LncRNA FOXCUT在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能研究

目的：分析LncRNA( long non-coding RNA,LncRNA) FOXCUT基因在口腔鳞状细胞癌中的表达及功能,探讨口腔鳞癌分子标志物及靶基因。方法采用实时定量荧光聚合酶链反应检测23例鳞状细胞组织及口腔鳞癌细胞Tca8113和SCC-9中FOXCUT的表达,然后采用MTS(细胞增殖实验)单细胞克隆及细胞划痕等细胞功能实验检测FOXCUT基因下调以后在口腔鳞癌细胞Tca8113中的功能。结果 LncRNA FOXCUT在23例口腔鳞癌有21例高表达,在Tca8113和SCC-9细胞中表达均高于人正常黏膜HOK细胞中的表达。当Tca8113细胞转染FOXCUT siRNAs后,FOXCUT的表达降低了,在体外口腔鳞癌Tca8113细胞功能实验中,FOXCUT表达下调后抑制细胞增殖和细胞迁移能力。结论 LncRNAFOXCUT可能与口腔鳞癌的发生发展相关,可能成为口腔鳞癌潜在的新型生物标志物及治疗靶标。     

转人B7-H3基因鳞癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫应答的研究

目的:研究转人B7-H3基因鳞癌细胞疫苗体外诱导抗肿瘤免疫应答的能力。方法:采用脂质体介导法将真核表达质粒pEGFP-B7-H3导入人鳞癌细胞Tca8113,经G418筛选后获得稳定高表达克隆,以丝裂霉素C(MMC)处理后,制成肿瘤细胞疫苗,经体外与人外周血淋巴细胞共同培养后,测定淋巴细胞特异性杀伤活性及对淋巴细胞产生细胞因子的影响。结果:转染B7-H3的Tca8113细胞能够高表达B7-H3蛋白。经MMC处理后,与野生型的Tca8113细胞相比,上述瘤苗能诱导淋巴细胞产生针对Tca8113的特异性杀伤作用,能显著增强淋巴细胞分泌IFN-γ的能力。结论:转B7-H3基因人鳞癌细胞疫苗能诱导有效的抗鳞癌免疫反应。     

β2肾上腺素受体在口腔鳞癌中的表达研究

目的：探讨B2-AR在口腔鳞状细胞癌（oralsquamous cell carcinoma，OSCC）中的表达及其在口腔鳞癌淋巴结转移中的作用。方法：采用免疫组化染色、RT—PCR和Westernblot，检测β2-AR在65例口腔鳞癌组织、10例正常口腔黏膜组织、Tca8113细胞系中的表达，比较β2-AR表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系。结果：口腔鳞癌组织中β2-AR的表达与正常口腔黏膜组织中β2-AR的表达之间存在显著差异（P=0．004）。在口腔鳞癌中，有淋巴结转移者的β2-AR阳性率为85．3％，无淋巴结转移者的阳性率为48．3％，两者之间的差异具有显著性（P：0．001）。RT—PCR和Western检测表明，口腔鳞癌组织和Tca8113细胞系中均有β2-AR表达，而正常口腔黏膜组织中无β2-AR表达。结论：β2-AR在口腔鳞癌中的表达显著升高，可能在口腔鳞癌发生和淋巴结转移中发挥一定的作用。     

NOD2在舌鳞癌中的表达特征及功能变化

目的:检测NOD2在舌鳞癌中的表达特征及功能变化。方法:采用免疫组织化学、RT-qPCR检测人舌鳞癌和正常舌黏膜组织中NOD2的表达;采用免疫荧光、RT-qPCR检测NOD2活化对人舌鳞癌细胞株Tca8113、正常舌黏膜上皮细胞分泌hBD-2的影响。应用SPSS 13.0软件包对各组mRNA的表达进行t检验及多个样本均数的方差分析。结果:①NOD2蛋白表达于细胞质,舌鳞癌组织中NOD2的蛋白表达率为64.0%(16/25),显著低于正常舌黏膜组织的表达率84.0%(21/25,P<0.05)。舌鳞癌组织NOD2 mRNA表达量为正常舌黏膜组织的(0.521±0.080)倍(P<0.05)。②hBD-2表达于细胞质,Tca8113细胞中hBD-2为低表达和阴性表达,MDP处理6 h、12 h后,Tca8113细胞中hBD-2mRNA的表达量较处理前显著上调(1.770±1.202)、(68.277±48.946)倍(P<0.05)。结论:舌鳞癌组织中NOD2 mRNA和蛋白表达显著低于正常舌黏膜组织,NOD2激动剂MDP能上调Tca8113细胞中hBD-2 mRNA和蛋白的表达。推测在舌黏膜中NOD2能调节hBD-2表达,可能影响舌鳞癌的免疫功能,与舌鳞癌进展相关。     

