多重耐药鲍曼不动杆菌的主动外排泵基因对β-内酰胺类抗菌药物耐药性的影响

目的 探讨对β-内酰胺类抗菌药物耐药的多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵基因在耐药机制中表达情况.方法 多重耐药鲍曼不动杆菌96株,分析其对9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药性.以加入泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)后最低抑菌浓度(MIC)降低至≤1/4为标准,筛选出34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌,用聚合酶联链反应(PCR)扩增法对其行外排泵蛋白基因adeB进行检测和分析.结果 多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率分别为92.3％,86.6％,83.0％,70.8％,68.3％;对氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦的耐药率分别为90.1％,77.5％,72.4％和67.3％.34株外排泵表型阳性的鲍曼不动杆菌检测到adeB基因有33株,检出阳性率97.06％.对33株鲍曼不动杆菌的外排泵基因adeB进行测序,经比对所测序列与Genebank中序列同源性为100.0％.结论 主动外排泵基因是多重耐药鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的一个重要因素.     

51株鲍曼不动杆菌耐药表型及外排蛋白基因表达研究

目的:探讨鲍曼不动杆菌耐药表型以及adeB外排泵基因的表达情况。方法:收集2004年2月～2005年2月北京协和医院51株非重复鲍曼不动杆菌,应用聚合酶链反应法测定鲍曼不动杆菌主动外排系统adeB结构基因及序列分析。结果:受试菌株对常用广谱抗生素均不敏感;多重耐药鲍曼不动杆菌携带adeB主动外排泵基因。结论:本研究中鲍曼不动杆菌多重耐药性与产生β-内酰胺酶无关,另有其它耐药机制存在,主动外排作用可能是鲍曼不动杆菌多重耐药的重要机制之一。     

泵抑制剂对鲍曼不动杆菌诱导突变株氟喹诺酮敏感性的影响

目的探讨主动外排泵在鲍曼不动杆菌诱导突变株对氟喹诺酮类药物敏感性的影响。方法用环丙沙星诱导鲍曼不动杆菌筛选突变株。采用琼脂二倍稀释法检测泵抑制剂羰基氰氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenyl-hydrazone,CCCP)或利舍平存在时鲍曼不动杆菌诱导突变株对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星敏感性的变化。结果CCCP和利舍平能影响部分鲍曼不动杆菌突变株对3种氟喹诺酮的最低抑菌浓度(minimum inhibition concentration,MIC),使MIC降至原值的1/4以下,泵阳性株在对3种氟喹诺酮均敏感的突变株中即存在。结论主动外排泵表达增强可能是鲍曼不动杆菌突变株MIC值升高的原因之一。     

鲍曼不动杆菌主动外排系统AdeABC、AdeIJK与多重耐药相关性

了解本地区鲍曼不动杆菌主动外排系统的分布并探讨其在介导细菌多重耐药中的作用.方法 琼脂二倍稀释法检测20种抗菌药物对鲍曼不动杆菌l临床分离株的MIC;PCR扩增AdeABC-AdeRS、AdeIJK两种RND主动外排系统的结构和调节基因.结果 112株鲍曼不动杆菌临床分离株对亚胺培南/西司他丁和美罗培南耐药率分别为0.9%和1.8%,对大多数抗菌药物的耐药率均大于60%,但对多黏菌素B和米诺环素均敏感.75.9%的菌株同时检出adeABC-adeRS和adeIJK主动外排基因,6.3%仅检出adeIJK.同时检出adeABC-adeRS和adeIJK的菌株耐药率较高.结论 本地区鲍曼不动杆菌临床分离株多重耐药情况严重.adeABC和adeIJK在鲍曼不动杆菌临床分离株有较高检出率.AdeABC主动外排系统在鲍曼不动杆菌多重耐药性的形成中起重要作用.     

鲍曼不动杆菌耐药表型与外排泵基因表达水平的研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系.方法 琼脂二倍稀释法检测鲍曼不动杆菌临床分离株对17种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA:实时荧光定量RT-PCR(Real Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)法检测adeA基因的mRNA表达水平.结果 药敏结果显示86株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感(100%),其次是美罗培南(73.2%)、亚胺培南(70.9%).耐药率最高的是庆大霉素(84.9%),其次为美罗西林(83.7%)和环丙沙星(79.1%).55株菌为多重耐药株(64%),其中5株(5/86)对多粘菌素B外的所有抗菌药物耐药(5.8%).adeA的检出阳性率为84.9%(73/86),Real Time RT-PCR结果显示多重耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平的30倍以上.结论 鲍曼不动杆菌临床分离株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多重耐药性形成中起重要作用.     

