孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测临床探讨

目的:探讨孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测(无创DNA)的临床应用.方法:回顾分析2015年6月至2018年4月本院收治的2603例行无创DNA检测孕妇(全部是单胎)为研究对象.结合孕妇年龄、血清检查结果、超声筛查信息等将孕妇分为五组.所有孕妇均进行无创DNA检测,结果不正常者需要实施羊水或脐血穿刺,并进行胎儿染色体核...     

孕妇外周血中胎儿DNA的提取和应用

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是无创性产前诊断的主要思路和探索途径 ,但是母血中胎儿细胞数量少 ,富集、分离技术操作复杂 ,价格昂贵限制了其临床应用。近年来发展起来的从孕妇外周血中提取胎儿DNA行产前诊断 ,敏感度、特异度不降低的同时简化了技术条件 ,为无创性产前诊断开辟了新途径 ,具有广阔的发展前景     

孕妇外周血中胎儿DNA的提取和应用

从孕妇外周血中分离胎儿细胞一直是无创性产前诊断的主要思路和探索途径，但是母血中胎儿细胞数量少，富集，分离技术操作复杂，价格昂贵限制了其临床应用。近年来发展起来的从孕妇外周血中提取胎儿DNA行产前诊断，敏感度，特异度不降低的同时简化了技术条件，为无创性产前诊断开辟了新途径。具有广阔的发展前景。     

孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究进展

<正>当前,产前诊断越来越受到人们的重视,产前诊断是减少出生缺陷儿的有效措施之一。分为有创与无创性,有创性包括:羊水穿刺、绒毛活检取样(CVS)、胚胎(胎儿)镜、经皮胎儿脐血穿刺等,因为具有创伤性,操作时可能对母亲和胎儿造成一定的风险,因而在临床上限制了其使用。近年来,无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注,而孕妇外周血中的胎儿游离DNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断提供了重要的研究方法,由于胎儿游离DNA在孕妇外周血中具有     

孕妇血浆中胎儿DNA的定量检测

目的: 定量检测孕妇血浆中游离胎儿DNA含量。方法: 以SRY基因序列作为胎儿DNA的基因标志, 应用实时定量PCR技术测定不同孕期的孕妇血浆中胎儿DNA的含量。结果: ①最早检测出孕妇血浆中胎儿DNA的时间为 7-1周; ②早、中、晚孕期孕妇血浆中胎儿DNA浓度平均值分别为 77. 86、95 .43、325 .61copy/ml, 在孕妇血浆总DNA含量中的相对浓度分别为 4 .88%、6 .10%、4. 77%。结论: 在孕妇血浆中可监测到较高浓度胎儿游离DNA, 并且随着孕期的进展, 胎儿DNA含量逐渐增加, 这一结果有助于进一步无创伤性产前基因诊断的研究。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中游离胎儿DNA的可行性研究

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术用于孕妇外周血浆中游离胎儿DNA检测的可行性。方法:利用FQ-PCR技术特异性扩增Y基因性别决定区(SRY)并定量分析妊娠中期(18～25周)孕妇血浆中含量。结果:148例男胎孕妇血浆标本中,SRY基因检出率为98.65%。139例女胎孕妇血浆标本中未检测到SRY基因。结论:FQ-PCR技术在孕妇外周血游离胎儿DNA的检测中具有较高的灵敏性和特异性,FQ-PCR技术可应用于非创伤性产前诊断。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的生物学特点及临床应用

已证实胎儿细胞存在于孕妇外周血中，但由于其数量较少，而且存在个体差异，所以很难将其应用于临床形成成熟的非创伤性产前诊断检测方法。1997年，Lo^[1]首次报道在母体血循环中发现了游离胎儿DNA，证实了母体血浆中的DNA是胎儿和母体DNA的嵌和物。随后又有一些学者相继证实了母体血循环游离胎儿DNA的存在。近两年来，随着分子生物学等技术的完善，使得从母血循环中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能，并为形成一种易于为广大患者接受、应用范围广的无创性产前诊断技术奠定了基础。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的生物学特点及临床应用

已证实胎儿细胞存在于孕妇外周血中 ,但由于其数量较少 ,而且存在个体差异 ,所以很难将其应用于临床形成成熟的非创伤性产前诊断检测方法。 1997年 ,Lo[1] 首次报道在母体血循环中发现了游离胎儿DNA ,证实了母体血浆中的DNA是胎儿和母体DNA的嵌和物。随后又有一些学者相继证实了母体血循环中游离胎儿DNA的存在。近两年来 ,随着分子生物学等技术的完善 ,使得从母血循环中检测胎儿DNA并应用于临床成为可能 ,并为形成一种易于为广大患者接受、应用范围广的无创性产前诊断技术奠定了基础     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的生物学及其在产前诊断中的应用

