灯盏乙素对血栓形成及血小板聚集的影响

目的研究灯盏乙素对血栓形成及血小板聚集的影响.方法采用电刺激大鼠颈动脉血栓模型评价灯盏乙素对血栓形成的影响;应用Born比浊法测定灯盏乙素体内外对兔血小板聚集功能的影响.结果灯盏乙素对电刺激大鼠颈动脉引起的血栓形成具有明显的对抗作用;灯盏乙素体外显著抑制AA和ADP和PAF诱导的兔血小板聚集,其半数抑制浓度(m ed ium inh ib itory concentration,IC50)分别为70.5、39.8和97.7mg/L;灯盏乙素静脉注射也能明显降低AA和ADP、PAF诱导的兔血小板聚集率,且呈剂量-效应关系.结论灯盏乙素有明显的抗血栓形成作用,其机制与其抗血小板聚集作用密切相关.     

当药水提物对大鼠中性白细胞活性氧生成和兔血小板聚集的影响

目的 研究当药水提物对大鼠中性白细胞性细胞内内Ca^2 浓度增加、活性氧生成及兔血小板聚集的影响。方法 用酵母多糖、FMLP和A23 187活化大鼠中性白细胞,用化学发光法测定活性氧,用荧光光度法测细胞内Ca^2 浓度,用比浊法测血小板聚集。结果 当药水提物浓度依赖性地抑制酵母多精、FMLP和A23 187诱导的大鼠中性白细胞内Ca^2 浓度增加及活性氧生成;也抑制花生四稀酸、胶原及ADP诱导的兔血小板聚集。和吲哚美辛比较,当药水提物抑制活性氧生成的作用较强而抑制血小板聚集的作用较弱,其作用远强于swertiamarin。结论 当药水提物是极强的中性白细胞活性氧生成抑制剂,其作用强于swertiamarin。     

人参皂苷Rg1对血小板聚集及环磷腺苷的影响*

[目的]探讨三七活血有效成分人参皂苷Rg1对大鼠血小板聚集的影响。[方法]体外分离大鼠血小板,采用比浊法观察不同浓度Rg1(0.5、1.5、2.5、3、4 mmol/L,)对体外大鼠二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集的抑制作用,以阳性药阿司匹林作为对照;采用酶联免疫(ELISA)法检测Rg1对大鼠血小板环磷腺苷(cAMP)的影响。[结果]0.5 mmol/L人参皂苷Rg1组对血小板聚集无明显影响;阿司匹林组及人参皂苷Rg1(4、3、2.5、1.5 mmol/L)组最大聚集率均明显小于阴性对照组(P<0.01),其抑制率分别为18.95%,59.04%,40.37%,29.77%,9.77%;不同浓度Rg1组对ADP诱导后血小板cAMP的含量与ADP组没有显著性差异。[结论]Rg1可明显抑制ADP诱导的血小板聚集,但其机制并不是通过升高血小板内cAMP含量而抑制血小板激活。     

夏天无总碱抑制血小板聚集作用的研究

目的 探讨夏天无总碱的活血化瘀作用饥制，观察夏天无总碱抑制血小板聚集作用的影响。方法 以不同浓度的夏天无总碱给大鼠连续灌胃7d，抽血分别测定二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸诱导的血小板聚集率；试管内人血小板加中药孵育前后，比浊法测定血小板聚集；体外给药测定高剪切力诱导的血小板聚集，显微镜下游离血小板计数。结果 夏天无总碱在体内、外对以二磷酸腺苷(ADP)和花生四烯酸诱导的血小板聚集均有明显的抑制作用，其作用强度随药物剂量的增加而增强；该药物能够有效地抑制由剪切力诱导的血小板聚集(SIPA)。结论 夏天无总碱是一个有效的多途径血小板聚集抑制剂。     

复方银杏滴丸抗血栓及抑制血小板聚集作用实验研究

目的探讨复方银杏滴丸(CO-GBE)抗血栓形成及抑制血小板聚集的作用.方法①制造大鼠动静脉旁路血栓形成模型,测定血栓湿重及干重;②分别采用胶原、PAF、ADP诱导豚鼠血小板聚集,测定血小板在不同时间点的聚集率以及最大聚集率.结果.复方银杏滴丸 40、20、10 mg/kg均可以不同程度地抑制大鼠动静脉旁路血栓形成,减轻血栓干重及湿重(P<0.05,P<0.01);抑制不同诱导剂诱导的豚鼠血小板在不同时间点的聚集,降低其最大聚集率.结论.复方银杏滴丸可明显抗血栓形成,并具有高效广泛的血小板聚集抑制作用.     