膜蛋白新机制参与的体诱导鲍曼不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素

目的:通过研究膜蛋白改变与碳青霉烯类抗生素耐药,阐述膜蛋白参与的耐药机制,更好地为临床选择抗生素提供合理建议,同时为新药开发提供参考。方法:采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及琼脂稀释法从76株广泛耐药鲍曼不动杆菌中筛选出8株仅对多黏菌素敏感、1株全敏感临床株。采用PAβN外排泵抑制试验检测其外排泵表型。结果:外排泵抑制剂(PAβN)抑制试验显示受试8株菌中4株亚胺培南最低抑制浓度(MIC)值下降≤1/4,而美罗培南MIC值下降至1/4及以下。耐药菌株和敏感菌株差异膜蛋白组学鉴定出肌肉(Car),外膜蛋白(Omp A)和推测分子量为41 ku外排泵膜蛋白。结论:本次试验中膜孔蛋白Car O表达缺失可能参与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯抗生素耐药,外排泵过度表达可能参与细菌对美罗培南的耐药。     

鲍曼不动杆菌8种RND外排泵介导替加环素耐药表型的研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌中8种RND外排泵基因的分布与替加环素耐药表型间的关系。方法 微量肉汤稀释法检测120株鲍曼不动杆菌对替加环素的耐药性,PCR扩增8种外排泵及调控基因。琼脂二倍稀释法测定替加环素耐药菌株对18种抗菌药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),利用5种外排泵抑制判定外排泵表型。采用实时荧光定量PCR检测外排泵基因的表达水平。结果 筛选出替加环素耐药菌8株,对18种抗菌药物耐药情况严重,其中6株为广泛耐药菌;3种外排泵抑制剂CCCP、PAβN及维拉帕米的表型阳性率分别为50%、37.5%和12.5%。耐替加环素菌株除ACICU_02904和ACICU_03412基因外均为阳性;替加环素敏感菌中外排泵(adeABC-adeRS、adeFGH-adeL和adeIJK-adeN)基因检测率为38.4%,新近发现外排泵(ACICU_00143、ACICU_03066和ACICU_03646)基因检测率为50.9%,然而,ACICU_02904和ACICU_03412基因检出率为0.9%。在转录水平上,替加环素耐药组的adeB相对表达量是敏感组的23.5倍。结论 鲍曼不动杆菌中adeB相对表达量伴随菌株对替加环素MIC值增加而升高,主动外排泵表达活性增加是替加环素耐药的一个重要机制。     

鲍曼不动杆菌多重耐药性与外排泵机制研究

目的分析江苏大学附属医院鲍曼不动杆菌外排泵对其耐药性形成的作用。方法收集2012年8月至2013年2月江苏大学附属医院住院患者44株鲍曼不动杆菌。应用K-B纸片扩散法检测鲍曼不动杆菌对抗生素的敏感性。经Realtime PCR法检测外排泵基因ade B m RNA水平。扩增外排泵调控基因ade R和ade S全长片段并测序比对。结果在44株鲍曼不动杆菌中,27株为多重耐药株且对头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、米诺环素较为敏感。耐药菌株ade B m RNA表达水平明显高于敏感株,且发现ade R的2639位碱基发生A→G突变,其对应的219位氨基酸则呈现AAA(赖氨酸)→GAA(谷氨酸)改变,而ade S无有义突变。结论鲍曼不动杆菌的多重耐药性可能与ade ABC外排泵系统的过表达相关,且其表达可能与调控基因ade R的突变相关。     

4种外排泵抑制剂对鲍曼不动杆菌耐药性的抑制影响

目的 检测4种外排泵抑制剂对5种抗菌药物耐药的影响,了解主动外排泵耐药机制在鲍曼不动杆菌菌株中的作用,为外排泵抑制剂的开发和鲍曼不动杆菌感染的治疗提供实验室数据.方法 临床收集鲍曼不动杆菌116株,采用琼脂平皿二倍稀释法测定5种抗菌药物对实验菌株的最低抑菌浓度(MIC),同批测定加入外排泵抑制剂后抗菌药物的MIC值.结果 庆大霉素加羰基氰氯苯腙(cCCp)后显示出外排阳性的菌株数量最多,有87株(75％);其他显示外排阳性菌株的数量分别为:利血平+氯霉素(46.6％),奥美拉唑+氯霉素(33.6％),维拉帕米+庆大霉素(17.2％).外排泵抑制剂对头孢唑林的耐药性无影响.结论 4种所用外排泵抑制剂可不同程度逆转鲍曼不动杆菌的耐药,以CCCP筛选外排阳性菌效果最佳.当存在明显的酶水解耐药机制时,外排泵抑制剂对耐药性无影响.     

多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布及外排泵基因的检测

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布并检测其外排泵基因型。方法统计96株多重耐药鲍曼不动杆菌临床分布,用Kirby-Bauer法检测96株多重耐药鲍曼不动杆菌对15种抗菌药物的耐药情况,并用PCR扩增进行外排泵基因的检测。结果 96株多重耐药鲍曼不动杆菌主要分布在重症监护病房(54.2%)和呼吸内科(18.8%);对喹诺酮类、头孢菌素类、氨基糖苷类、四环素类抗菌药物的耐药率均在70%以上;分布在重症监护病房的52株多重耐药鲍曼不动杆菌中检测到ade B、ade R、ade S、ade J、ade E、abe M基因分别有18株(34.62%)、16株(30.77%)、18株(34.62%)、18株(34.62%)、0株、18株(34.62%);分布在呼吸内科的18株多重耐药鲍曼不动杆菌中检测到ade B、ade R、ade S、ade J、ade E、abe M基因分别有9株、8株、8株、8株、0株、8株。结论外排泵基因是分布在重症监护病房和呼吸内科的鲍曼不动杆菌发生多重耐药的重要因素。