Naa10p 表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素敏感性的影响

目的：观察 N-α乙酰基转移酶（Naa10p）表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素（PYM）敏感性的影响。方法：采用慢病毒体系分别构建干扰及过表达 Naa10p 的 Tca8113细胞株,并设立相应的对照细胞 Tca8113-LV-NC,鉴定干扰和过表达效率,MTS 法检测药物处理后各处理组细胞对 PYM的敏感性。结果：干扰 Naa10p 的 Tca8113-LV-shNaa10p 细胞、过表达Naa10p 的 Tca8113-LV-Naa10p 细胞与对照细胞 Tca8113-LV-NC 对平阳霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（20．772±0．106）μg／ml、（2．157±0．123）μg／ml、（6．301±0．069）μg／ml（组间比较,P ＜0．05）。结论：下调 Naa10p 表达可降低口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性,上调 Naa10p 表达可增强口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性。     

nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖及PKC-α表达的影响

目的探讨nm23-h1基因对口腔鳞癌细胞增殖的影响及可能机制。方法检测6个口腔鳞癌细胞系中nm23．h1的表达水平;挑选nm23-h1表达量最少、绿色荧光报告基因质粒转染效率最高的细胞系,瞬时转染pCMV—nm23．hl质粒,MTT法检测转染的细胞增殖活性;应用实时定量PCR检测nm23-h1功能相关基因PKC-α的表达。结果在Tca8113、Tb、Tca8113M、TSCC、OSC-4、Tca8113／CDDP6个口腔鳞癌细胞系中,高转移细胞系Th、Tca8113M的nm23-h1表达量最低。Th细胞转染pCMV—nm23-h1后,细胞增殖速度减慢,为对照组的79．69％（P〈0．01）;过表达nm23-h1的Th细胞PKC-α的mRNA表达量增加,为对照组的1．52倍（P〈0．01）。结论nm23-h1基因过表达能抑制口腔鳞癌细胞的增殖,该作用可能与PKC-α相关的信号通路有关。     

膜联蛋白A1表达下降在口腔鳞癌中的意义

目的：研究膜联蛋白A1（ANXA1）在口腔鳞癌中的表达及其与临床病理的关系。方法：应用实时定量PCR、Western印迹方法和免疫组化方法检测ANXA1在口腔鳞癌细胞株和30例原发口腔鳞癌中的表达，采用SPSS10．0软件包对数据进行非参数检验。结果：与人永生化口腔黏膜上皮细胞（HIOEC）相比，Tca8113、TSCC、OSC和NT细胞中ANXA1的mRNA表达降低；Tca8113、TSCC、CAL-27、OSC和NT细胞中ANXA1的蛋白表达降低。30例口腔鳞癌组织标本中，ANXA1的mRNA和蛋白表达均较癌旁组织降低（p〈0．001）。ANXA1的表达水平与肿瘤的病理分化程度有关（mRNA：P=0．007；蛋白：P=0．006），与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移无关。结论：ANXA1在口腔鳞癌中表达降低，可能与肿瘤的发生、发展和组织分化有关。     

