抗HBeAg不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及其应用

目的建立检测人乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的双单抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂。方法用基因工程HBeAg免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术建立能稳定分泌针对抗原不同位点单抗的杂交瘤细胞株。将构象型位点单抗和线性位点单抗配对做夹心ELISA,选择最匹配的一对建立双单抗夹心HBeAg检测试剂,并与人抗HBeAg多抗包板、单抗标酶的HBeAg检测试剂盒做对比试验。结果建立了89株能稳定分泌小鼠抗HBeAg的杂交瘤细胞株,其中63株单抗针对构象型位点,26株单抗针对线性位点。挑选出最匹配的7E6和e1构建成检测HBeAg的双单抗夹心ELISA检测试剂。与人抗HBeAg多抗包被、单抗酶标检测试剂对比,双单抗试剂具有更高的灵敏度,而其他指标基本一致。结论我们用不同位点的HBe单克隆抗体建立了高灵敏度、高特异性的有实用价值的HBeAg双单抗夹心ELISA检测试剂。     

HIV感染病人中抗-HCV检出率

1989年建立以丙肝病毒(HCV)非结构区重组肽C_(100)为抗原的第一代抗-HCV检测方法,因其敏感性不够可能导致对HCV感染率估计过低。后来加入另一个非结构区重组抗原C_33和HCV核壳区抗原建立了第二代抗-HCV检测方法,提高试验敏感性。该文作者以四种免疫学方法(第一代EIA和中和试验、第二代EIA和免疫印迹试验)检测人类免疫缺陷病毒(HIV)感染病人中抗-HCV阳性率,探讨HIV对HCV感染的影响及HCV的传播。研究对象为法国多中心前瞻性研究中的272例HIV血清学阳性至少一年以上的患者,男174例、女98例,平均年龄30.9岁(18～78岁)。因静脉毒瘾而感染者97例(35.7％)、同性恋男子68例(25.0％)、     

HBV S基因与HCV C基因融合基因免疫与联合基因免疫效果研究

目的比较HBV S基因与HCV C基因真核表达质粒融合基因免疫与联合基因免疫的效果，为HBV和HCV融合基因疫苗研究奠定基础。方法将同时含HBV S基因与HCV C基因的真核表达质粒SCpcDNA3.1、含HBVS基因真核表达质粒SpcDNA3.1、含HCV C基因真核表达质粒CpcDNA3．1分别免疫小鼠；将SpcDNA3.1 CpcDNA3.1联合免疫小鼠。ELISA法检测血清抗HBs和抗HCV。结果无论是抗HBs和抗HCV阳转出现的时间、阳转率和体液免疫应答强度，融合基因免疫都优于联合基因免疫：融合基因免疫的抗HBs的应答强度低于SpcDNA3．1质粒的免疫，抗HBc的应答强度高于CpcDNA3.1质粒的免疫。结论HCV C基因或其表达产物对HBV S基因或抗原的表达和提呈有抑制作用；HCV C基因与HBV S基因相融合，更有利于HCV核心蛋白的提呈。     

丙型肝炎病毒不同编码区重组抗原在抗体检测中的应用

目的　探讨丙型肝炎病毒 (HCV)不同编码区重组蛋白片段的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法　分别以 4种HCV单片段抗原 (C、NS3、NS4或NS5 )检测抗 HCV抗体阳性血清 ;以 4种单片段抗原的混合物 (MIX)检测抗 HCV抗体阳性血清、大学生体检血清和抗 HCV抗体阴性质控血清。结果　 90份抗 HCV抗体阳性血清中共有 75份可与一种或多种单片段抗原反应 ,阳性率分别为 70 .0 % (C)、6 1.1% (NS3)、5 2 .2 % (NS4 )、4 4 .4 % (NS5 ) ,其中仅与C、NS3、NS4和NS5一种抗原发生反应的分别有 8份、1份、2份和 3份血清标本 ;90份抗 HCV阳性血清经MIX抗原检测 ,阳性率为 83.3% (75 / 90 ) ;10 0份大学生血清和39份阴性质控血清经混合抗原检测均阴性。结论　HCV不同编码区重组蛋白片段有不同的免疫反应性 ,在发展抗 HCV抗体诊断试剂时 ,应采用各种不同编码区的混合抗原。     

