用PCR-限制性片段长度多态性分析法检测游泳池肉芽肿中海分枝杆菌

目的：探讨用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）分析法快速检测游泳池肉芽肿组织中海分枝杆菌。方法：对疑诊为游泳池肉芽肿患者5份皮损组织DNA进行PCR扩增,扩增产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶进行酶切,再用琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并与培养结果进行比较。结果：5份标本中均检测出海分枝杆菌,与培养结果一致。经过3～7个月治疗,4例患者治愈,1例患者好转。结论：用PCR—RFLP可以快速鉴定海分枝杆菌,有利于该类疾病的早期诊断和及时治疗。     

用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析进行沙眼衣原体的基因分型

为了研究泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的分子流行病学，我们建立了一种不需做培养的ＣＴ血清型鉴定方法。用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＣＴ大部分主要外膜蛋白基因（ｏｍｐｌ），将扩增产物做限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，即用限制性内切酶ＡｌｕⅠ和ＭｓｐⅠ同时消化，产生的片段通过１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。经硝酸银染色后，１５个ＣＴ血清型标准株产生１３个特征性带谱。血清型Ｃ和Ｊ带型相似，用ＨｉｎｆⅠ酶切后区分；Ｈ和Ｌ３带型相同，用ＤｄｅⅠ和ＥｃｏＲⅠ同时酶切后区分。对１２份ＣＴ培养阳性的临床标本行ＰＣＲＲＦＬＰ分型检测。结果：Ｄ血清型为６份标本，Ｅ型２份，Ｆ型２份，Ｆ／Ｇ混合型１份，Ｂ型１份。研究表明对ｏｍｐｌ的ＰＣＲＲＦＬＰ基因分型方法能用于大范围ＣＴ感染的流行病学研究     

PCR-RFLP技术快速鉴定八种致病丝状病原真菌的实验研究

目的 建立能快速鉴定深部丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP方法。方法 用真菌通用引物扩增烟曲霉、黄曲霉、土曲霉、黑曲霉、杂色曲霉、构巢曲霉、尖端赛多孢和串珠镰刀菌的ITS区,分别用HhaⅠ、HaeⅢ、HinfⅠ、TaqⅠ和MspⅠ 5种限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切,建立以PCR为基础的RFLP方法,然后对22株临床株和2株环境分离株进行PCR-RFLP图谱分析。结果 对PCR产物进行RFLP分析可以准确鉴定8种深部致病丝状真菌,从DNA提取到酶切分析可以在1个工作日完成。22株临床株和2株环境分离株PCR-RFLP鉴定结果与传统的形态学鉴定结果一致。结论 PCR-RFLP技术是一种能够快速鉴定丝状真菌的有效方法。     

HCR基因单核苷酸多态性与维吾尔族银屑病的相关性

目的 探讨HCR基因与银屑病发病的相关性.方法 测定118例新疆维吾尔族寻常性银屑病及127例正常人对照组的HCR基因第4外显子第307位点基因多态性.从抗凝血中抽提DNA,用PCR-RFLP法和PCR产物直接测序法鉴定基因型.对结果进行统计学分析处理.结果 HCR-307位点核苷酸存在C、T二态性,表现为CC纯合、TF纯合、CT杂合三种基因型,病例组TF基因型频率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HCR-307位点的C→T多态性与新疆维吾尔族寻常性银屑病具有相关性.     