X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白与口腔鳞癌细胞Tca8113化疗耐药的关系

目的研究X-性染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）在口腔鳞癌细胞Tca8113中的表达水平,并探讨XIAP表达与Tca8113细胞对化疗药物耐药性之间的关系。方法用平阳霉素（PYM）间歇性加药,逐步递增剂量,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测药物处理前后细胞对PYM的敏感性,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测XIAP在药物处理前后的各Tca8113细胞组中的表达变化,并探讨XIAP与细胞耐药性的关系。结果Tca8113细胞在PYM间断作用下产生耐受,Tca8113-1-10组、Tca8113-10-10组耐药细胞对PYM的半数有效浓度（IC50）分别为（12.758±0.030）、（18.986±0.150）μg·mL-1。Tca8113-1-20、Tca8113-10-20组耐药细胞对PYM的IC50分别为（26.302±0.072）、（35.294±0.115）μg·mL-1。XAIP的表达水平与细胞对PYM的耐药有相关性（P<0.01）。结论XIAP在口腔鳞癌中的表达水平升高,可能与鳞癌的化疗耐药性有关,这可作为口腔鳞癌基因治疗的一个新靶点。     

长链非编码RNA AFAP1-AS1在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨长链非编码RNA (lncRNA) 肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(AFAP1-AS1)在口腔鳞癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法:利用实时定量PCR(RT-qPCR)法检测75例口腔鳞癌组织及其配对癌旁正常组织中lncRNA AFAP1-AS1的表达情况,并分析其与口腔鳞癌临床病理学特征之间的联系;应用小干扰RNA(siRNA)干扰lncRNA AFAP1-AS1表达,CCK-8实验检测lncRNA AFAP1-AS1对口腔鳞癌细胞株Tca8113细胞增殖能力的影响。结果:RT-qPCR检测结果显示lncRNA AFAP1-AS1在癌组织中的相对表达水平是癌旁组织的5.16倍,差异有统计学意义(P＜0.01)。lncRNA AFAP1-AS1的表达与临床分期、分化程度及淋巴结转移显著相关(P＜0.05)。CCK-8实验结果显示,转染48 h、72 h实验组A₄₅₀值较对照组显著降低(P＜0.01),表明siRNA沉默AFAP1-AS1表达后,抑制了Tca8113细胞的增殖。结论:lncRNA AFAP1-AS1在口腔鳞癌中的表达上调可能与口腔鳞癌的发生发展有关。     

口腔鳞状细胞癌中趋化因子受体CCR7的表达及其与颈部淋巴结转移的关系

目的 探讨趋化因子受体CCR7在口腔鳞状细胞癌中的表达及在口腔鳞癌颈淋巴结定向转移中的作用.方法 应用免疫组化、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting等方法检测85例口腔鳞状细胞癌组织以及口腔鳞癌细胞系Tca8113和腺样囊性癌细胞系(adenoid cysticcareinoma,ACC-M)中CCR7的表达,分析CCR7表达与口腔鳞癌临床病理参数之间的关系.比较Tca8113和ACC-M对淋巴结的黏附能力,以及CCR7抗体对其黏附能力的影响.结果 66%(56/85)的口腔鳞癌组织存在CCR7的阳性表达,其中淋巴结转移组的CCR7阳性表达率明显高于无淋巴结转移组(P=0.015).RT-PCR和Western blotting检测结果也证实,CCR7在口腔鳞癌中有阳性表达.Tca8113细胞系对淋巴结的黏附能力明显高于ACC-M细胞系,并且能够被CCR7抗体有效阻断.结论 趋化因子受体CCR7在口腔鳞癌的发生发展及淋巴结转移中起着重要的作用.     

RNA干扰TEAD基因对舌癌细胞系Tca8113增殖和侵袭的影响

目的：应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113中内源TEAD基因的水平,观察TEAD基因对舌癌细胞生物学行为的影响。方法：构建针对TEAD基因特异性siRNA真核表达载体,将其转染至Tea8113,采用RT—PCR法检测转染后的Tca8113细胞中TEAD基因的表达。采用CCK8技术检测细胞的增殖情况,采用Transwell法检测细胞的迁移情况。实验数据采用SPSSl3．0软件包进行单因素方差分析。结果：siRNA干扰Tea8113细胞后,TEAD基因的表达水平显著下降（P〈0．05）,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降。结论：通过RNA干扰技术阻断TEAD的表达,可抑制,rca8113细胞的生长、增殖、迁移,提示TEAD基因在舌癌的发生、发展过程中起着重要作用。     

