单磷酸腺苷激活蛋白激酶的活性调节

AMP激活蛋白激酶(AMPK)是参与细胞及全身水平能量代谢调节的一个关键分子,AMPK通过各种途径激活后可以刺激分解代谢途径(脂肪酸氧化、线粒体的生物合成和糖酵解)和抑制合成代谢途径(糖原、葡萄糖、蛋白质及脂肪酸的合成),并具有直接调节下丘脑对食欲的影响,被称为"能量开关"。现就AMPK活性调节机制的研究进展进行综述。     

激活细胞外信号调节激酶-丝裂原蛋白激酶信号通路对人结肠癌细胞增殖及相关基因的影响

目的探讨野生型RAF和MEK持续激活细胞外信号调节激酶．丝裂原蛋白激酶信号通路（ERK-MAPK）对人结肠癌细胞增殖及细胞周期相关基因的影响。方法培养人结肠癌细胞系SW1116,脂质体介导RAF、MEK基因和空质粒转染,G418筛选阳性克隆。流式细胞仪分析细胞周期,光学显微镜下观察细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,生长曲线和软琼脂集落形成检测细胞增殖,实时定量PCR检测p21^WAF1和p16^INK4A及癌基因c-myc转录水平。结果建立稳定表达RAF或MEK的细胞系,RAF或MEK高表达均能明显降低G0／G1期细胞百分比,促进细胞周期由G1向S期进行,增加DNA合成的S期细胞百分比,细胞活力和增殖力升高3—4倍,细胞分裂增殖旺盛。转染RAF／MEK质粒后,细胞均呈现p21^WAF1和p16^INK4A转录水平降低,c-myc转录水平升高。结论ERK-MAPK信号通路激活可下凋细胞周期相关基因p21^WAF1和p16^INK4A表达,并上调c-myc表达,减少G0期时相,加速G1／S期转化,促进细胞增殖。     

肥厚心肌缺血后适应时细胞外信号调节激酶的保护作用

目的 研究缺血后适应(IPost)在离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注(L/R)损伤中的保护作用,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在此保护中的作用机制.方法 12周龄C57/BL小鼠通过主动脉弓缩窄4周建立心肌肥厚模型,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌I/R模型,30 min全心缺血随后再灌注120 min.分为4组,I/R组、Ipost组(采取缺血10 s及再灌注10 s的3次IPost周期)、I/R+PD98059组(ERK1/2抑制剂)、Ipost+PD98059组,进行心脏血流动力学、心肌梗死范围检测,Western印迹方法检测细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt.c)蛋白表达水平,脱氧核苷酸转移酶介导的生物素原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞的凋亡.结果 与I/R组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标左心室收缩压、左心室压力变化最大速率显著改善[(85±4)mm Hg比(68±5)mm Hg,(3811±230)mm Hg比(2830±230)mm Hg,均P<0.05],IPost组心肌的ERK1/2磷酸化水平、Bcl-2、线粒体Cyt.C表达显著增加,Bax、胞质Cyt.C蛋白表达显著降低,凋亡指数显著降低,心肌梗死范围减小(均P<0.05).与I/R组比较,I/R+PD98059组上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05).IPost+PD98059组显示在再灌注的最初15 min使用PD98059能消除IPost对肥厚心肌的上述保护作用并显著增加心肌梗死面积,与I/R组水平相同.结论 IPost能有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤,ERK1/2细胞信号途径参与IPost对缺血再灌注肥厚心肌保护作用并可能通过其抗凋亡的机制实现.     

己酮可可碱对p38丝裂原激活蛋白激酶激活的影响

目的:观察己酮可可碱(PTX)对p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活的影响,探讨PTX保护内皮细胞单层通透性的机制.方法:建立内皮细胞单层损伤模型,随机分为脂多糖(LPS)-A组、LPS-B组、LPS PTX-A组及LPS PTX-B组,分别以不同终浓度LPS及PTX刺激不同时间,以Western印迹杂交技术检测内皮细胞p38MAPK活性.结果:LPS组,随着LPS刺激时间的延长及刺激浓度的增大,磷酸化的p38MAPK亮度逐渐增强;LPS PTX组,磷酸化的p38MAPK亮度随着PTX刺激时间的延长及刺激浓度的增大而逐渐减弱.结论:PTX可通过降低p38 MAPK的活性而起保护内皮细胞通透性的作用.     