上海地区1366例浅部念珠菌病致病菌种分析

目的 分析上海地区1366例浅部念珠菌病的致病菌种构成及分布情况。方法 对1366例儿童与成人浅部念珠菌病的致病菌种进行菌种鉴定：采用科玛嘉平板、API20C AUX等鉴定手段常规鉴定;采用Pal平板、木糖同化试验、45 ℃生长试验鉴定都柏林念珠菌;采用分子鉴定方法鉴定近年发现的新种,包括Candida orthopsilosis、Candida metapsilosis、Candida fermentati、Candida nivariensis、Candida bracarensis。对致病菌种的构成及分布情况进行分析。 结果 1366例浅部念珠菌病的主要致病菌为白念珠菌（占79.0%）,排在2 ~ 4位的依次为近平滑念珠菌（9.5%）、热带念珠菌（2.9%）和季也蒙念珠菌（1.9%）,致病株中包括念珠菌新种Candida orthopsilosis（2株）和Candida metapsilosis（4株）;儿童患者与成人患者的致病菌种构成差异有统计学意义（?字２ = 196.46,P < 0.01）,其中非白念珠菌分离率分别为14.4%和45.8%。结论 白念珠菌仍为浅部念珠菌病的主要致病菌;新种Candida orthopsilosis和Candida metapsilosis可引起浅部念珠菌病。与儿童病例相比,成人病例中非白念珠菌的分离比例明显上升。     

雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮的相关性

目的 探讨人雄激素受体基因第一外显子CAG重复序列长度多态性与痤疮发生之间的关系。方法 研究对象为中国东北地区238例痤疮患者和207例健康对照，抽取外周血后分离纯化出基因组DNA，采用微卫星扫描（STRs）方法分析CAG重复序列的多态性。结果 男性病例组和对照组的CAG重复均数分别为22.70 ± 3.09和23.48 ± 2.83，两组之间差异有统计学意义（P = 0.046）；将对照组中CAG重复次数的中位数23作为分割点分组比较，长/短CAG片段在男性病例和对照中的分布差异有统计学意义，携带有CAG短片段的男性较携带CAG长片段的男性患痤疮的风险性明显增加（OR值2.07；95%可信限为1.21 ～ 3.54）。女性病例组和对照组的CAG重复均数分别为23.41 ± 2.87和23.85 ± 0.21，两组之间差异无统计学意义（P = 0.115）；按中位数分组比较长/短CAG片段在女性病例和对照中的分布差异有统计学意义，携带有CAG短片段的女性患痤疮的风险性明显增加（P = 0.013，OR值2.05；95%可信限为1.18 ～ 3.56）。结论 雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数与中国东北地区痤疮的发生有关，CAG重复次数少的男性个体患痤疮的风险性增加，雄激素受体基因第一外显子CAG的重复次数可作为痤疮的遗传易感标志之一。     

用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析进行沙眼衣原体…

为了研究泌尿生殖道沙眼衣原体（ＣＴ）感染的分子流行病学，我们建立了一种不需做培养的ＣＴ血清鉴定方法。用聚合酶锭反应（ＰＣＲ）扩增ＣＴ大部分主要外膜蛋白基因（ｏｍｐｌ），将扩增产物做限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，即用限制性内切酶Ａｌｕ和ＭｓｐＩ同时消化，产生的片段通过１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离。经硝酸银染色后，１５个ＣＴ血清型标准株产生１个特征性带谱。血清型ＣＴ和Ｊ带型相似，用ＨｉｎｆＩｓ     

银屑病患者甘露糖结合凝集素基因多态性及血清水平的研究

【摘要】 目的 探讨银屑病患者甘露糖结合凝集素（MBL）基因多态性及血清水平与疾病的关系。 方法 寻常性银屑病患者67例,健康对照组69例。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）法检测MBL基因第54号密码子基因多态性,ELISA法测定血清MBL浓度。 结果 67例银屑病患者GGC/GAC基因型频率高于健康对照组,GGC/GGC基因型频率低于健康对照组,两组比较,差异有统计学意义（χ2 = 10.36,P ＜ 0.05）;银屑病组GAC等位基因频率增高,GGC等位基因频率降低,两组差异有统计学意义（χ2 = 8.31,P ＜ 0.05）。GAC型等位基因与银屑病显著相关（OR = 3.383,95％置信区间1.585 ~ 7.211,P ＜ 0.05）。银屑病组与健康对照组血清MBL浓度分别为（2.1937 ± 0.8163） mg/L和（3.2695 ± 1.2058） mg/L,银屑病组显著低于健康对照组（t = 6.11,P ＜ 0.05）。 结论 MBL与银屑病的发病可能存在一定关系。     

