提高神经移植效果的研究回顾与展望

人类开展神经移植的研究已有较长的历史,特别是近几十年来,国内外学者对神经干细胞(NSCs)及其应用进行了更为广泛和深入的研究。NSCs具有多潜能分化的特点,利用NSCs移植可以替补相应受损区的神经细胞,重建受损的神经环路,促进宿主自身的神经修复,极大地改变了传统治疗观念。近年有关新生动物NSCs移植的研究为包括特别是重度缺氧缺血性脑损伤(HIBD)等在内的新生儿获得性脑损伤及其神经系统后遗症的治疗带来了新的希望。北京海军总医院儿科在既往大量动物实验研究的基础上,已成功开展为围产期脑损伤后遗症的患儿实施人NSCs移植,近期效…     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤后不同途径人神经干细胞移植的实验研究

缺血缺氧性脑病（hypoxic—ischemic encephalopathy，HIE）是儿科最常见导致中枢神经系统后遗症的原因，目前无特效治疗。近年来神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗缺血缺氧性脑损伤的实验研究已见报道，其中成年动物神经干细胞移植的研究已有较长时间，相比之下，儿科相关研究很少，有限的新生动物神经干细胞移植研究结果表明，新生动物移植内环境明显优于成年动物，能取得较成年动物好的移植效果，     

经脑室神经干细胞移植对脑室周围白质软化新生大鼠的脑病理评估

目的：对经脑室植入神经干细胞（NSCs）的脑室周围白质软化（Periventricular leukolamacia，PVL）新生大鼠进行光镜下脑病理评估，探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性。方法：采用E14胎鼠大脑皮层制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组（PVL组），PVL＋DMEM/F12培养基对照组（PVL＋DMEM/F12组），PVL＋神经干细胞（NSCs）移植组（PVL＋NSCs组），假手术对照组（Sham组），Sham＋DMEM／F12培养基对照组（Sham＋DMEM/F12组），Sham＋NSCs移植组（Sham＋NSCs组），每组18～21只。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植，分别于移植后7，14，21 d进行光镜下脑病理评估。结果：随着移植后时间的增加，脑白质病变呈进一步改善。移植后21 d光镜下病理证实，未移植组脑白质呈轻度和重度病变各占50％，神经元病理评分为1.28±0.86。移植组则有30％白质完全正常，轻度和重度病变各占40％和30％，神经元病理评分为0.32±0.16，两组在脑白质病变程度以及神经元病理评分之间的差异均呈非常显著性意义（χ2＝10.7，P<0.01；F=29.664, P<0.01）。结论：经脑室外源性NSCs移植可明显改善脑白质的病理损伤。经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力，为今后成功防治早产儿这一最常见的脑损伤顽症提供了新的可行性途径。     

新生动物及其缺血性脑损伤神经干细胞移植的研究现状

新生儿缺血缺氧性脑病(HIE)是导致脑性瘫痪(脑瘫)的主要原因,至今缺乏有效疗法。近年有关缺血性脑损伤以及新生动物神经干细胞(neural stem cells,NSCs)移植的实验研究为治疗新生儿HIE带来了新的希望。现有研究表明在移植条件相同的情况下,受者年龄、脑发育成熟度、脑内微环境是NSCs移植成功的决定因素。     

三种途径注射神经干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤可行性比较

目的 比较三种神经干细胞(NSCs)移植方法 的可行性,尝试建立一种创伤小、疗效好的神经干细胞移植方法 .方法 生后3～4 d的新生猪在缺氧缺血性脑损伤造模后被分为静脉NSCs移植组、颈内动脉NSCs移植组、腰穿NSCs移植组,每组各5只;术后2 h分别通过腋静脉、颈内动脉和腰穿途径注射2×106个绿色荧光蛋白标记的NSCs.术后24 h处死实验动物,取海马、侧脑室前角、侧脑室后角层面进行病理切片,400倍镜下计数荧光染色的神经干细胞.结果 400倍荧光显微镜视野(HP)下,静脉NSCs移植组、颈内动脉NSCs移植组、腰穿NSCs移植组的阳性细胞分别为(53.80±8.78)/HP、(69.80±11.90)/HP、(265.00±29.65)/HP.其中腰穿NSCs移植组进入脑组织的NSCs细胞显著多于其他两组,差异有非常显著性(P<0.01).结论 本实验证实了腰穿途径治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤的可行性,且较静脉及颈内动脉途径优越.     