AMP激活蛋白激酶对慢性心力衰竭进展影响的实验研究

目的:探讨AMP激活蛋白激酶(AMPK)对慢性心力衰竭进展的影响及可能作用机制.方法:选择8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠共40只,随机分为四组,其中A组为生理盐水(NS)注射+假手术(sham),B组为AICAR注射+假手术(sham),C组为NS注射+行主动脉缩窄手术,D组为AICAR注射+行主动脉缩窄手术;比...     

细胞外信号调节激酶和转化生长因子β1在哮喘气道重塑中的作用以及糖皮激素的调控

目的 研究细胞外信号调节激酶（ERK）和转化生长因子β1（TGF—β1）在哮喘气道重塑中的作用,探讨糖皮质激素对ERK、TGF—β1及哮喘气道重塑的调控。方法建立慢性哮喘动物模型,将30只SD大鼠随机分对照组、哮喘组、地塞米松干预组（DM组）。免疫组化测定肺组织中磷酸化的ERK（P-ERK）,ELISA测定血清中TGF—β1含量。体外培养大鼠气道上皮细胞,以BB型血小板源性生长因子（PDGF—BB）、U0126、布地奈德（BUD）作为工具药干预细胞,Western印迹检测细胞ERK磷酸化水平,ELISA法检测细胞上清液TGF—β1含量。结果哮喘组P—ERK平均吸光度和TGF—β1含量[分别为（31．1±2．2）和（28．1±7．4）μg/L]均较对照组[（12．8±2．4）和（13．6±2．7）μg/L]高（P〈0．01）,DM组[分别为（18．7±3．1）和（15．0±3．2）μg/L]较哮喘组低（P均〈0．01）。ERK的磷酸化与PDGF—BB存在浓度依赖关系,50μg/L时ERK磷酸化水平最高,高于对照组（P〈0．01）;U0126和BUD均可抑制ERK的磷酸化;各处理组细胞上清TGF—β1差异无统计学意义。结论ERK磷酸化、TGF—β1在支气管哮喘气道重塑中起重要作用;PDGF—BB不能通过ERK磷酸化诱导正常大鼠气管上皮细胞产生释放TGF—β1;糖皮质激素能抑制ERK磷酸化。     

牛磺酸对重症急性胰腺炎大鼠枯否细胞p38MAPK信号转导通路的影响

目的 探讨牛磺酸对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠枯否细胞(KCs)P38MAPK的影响以及对分泌促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的作用.方法 48只SD大鼠采用完全随机法分为假手术对照(SO)组、SAP组、SAP+Taut(牛磺酸)组.SAP模型通过胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱导,造模前SAP+Taur组分别于24、12 h从尾静脉内注入牛磺酸(3 mmol/L,0.1 ml/100 g).假手术或造模后分别于12、24 h处死动物,检测其血清中AST、ALT、AMS含量;分离KCs,采用Western blot法检测P38MAPK活化情况,凝胶电泳迁移率法(EMSA)检测KCs中NF-κB DNA的表达,并用ELISA法检测KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量.结果 SAP组大鼠血清中AST、ALT、AMS含量均较SO组明显升高(P<0.01);而SAP+Taur组血清中AST、ALT、AMS含量与SAP组比较,明显降低(P<0.05).SAP组各时间点大鼠KCs中p38MAPK活性显著高于SO组(P<0.01),而且NF-κB的表达也明显高于SO组(P<0.01),KCs培养上清液中TNF-α和IL-1β蛋白含量明显高于SO组(P<0.01),但SAP+Taut组大鼠KCs上述指标均显著低于SAP组.结论 牛磺酸可以抑制急性胰腺炎时KCs中p38MAPK的活化,减少NF-κB的表达,从而对促炎细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌起抑制作用,可能具有临床应用前景.     