抗HBeAg不同位点的单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及其应用

目的 建立检测人乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）的双单抗夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法用基因工程HBeAg免疫Balb／c小鼠，采用杂交瘤技术建立能稳定分泌针对抗原不同位点单抗的杂交瘤细胞株。将构象型位点单抗和线性位点单抗配对做夹心ELISA，选择最匹配的一对建立双单抗夹心HBeAg检测试剂，并与人抗HBeAg多抗包板、单抗标酶的HBeAg检测试剂盒做对比试验。结果建立了89株能稳定分泌小鼠抗HBeAg的杂交瘤细胞株，其中63株单抗针对构象型位点，26株单抗针对线性位点。挑选出最匹配的7E6和e1构建成检测HBeAg的双单抗夹心ELISA检测试剂。与人抗HBeAg多抗包被、单抗酶标检测试剂对比，双单抗试剂具有更高的灵敏度，而其他指标基本一致。结论 我们用不同位点的HBe单克隆抗体建立了高灵敏度、高特异性的有实用价值的HBeAg双单抗夹心ELISA检测试剂。     

抗人直肠癌单克隆抗体的制备及应用研究

目的:制备鼠抗人直肠癌单克隆抗体.方法:以手术取得的新鲜直肠癌组织免疫Balb/c小鼠,用淋巴细胞杂交瘤技术获得能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系.结果:制得了1株能稳定分泌高特异和高效价单抗的杂交瘤细胞系,其单抗相应抗原在直肠癌组织高度表达(＞90%),主要分布于细胞膜,胞浆少量分布,并可脱落至腺腔.结论:此单抗的成功研制为直肠癌早期诊断和进一步制备抗直肠癌独特型抗体提供了可能性.     

前列腺特异性抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的 筛选出针对总前列腺特异性抗原(t-PSA)等克分子的抗体对,及针对游离前列腺特异性抗原(f-PSA)灵敏度高线性好的抗体对.方法 以前列腺特异性抗原(PSA)为免疫原免疫6~8周龄BALB/C小鼠,4次免疫后取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,以PSA为包被抗原,通过间接ELISA法和有限稀释法筛选阳性细胞株.建株细胞通过F1代小鼠制备腹腔积液,纯化的单抗经间接ELISA法相加实验分析抗体与抗原表位结合位点,将单抗分类,双抗体夹心法ELISA筛选出合适的抗体对,利用国际标准品PSA WHO96/668和PSA WHO96/670鉴定等克的抗体对.结果 共获得88株稳定分泌PSA单克隆抗体的细胞株,经免疫特性鉴定后得到2对t-PSA等克的单抗,2对f-PSA的单抗,这6株单抗活性稳定,特异性强,灵敏度高,抗体对具有良好的线性.结论 该试验成功筛选出所需的抗体对,尤其适用于精确度、灵敏度要求较高的化学发光免疫分析法,为其定量分析人血清中的PSA提供了很好的原料.     

单克隆抗体治疗恶性肿瘤的临床应用进展

<正>单克隆抗体(单抗)指由一个识别单一抗原表位的B细胞克隆所分泌的高度均一性的特异性抗体。1975年Kohler和Milstein将小鼠骨髓瘤细胞与用绵羊红细胞免疫后的小鼠脾细胞进行融合,形成的杂交瘤细胞既能产生抗绵羊红细胞抗体,又能进行"永生化"地分裂繁殖,从而创立了单抗杂交瘤技术。目前,依据该原理制备的单抗已广泛应用于肿瘤的临床治疗,在非小细胞肺癌、乳腺癌、恶性淋巴     

单克隆抗体在肺癌诊断治疗中的应用

自1975年K(o|¨)hler和Milstein首次成功地将小鼠脾细胞与连续培养的骨髓瘤细胞株融合,创造杂交瘤技术以来,单克隆抗体(单抗)在肿瘤学领域内被广泛研究和应用。1979年Minna首先制备出抗人肺癌单抗。目前单抗在肺癌诊断和治疗方面的研究十分活跃。本文简要介绍有关进展及其前景。一、肺癌相关抗原单克隆抗体的制备应用杂交瘤技术制备肺癌单抗有三种途径。(1)利用已建立的人肺癌细胞株和小鼠B淋巴细胞瘤。Cu-ttita等用这种方法制备了主要与小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞癌(NSCLC)反应的单抗。(2)用肿瘤分泌产物作为确定抗原。已知肺癌能分泌癌胚抗原(CEA)和B绒毛膜性腺激素,也已制备出这些     

风疹病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及应用

为了建立产生风疹病毒（ＲＶ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株及检测ＲＶ感染的捕获ＥＬＩＳＡ。用ＲＶ抗原免疫后的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合建立杂交瘤细胞株。用相应单抗建立检测血清中ＲＶ行异性ⅠｇＭ的捕获ＥＬＩＳＡ，并以该法与间接ＥＬＩＳＡ进行了比较实验。获得的杂交瘤细胞５Ｄ５、５Ｇ５、２Ｆ７相应单抗均属ⅠｇＧ１，与纯化ＲＶ抗原有强阳性反应。两法比较，阳性血清Ｘ＾２＝０．２５，Ｐ〈０．     

