HSP90通过PTK2B影响Aβ1-42诱导的痴呆小鼠学习记忆功能

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)和蛋白酪氨酸激酶2β(PTK2B)与Aβ_1-42诱导痴呆模型小鼠学习记忆功能的关系。方法:32只C57BL/6J小鼠分为对照组(NS)、痴呆模型组(Aβ_1-42+NS)、HSP90抑制剂Luminespib处理组(Aβ_1-42+Lum)以及PTK2B抑制剂PF431396处理组(Aβ_1-42+PF)。实验组侧脑室注射Aβ_1-42构建痴呆模型后分别注射HSP90抑制剂或PTK2B抑制剂进行处理。采用水迷宫对小鼠学习记忆功能进行检测，Western Blot检测海马HSP90、PTK2B的表达情况以及tau蛋白磷酸化水平(p-tau),免疫组织化学染色检测海马HSP90和PTK2B的表达，real time RT-PCR检测PTK2B mRNA表达。结果:在Aβ_1-42诱导的痴呆模型小鼠海马中，PTK2B及p-tau水平均升高，HSP90水平降低(P<0.01)。而应用HSP90抑制剂则更进一步导致小鼠海马PTK2B...     

PTK重组质粒的构建与表达

目的构建并表达出PTK重组蛋白,以鉴定酪氨酸蛋白激酶(PTK)的活性,筛选酪氨酸激酶的抑制剂.方法从PTK重组克隆载体上切下目的基因片段Abl-PTK使其连接到表达载体pGEX4T-2上,转化大肠杆菌DH5a,筛选鉴定出正确的转化子.转化菌株经IPTG诱导后进行表达并进行SDS-PAGE分析.结果经酶切和诱导表达鉴定,重组质粒pGEX4T-2-PTK构建成功,并高效表达了58KD的GST-PTK融合蛋白.结论PTK基因被成功地重组至融合蛋白表达载体中,并在大肠杆菌中获得高效表达.该研究为进一步纯化、鉴定PTK的活性,筛选PTK的抑制剂奠定了基础.     

蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P0.05);上调PTK6使ZO-1、Occludin转录及蛋白水平和TER值进一步降低,细胞通透性和p-JNK1/2、p-p38蛋白水平也进一步增高(P0.05),但下调PTK6后上述指标呈相反变化(P0.05);上调或下调PTK6对p-ERK1/2无明显影响。结论:下调PTK6可以降低JNK1/2、p38MAPK磷酸化水平,进而改善TNF-α诱导的气道上皮屏障功能减损。     

蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响北大核心CSCD

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P<0.05);上调PTK6使ZO-1、Occludin转录及蛋白水平和TER值进一步降低,细胞通透性和p-JNK1/2、p-p38蛋白水平也进一步增高(P<0.05),但下调PTK6后上述指标呈相反变化(P<0.05);上调或下调PTK6对p-ERK1/2无明显影响。结论:下调PTK6可以降低JNK1/2、p38MAPK磷酸化水平,进而改善TNF-α诱导的气道上皮屏障功能减损。     

dt_2-cAMP,IFN-γ和PMA对U937胞浆Ca~(2 )和酪氨酸激酶的影响

目的探讨dt2 cAMP ,PMA和IFN γ对U937细胞C5aR表达的影响 ,以及rhC5a刺激受dt2 cAMP ,PMA和IFN γ分化的U937细胞后 ,其胞浆Ca2 浓度的变化情况。方法用流式细胞仪分析胞膜C5aR和胞浆蛋白酪氨酸激酶的表达 ;荧光发光法测定胞浆Ca2 浓度的变化。结果dt2 cAMP ,PMA和IFN γ等可不同程度地上调C5aR表达。用0.5mmol/L的dt2 cAMP就足以上调U937细胞C5aR分子 ,10～20nmol/L浓度范围的PMA对C5aR表达的上调没有明显差异 ,IFN γ也可上调U937细胞上C5aR的表达。此外 ,rhC5a刺激受dt2 cAMP ,PMA和IFN γ分化的U937细胞 ,可使其细胞浆Ca2 浓度上升。蛋白酪氨酸激酶(PTK)抑制剂Genistein可明显抑制rhC5a所致U937细胞胞浆Ca2 浓度升高。结论PTK可能参与了C5a C5aR相互作用过程中的信号转导。     