纳米金基因芯片技术快速鉴定常见浅部致病真菌北大核心CSCD

浅部真菌病是临床常见的感染性疾病,能简便快速鉴定出致病真菌对疾病的治疗至关重要。传统的鉴定方法主要依据真菌的形态、细胞生理和生化特征,这些方法阳性率低,操作复杂费时。一些免疫学和分子生物学技术如PCR,以及以PCR为基础的限制性片段长度多态性PCR（PCR—RFLP）、随机扩增多态性DNAPCR（PCR—RAPD）、单链构象多态性PCR（PCR—SSCP）等也应用于真菌病的诊断,但这些技术也存在操作复杂、实验设备要求高等缺陷。因此,我们尝试建立一种可目视化、快速简便、准确鉴定常见浅部致病真菌的方法。     

E选择素基因多态性与广西壮族系统性红斑狼疮的相关性研究

目的 探讨E选择素基因第2外显子G98T和第4外显子A561C多态性在广西壮族人群中的分布及其与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法 用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测82例系统性红斑狼疮患者和95例正常对照者E选择素基因型。结果 E选择素第2外显子基因型GG、GT、TT频率在SLE组和对照组分别为86.6%、12.2%、1.2%和90.5%、8.4%、1.1%;E选择素第4外显子基因型AA、AC、CC频率在SLE组和对照组分别为81.7%、15.9%、2.4%和92.6%、7.4%、0.0%。E选择素第4外显子基因型频率和等位基因频率在SLE组和对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。基因型频率的相对风险分析发现,AC+CC基因型患SLE的风险是AA基因型2.81倍(OR=2.81,95%CI为1.087～7.290)。结论 E选择素A561C基因多态性与广西壮族人群SLE的发病有相关性,C等位基因可能是SLE的易感基因。     

皮肤癌与锰超氧化物歧化酶信号肽基因多态性关系的研究

利用聚合酶链式反应与限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）,检测了52例皮肤癌和50名正常人锰超氧化物歧化酶（MnSOD)信号肽基因的多态性位点V－9A,结果：皮肤癌患者与正常对照相比具有较高的－9A等位基因频率和A／A基因型频率,表明MnSOD信号肽基因的多态性位点V－9A与皮肤癌发病相关。     

某些致病真菌的聚合酶链反应检测

分子生物学技术的发展为深部真菌感染的诊断提供了新的手段.我们建立一种比其它常规方法更为快速、稳定的体系,以协助临床的早期诊断和治疗.     

PCR-RFLP分析鉴定皮肤组织中的分枝杆菌

目的 探讨用PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析的方法快速检测皮肤感染性肉芽肿组织中分枝杆菌。方法 皮肤感染性肉芽肿患者组织标本9份.提取组织DNA,进行PCR扩增,PCR产物分别用BstEⅡ和HaeⅢ2种限制性内切酶进行酶切,3%Nusieve 3:1琼脂糖凝胶电泳,进行限制性片段长度多态性分析,并与培养结果进行比较。结果 从5份临床诊断为游泳池肉芽肿的组织标本中检测出海分枝杆菌,从另4份诊断为皮肤感染性肉芽肿的标本中检测出2份结核分枝杆菌和2份脓肿分枝杆菌,此9份结果与培养鉴定结果完全一致。结论 用PCR-RFLP方法可以快速鉴定皮肤感染性肉芽肿组织中的分枝杆菌。     