蓖麻毒素单克隆抗体的制备、纯化及鉴定

目的 制备抗蓖麻毒素单克隆抗体并鉴定其特性.方法 以甲醛处理的蓖麻毒素毒蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法筛选、融合细胞有限稀释法克隆、克隆化杂交瘤细胞株的亚类鉴定等方法筛选出单克隆抗体杂交瘤细胞株,用杂交瘤细胞株诱生小鼠腹水,应用蛋白A亲和层析法进行单抗的纯化,并对单克隆抗体的特异性进行鉴定.结果 获得了4株可稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞2F6、4D3、1E4和1C7,诱生的腹水效价分别为1:1×107、1:1×106、1:1×105、1:1×106,亚类鉴定表明2E6为IgG1,其余3株均为IgG2h;特异性鉴定显示它们与多种毒素均无交叉反应,经过亲和层析,获得了纯化的单抗.结论 获得了特异性的蓖麻毒素单克隆抗体,为建立蓖麻毒素的检测及纯化方法奠定了基础,其中2E6的效价最高,可作为检测蓖麻毒素的核心试剂.     

三株抗人巨细胞病毒pp65蛋白单克隆抗体的鉴定和应用

目的 制备抗HCMVpp65蛋白的单克隆抗体(简称单抗),并对其进行相关研究.方法 以重组表达的HCMVpp65蛋白为抗原,运用杂交瘤技术制备单抗,对获得的单抗进行Ig亚型、特异性、效价和亲和常数的鉴定与测定,并以免疫荧光检测法与进口同类产品进行比较.结果 获得3株针对HCMVpp65蛋白的单抗,即B6、G12、2B12;Ig亚型依次为IgG1κ型、IgG1κ型、IgMκ型;亲和常数依次为3.6×107 L/mol、3.8×107 L/mol、3.1×108 L/mol;免疫印迹试验结果表明,3株单抗都与HCMVpp65蛋白特异性的结合,除2B12外,B6、G12与EB病毒(EBV)、单纯疱疹病毒(HSV)Ⅰ、HSVⅡ均无交叉反应;与进口单抗平行检测140份临床标本,结果一致(r=1.00,P＞0.05).结论 成功获得3株稳定分泌抗HCMVpp65蛋白的杂交瘤细胞株,所产生的抗体特异性和亲和力较理想,为HCMVpp65蛋白抗原血症检测国产化试剂盒的研制奠定了基础.     

神经元特异烯醇化酶单克隆抗体的制备

用ＮＳＥ粗制品免疫雌性ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，经免疫小鼠脾细胞和鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０的融合，ＥＬＩＳＡ法筛选，建立了四株持续分泌抗ＮＳＥ单抗的杂交瘤细胞。免疫沉淀法，单抗亲和柱纯化抗原鉴定等方法证实所分泌单抗对ＮＳＥ具有良好的特异性，注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价的抗ＮＳＥ的腹水。这四株细胞分泌ＩｇＧ１亚类抗体、且检查其染色体数目均大于９０条。     

重组日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶单克隆抗体在急性血吸虫病临床诊断中的应用

目的研究重组抗原26 ku日本血吸虫谷胱甘肽-硫-转移酶(SjGST)及其单克隆抗体在血吸虫患者分子诊断中的应用。方法用已纯化的重组SjGST抗原免疫近交系(BALB/c)小鼠,数周后取免疫鼠脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,选择性培养基筛选出杂交瘤细胞,经有限稀释法克隆化,扩大培养制备针对重组SjGST抗原的单克隆抗体细胞株。亲和层析法纯化单克隆抗体。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测急性血吸虫病患者和非流行区正常人血清。结果成功获得重组蛋白26 ku SjGST,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带。成功获得能够长期分泌抗重组SjGST单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA与蛋白质印迹试验均显示杂交瘤细胞培养上清中含有重组SjGST抗体。ELISA检测患者血清结果表明,26 ku SjGST用于急性血吸虫病患者血清中抗体检测的阳性率为90.6%,26 ku SjGST抗体用于急性血吸虫病患者血清中循环抗原检测的阳性率为59.4%。结论该重组蛋白用于急性血吸虫病患者血清中抗体的检测具有良好的免疫反应性,26 ku SjGST抗体对循环抗原的检测可作为抗体检测的有效补充。     