神经干细胞移植的临床应用及儿科应用展望

神经干细胞(NSCs)移植治疗中枢神经系统(CNS)疾病在动物实验及临床研究都取得令人鼓舞的进展。国内外NSCs移植治疗CNS疾病在成人临床应用中取得了较好结果。新生动物的实验研究及人NSCs移植治疗缺氧缺血性脑病(HIE)的临床应用,提示NSCs移植在儿科将会有较好治疗前景。     

神经营养素3及神经干细胞联合移植治疗实验性大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的研究神经营养素3（NT-3）及神经干细胞联合移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大鼠神经功能恢复及神经干细胞分化为神经元的比例的影响,并探讨其可能机制。方法取新出生的24h内的wistar大鼠,从海马中分离神经细胞,进行培养、鉴定。用出生7d的wistar新生大鼠制作缺氧缺血性脑损伤的动物模型,模型成功后7d进行移植。将实验大鼠随机分为5组：正常组、模型组、假移植组、神经干细胞移植组、NT-3及神经干细胞联合移植组（简称联合移植组）,每组12只。移植部位为损伤同侧侧脑室。移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查。结果从新生鼠海马中成功培养出神经干细胞,培养条件下呈悬浮状态生长,形成神经球,绝大多数的细胞表达神经干细胞的标志物神经巢蛋白（nestin）。说明培养的细胞大部分为神经干细胞,细胞纯度达90％以上。Y迷宫实验结果：神经干细胞移植组平均（163±11．6）次学会,记忆的平均正确率为（50±13．3）％;神经干细胞（NSC）＋NT-3联合移植组平均（117．27±11．04）次学会,记忆的正确率平均（63±11．2）％。握持牵引实验结果：神经干细胞移植组平均（30．1±11．8）s,右下肢能放置的占40％;NSC＋NT-3联合移植组平均（40．64±10．6）s,右下肢能放置的占72．73％。斜坡实验结果：神经干细胞移植组平均（20．3±8．25）;NSC＋NT-3联合移植组平均（12．9±5．15）s。说明接受NT-3及神经干细胞移植组大鼠的学习能力、记忆能力及肢体功能与单纯神经干细胞移植组相比有明显提高,差异具有统计学意义（P〈0．05）。其神经干细胞分化成神经元的比例（50％）与单纯神经干细胞移植组（30％）比有明显增多。结论NT-3与神经干细胞联合移植能提高缺氧缺血性脑损伤大鼠的学习、记忆能力和肢体功能,并能提高神经干细胞向神经元转化的比率,NT-3和神经干细胞联合移植较单独神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤有更好的治疗效果。     

神经营养因子与神经干细胞移植联合治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的观察神经营养因子与神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的治疗效果。方法取新生24h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定。选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,7d后行损伤侧侧脑室移植。将实验大鼠随机分为9组:正常组、模型组、磷酸盐缓冲液移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF NSCs移植组、NT-3组、NT-3 NSCs移植组、BDNF NT-3 NSCs移植组。移植4周后进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查。结果从新生大鼠海马可成功培养出NSCs,并表达NSCs的标志物神经巢蛋白(neuroepi-thelial stem cell protein,Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞。Y迷宫实验:NSCs移植组达到学会的次数(163±11.60)n,正确记忆次数(5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n;NT-3组(153.56±10.35,5.07±1.03)n;NT-3 NSCs移植组(117.27±11.4,6.30±1.1)n;BDNF NT-3 NSCs移植组(110±11.55,6.30±1.1)n。悬吊实验:NSC移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF NSCs移植组(43.6±10.56)s;NT-3组(34.95±10.15)s;NT-3 NSCs移植组(40.64±10.6)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(42.20±6.25)s。斜坡试验:NSCs移植组平均(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF NSC移植组(11.17±2.48)s;NT-3组(15.26±2.98)s;NT-3 NSC移植组(12.8±3.65)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(12.9±5.18)s。说明各联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较,明显改善(P<0.05),而NSCs组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各联合移植组损伤侧皮层、海马存活的NSCs数量(BDNF NSC移植组9.31±0.71个,10.10±1.65个;NT-3 NSCs移植组6.18±1.83个,8.18±3.06个;BDNF NT-3 NSCs移植组为9.58±1.61个,11.45±1.36个)与NSCs组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较明显增多(P<0.05),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,有统计学意义(P<0.05),但双因子联合移植组与其单因子移植组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论BDNF、NT-3与NSCs联合移植是治疗HIBD的有效方法。     

