老龄大鼠海马结构脑源性神经营养因子表达的改变

目的：探讨大鼠海马结构脑源性神经营养因子（BDNF）表达的老龄性改变，为脑衰老提供可靠的免疫组织化学资料。方法：选用雌性Wistar大鼠24只，分为青年组和老龄组。应用免疫组化方法结合图像分析技术对2组大鼠海马结构BDNF阳性产物进行定性、定量分析。结果：老龄组海马CA3和CA1区神经元BDNF含量比青年组分别下降了13．3％、10．4％，然而，齿状回从青年到老年变化不显著。结论：老龄时海马CA3和CA1区神经元的BDNF表达发生了明显的变化，其含量明显降低。提示老龄大鼠海马CA3和CA1区神经元BDNF表达的改变，可能是老龄动物海马结构营养及学习记忆障碍的形态学基础。     

人参皂甙对老龄大鼠大脑皮质AChE老龄性改变的影响

目的观察大鼠大脑皮质乙酰胆碱酯酶(AChE)阳性纤维的老龄性改变,探讨人参皂甙对其影响。方法24只雌性Wis青tar大鼠随机分为青年组、老龄组及给予人参皂甙的给药组。对各组大鼠大脑皮质进行AChE酶细胞化学染色,图像分析各组大鼠大脑皮质神经纤维AChE含量及AChE纤维的配布情况。结果老龄组大鼠大脑皮质神经纤维AChE平均光密度值较年组明显减少(p<0.01),AChE纤维面积百分比例下降,人参皂甙组大鼠大脑皮质神经纤维AChE平均光密度值较老龄组明显增加(p<0.01),纤维面积百分比例上升。结论人参皂甙可增加老龄大鼠大脑皮质纤维中AChE平均光密度值,促进纤维侧枝出芽和纤维网的生长及重建。     

脑源性神经营养因子在大鼠海马CA3区发育过程中的表达

采用免疫组织化学ＡＢＣ 法,研究脑源性神经营养因子在大鼠海马ＣＡ３ 区发育过程中的表达,观察其免疫反应产物的分布。结果表明：脑源性神经营养因子阳性物质在生后零天（Ｐ０）组位于ＣＡ３ 区细胞周围间质内;Ｐ１０,Ｐ１５ 和Ｐ２０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物位于锥体细胞内,幅射层内可见阳性苔藓纤维终末,这些终末随生后日龄增加而增加。Ｐ３０ 组脑源性神经营养因子免疫反应产物仅见于细胞周围间质内,未见细胞胞浆内有阳性物质分布,但偶见脑源性神经营养因子阳性细胞核位于ＣＡ３ 区锥体细胞层,辐射层内有较多的苔藓纤维阳性终末。本研究结果提示,发育早期大鼠海马ＣＡ３ 区脑源性神经营养因子分布于细胞周围间质而生后１０ 至２０ 天发育期间,ＣＡ３ 区锥体细胞合成脑源性神经营养因子并可沿神经元轴突顺行运输、传递信息。     

脑源性神经营养因子在成年猴脑的分布

采用免疫组织化学方法探讨了 BDNF在成年猴脑的分布。结果显示 ,脑源性神经营养因子阳性反应产物主要分布于下列结构 :大脑皮层 III～ V层的锥体细胞及突起 ;小脑皮质篮状细胞、Purkinje细胞、Golgi细胞及小脑顶核的神经元及其突起 ;海马各区的神经元、纤维和齿状核的颗粒细胞 ;尾状核、豆状核和室旁核部分神经元和纤维 ;脑干脑桥核、舌下神经核、迷走神经背核、前庭神经核、下橄榄核及网状结构的神经元及纤维或膨体。此外 ,在大、小脑的白质也可见到部分脑源性神经营养因子阳性胶质细胞。脑源性神经营养因子阳性反应产物广泛地分布于猴脑的多种区域和细胞 ,提示其功能可能涉及不同类型的神经元及可能的非神经细胞。本研究结果为探讨脑源性神经营养因子在成年猴脑的分布规律及其功能特点提供了有用的形态学依据。     