抗人真肠癌单克隆抗体的制备及应用研究

目的 制备鼠抗人直肠癌单克隆抗体。方法 以手术取得的新鲜直肠癌组织免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，用淋巴细胞杂交瘤技术获得能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系。结果 制得了１株能稳定分泌高特异和高效价单抗的杂交瘤细胞系，其单抗相应抗原在直肠癌组织高度表达（〉９０％），主要分布于细胞膜，胞浆少量分布，并可脱落至腺腔。结论 些单抗的成功研制为直肠癌早期诊断和进一步制备抗直肠癌独特型抗体提供了可能性。     

肝癌特异性GGT同工酶单克隆抗体的制备

[目的]制备肝癌特异性GGT同工酶（HS-GGT）的单克隆抗体。[方法]以纯化的HS-GGT作为抗原免疫BALB/c小鼠，取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤（SP2/0）细胞融合，经免疫酶斑点检测法（Dot-ELISA)筛选和有限稀释法获得分泌单克隆抗体的细胞株。[结果]获得2株识别HS-GGT的单克隆抗体细胞株Ⅲ7B、Ⅻ2C。该抗体能特异性识别HS-GGT；Dot-ELISA法测定杂交瘤细胞培养上清及体内成瘤后产生的脾水的抗体效价为1：60、1：800；杂交瘤细胞染色体数平均为90-108；亚类鉴定单抗为小鼠IgGl。[结论]成功制备了2株HS-GGT单克隆抗体杂交瘤细胞系。     

抗人和肽素单克隆抗体的研制

目的制备抗人和肽素单克隆抗体并完成鉴定。方法合成人和肽素C端及N端氨基酸片段并耦联钥孔戚血蓝蛋白(KLH)作为抗原,分别免疫BALB/c小鼠,利用经典杂交瘤技术筛选出分泌抗人和肽素抗体的单克隆细胞株,动物体内诱生法收集腹水,葡萄球菌蛋白A亲和层析柱纯化腹水中的单克隆抗体(单抗),完成抗体亚类鉴定,用间接ELISA鉴定其活性,初步应用于免疫细胞化学检测。结果获得了3株特异性抗人和肽素单抗2h7、5b10及5e7,均属于IgG1亚类,2h7针对的抗原表位在和肽素C端,而5b10及5e7针对的抗原表位在和肽素N端。间接ELISA检测证实3株单抗均特异性识别人和肽素,其中2h7和5b10可应用于免疫细胞化学分析。结论成功制备出抗人和肽素单抗,能特异识别和肽素C端和N端,可应用于细胞免疫化学检测,为人和肽素的进一步研究提供依据。     

人血管性血友病因子A1区单克隆抗体的研制

目的 研制人血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)A1区的单克隆抗体.方法 采用基因重组技术体外表达人vWF A1区蛋白(rvWF-A1),以rvWF-A1免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合,HAT选择性培养,用ELISA筛选阳性杂交瘤细胞.Western blot方法进行单抗鉴定.结果 构建了rvWF-A1表达载体pQE30-vWF-A1.rvWF-A1在大肠杆菌 M15中稳定表达.通过融合、筛选获得一株阳性杂交瘤细胞1B10.该抗体Western blot显示能特异性地与rvWF-A1和人血浆中vWF结合.结论 表达了rvWF-A1,并制备了具有潜在抗血栓作用的vWF-A1单克隆抗体1B10.     

白血病干细胞的新型标志蛋白IL1RAP杂交瘤细胞的制备及其分泌单克隆抗体的检测

本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP（IL-1receptoraccessoryprotein）的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB／c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2／0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株。分别应用EusA和Westernblot法对杂交瘤细胞上清中分泌抗体进行抗体类型、滴度和敏感性检测。分离人外周单个核细胞,检测所得抗体对细胞内源性抗原的特异性。结果表明,获得了8株可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3H6E10、486A6、8G1185、9E9F2、10D8A7、1C7H7、1D7G11和2D3D3;抗体类型鉴定为IgG1／K型;分泌的单克隆抗体能特异性识别单个核细胞表达的IL1RAP。结论：本实验成功制备了可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞及其特异性的IL1RAP单克隆抗体,为将来有效清除体内白血病干细胞提供了新途径。     

促丝裂原活化淋巴细胞诱导抗双链NDA抗体生成

抗双链DNA(ds-DNA)抗体是系统性红斑狼疮(SLE)的特征性和致病性抗体,但该自身抗体的诱生机理至今不明.我们用刀豆蛋白(Con A)和脂多糖(LPS)活化的小鼠淋巴细胞为自身抗原,分别免疫同系小鼠,均能诱导出IgG类抗ds-DNA抗体,并且小鼠肾脏有IgG类免疫复合物沉积形成.结果提示活化淋巴细胞的核内成分是诱生抗ds-DNA抗体的自身抗原.