神经营养因子与神经干细胞移植联合治疗缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 观察神经营养因子与神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠的治疗效果.方法 取新生24 h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定.选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,7 d后行损伤侧侧脑室移植.将实验大鼠随机分为9组正常组、模型组、磷酸盐缓冲液移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF NSCs移植组、NT-3组、NT-3 NSCs移植组、BDNF NT-3 NSCs移植组.移植4周后进行功能实验,取脑组织进行免疫组化及免疫荧光检查.结果 从新生大鼠海马可成功培养出NSCs,并表达NSCs的标志物神经巢蛋白(neuroepithelial stem cell protein,Nestin),NSCs可分化为神经元及星形胶质细胞.Y迷宫实验NSCs移植组达到学会的次数(163±11.60)n,正确记忆次数(5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n;NT-3组(153.56±10.35,5.07±1.03)n;NT-3 NSCs移植组(117.27±11.4,6.30±1.1)n;BDNF NT-3 NSCs移植组(110±11.55,6.30±1.1)n.悬吊实验NSC移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF NSCs移植组(43.6±10.56)s;NT-3组(34.95±10.15)s;NT-3 NSCs移植组(40.64±10.6)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(42.20±6.25)s.斜坡试验NSCs移植组平均(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF NSC移植组(11.17±2.48)s;NT-3组(15.26±2.98)s;NT-3 NSC移植组(12.8±3.65)s;BDNF NT-3 NSCs移植组(12.9±5.18)s.说明各联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较,明显改善(P＜0.05),而NSCs组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).各联合移植组损伤侧皮层、海马存活的NSCs数量(BDNF NSC移植组9.31±0.71个,10.10±1.65个;NT-3 NSCs移植组6.18±1.83个,8.18±3.06个;BDNF NT-3 NSCs移植组为9.58±1.61个,11.45±1.36个)与NSCs组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较明显增多(P＜0.05),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,有统计学意义(P＜0.05),但双因子联合移植组与其单因子移植组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 BDNF、NT-3与NSCs联合移植是治疗HIBD的有效方法.     

脑源性神经营养因子及神经干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的实验研究

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)及神经干细胞(NSCs)联合移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗效果.方法 取新生24 h的Wistar大鼠海马NSCs进行培养、鉴定.选7日龄Wistar大鼠制备HIBD动物模型,模型制备后7 d行损伤侧侧脑室移植.将实验大鼠随机分为6组:正常组、模型组、假移植组、NSCs移植组、BDNF组、BDNF+NSCs移植组(联合移植组).移植后4周进行功能实验,取脑组织进行免疫组化免疫荧光检测.结果 从新生大鼠海马可成功培养出NSCs.Y迷宫实验结果:NSCs移植组达到学会的次数及正确记忆次数(163±11.60,5.00±1.13)n;BDNF组(150.00±8.94,5.17±1.47)n;BDNF+NSCs移植组(111.25±13.56,6.23±1.60)n.悬吊实验结果:NSCs移植组平均(30.10±11.8)s;BDNF组(36.25±10.98)s;BDNF+NSCs移植组(43.6±10.56)s.斜坡试验结果:NSCs移植组(20.3±8.25)s;BDNF组(14.33±2.88)s;BDNF+NSCs移植组(11.17±2.48)s.表明联合移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与NSCs移植组比较明显改善(P＜0.05),而NSCs移植组大鼠学习记忆能力及神经功能与HIBD组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).联合移植组损伤侧额叶皮层、海马存活的NSCs数量(9.31±0.71个,10.10±1.65个)与NSCs移植组(3.33±0.24个,4.22±0.33个)比较差异具有统计学意义(P＜0.01),且NSCs分化为神经元的比例明显增多,与NSCs移植组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BDNF与NSCs联合移植较单独NSCs移植对HIBD有更好的疗效.     

胶质细胞源性神经营养因子联合神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠的疗效观察

目的 探讨在移植物中加入胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF),能否增强外源性神经干细胞(neural stem cells,NSCs)经脑室移植治疗脑室周围白质软化(periven-tricularleukomalacia,PVL)新生大鼠的移植效果.方法 采用E14胎鼠大脑皮质制备NSCs.2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL+NSCs移植组(PVL+NSCs组),PVL+NSCs移植+GDNF组(PVL+NSCs+GNDF组),假手术对照组(Sham组).Sham+NSCs移植组(Sham+NSCs组),以及Sham+NSCs移植+GDNF组(Sham+NSCs+GDNF组).对PVL新生大鼠在建模后72 h进行立体定位仪下经脑室NSCs移植,分别于移植术后7、14、21 d进行免疫荧光、光镜及电镜病理检测,评估在NSCs中加入GDNF对移植效果的可能影响.结果 经脑室植入的外源性NSCs在脑内具有良好的迁移能力,3 d内大部分移行至脑室周围,2周左右在脑室周围主要分化为少突胶质细胞前体,部份分化为神经元及星形胶质细胞.三种分化细胞在加入GDNF移植组显著多于未加GDNF移植组(P均<0.05).移植后21 d光镜下脑病理显示,两个移植组的脑白质病理均获明显改善,尤其加人GDNF移植组的脑白质重度病变发生率较未加GDNF移植组下降了25.5%(P<0.01).移植后21 d的电镜显示,PVL组罕见髓鞘形成,两个移植组的髓鞘形成明显增加,尤其加入GDNF移植组的髓鞘形成明显多于未加GDNF移植组.结论 在外源性NSCs移植物内加入GDNF,可明显增强NSCs经脑室移植治疗PVL新生大鼠的移植疗效.     