脂肪源性干细胞促进大鼠受损坐骨神经传导及脊髓脑源性神经营养因子和睫状神经营养因子的表达

目的:探讨脂肪源性干细胞(ADSCs)对坐骨神经损伤大鼠神经传导功能以及脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)表达的影响。方法:将第4代ADSCs移植入脱细胞神经移植物(ANA)中,构建组织工程神经。大鼠随机分为正常组、杜氏改良Eagle培养基营养混合物F12(DMEM)组和ADSC组。DMEM组和ADSC组均建立坐骨神经损伤模型,后用相应的组织工程神经桥接损伤神经的断端。术后6周采用神经电生理记录仪检测各组大鼠坐骨神经传导速度和波幅,采用免疫荧光和Real-time PCR检测各组大鼠脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)蛋白和mRNA的表达。结果:ADSC组大鼠坐骨神经传导速度、波幅和脊髓BDNF和CNTF蛋白及mRNA表达均显著高于DMEM组。结论:ADSCs可增加坐骨神经传导速度和波幅、上调脊髓BDNF和CNTF的表达。     

脑源性神经营养因子过表达促进大鼠神经干细胞向神经元分化

Objective To construct eukaryotic expression vector of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) and detect its effect of overexpression on differentiation of rat neural stem cells (NSCs) into neurons. Methods The RT-PCR was used to amplify rat BDNF gene from RNA of rat hippocampus. The BDNF gene was inserted into eukaryotic expression vector pEGFP-N1 to construct recombinant expression vector pEGFP-N1-BDNF. The recombinant vector was transfected into NSCs by Lipofectamine 2000.The expression of BDNF mRNA in NSCs was detected by RT-PCR. The differentiation of rat NSCs into neurons was detected by immunohistochemistry staining. Results The sequence of the cloned BDNF was confirmed to be correct by DNA sequencing. The NSCs transfected with pEGFP-N1-BDNF expressed BDNF efficiently. The pEGFP-N1-BDNF transfected NSCs differentiated into more neurons than the pEGFP-N1 transfected ones (EM>P/EM>0.01). Conclusion All these results indicate that BDNF overexpression significantly promotes the differentiation of rat NSCs     

脑源性神经营养因子基因修饰的胚胎大鼠皮质神经干细胞及其在体外的分化

目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）基因修饰大鼠脑皮质神经干细胞（NSCs）后BDNF的表达,并观察其对NSCs体外诱导分化的影响。 方法 体外分离、培养大鼠胚胎脑皮质神经干细胞并鉴定;构建BDNF基因重组质粒,非脂质体法转染NSCs,实验分为pcDNA3-1- BDNF组、pcDNA3-1组和未转染NSCs组。免疫细胞化学技术和RT-PCR检测转染后BDNF蛋白和mRNA的表达;在含5％胎牛血清的分化培养基中诱导分化,βIII微管蛋白、神经胶质纤维酸性蛋白（GFAP） 和突触素( SYP)免疫细胞化学染色对分化细胞进行鉴定,并观察pcDNA3-1-BDNF转染NSCs分化过程中SYP的表达变化。 结果 体外培养获得巢蛋白（nestin）阳性的NSCs。成功构建BDNF基因重组质粒,免疫细胞化学和RT-PCR检测均显示,与pcDNA3-1组和NSCs组比较,pcDNA3-1-BDNF组NSCs的BDNF表达明显增强（P<0.05）。pcDNA3-1组和NSCs组比较,无显著性差异（P＞0.05）。分化后第4天,各组细胞均可分化为Βiii-微管蛋白阳性和GFAP阳性细胞,pcDNA3-1-BDNF组可见少量SYP阳性表达细胞。分化后第7天,与pcDNA3-1组和NSCs组比较,pcDNA3-1-BDNF组NSCs分化为βIII微管蛋白阳性神经元的比例明显增高,有显著性差异（P<0.05）,SYP阳性细胞数增多,表达增强。 结论 BDNF转染NSCs具有体外分泌BDNF的能力,能够促进NSCs定向分化为神经元,SYP表达增强,可能在促进神经元之间的突触发生中发挥作用。     

脑源性神经营养因子与癫痫

癫痫发作可诱导海马内脑源性神经营养因子(BDNF)水平上调,进而激活海马门区及CA3区腔隙层的TrkB受体,通过促进兴奋性神经递质释放等效应加强海马通路尤其是苔状纤维的兴奋性突触传递,从而导致持续的高度兴奋状态;而阻断BDNF信号转导通路则可抑制癫痫发生.提示BDNF在癫痫发作过程中具有重要作用,进一步阐明其细胞分子机制将为探索癫痫治疗手段提供新途径.     