外膜蛋白IB基因聚合酶链反应及限制性片段长度多态性鉴别淋病奈瑟菌菌株

应用聚合酶链反应(PCR)及限制性片段长度多态性(RFLP)分析对淋病奈瑟菌蛋白IB(PIB)分离株进行快速鉴别,并对其实用性与普遍认可的营养型/血清型分类系统进行了比较。     

热休克蛋白65基因PCR-限制性片段长度多态性分析技术快速诊断非结核分支杆菌皮肤感染

非结核分支杆菌 (ＮＴＭ )可引起人类多种疾病包括皮肤感染。常规诊断依靠病史、病理和病原菌检查。病史 (皮肤外伤、机体免疫力低下 )、流行病学特征以及病理呈结核样肉芽肿改变 ,提示非结核分支杆菌感染的可能性。但病史和病理均无特异性 ,而抗酸染色涂片及细菌培养敏感性不高或费时 ,从而常导致误诊或延误治疗。该文介绍用热休克蛋白6 5 (ｈｓｐ6 5 )基因ＰＣＲ 限制性片段长度多态性分析技术快速诊断非结核分支杆菌皮肤感染。实验方法为标本 (脓液或活检组织 )在液相培养基 (Ｍｉｄｄｌｅｂｒｏｏｋ7Ｈ9∶12Ｂ)培养 ,当培养指数 (ＧＩ)…     

常见致病性念珠菌的PCR-RFLP鉴定研究

目的 研究常见致病性念珠菌的分子鉴定方法,为深部念珠菌病的分子诊断奠定基础。方法 对常见9种致病性念珠菌的11株标准株和39株临床株的核糖体DNA内转录间隔区进行聚合酶链反应扩增,对扩增产物进行MspⅠ、HaeⅢ和DdeⅠ三种内切酶的酶切分析。结果 9种念珠菌聚合酶链反应扩增后产生5种不同分子量的条带,扩增产物经MspⅠ、DdeⅠ和HaeⅢ酶切后分别产生8种、5种和4种特异性带型。结论 聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性方法在鉴定常见的致病性念珠菌中稳定、可靠、特异,是传统方法的有益补充。     

阴道非白念珠菌的PCR-RFLP鉴定

目的对分离自外阴阴道念珠菌病(VVC)患者阴道的常见致病性非白念珠菌进行聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法的鉴定。方法首先采用芽管试验、厚壁孢子试验、法国科玛嘉(CHROMagar)念珠菌显色培养基及API20CAUX酵母菌鉴定系统将分离自VVC患者阴道内的念珠菌菌株鉴定到种,然后采用真菌通用引物将4种常见非白念珠菌(包括光滑念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌和热带念珠菌)进行PCR扩增,并选用MspⅠ和HaeⅢ两种内切酶对扩增产物进行酶切分析。结果在4种非白念珠菌中光滑念珠菌15株(7.50%),近平滑念珠菌7株(3.50%),克柔念珠菌5株(2.50%),热带念珠菌2株(1.00%);PCR扩增后均产生稳定、清晰的条带,扩增产物经MspⅠ,HaeⅢ酶切后分别产生4种和2种特异性带型。结论外阴阴道念珠菌病非白念珠菌中以光滑念珠菌为主;PCR-RFLP方法在鉴定常见致病性非白念珠菌中比较可靠、稳定、特异,但仍有方法繁琐等不足之处。     

应用聚合酶链反应检测某些机会致病真菌的初步探讨

目的 探讨快速检测某些机会致病性直菌的方法。方法 以源于医学机会致病性真菌１８ｓｒＲＮＡ保守区的一对寡核苷酸序列为引物,利用聚合酶链反应对医学上重要机会致病性真菌ＤＮＡ进行扩增。结果 ３属７种２９株重要机会致病性直菌,经扩增均出现一条１９７ｂｐ的ＤＮＡ片段,而对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、人白细胞则不扩增。以溴化乙啶染色,该ＰＣＲ方法对白念珠菌ＤＮＡ的最低检出限为１ｐｇ。３０份临床标