丹参素对血小板聚集性及血小板膜流动性的影响

丹参素具有明显抑制由凝血酶或ADP诱导的血小板聚集作用。为进一步探索丹参素仰制血小板聚集的分子机制,本文用荧光探剂DPH标记血小板膜脂,借助荧光偏振技术,监测丹参素对血小板膜脂质流动性的影响。实验结果表明:抑制血小板聚集剂量的丹参素,能明显升高血小板膜的流动性。提示丹参素治疗冠心病有效,可能与纠正冠心病患者血小板膜的分子缺陷,增加血小板膜的流动性有关。     

五灵脂抗血小板聚集作用的药理研究

五灵脂水提取物体外实验能显著抑制由胶元、ＡＤＰ所诱导的家兔血小板聚集，其抑制效应与剂量相关，ＩＣ５０分别为５６，２２５μｇ／ｍＬ；腹腔注射剂量２００，３００ｍｇ／ｋｇ对大鼠体内（ｅｘｖｉｖｏ）血小板聚集有明显抑制作用，聚集抑制率分别为１６．８％和５１．４％；静脉注时剂量１００，２００ｍｇ／ｋｇ对大鼠颈总动脉——颈外静脉血流旁路实验性血检形成有显著防治作用，血栓抑制率分别为６０．０％和６７．３％；按蛋白激酶结合法测定，本品１００μｇ／ｍＬ能使血小板内ｃＡＭＰ水平升高６２．８％，增加血小板内ｃＡＭＰ水平可能是其抑制血小板功能和抗血栓作用的机制之一。     

噻氯匹啶的抗血小板作用

噻氯匹啶为抗血小板聚集药物，能抑制多种诱导剂所致的血小板聚集。大鼠灌服给药25～200mg／kg后，能明显降低外源性ADP、凝血酶、花生四烯酸诱导的血小板聚集，且呈一定的量效关系，等剂量（100mg／kg）的噻氯匹啶与经典药物阿斯匹林相比，二者抑制血小板聚集的作用相似；能明显抑制动脉血栓的形成，形成的血栓干重和湿重均低于等渗盐水对照组，且随剂量的增加而抑制作用增强。大鼠灌服噻氯匹啶后，能明显延长出血时间，并随剂量的增加而延长，但不影响血管壁PGI2活性。     

老年大鼠血小板反应性及血小板膜LDL受体活性的改变

本文利用受体放射配基分析方法观察不同年龄大鼠血小板聚集性、血浆脂质水平及血小板膜LDL受体活性的改变。结果表明,老年大鼠血小板对ADP诱导的聚集反应性明显增强;血浆总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平增高;血小板膜LDL受体活性增强,解离常数显著低于对照组。本文作者认为血小板膜受体活性的增强及血浆LDL水平的增高可促进LDL与血小板的结合,提高了LDL对血小板功能的影响,与老年大鼠血小板高反应性改变可能有关。     

血小板骤集作为临床观察及药理研究的一种方法(一)

血小板聚集:是临床观察与药理研究的一种方法,可以用血小板聚集仪持续地记录穿过搅动中的血小板悬液的透光度来测定血小板聚集的数量。常规临床研究是用富血小板的枸椽酸血浆(PRPc)测血小板聚集,血样本最好需除去任何痕量的凝血酶。血液以3.8％的二羧化(dihydrate)枸椽酸钠抗凝(1:9份血),于室温内190g离心15分钟。所得到的富血小板枸椽酸血浆以贫血小板血浆(ppp)稀释,并调整血小板浓度为3×10~5/微升。富血小板血浆在室温内保存在Co_2中塞住的玻璃试管内以防PH发生变异。从取血到测定完毕的时间只能是3小时,有些情况下为了判定血小板的病变,血浆旦白,凝血因子及抗凝血因素的影响,需要用洗涤过的血小板悬液。用酸性葡萄糖枸椽酸(ACD)收集血样本,于 37℃下离心取PRPc。将PRPC离心后取血小板沉淀物,按Mustard氏法在 37℃以0.35％浓度的台氏-旦白缓冲液反复洗涤2次。再将洗涤后的血小板在 37℃重新悬浮于含有腺苷三磷酸双磷酸酶(apyrase)的上述缓冲液内,并调整血小板浓度为3×10~5/微升。用下述几种试剂诱导血小板聚集:ADP,肾上腺素,胶原,凝血酶,花生四烯酸,离子载体A_(23187),血小板活化因子-酰醚(PAF-acether),及瑞斯托霉素(ristocetin)。对人血小板聚集曲线的定量分析,有助于对调节血小板聚集的生理及生化机制的研究,对导致临床出血或血栓栓塞性疾病的先天性或获得性血小板异常的认识及分类,以及利用血小板聚集曲线的定量分析对抑制血小板聚集药物的效应及其作用机理进行研究。人血小板与血管壁成分及凝血旦白间的相互作用在许多生理及病理过程中起着重要作用:止血、血栓形成,动脉粥样硬化,免疫性疾病,癌瘤转移,体内存在许多诱导血小板聚集的因素:如ADP,肾上腺素,花生四烯酸及其衍生物(前列腺素内过氧化物PGG_2及PGH_2,TXA_2),胶原,凝血酶,PAF-acether。各种刺激所引起的血小板致活反应系按同一机理逐步发生的血小板反应,根据刺激物与特异性膜受体的反应强度,椭园状血小板的形态发生改变,于是出现聚集,血小板将其α颗粒,致密颗粒以及最后是溶酶体中的内含物都分泌出来。聚集系指需要有血小板间,在细胞外的钙离子(Ca~(2 )),纤维旦白原,以及由糖酵解同完整呼吸提供代谢能量使血小板发生撞击的一种主动过程,因为血小板能悬浮在枸椽酸血浆或人工缓冲环境内,故其功能可以在体外加以测出,以穿过悬浮血小板的光束的透光度,可在一个激动系统内用持续的比浊法测出血小板聚集的量。本文的目的在于详述我们实验室内日常应用着的测血小板聚集的方法。我们所应用的方法对血小板制备,反应物(试剂),以及我们所进行的关于血小板聚集机理的研究,以及对聚集的测定法都是严格标准化了的;对血小板功能的遗传性或后天性异常;对抑制血小板聚集药物效应及药理作用机理的认识都是严格标准化了的。     