乳腺癌与细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶关系的研究进展

在信号网络中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号传递途径起着极为重要的作用,MAPK异常活化导致细胞分化、凋亡功能的丧失,引起细胞恶性转化,异常增殖、肿瘤发生、侵袭能力增强,最终导致肿瘤转移。细胞外信号调节激酶(ERK)是MAPK家族极其重要的一员,它的信号传递途径是涉及调节细胞生长、发育及分裂的信号网络的核心,其基本的信号传递步骤已明确,遵循MAPKs的三级酶促级联反应,即上游激活蛋白→MAPK激酶激酶(MAPKKK)→MAPK激酶(MAPKK)→MAPK。在ERKs的传递途径中,Ras作为上游激活蛋白,Raf作为MAPKKK,MAPK/ERK激酶(MEK)作为MAPKK,ERK即MAPK,即Ras-Raf-MEK-ERK途径,它是表皮生长因子受体(EGFR)信号传导通路最主要的通路之一,主要调节细胞增殖和生长。在恶性肿瘤尤其是乳腺癌的发生、发展、浸润和转移方面都起着重要的作用。     

胰岛素对NIH3T3细胞生长和Ras-MAPK信号途径的影响

目的 探讨胰岛素激活的Ras-MAPK信号途径对鼠成纤维细胞（NIH3T3细胞）生长的影响。方法 藉四唑蓝比色法（MTT法）和蛋白免疫印迹试验分别观察胰岛素对NIH3T3细胞生长和胞内丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）活性的影响。结果 胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用呈时间和浓度依赖性，10mU/ml胰岛素对NIH3T3细胞的促增殖作用效果最佳，对NIH3T3细胞作用的EC50是0.2mU/ml(48h);0.14mU/ml(72h)。MAPK在10mU/ml胰岛素刺激1min后即出现酪氨酸磷酸化，10min达到高峰。胰岛素作用10min，MAPK酪氨酸磷酸化程度随浓度增高（0.1,1.0,10mU/ml)而递增。结论 胰岛素对NIH3T3细胞促增殖作用与激活Ras-MAPK信号途径相关。     

胞外信号调节激酶抑制剂对慢性压迫损伤大鼠痛觉过敏的作用

目的探讨脊髓背角胞外信号调节激酶(ERK)在慢性压迫性损伤(CCI)大鼠中的作用。方法大鼠48只随机分为6组(n=8):假手术+5%二甲基亚砜(DMSO)(S组)、CCI+5%DMSO(C组)、CCI+U0126(ERK上游激酶抑制剂)0.2μg(U0.2组)、CCI+U01260.5μg(U0.5组)、CCI+U01261μg(U1组)、CCI+U01265μg(U5组),分别鞘内注射5%DMSO或U0126。记录注射后0.5,2,6,12,14h大鼠机械缩爪阈值(MWT)和热缩爪潜伏期(TWL)。另取50只CCI5d大鼠随机分为5组:G1、G2、G3、G4、G5组,鞘内注射U01265μg后0.5,2,6,12,24h取材,免疫组化法(n=6)和免疫印迹法(n=4)检测脊髓背角磷酸化胞外信号调节激酶(pERK)含量。结果U0.5组给药后0.5,2,6hMWT为(12.3±2.8)g、(11.9±3.3)g、(9.5±2.7)g;U1组给药后0.5,2,6,12hMWT为(12.6±2.6)g、(13.3±3.2)g、(11.4±3.3)g、(10.5±3.7)g;U5组给药后各时点MWT分别为(14.6±1.1)g、(13.4±1.6)g、(12.3±2.8)g、(11.7±2.7)g、(10.8±2.5)g,与C组相比明显升高有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。U0.5组0.5、2hTWL为(15.8±2.6)s、(15.8±2.4)s;U1组0.5,2,12hTWL为(17.7±3.8)s、(16.9±4.2)s、(15.6±5.3)s;U5组各时点TWL与C组相比明显升高差异有显著性(P<0.05,P<0.01)。G1、G2、G3组大鼠脊髓结扎侧背角浅层pERK阳性神经元细胞与CCI组(23.8±4.2)比明显减少,差异有显著性(P<0.05)。G1组胞浆与胞核pERK1分别为(0.6±0.2)、(0.88±0.3),与CCI组(1.97±0.3)、(2.03±0.6)相比明显降低,差异有显著性(P<0.05)。G1组胞浆与胞核pERK2分别为(0.83±0.5)、(0.92±0.3),与CCI组(2.92±1.1)、(2.63±0.8)相比均显著减少,差异有显著性(P<0.05)。结论脊髓背角ERK级联系统参与神经病理性疼痛的信号转导过程。     