脑源性神经营养因子研究现状

近年来神经科学的研究表明,神经营养因子是选择性调节周围神经和中枢神经系统神经生长和存活的一类蛋白质。脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF）是神经生长因子（nerve growth fac-tor,NGF)发现后约30年由德国神经生物学家Barde^[1]报告的另一神经营养因子,它对CNS多种类型神经元的生长、发育、分化、维持和损伤修复都具有重要作用,对神经系统疾病诸如早老性痴呆、帕金森氏病和肌萎缩侧索硬化等退变性疾病的治疗具有潜在应用前景。本文就脑源性神经营养因子的结构、功能及应用前景作一综述。     

脑源性神经营养因子与帕金森病

帕金森病 (PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars com pacta,SNpc)多巴胺 (DA)能神经元的进行性退化变性 ,由于其机制还不清楚 ,因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子 (brain- derived neu-rotrophic factor,BDNF)由 Barde等于 1982年在猪脑中首次发现 ,其氨基酸序列有 5 5 %～ 6 0 %与神经生长因子 (nervegrowth factor,NGF)完全相同 ,也属神经营养素 (neu-rotrophin)家族的成员 ,BDNF可通过其高亲和力受体 trk B和低亲和力受体 p75 NTR发挥生物活性 ,能够促进多种神经元的存活 ,尤其对 DA能神经…     

促肾上腺皮质激素释放因子在Meynert基底核中对大鼠学习记忆的影响

为了探讨Meynert基底核内促肾上腺皮质激素释放因子对学习记忆的影响,本实验采用脑内埋管微量注射技术,把促肾上腺皮质激素释放因子(0,0.01,0.1和0.4nmol四个剂量组)分别注入大鼠双侧的Meynert基底核内,采用Morris水迷宫对大鼠进行空间辨别性学习记忆能力的测试。结果发现:0.1和0.4nmol剂量促肾上腺皮质激素释放因子均能使大鼠训练时寻找平台的时间(逃避潜伏期)延长,第12d的空间探索试验,0.1和0.4nmol剂量组的大鼠找到平台的时间也显著延长。结果提示:促肾上腺皮质激素释放因子在Meynert基底核内可损害大鼠的空间辨别性学习能力和记忆的巩固。     

毁损Meynert基底核造成皮层及海马的乙酰胆硷酯酶减少行为学和形态学研究(英文)

本研究通过毁损Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底核（ｎｂＭ ）建立Ａｌｚｈｅｉｍ ｅｒ氏病（ＡＤ）动物模型。用乙酰胆硷酯酶（ＡＣｈＥ）细胞化学方法对模型动物大脑皮层及海马进行反应，评价ＡＣｈＥ 与ＡＤ 之间可能存在的关系。将４８ 只大鼠分成对照组及实验组，用Ｍｏｒｒｉｓ 水迷宫（ＭＷ Ｍ ）测定行为学变化。在实验组，以局部注射海人藻酸的方法毁损ｎｂＭ 。术后７ ｄ，再次检测其行为学变化。存活不同时间后，用ＡＣｈＥ 酶细胞化学技术染色脑切片，用图象分析系统测算海马层ＡＣｈＥ阳性神经元及纤维的体积密度。结果显示，毁损ｎｂＭ 鼠皮质及海马的ＡＣｈＥ阳性神经元纤维明显减少，其特征为片层结构缺失。这些变化在毁损ｎｂＭ 鼠３～４ 个月及９～１０ 个月组间无显著差异。本研究证明，毁损ｎｂＭ 出现的ＡＣｈＥ减少与ＡＤ 的发生关系密切，且与同一动物模型β 淀粉样蛋白及τ蛋白过度表达在时间上一致，后者是ＡＤ 病人的特征。     