PTK7在食管鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的研究酪氨酸蛋白激酶-7（PTK7）在食管鳞状细胞癌、癌旁组织中的表达及其与食管鳞状细胞癌的发展、侵袭、淋巴结转移的关系,分析其在食管鳞癌中的诊断价值及预后变化。方法收集食管鳞状细胞癌标本80例及癌旁组织63例,采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法检测PTK7蛋白的表达,结合临床相关因素进行x2检验及Kaplan—meier等统计学分析。结果80例患者食管鳞状细胞癌组织中有45例PTK7蛋白表达阳性（X2=50．17,P〈0．01）,食管癌旁非典型增生及正常鳞状上皮中PTK7蛋白表达均阴性。PTK7表达与食管鳞癌的年龄、性别、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、浸润长度、临床分期等比较差异无统计学意义（P〉0．05）;与5年生存率比较差异亦无统计学意义（X2=0．2,P〉0．1）;当肿瘤组织PTK7蛋白表达综合免疫组化评分≥5分时,5年生存率有下降趋势（X2=3．35,P=0．06）。结论PTK7表达与食管鳞癌有关,当PTK7综合免疫评分≥5分时,5年生存率有下降趋势。利用检测PTK7的表达,有助于综合判断食管鳞癌的相关性和临床预后。     

CD2途径T细胞激活与PTK

同T淋巴细胞激活后Ser/Thr蛋白激酶(PKC,PKA)作用一样,Tyr蛋白激酶(PTK)在激活T细胞中也有重要作用,参与T细胞活化的PTK主要有两种,分子量为56KD的P56~(LCK)和分子量为59KD的P59~(fyn).它们结合于胞膜内表面接受抗原激活后传递来的信号而活化,使得底物蛋白质上的Tyr磷酸化,从而激活或抑制这些活性蛋白质而发挥作用,本文重点论述PTK的生物学特性及其参与CD2途径活化T细胞的三种信号传递模式.     

人酪氨酸激酶6原核表达载体的构建、表达、纯化与鉴定

目的构建人络氨酸激酶6(PTK6)与His融合蛋白重组表达载体,在大肠杆菌中诱导表达,并对重组蛋白进行纯化。方法通过PCR在编码PTK6的cDNA序列两端添加EcoR I和BamH I酶切位点,双酶切后将编码PTK6的cDNA序列亚克隆至原核表达载体PHUE构建重组蛋白表达载体PHUE/PTK。重组载体经鉴定后转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)感受态细胞。IPTG诱导重组蛋白表达。收集菌体裂解后,用尿素洗涤和溶解包涵体。溶解上清经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并用SDS-PAGE和Western blotting检测纯化产物。结果成功构建人PTK6重组蛋白原核表达载体,重组蛋白以包涵体形式表达,其相对分子质量为55 000,与预期一致。亲和层析纯化产物的SDS-PAGE和Western blotting鉴定表明获得纯度大于80%的目的重组蛋白。结论人PTK6 His融合蛋白的纯化为多克隆及单克隆抗体的制备以及结构和功能的研究奠定了基础。     

TCRVβ基因亚家族的优势取用和PTK信号传导途径的激活及体外对肝癌细胞凋亡的诱导

目的：研究特异识别肝癌细胞株肿瘤相关抗原的TCRVβ基因亚家族的优势取用及对肝癌细胞凋亡的诱导。方法：流式细胞术检测淋巴细胞表型,RT-PCR和Southem印迹分析TCRVβ基因亚家族表达水平,Westem blot检测PTK含量,透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果：McAb共刺激T细胞与肝癌细胞混合培养后,T细胞表面CD3和CD8分子表达量明显升高,而CD4玩明显变化,TCRVβ6选择性扩增,表达水平由5%升高至13%-25%,且在第4天达到高峰,同时相应的PTK信号传导途径被激活,其含理由11%升至58%,亦在第4,5天达到高峰,以抗CD3 CD28,抗CD28 CD80,抗CD2 CD58共刺激的淋巴细胞均在体外诱导了肝癌细胞的凋亡。结论：TCRVβ7为特异的肿瘤抗原识别受体,TCR-CD4复合物与抗原结合后激活PTK信号传导途径。并诱导了肝癌细胞的凋亡。     