p38 丝裂原活化蛋白激酶在炎症微环境作用下对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在慢性牙周炎组织来源的牙周膜干细胞中的表达及其对炎症微环境作用下牙周膜干细胞成骨分化能力的影响。方法 2012年10月至2013年5月收集中国人民解放军总医院口腔科因治疗需要拔除的无龋前磨牙及慢性牙周炎牙齿,培养正常及炎症微环境下的牙周膜干细胞(H-PDLSCs,P-PDLSCs)。采用酶联免疫吸附试验及实时定量PCR检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的分泌及基因表达量,免疫荧光检测p38在细胞内的表达,Western blot法检测两种细胞成骨诱导7 d后p38及磷酸化p38(p-p38)的表达。使用p38 MAPK特异性抑制剂SB-203580干扰后体外成骨诱导7 d,实时定量PCR检测细胞成骨关键基因Runx2和碱性磷酸酶(ALP)的基因表达水平,成骨诱导21 d后茜素红染色检测PDLSCs的矿化结节形成情况。结果 P-PDLSCs的TNF-α和IL-1β分泌量均显著高于 H-PDLSCs(68.80±6.70比34.10±3.07,P=0.001;57.10±4.23比26.90±2.58,P=0.000)。P-PDLSCs中TNF-α的基因表达水平较H-PDLSCs上升1.4倍(P=0.011),IL-1β的基因表达水平也上升1.7倍(P=0.009)。P-PDLSCs的p38表达量高于H-PDLSCs;成骨诱导后两种PDLSCs 中的p-p38表达均升高,但p38表达水平有所降低。SB-203580干扰后PDLSCs 的Runx2和ALP表达水平显著降低(H-PDLSCs:P=0.044、0.036;P-PDLSCs:P=0.017、0.004),矿化结节形成数量减少。结论 在慢性炎症微环境中,p38 MAPK参与细胞的炎性反应,抑制p38后炎症微环境作用下PDLSCs的成骨分化能力也被显著抑制。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病肾脏疾病中的研究进展

p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)是MAPK信号通路中重要的信号转导分子,是细胞信号传递的交汇点或共同通路,可被磷酸化为p-p38MAPK而激活,参与细胞增殖、生长、分化及凋亡等多种细胞行为的调控。最近的研究显示,p38MAPK信号转导通路可能通过调节转化生长因子β1的转录与合成,调节炎性因子的表达,活化环腺苷酸反应原件结合蛋白等转录因子,加重肾脏的炎症和纤维化进程,从而加速糖尿病肾病进程。     

大鼠神经干细胞中MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号转导通路的实验研究

 目的应用丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性阻滞剂PD98059孵育大鼠神经干细胞(NSC),探讨MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路在NSC中的作用。方法体外分离、培养大鼠NSC,应用不同浓度的PD98059孵育NSC后进行WTS-8、Nestin,BrdU、β-tubulin-Ⅲ、Western
      blot检测。结果PD98059对NSC的存活、增殖和分化的影响呈剂量依赖性,在PD98059较高浓度时NSC的存活率明显下降(P<0.05),BrdU和β-tubulin-Ⅲ的阳性细胞数明显少于正常对照组(P<0.05)。PD98059阻断ERK表达的作用呈剂量依赖性。结论MAPKK/MEK-MAPK/ERK信号通路对大鼠NSC的存活、增殖、分化起重要作用。     

p38丝裂素活化激酶与脑缺血性损伤关系的研究进展

丝裂素活化激酶(MAPK)级联信号转导途径是许多信号转导通路的整合点。许多酪氨酸激酶都可以通过刺激信号级联反应激活丝裂原活化蛋白激酶通路。p38 MAPK通路是MAPK家族主要成员之一。p38 MAPK在脑缺血后早期被激活,参与炎性反应、自由基损伤、细胞凋亡等病理、生理过程,在脑缺血神经元死亡过程中发挥重要的调控作用。p38 MAPK抑制剂可望成为脑缺血性损伤临床治疗的有效途径。     