老年鼠皮质内胆硷能纤维损伤后的再生和抽芽

老年SD大鼠(24月龄)顶皮质切一宽2mm的冠状切口,用染色AChE纤维的组织化学方法分析术后1、2、3,4、5、8周切口嘴、尾侧区的胆硷能纤维的再生和抽芽状况.结果显示损伤后切口嘴侧纤维先轻度减少,然后迅速增加超过正常22.6%,并沿切口嘴侧缘形成密集的AChE阳性纤维丛;损伤后第1周切口尾侧纤维显著减少,相当于正常的22.3%,从第2周开始纤维数量逐渐增加,到8周时恢复到正常的82.7%;并发现少量纤维直接穿过切口进入尾侧区.提示老年哺乳类皮质胆硷能纤维有一定的再生和侧支抽芽能力.     

大鼠Meynert基底核TrkA和ChAT的表达

本实验用免疫组织化学方法研究了 Trk A在大鼠 Meynert基底核的分布及 Trk A、Ch AT免疫反应神经元的生后发育及两者表达的相互关系。用图像分析仪检测 Meynert基底核 Trk A-、Ch AT-IR神经元的数量、截面积和灰度值。结果表明 :　Tr-k A、Ch AT分布于 Meynert基底核神经元。生后 1d可见 Trk A表达 ,但未见 Ch AT表达 ;生后 5 d方出现 Ch AT表达 ;生后 2 0 dTrk A、Ch AT表达达高峰 ;生后 3 0 d下降 ,到成年时维持相对较高水平。老龄鼠 Trk A-、Ch AT-IR神经元萎缩 ,数量分别减少 41.3 8%和 5 1.61% ,胞体平均截面积分别减少 3 9.4%和 3 0 .4% ,平均灰度值分别减少 11.8%和 9.9%。大鼠 Trk A-、Ch AT-IR神经元截面积呈正相关。大鼠 Meynert基底核神经元 Trk A表达早于 Ch AT表达 ,从生后 5 d开始 ,Trk A、Ch AT表达有相似的时间模式。 Trk A可能参与 Meynert基底核胆碱能神经元的发育、分化、成熟和老化。老龄鼠 Trk A、Ch AT表达下降可能是老年动物和老年性痴呆病人基底前脑胆碱能神经元变性的易感性增加的原因之一     

老龄大鼠和年轻大鼠大脑皮层胆碱能系统功能的比较研究

用脑内微透析技术结合 HPL C-柱后固定化酶反应器 -电化学检测器方法分析比较了老龄大鼠和年轻成年大鼠额叶皮层乙酰胆碱的释放 ,并探讨了它和学习记忆功能减退的相关性。老龄大鼠额叶皮层乙酰胆碱的基础水平为 ( 0 .15 5 9± 0 .18)pmol/5μl,远较年轻大鼠的 ( 0 .2 93 9± 0 .14 ) pmol/5μl为低。老龄大鼠额叶胆碱能神经元对高 [K+ ]溶液的反应较弱 ,乙酰胆碱的释放量仅增加 3 0 .18% ,而年轻大鼠可增加 96%。老龄大鼠对新异环境刺激的反应也较年轻大鼠为弱 ,但电刺激 Meynert基底核仍能明显提高老龄大鼠额叶皮层乙酰胆碱的释放。实验结果还表明 ,老龄大鼠额叶皮层的乙酰胆碱水平有较大的个体差异 ,9只老龄大鼠额叶皮层乙酰胆碱释放量的变化范围为 0 .0 0 67pmol/5 μl～ 0 .41pmol/5 μl。这种差异也反映在老龄大鼠对被动回避反应的记忆保持能力上 ,2 4h步下潜伏期和乙酰胆碱释放量有较好的相关性 ,相关系数为 0 .86。本研究所获得的实验结果对进一步阐明老龄大鼠认知性功能缺损的机制具有重要意义     