孕妇外周立中游离胎儿DNA的存在，为非侵入性产前基因诊断开辟了崭新途径；检测手段的简便、高效及胎儿DNA的稳定性使我们在对性连锁遗传病及单基因遗传病进行产前诊断方面又有了新的进展。同时，血中游离胎儿DNA的浓度改变也与某些妊娠病理息息相关。这些均为今后的产前诊断及研究母胎间关系提供了更多思路。     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的生物学及其在产前诊断中的应用

孕妇外周血中游离胎儿DNA的存在,为非侵入性产前基因诊断开辟了崭新途径;检测手段的简便、高效及胎儿DNA的稳定性使我们在对性连锁遗传病及单基因遗传病进行产前诊断方面又有了新的进展.同时,血中游离胎儿DNA的浓度改变也与某些妊娠病理息息相关.这些均为今后的产前诊断及研究母胎间关系提供了更多思路.     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的生物学及其在产前诊断中的应用

孕妇外周血中游离胎儿DNA的存在,为非侵入性产前基因诊断开辟了崭新途径;检测手段的简便、高效及胎儿DNA的稳定性使我们在对性连锁遗传病及单基因遗传病进行产前诊断方面又有了新的进展.同时,血中游离胎儿DNA的浓度改变也与某些妊娠病理息息相关.这些均为今后的产前诊断及研究母胎间关系提供了更多思路.     

孕妇外周血中游离胎儿DNA的生物学及其在产前诊断中的应用

孕妇外周血中游离胎儿DNA的存在 ,为非侵入性产前基因诊断开辟了崭新途径 ;检测手段的简便、高效及胎儿DNA的稳定性使我们在对性连锁遗传病及单基因遗传病进行产前诊断方面又有了新的进展。同时 ,血中游离胎儿DNA的浓度改变也与某些妊娠病理息息相关。这些均为今后的产前诊断及研究母胎间关系提供了更多思路。     

孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测假阳性结果影响因素分析

目的探讨孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测假阳性结果的影响因素。方法回顾分析2015年1月—2021年6月,在南京鼓楼医院产前诊断中心因孕妇外周血胎儿游离DNA产前检测(简称NIPT)阳性的651例孕妇进行产前诊断的结果,选择其中10例NIPT结果假阳性的病例采集孕妇外周血和胎盘样本行进一步测序分析。结果651例行羊膜腔穿刺产前诊断的病例中,357例为真阳性,其中204例是21-三体高风险、49例是18-三体高风险、7例是13-三体高风险、97例是性染色体高风险;294例为假阳性,包括21-三体高风险41例、18-三体高风险33例、13-三体高风险40例、性染色体高风险180例。选择4例21-三体高风险假阳性、2例18-三体高风险假阳性、4例性染色体高风险假阳性,共10例病例进行追踪检查,病例1(P1)在21号染色体上存在重复区域;病例2(P2)患有系统性红斑狼疮,而且在X染色体上存在重复区域;病例9(P9)在妊娠31周时提示可能存在胎儿生长受限;病例3(P3)、病例4(P4)、病例5(P5)、病例6(P6)和病例7(P7)的胎盘样本中发现限制性胎盘嵌合。病例8(P8)和病例10(P10)胎盘样本及外周血结果均无异常。结论限制性胎盘嵌合和母体因素是可能造成NIPT假阳性的主要因素。因此NIPT仍然是一种筛查试验,不能作为侵入性产前诊断的替代方法。     

孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在染色体非整倍体无创产前诊断中的意义

目的探讨孕妇外周血中游离胎儿DNA检测在无创产前诊断染色体非整倍体中的临床意义。方法选取2016年1月1日-2017年1月31日在该院产科接受外周血中游离胎儿DNA检测的5 000名孕妇为研究对象,采集孕妇外周血分离血浆后,提取胎儿游离DNA,采用高通量测序法对孕妇外周血中游离胎儿DNA进行染色体非整倍体检测,得出21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征等染色体非整倍体疾病的风险率,对于高风险的孕妇行介入性穿刺并对胎儿染色体核型进行分析,对低风险孕妇进行随访,以了解胎儿出生后情况。结果 5 000名孕妇均成功完成外周血游离胎儿DNA检测,其中有69例出现染色体非整倍体异常,阳性率为1.38%,其中21-三体异常47例、18-三体异常11例、13-三体异常6例、性染色体异常5例,抽取羊水经细胞培养后行染色体核型分析,确定染色体非整倍体异常66例,符合率为95.65%,检查率为100.00%;47例21-三体异常中有46例进行了介入性产前诊断,诊断符合率为97.87%;11例18-三体异常中有10例进行了介入性产前诊断,诊断符合率为90.91%;6例13-三体异常均进行了介入性产前诊断,诊断符合率为100.00%;5例性染色体异常有4例进行了介入性产前诊断,诊断符合率为80.00%。结论孕妇外周血中游离胎儿DNA检测诊断染色体非整倍体安全可靠,灵敏度和准确率较高,可避免侵入性损害,可作为产前诊断染色体非整倍体疾病的辅助手段。     

