提示ＨＬＡＤＲＢ１０１０１．２和ＤＲＢ１０３０２等位基因与ＡＲ关联。     

聚合酶链反应对颈部肿块的EBV检测

目的：探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）对隐匿性鼻咽癌的诊断意义。方法：采用ＰＣＲ检测５８例颈部肿块的细针抽吸标本中的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）。结果：３５例颈中、上淋巴结转移癌２８例ＥＢＶ阳性,３例淋巴瘤阴性,４例锁骨上淋巴结转移癌阴性;１６例淋巴结炎性病变１例为弱阳性,１５例均为阴性;该法诊断鼻咽癌的灵敏度为８９．３％,特异性为８６．７％。结论：用ＰＣＲ检测颈部转移癌中的ＥＢＶ－ＤＮＡ,对隐匿性鼻咽癌的诊断具     

用聚合酶链反应技术制备地高辛素标记核酸探针检测国人喉癌人类乳头瘤病毒DNA

应用聚合酶链反应（PCR）技术制备非放射性探针标记物——地高辛素标记人类乳头瘤病毒（HPV）共有引物探针，对146例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌68例，喉其它病变48例，正常喉组织30例）进行HPV6，11，16，18，31，33，35，42，58共9型HPVSDNAS感染的检测。结果表明，喉癌组HPV感染阳性率45．6％（31／68），喉癌颈转移淋巴结组阳性率21．0％（3／15），喉癌前病变阳性率11．8％（2／17），声带息肉组阳性率6．3％（1／16），15例癌旁及15例癌周正常喉组织均为HPVDNA阴性。文中还对HPV在喉癌中的致病作用及应用PCR技术制备地高李标记HPV共有引物探针的敏感性及特异性进行了讨论。     

DNA amplification for the in vitro detection of Candida albicans in head and neck squamous cell carcinomas

DNA was extracted from whole cells of Candida albicans and digested with HindIII restriction enzyme. After electrophoresis in a segment of the lane containing between 800 and 1200 base pairs (bp) of DNA fragments, a 1.1-kilobase (kb) fragment was found that hybridizes to biopsied tumor cells from head and neck squamous cell carcinomas (SCC). From the nucleotide sequence of the putative gene locus, primers were synthesized for use in a polymerase chain reaction (PCR) with DNA extracted from 18 SCC of the upper aerodigestive tract. After 30 cycles of amplification all tumors were found to contain sufficient amplified DNA to be detected in polyacrylamide or agarose gels. In contrast, template DNA from lymph nodes and malignant lymphomas failed to generate positive signals under these conditions. However, samples of DNA obtained from head and neck SCC cells in vitro, Candida glabrata, and Candida parapsilosis after PCR were found to contain homologous sequences. Application of this technique to head and neck SCC biopsies may help to identify quickly the presence of concurrent candidal species.     

鼻咽癌患者鼻咽组织和血清中EBV检测

目的：比较血清爱泼斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）抗体滴定度测定与癌组织ＥＢＶ基因组检测对鼻咽癌（ＮＰＣ）的诊断价值。方法：１４６例患者采用双盲法测定血清ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ,ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ和活检组织ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）。全组病例按活检病理检查结果分析：ＮＰＣ组,非ＮＰＣ组（对照组）。结果：ＮＰＣ组中ＥＢＶ－ＤＮＡ（ＰＣＲ）,ＥＢＶ－ＶＣＡ－ＩｇＡ和ＥＢＶ－ＥＡ－ＩｇＡ的阳性率分别为９０．８％     

应用半巢式PCR检测喉鳞癌中bcl-2基因的重排

目的　探讨bcl 2基因在喉鳞癌中可能的发病机理。方法　采用半巢式 (semi nested)多聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)方法检测 6 0例喉鳞癌新鲜或冰冻组织中bcl 2的基因重排。结果　检出 37例存在bcl 2 /JH融合基因 ,重排率为 6 1 7% ,33例发生于主要断裂区 (majorbreakpointregion ,mbr) ,4例发生在次要断裂区 (minorclusterregion ,mcr)。Bcl 2 /JH基因重排率重度吸烟者较轻度和非吸烟者为高 (P <0 0 5 ) ,而与喉鳞癌的临床分期、病理分化程度和颈淋巴结转移无关(P >0 0 5 )。结论　bcl 2 /JH基因重排可能在喉鳞癌发生发展中起重要作用     

Low prevalence of transfusion transmitted virus (TTV)-like DNA sequences in cystadenolymphoma and pleomorphic adenoma of the salivary glands

Titers of transfusion transmitted virus (TTV)-like DNA in saliva samples have been reported 100–1,000 times higher than those of the corresponding sera, suggesting viral transmission by saliva droplets. The present study was conducted to determine whether TTV-like DNA sequence elements play a role in the pathogenesis of cystadenolymphoma or pleomorphic adenoma and if the parotid or the submandibular gland is a major source of TTV persistence. Sixty-two archival salivary gland samples (16 cystadenolymphomas, 13 pleomorphic adenomas, and 33 controls) and 23 corresponding saliva samples were examined using a polymerase chain reaction (PCR) for TTV DNA. All PCR products that displayed DNA bands were sequenced. Leder’s stain and immunohistochemistry (anti-CD8, anti-CD20, anti-CD45R0, anti-CD68, and anti-Ki67/MiB1) were applied to detect possible changes associated with findings of TTV-like DNA sequences. Tissue displayed TTV-like DNA sequences in 8.1% (5/62; saliva: 47.8%, 11/23). Tissue that contained TTV-like DNA sequences was histologically indistinguishable from samples lacking such DNA. TTV appears to be only a bystander in cystadenolymphoma, pleomorphic adenoma, and other salivary gland affections. Neither of the glands seems to be a major source of TTV persistence.An erratum to this article can be found at