缺血再灌注对大鼠神经元与星形胶质细胞的影响

应用免疫组织化学单标记法分别观察大鼠在大脑中动脉阻塞再灌注时胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和Fos蛋白在大脑皮质内表达的时间规律,并用免疫组织化学双重标记法观察GFAP和Fos蛋白表达的相互关系。结果发现在缺血1h再灌注2h时,大脑皮层的星形胶质细胞被激活,细胞体积增大,突起粗大,呈GFAP阳性。星形胶质细胞的反应直至48h依然强烈。被激活的星形胶质细胞和神经元表达Fos蛋白,并呈现时程变化规律。结果提示星形胶质细胞可能和神经元一起参与了大脑皮层缺血再灌注后的变化。     

Nogo(N-18)在大鼠海马及大脑皮质中分布和发育的免疫组织化学研究

目的 观察Nogo(N-18)在成年大鼠、乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质中的分布规律，探讨其存在的意义。方法 采用抗Nogo(N-18)多克隆抗体免疫组织化学链霉卵白素-过氧化物酶SP(streptavidin peroxidase，SP)法。结果 成年大鼠海马以及大脑皮质神经元胞核Nogo(N-18)免疫反应呈强阳性，胞浆和突起的反应较弱，而乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质神经元Nogo(N-18)免疫反应阳性产物只存在于突起和胞浆中。结论 Nogo(N-18)免疫反应阳性神经元广泛分布于成年大鼠、乳鼠和胎鼠海马及大脑皮质，其生物学意义有待探讨。     

降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）和神经生长因子（NGF）对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响。方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法。结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱；缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强（P〈0．01）；CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）。假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达；缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强（P〈0．01），缺血后再灌注3h强，1d、3d时弱；CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱（P〈0．01），分别弱于CGRP组和NGF组（P〈0．05）；CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3h时强，1d、3d时弱。结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达，两者对保护缺血神经元可能有协同作用。     

bFGF对成年大鼠损伤的大脑皮质神经元的作用

实验用ＳＤ大鼠４０只，其中３０只分为实验组和对照组各１５只，切片用甲基绿－派洛宁染色；另１０只也分为实验组和对照组，各５只，切片用神经丝免疫组化染色．手术毁损大鼠大脑顶叶皮质，立即放入分别浸有碱性成纤维细胞生长因子（实验组）或ＰＢＳ（ｐＨ７．２，０．２ｍｏＬ／Ｍ）（对照组）的海绵胶粒（１ｍｍ３），于术后１４ｄ，２４ｄ，３４ｄ在损伤的皮质腔内重复注射相应的实验用液２５μｌ．术后４０ｄ取材，在大脑皮质损伤腔颞侧边缘Ⅱ～Ⅲ层距边缘５００μｍ范围内，对每只大鼠计数了１ｍｍ２面积中的存活神经元数目，并观察神经元的形态学变化．结果发现，实验组大脑皮质存活神经元数目较多，对照组存活神经元较少．经体视学定量方法分析，结果其均数±标准差为：实验组９１９．４５±１６５．４０，对照组６２８．３９±５７．５０／ｍｍ２，经两样本均数ｔ检验，Ｐ＜０．０５．提示碱性成纤维细胞生长因子对大鼠大脑皮质损伤神经元有一定的维持存活作用．     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生长的影响

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ 大鼠左侧Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型。将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ者植入ＡＤ 模型鼠额、顶叶皮质,隔日通过脑室灌注人工脑脊液和相应神经营养因子共７ 次。移植后４ 个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色、ＮＡＤＰＨ ｄ和ＮＡＤＰＨ ｄ＋ ＡＣｈＥ 组化染色,计数移植区中ＮＯＳ阳性神经元数及其纤维在１６９００ μｍ ２ 网格中的交点数,并用ＭＩＡＳ ３００ 计算机图像分析系统对移植区中ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积进行处理。结果显示：给予神经营养因子的动物,移植区中的ＮＯＳ阳性神经元数、ＮＯＳ阳性纤维交点数和ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积等形态学指标均较不给予神经营养因子的对照组为佳,而在应用神经营养因子的各组中又以ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ组为优,提示ＢＤＮＦ、ＮＧＦ能促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元的发育生长,ＢＤＮＦ与ＮＧＦ联合使用可发挥协同作用。本文对ＢＤＮＦ和ＮＧＦ促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元发育生长的机制进行了探讨。