间隙连接蛋白43在口腔颌面部鳞癌组织及舌癌细胞株(Tca8113)中表达的研究

目的:探讨间隙连接蛋白43(Cx43)在口腔鳞癌组织(oscc)和舌鳞癌细胞株(Tca8113)中的表达及其生物学行为的关系;细胞分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)中Cx43表达的影响。方法:应用免疫组织、细胞化学、免疫荧光及结合免疫印迹技术,观察OSCC组织中以及ATRA对Tca8113细胞株进行培养及分化诱导后Cx43在蛋白水平的变化。结果:Cx43在正常口腔鳞状上皮主要表达于相邻细胞间相互接触的细胞膜上,而在OSCC组织中,Cx43细胞膜表达与组织的分化程度、转移之间有显著性差异(Cx43:х2=7.42、12.43,P<0.05、P<0.01)。免疫细胞化学检测可见舌癌细胞中Cx43异常定位于细胞浆中和/或细胞膜不与邻近细胞接触的游离缘上。Tca8113经ATRA诱导后,Cx43蛋白表达增加。结论:Cx43表达的改变与OSCC的发生和发展有关。ATRA可以通过上调Cx43表达,实现对肿瘤生长的抑制     

二氢卟吩e6光动力学疗法对人舌鳞癌细胞株Tca8113的杀伤作用

目的：探讨二氢卟吩e6 （Ce6）光动力学疗法（Ce6-PDT）对体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用.方法：向体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞中加入Ce6,浓度分别为5、10、20、50和100μg/ml,孵育1.5h,予波长630nm半导体激光照射,照射的功率密度为100mW/cm2,能量密度分别为0.5、1、2、5、10和15J/cm2,继续孵育6h,用MTS比色法测定细胞存活率.结果：（1）不受光照的条件下,较低浓度Ce6（＜10μg/ml）与细胞共同培养而对细胞的毒性较小,Ce6浓度为20μg/ml时对细胞的杀伤率约为10％.（2）光照条件下,Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量正相关,呈浓度/剂量依赖性（P＜0.01）.结论：Ce62PDT能有效地杀伤体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性.     

信号转导蛋白P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系

目的 探讨不同剂量的X射线对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞中信号转导蛋白P65表达的影响以及P65与放疗诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的关系.方法 人舌鳞癌Tca8113细胞复苏后,在37℃,5%CO2的孵箱中培养.共分对照组、2、4、6、8、10 Gy剂量组,待细胞长至对数生长期后,对细胞分别应用上述照射剂量一次性照射....     

三苯氧胺对人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖抑制作用研究

目的：探讨三苯氧胺（Tamoxifen,TAM）对人舌鳞癌细胞系Tca8113的增殖抑制作用。方法：不同浓度TAM处理体外培养的人舌鳞癌细胞Tca8113,MTT法检测细胞增殖,倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果：在浓度为1、2、5、10μmol／L时,TAM呈现出剂量依赖性抑制人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖作用。通过对三个不同浓度（2μmol／L、5μmol／L、10μmol／L）TAM实验组的抑制率进行比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,细胞抑制率与药物浓度呈正相关。细胞超微结构显示,药物浓度与细胞结构呈剂量依赖关系。结论：TAM可显著抑制人舌鳞癌细胞Tea8113的增殖,其作用呈剂量依赖关系。     

核因子-κB/p65 siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制

目的：研究下调核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法：利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT-PCR检测0、24、48和72hp65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-Glo○R-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达。结果：Tca8113细胞转染p65siRNA后,在48hp65 mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613±0.067（P〈0.05）。流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为（23.16±1.72）%,显著高于未处理组和对照siRNA组（P〈0.01）。转染48h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升。结论：NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