轴突导向因子Netrin-1在血管生成中调节作用的实验研究

目的研究神经轴突导向因子Netrin-1在血管生成中的作用及其机制。方法原代培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用逆转录多聚酶链反应检测其上Netrin-1的各种受体表达,并用体外实验分别检测Netrin-1对HUVEC增殖,迁移和管状结构形成的作用,并用兔角膜新生血管实验研究在不同浓度Netrin-1作用下体内血管新生的情况。结果在HUVEC上仅检测到一种受体UNC5B的表达。在体内和体外实验中均发现Netrin-1不仅是个促血管生成因子,也是一个抑制血管生成因子,在浓度低于500ng／ml时均表现为促进作用,而在1000～5000ng／ml时表现为抑制作用。其中,当Netrin-1为50ng／ml时,HUVEC的增殖能力最强,当Netrin-1浓度为100ng／ml时,HUVEC的迁移能力最强。结论Netrin-1在血管生成中起着促进和抑制的双重调控作用,这种双重调控作用取决于Netrin-1浓度,其中抑制作用和受体UNC5B相关。     

山莨菪碱对正常及自发性高血压大鼠离体血管舒张功能的影响

目的:观察山莨菪碱对离体正常(Wistar)大鼠及自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)腹主动脉舒张作用的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:采用大鼠离体腹主动脉环(长度为4~5 mm的血管)灌流技术,观察山莨菪碱对正常大鼠及SHR血管舒张功能的影响,并观察苯肾上腺素(phenylephrine,PE)、左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME)预处理对山莨菪碱作用的影响。结果:山莨菪碱对PE预收缩的正常大鼠内皮完整和去内皮血管的舒张作用差异显著(P<0.05);对PE预收缩的SHR内皮完整及去内皮血管环,山莨菪碱均具有显著舒张作用,呈剂量-效应关系,最大舒张率分别为(78.6±6.9)%和(65.76±11.39)%,无统计学差异。用NOS抑制剂L-NAME预处理正常大鼠内皮完整的血管环,可显著地抑制山莨菪碱诱导的舒张作用(P<0.05)。山莨菪碱对SHR血管的舒张作用能够被L-NAME抑制,抑制前后最大舒张率分别为61%和11.9%(P<0.01)。结论:山莨菪碱可能通过内皮和平滑肌2条途径发挥舒张大鼠离体腹主动脉的作用。     

钙通道阻断剂硝苯地平对血迷路屏障的通透性研究

目的：探讨钙通道阻断剂硝苯地平的血迷路屏障通透性，建立高效液相色谱仪测定豚鼠外淋巴液硝苯地平浓度的方法。方法：豚鼠腹腔注射硝苯地平1周采集外淋巴液，应用反相高效液相色谱法(reversed phase highperformance liquid chromatography，RT-HPLC)测定外淋巴液硝苯地平的浓度。结果：本法的灵敏度为5ng／ml。在浓度为50ns／ml时的平均回收率为98％。测定的相对偏差为8．56％。外淋巴液硝苯地平的浓度为50．2—124．2ng／ml。结论：硝苯地平可以通过血迷路屏障，浓度随给药时间变化。本实验方法简便、快捷、准确可靠，可有效用于豚鼠外淋巴液硝苯地平的药理学研究。     