PTK 对跨膜型与分泌型TNF-α诱导中性粒细胞功能的调节作用

目的:研究酪氨酸磷酸化激酶（PTK）对跨膜型〔TM-TNFα）与分泌型TNF-α（S-TNF-α）诱导中性粒细胞呼吸爆发和NO释放的影响。方法:用化学发光法检测呼吸爆发,用硝酸还原酶法定量检测释放的NO,在体外观察PTK抑制剂对两型TNF-α诱导中性粒细胞以上功能的影响,并用Western印迹比较两型TNF-α诱导中性粒细胞蛋白酪氨酸磷酸化的异同。结果:PTK抑制剂Genistein（50 μmol/L）不仅可明显抑制S-TNF-α诱导的中性粒细胞呼吸爆发（P<0.005）,也可明显抑制TM-TNF-α诱导的中性粒细胞产生NO（P<0.001）。Western印迹显示大约17KD处,S-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化条带比对照略强,而TM-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化条带则明显增强;约于31 kD处,出现由TM-TNF-α介导的酪氨酸磷酸化的特异性条带,而在其它处理组则均未发现。结论:两型TNF-α对中性粒细胞功能的影响均依赖于PFK的激活;但二者诱导酪氨酸磷酸化的程度及酪氨酸磷酸化的靶分子则存在差异。     

胆固醇缺乏对Jurkat细胞增殖的影响

利用间接免疫荧光染色、荧光探针标记、免疫细胞化学染色及免疫印迹等实验方法 ,从细胞增殖转化功能、细胞膜脂质流动性、蛋白酪氨酸激酶 (PTK )活性以及细胞周期调控蛋白表达的变化等方面探讨了胆固醇缺乏对Jurkat细胞的功能影响及其分子机制。结果显示 :经去脂血清培养基培养的Jurkat细胞加洛伐他丁处理 3d后 ,细胞膜脂流动性明显增大 ,细胞生长速度明显下降 ,细胞增殖受抑 ,PTK活性及细胞周期素D1(cyclinD1)、周期素依赖性激酶 4 (CDK4 )蛋白的表达明显降低 ,加入低密度脂蛋白可以部分逆转上述变化。结果提示 ,无论是内源性还是外源性胆固醇的缺乏都能使Jurkat细胞膜脂流动性发生变化 ,细胞PTK活性下降 ,cyclinD1、CDK4蛋白表达降低 ,推测这一变化与细胞增殖受抑有直接关系     

黏着斑激酶与肿瘤

黏着斑激酶(FAK)最初是在1992年被发现的,因其定位于整合素簇集的部位即黏着斑,故命名为之[1].FAK属非受体酪氨酸激酶家族中的FAK/PTK2亚家族,该亚家族仅有两个成员:FAK(PTK2)和PYK2(PTK2B).FAK在哺乳动物以及低等真核生物如果蝇、斑马鱼等的大多数组织及细胞类型中都有表达,且其序列在进化上具有保守性性[2],而PYK2表达具有一定的组织特异性.     

BCR信号转导研究进展

B细胞表面抗原受体(BCR)与其抗原或其它配体(如anti-μMcAb)的结合启动了B细胞的活化。BCR交联后,首先在其ITAM序列部位发生酪氨酸磷酸化,从而富集并激活Src家族蛋白质酪氨酸激酶(PTK),进而Src家族PTK将SykPTK等的酪氨酸磷酸化而活化,使信号传递下去。在此过程中,还有FcγRⅡb和CD22等分子通过富集蛋白质酪氨酸磷酸酶PTP1C活化信号进行负调控。本文对此BCR信号转导早期阶段的主要途径及其调控机理进行综述。     