Study on the signalling pathway of inhibitory effect of adreno-medullin on the growth of cultured glomerular mesangial cells

A6dr0e0n0o,medu ollriingi n(aAllDyM),is aola stemdall p efrpotimde of h RumMaMnpheochromocytomas in1993,is potently hypotensive andnatriuretic.1,2Some recent studies established thatADM exerted its action by interaction with its receptorproteins complex which consists of a calcitonin receptor-like receptor(CRLR),receptor activity modifyingproteins(RAMPs)and a receptor component protein.3We have also demonstrated that CRLR and RAMPs wereexpressed on cultured rat glomerular mesangial c…     

丝裂原活化蛋白激酶在糖尿病神经病理性疼痛中枢敏化和外周敏化中作用的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是一组包括细胞外信号调节激酶1/2、c-Jun氨基端激酶1/2/3、p38亚型(α,β,γ和δ)和细胞外信号调节激酶5的丝/苏氨酸蛋白激酶,能够介导增殖、分化、凋亡、免疫、炎症等一系列细胞活动。痛觉敏化是一种中枢和外周伤害性感受器的重塑机制。大量研究显示,MAPKs在糖尿病动物模型的脊髓和背根神经节中广泛激活,在糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中枢敏化和外周敏化中发挥了重要的作用。此外,一些药物也可通过抑制中枢和外周神经系统中MAPKs的激活来缓解DNP。本文主要总结了MAPKs在DNP中枢和外周敏化中作用的研究进展。     

丝裂原活化蛋白激酶家族在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白 转基因鼠脑缺血中的作用

 【目的】 探讨丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPK)在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白(APP/SWE)转基因鼠脑缺血中的作用&#65377;【方法】 APP/SWE 转基因鼠与非转基因鼠各12 只应用光化学法诱导脑梗塞形成,缺血7 d后其中6只以尼氏染色对缺血半暗带区存活神经元进行定量分析,6只以Western blot方法检测p38MAPK和JNK的活性&#65377; 【结果】 缺血7 d后, 非转基因鼠组缺血半球海马区缺血半暗带存活神经元数目与非缺血半球镜像部位神经元数目的比值(78.3 ± 1.3)%与APP/SWE转基因鼠组(70.5 ± 1.4)%有统计学差异(P < 0.05);APP/SWE转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球有统计学差异(P < 0.05),而非转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球差异无统计学意义(P > 0.05)&#65377;【结论】 APP/SWE转基因鼠组缺血后脑损伤显著重于非转基因鼠组,可能的机制与丝裂原活化蛋白激酶过度激活促进脑缺血后细胞凋亡过程有关&#65377;     

抑制细胞外调节蛋白激酶增强Jurkat淋巴瘤细胞对三尖杉酯碱的敏感性

目的 研究细胞外调节蛋白激酶（EPK）在三尖杉酯碱（HRT）诱导Jurkat淋巴瘤细胞调亡中的作用。方法 用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术和Western印迹检测法分别检测细胞增殖抑制率，细胞凋亡和磷酸化ERK蛋白的表达。结果 研究发现下调磷酸化状态的细胞外调节蛋白激酶的表达可以增强淋巴瘤细胞系Jurkat对三尖杉酯碱的敏感性。结论 ERK通路对维系Jurkat淋巴瘤生存有重要作用，该通路的抑制可以增强细胞对凋亡诱导剂的敏感性。     

MTT法检测博莱霉素对小鼠肺成纤维细胞增殖的影响

目的：观察不同浓度和时间的博莱霉素对小鼠肺成纤维细胞（NIH3T3细胞）增殖的影响。方法：取对数生长期的NIH3T3细胞,用10%胎牛血清培养制成的细胞悬液加入96孔培养板中培养。以NIH3T3细胞为观察对象,分别给予不同浓度（0.1~10 000 mU/mL）博莱霉素处理,于给药后12 h、36 h、48 h后采用4-甲偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果：与空白对照组比较,1~10 mU/mL浓度的博莱霉素,可促进NIH3T3细胞增殖（P〈0.05）。其余浓度博莱霉素对细胞增殖无影响。结论：1~10mU/mL浓度的博莱霉素能够促进NIH3T3细胞的增殖。