硝苯啶及其与异搏定联合降压疗效及细胞离子钙的改变

本文观察了24例原发性高血压单服硝苯啶二周及合并服用硝苯啶和异搏定二周后的降压效果及细胞内外钙离子浓度的变化。发现硝苯啶与异搏定合用的降压效果优于单用硝苯啶。细胞外全血离子钙及细胞内血小板离子钙亦比单用硝苯啶时下降更明显,提示细胞内、外离子钙的改变在钙拮抗剂降压中起重要作用。     

反复冻融对血浆抵抗素和内脂素测定水平的影响

目的 探讨反复冻融对血浆抵抗素和内脂素测定水平的影响。方法 抽取-70℃保存的血浆标本22份,化冻后用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆抵抗素和内脂素水平（冻融1次标本）,同时将每份标本分装2管,一管放入-20℃冷冻后取出,室温融解,重复3次（冻融4次标本）;另一份按相同方法重复5次（冻融6次标本）,用同一试剂盒、在同一批内检测血浆抵抗素、内脂素水平。比较3种冻融方式间的差异。结果 标本在冻融1次、4次和6次的情况下,抵抗素测定水平分别为2.24±0.99、2.01±1.05、1.89±1.01ng/ml,内脂素测定水平分别为16.3±7.6、13.4±6.3、12.1±5.6ng/ml,后两次检测抵抗素水平较第1次分别下降10.3%（t=5.05,P=0.000）和15.6%（t=10.65,P=0.000）;内脂素水平较第1次检测分别下降17.8%（t=5.19,P=0.000）和25.8%（t=6.58,P=0.000）。结论 反复冻融对血浆标本中抵抗素和内脂素的水平有显著影响,提示在血标本贮存运输、测定和分析中要注意这一现象对研究结果的影响,避免标本的反复冻融。     

白藜芦醇对TNF-α诱导的血管内皮细胞炎性反应的影响

目的观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制。方法不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24 h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中sICAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10μmol/L)预处理24 h后,再用TNF-α(10 ng/ml)处理24 h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平。结果高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P<0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7%;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P<0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P<0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P<0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强。结论白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂阻断转化生长因子(TGF)β1致肝纤维化作用的机制,探讨其抗肝纤维化的潜在作用.方法 体外培养肝星状细胞株HSC-T6.观察PPARγ配体15 d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白(FN)表达的影响.利用Western印迹技术观...     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

他克莫思对rhHGF刺激ECV304细胞株表达MMP-的抑制作用

目的探讨重组人类肝细胞增殖因子(rhHGF)刺激ECV304细胞株表达基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的作用及他克莫思(Tacrolimus,FK506)的抑制作用.方法绘制正常ECV304细胞株生长曲线,明确最适生长浓度及对数生长期;明确rhHGF及FK506的作用浓度;流式细胞仪(FCM)检测ECV304细胞株的MMP-9水平.结果①ECV304细胞的最适生长浓度为1.0E+4/ml,对数生长期为3～5 d;rhHGF的作用浓度为8 ng/ml,IC50为8.27 ng/ml;FK506的作用浓度为50 ng/ml,IC50为51.63 ng/ml.②对照组MMP-9的表达量为39.74%;培养基中加入rhHGF 8 ng/ml后,细胞存活率为1.388169±0.102033(P<0.01),MMP-9的表达量为40.32%;培养基中加入FK506 50 ng/ml后,细胞存活率为0.398764±0.092476(P<0.01),MMP-9的表达量为14.61%;培养基中加入FK506 50 ng/ml 15 min后加入rhHGF 8 ng/ml,细胞存活率为0.767203±0.02639(P<0.01),MMP-9的表达量为35.08%.结论rhHGF可刺激ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量增加;FK506可抑制ECV304细胞增殖,使MMP-9的表达量降低;FK506可拮抗rhHGF所引起的ECV304细胞增殖,从而使MMP-9的表达量降低.     

维持性血液透析患者血小板凝血酶受体的表达及其意义

目的观察维持血液透析患者(研究组)血小板蛋白酶激活受体1(PAR1)、蛋白酶激活受体4(PAR4)和糖蛋白Ibα(GPIbα)的表达及其与正常对照者(对照组)之间的差异。方法采用流式细胞术检测两组的PAR1,PAR4和GPIbα的表达,采用比浊法检测其血小板最大聚集率(MAR)。结果维持性血液透析患者血小板GPIbα表达略低于对照组,但差异无统计学意义(P=0.072);血小板PAR1表达高于对照组,血小板MAR低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);相关性分析显示PAR1的表达和血液透析频率之间存在明显正相关(r=0.601,P<0.05)。结论与正常对照者相比,维持性血液透析患者的血小板PAR1表达明显升高,而PAR1的高表达又可引起血小板的进一步活化,从而使血液的高凝状态加剧,可能增加动脉粥样硬化及血管意外发生的概率。