18%Ⅲ度烫伤对小鼠脾脏T淋巴细胞肌醇脂质信号系统及其功能的影响

目的：探索18％Ⅲ度烫伤对小鼠脾脏T淋巴细胞肌醇脂质信号系统活性的影响及其与T细胞功能受抑，IL-2、IL-10分泌的关系，即烧伤后T淋巴细胞功能受抑的信号转导分子机制。方法：以18％Ⅲ度烫伤小鼠为模型，检测烫伤后不同时相参与跨膜信号转导的G蛋白（G-protein）、蛋白酪氨酸激酶（PTK）、蛋白激酶C(PKC)及胞浆PTK、PKC、PI-PLC活性与Ca 浓度的改变，观察不同时相细胞功能及IL-2、IL-10分泌，分析各信号转导分子活性改变与T细胞功能受抑，IL-2、IL-10分泌的关系。结果：烧伤后膜G-protein、浆PI-PLC变化趋势与G-protein相同，但出现活性受抑的时间较G-protein拖后一个时相）。胸浆游离Ca 浓度明显降低，明显降低的时相亦始于伤后12h。PTK和PKC由于存在膜浆两相，其变化规律较复杂，转膜PKC活性呈现先降低（伤后2-24h）后升高（伤后96h及以后）的双相改变，浆PKC活性变化与之相反；膜PTK活性于伤后早期降低，168h后升高，浆PTK活性于伤后各时相均升高。T淋巴细胞增殖能力和IL-2分泌于伤后各时相均降低，其变化趋势与胞膜G-protein和胞浆游离Ca 浓度呈显著正性直线相关。IL-10分泌亦呈先降低后升高的双相改变，其活性改变与胞浆PKC呈负性直线相关。结论：肌醇磷脂途径胞膜G-protein、胞膜PTK和胞浆游离Ca 浓度改变是严重烧伤后T淋巴细胞增殖能力降低，IL-2分泌减少和IL-10分泌先降低后升高的主要信号转导分子机制。     

磷酸二酯酶抑制剂的免疫调节和抗炎作用

氨茶碱和选择性磷酸二酯酶（ＰＤＥ）抑制剂具有广泛的免疫调节作用，能够抑制多种炎性细胞的激活和炎性介质的释放，抑制淋巴细胞增殖和嗜酸细胞聚集，降低气道反应性等，有必要对茶碱类在哮喘治疗中的作用和地位给予重新评价，选择性ＰＤＥⅣ抑制剂可望成为新一代的抗炎药物     

衰变加速因子及其所在膜微区在T淋巴细胞信号传递中的作用

低温抽提Jurkat细胞膜去污剂抗性的膜成分(DIG),检测Src家族酪氨酸激酶(PTK)及衰变加速因子(DAF)的分布情况。共聚焦扫描显微技术检测Jurkat细胞静息与交联状态下DAF分子对去污剂Triton-X100的抗溶性,以探讨其在Jur-kat细胞免疫识别中的作用,结果显示静息状态CD3对去污剂无抗溶性,而DAF与Lck有抗溶性。单抗交联后CD3对去污剂抗性有所增加。静息状态DAF与Src家族PTK特异分布于膜微区中,交联CD3可诱导CD3与膜微区特异性聚集,DAF所在的膜微区可能促进T细胞的免疫识别和信号传递作用。     

磷酸地酯酶抑制的免疫调节和抗炎作用

氨茶碱和选择性磷酸二酯酶（ＰＤＥ）抑制剂具有广泛的免疫调节作用，能够抑制多种炎性细胞的激活和炎性介质的释放，抑制淋巴细胞增殖和嗜酸细胞聚集，降低气道反应性等，有必要对茶碱类在哮喘治疗中的作用和地位给予重新评价，选择性ＰＤＥⅣ抑制剂可望成为新一代的抗炎药物。     

BCR／ABL嵌合蛋白信号转导研究进展

BCR/ABL嵌合蛋白具有较强的蛋白酪氨酸激酶 (PTK)活性 ,可组成性激活Ras/MAPK ,JAK STAT ,PI3 K ,c Myc等细胞内各种信号转导途径 ,从而促进细胞的分裂、改变造血细胞的粘附特性及运动性、降低细胞对凋亡信号刺激的反应性 ,导致白血病的发生     

PTP的结构与功能

蛋白质分子中酪氨酸残基的可逆性磷酸化作为真核生物信号转导的一个重要组成部分,参与了多种细胞功能调节,包括细胞增殖、迁移以及细胞间相互作用等。目前认为这种可逆性的磷酸化调节主要是受控于蛋白酪氨酸激酶(PTK)及蛋白酪氨酸磷酸酯酶(PTP)这两种酶活性的动态平衡。因此,与PTK一样,PTP对于体内各种生命活动起着非常重要的生物学作用。文章综述了近年来PTP在信号转导中的调控作用,特别是其在肿瘤发生、发展过程中的作用、以及其本身的结构与调控的研究进展。     

酪氨酸蛋白激酶对磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D的调节

磷脂酶 D(PLD)被认为是细胞信号转导途径中的重要成员,受多种因素调节。本文主要对受体酪氨酸蛋白激酶(PTK)、非受体PTK以及氧化剂诱导的酪氨酸磷化与磷脂酶D的关系及PTK调节PLD的机理研究进行综述。