用PCR法扩增孕妇外周血DNA确定胎儿性别

理论上孕妇外周血中的胎儿细胞可做为新的标本来源,它可以替代羊膜穿刺术和绒毛膜活检所得到的样品。本文作者使用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测孕妇静脉血中大量母体细胞中所含少量的胎儿细胞。PCR方可扩增外周血里DNA中一个Y-特异性重复序列。胎儿是男性的孕妇外周血DNA中的Y-特异性序列得以扩增,而胎儿是女性的则无扩增现象。作者认为这是首次利用孕妇血液进行分子遗传学分析的报道。     

套式聚合酶链反应技术检测孕妇外周血中胎儿细胞

目的探讨利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前诊断的可行性。方法采用套式聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术扩增孕妇外周血中男性胎儿性别决定基因(sexdetermining region Y，SRY)，并与胎儿实际性别相对照。结果74例孕7～40周的孕妇中38例怀男胎，其中23例扩增出Y特异带；另外36例怀女胎孕妇中，仅1例出现Y特异带。SRY套式PCR扩增系统在孕中期，孕晚期检查孕妇外周血中男胎灵敏度(72．7％、71．4％)、特异度(100．0％)和符合率(87．0％、90．5％)高，误诊率为0，而在孕早期灵敏度(50．0％)、特异度(90．0％)及符合率(63．3％)较低，误诊率(10．0％)、漏诊率(50．0％)较高。结论胎儿细胞在孕早期即存在于孕妇外周血中，但直接利用孕妇外周血中胎儿细咆检查SRY基因的检出率较低。     

孕妇外周血中胎儿特异性血红蛋白基因的检测与定性分析

目的 :自孕妇外周血中检测胎儿γ血红蛋白基因及探索GelWorks 1D软件应用于PCR扩增产物的定性分析。方法 :提取孕妇全血mRNA ,经体外逆转录后 ,应用ε/γ引物引导扩增胎儿特异血红蛋白基因片段 ,以NdeⅡ内切酶对其酶切 ,经琼脂糖凝胶电泳 ,凝胶成像系统扫描成像 ,用GelWorks 1D软件对凝胶图像进行定性分析。结果 :成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因。定性标准曲线公式 :Y =0 0 3 5 92X2 -11 94X + 10 92 ,R2 =0 9978,精确度为 98 6%。ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断 ,大小分别为 191bp、 5 7bp和 2 6bp。结论 :GelWorks 1D软件可以对PCR扩增产物进行定性分析 ,孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求 ,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础     

孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞产前诊断胎儿ABO血型

目的:探讨母血中单个胎儿有核红细胞(NRBCS)产前诊断胎儿ABO血型的可行性。方法:从154例孕妇外周血中分离单个NRBCS,应用引物延伸扩增(PEP)法扩增单个NRBCS的基因组,用PCR法检测扩增产物中的SRY基因以判断NBRCS的来源。再用特异性序列-聚合酶链反应(PCR-SSP)法测胎儿ABO血型基因型。抽取新生儿脐血提取淋巴细胞,应用PCR-SSP法测胎儿ABO血型基因型。用常规血清方法测新生儿血型。结果:用PCR-SSP法检测出154例中的152例血型,2例未测出,检出率98.7%。检测出的152例胎儿基因型与脐血淋巴细胞所测ABO血型基因型完全相符。常规血清学方法测新生儿ABO血型,检测率为85.7%。结论:用单个NRBCS结合PCR-SSP法检测胎儿ABO血型方法可靠。     

应用表观遗传学标记检测孕妇血浆中的胎儿游离DNA

[目的]探讨应用非性别依赖的表观遗传学标记检测孕妇血浆中胎儿游离DNA的可行性. [方法]随机选择60例孕妇作妊娠组,15例未生育非妊娠女性作对照组1,15例已生育非妊娠女性作对照组2.以甲基化特异性PCR扩增各待检对象血浆DNA中不同甲基化状态的maspin基因,并对结果进行统计学分析.[结果]m-maspin(maspin基因的甲基化序列)在妊娠组和两对照组中均被检测出,其检测阳性率在各组间无差异.u-maspin(maspin基因的非甲基化序列)在妊娠组中有53例被检测出,检出率88.3%,而在两对照组中均未被检测出,其检测阳性率在妊娠组和两对照组间的差异均具有统计学意义. [结论]u-maspin基因可作为非性别依赖的胎儿DNA特异性标志物应用于非侵入性产前诊断.     

孕妇外周血中游离胎儿核酸的研究进展

非创伤性产前诊断一直是人类遗传学发展的长期目标，从非细胞成分中如母血浆和血清中检测胎儿DNA为非创伤性产前诊断的开展提供了可能。实时定量PCR分析技术的发展，使母血浆和血清中胎儿DNA检测的敏感性和特异性接近100％，同时胎儿核酸领域的研究也扩展到了母血浆中胎儿RNA和胎儿表遗传标记物的检测。