PU-VEGF-siRNA对裸鼠皮下舌癌移植瘤生长的影响

目的：探讨针对血管内皮生长因子WEGF）的小干扰RNA（siRNA）对舌癌Tca8113细胞移植瘤在裸鼠体内生长的影响。方法：将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体（PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2）,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以空载体组做实验对照,以未转染舌癌细胞作空白对照。将各组细胞接种裸鼠背部皮下,每组5只,观察裸鼠肿瘤生长情况,免疫组织化学染色法观察裸鼠肿瘤组织VEGF的表达。结果：与实验对照组和空白对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减缓,VEGF表达降低（P〈0.05）。结论：siRNA抑制VEGF的表达,可显著抑制舌癌移植瘤在裸鼠体内的生长。     

端粒酶逆转录酶mRNA在OLP和OSCC中的表达

目的：探讨端粒酶逆转录酶（TERT）mRNA在口腔扁平苔藓（OLP）和口腔鳞状细胞癌（OSCC）中的表达以及在OLP癌变过程中的作用。方法：应用mRNA原位杂交法对正常口腔黏膜12例,非糜烂型OLP20例,糜烂型OLP20例及OSCC20例,进行hTERTmRNA的检测。结果：正常口腔黏膜、非糜烂型OLP、糜烂型OLP及OSCC中hTERTmRNA阳性表达率分别为8.33％（1／12）、15％（3／20）、45％（9／20）、80％（16／20）。其中,除正常口腔黏膜与非糜烂型OLP中hTERT mRNA阳性率无显著性差异外,其余各组间均有显著性差异（P〈0.05）。而且,正常口腔黏膜与非糜烂型OLP的hTERT mRNA染色强度明显低于糜烂型OLP及OSCC（P〈0.05）。结论：hTERT mRNA可能在糜烂型OLP的癌变过程起着一定的作用。     

MTUS1／ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨过表达MTUS1/ATIP1对舌鳞癌细胞增殖及凋亡的影响。方法检测人舌鳞癌系UM1、SCC鄄9、SCC鄄15、Tca8113细胞株中MTUS1的表达水平。应用含ATIP1片段的质粒转染舌鳞癌细胞,48 h后MTT检测舌鳞癌细胞的增殖能力;应用流式细胞仪技术和细胞免疫荧光技术检测细胞周期和细胞凋亡率;Western blot检测舌鳞癌细胞中MTUS1、p53、ERK1/2的表达情况。结果转染MTUS1/ATIP1后细胞的增殖明显受到抑制,其抑制率约为40％（t=0.023,P＜0.05）;高表达MTUS1/ATIP1可导致舌鳞癌细胞株G1期阻滞（G1期：t=0.032,G2期：t=0.036,S期：t=0.027,P＜0.05）并诱导细胞凋亡率的明显升高,差异具有统计学意义（t=0.005,P＜0.05）。 Western blot检测显示,转染MTUS1/ATIP1后ERK的表达升高,磷酸化的ERK表达下降,p53的表达升高。结论 MTUS1可抑制舌鳞癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

Semaphorin 3A及其受体Neuropilin-1在舌癌组织及Tca8113中的表达

目的：观察Semaphorin 3A（SEMA3A）及其受体Neuropilin-1（Nrp-1）在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其对舌癌中血管生成的意义。方法：应用免疫组织化学方法检测舌癌组织和癌旁组织中SEMA3A及Nrp-1的表达,应用免疫细胞化学检测SEMA3A及Nrp-1在Tca8113中的表达,并用Western印迹检测舌癌组织、癌旁组织及舌癌细胞系Tca8113中SEMA3A及其受体Nrp-1的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行χ2检验。结果：免疫组织化学显示,17/20例舌癌组织SEMA3A呈阴性表达,18例Nrp-1呈阳性表达。19/20例癌旁组织中SEMA3A阳性表达,而Nrp-1均呈阴性表达。免疫细胞化学显示,SEMA3A在舌癌细胞中检测不到,而Nrp-1均呈阳性表达。Western印迹检测与此结果完全相符。SEMA3A及Nrp-1在舌癌及癌旁组织中的表达有显著差异（P〈0.001）。结论：SEMA3A及其受体Nrp-1在舌癌组织及细胞系中表达异常,提示其可能与肿瘤血管生成相关。