高压氧促HIBD新生大鼠内源性神经干细胞增殖过程中Wnt-3蛋白的变化

目的：近年来的研究已经证实高压氧(hyperbaric oxygen, HBO) 能够促进缺氧缺血性脑损伤（Hypoxic ischemic brain damage, HIBD）新生大鼠内源性神经干细胞（Neural stem cells, NSCs）的增殖，并且发现Wnt 信号途径参与神经干细胞的增殖，故本课题将探讨 HBO 对 HIBD 新生大鼠脑内源性 NSCs 增殖分化过程中 Wnt-3 蛋白的变化的影响及其它们之间的相关性。方法：7 日龄 Sprague-Dawley 新生大鼠随机分为正常对照组（CON），缺氧缺血性脑损伤组（HIBD）及高压氧组（HBO）。采用经典的 Rice 法制成 HIBD 模型，HBO 组在 HIBD 后 3 h 内进行 HBO 治疗（压力为 2 个绝对大气压，稳压 1 h，每日 1 次，连续 7 d）。采用 BrdU/nestin， Wnt-3/ nestin 免疫荧光双标法，检测 HIBD 后 6 h，24 h，3 d，7 d，14 d，缺血侧侧脑室室管膜下区（subventricular zone, SVZ）增殖的 NSCs 及 Wnt-3 蛋白的动态变化，激光共聚焦显微镜（LSM 510，Zeiss）分析细胞内 nestin 蛋白与 Wnt-3 蛋白的荧光强度，统计学分析二者相关性。Western blotting 法检测缺血侧大脑半球nestin、Wnt-3 总蛋白的动态变化。结果 ：SVZ 区 BrdU+ nestin+ 细胞于 HBO 治疗后 3 h 开始增加，7 d 达最高水平，显著高于 CON 组与 HIBD组（P<0.01），14 d 时 BrdU+ nestin+ 细胞数开始下降，但仍多于CON 和 HIBD 两组（P<0.05）；NSCs 细胞膜表面 Wnt-3 蛋白于 HBO 治疗后 3 h 开始增加，3 d 时达最高水平，并维持较高水平至 14 d 时开始下降；直线回归分析示细胞内 Wnt-3 蛋白与 nestin 蛋白呈直线相关（r = 0.893, P<0.05）；Western blotting 分析示缺血侧大脑半球Wnt-3 蛋白于 HBO 后 3 d，7 d 一直维持较高水平，显著高于其他各时间点（P<0.05），至 14 d 时表达开始下降；nestin 总蛋白水平于 HBO 治疗后 21 h 开始增加（P<0.05），7 d 达最高水平，后下降。结论：高压氧可以促进 HIBD 新生大鼠内源性 NSCs 的增殖，其机制与 Wnt 信号活化有关。［中国当代儿科杂志，2007，9（3）：241-246］     

经脑室神经干细胞移植治疗脑室周围白质软化新生大鼠电镜下脑病理评估

目的对经脑室植入神经干细胞(NSCs)的脑室周围白质软化(PVL)新生大鼠进行电镜下脑病理和髓鞘形成评估,探讨NSCs移植对治疗早产儿PVL的可行性,以及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对NSCs治疗PVL的影响。方法采用颈部正中切开双侧颈总动脉结扎法制备PVL模型。采用孕14 d SD大鼠大脑皮质制备NSCs。2日龄新生大鼠随机分为PVL对照组(PVL组),PVL加NSCs移植组(PVL加NSCs组),PVL加NSCs移植及GDNF组(PVL加NSCs加GDNF组),假手术对照组(Sham组),Sham加NSCs移植组(Sham加NSCs组),以及Sham加NSCs移植及GDNF组(Sham加NSCs加GDNF组)。NSCs移植组将NSCs调整为5×107L-1,将2μL移植液以0.5μL/min注入侧脑室内。GDNF干预组以100μg/L GDNF加入NSCs移植液中注入侧脑室。对2日龄PVL新生大鼠在建模后72 h进行经脑室NSCs移植,分别于移植第21天行电镜下脑病理和髓鞘形成评估。结果移植第21天,电镜显示,PVL组可见部分神经元固缩变形,细胞器减少,罕见髓鞘形成。PVL加NSCs组皮质部位神经元形态基本正常,脑白质内髓鞘形成明显增加。PVL加NSCs加GDNF组皮质改善以及髓鞘形成增多情况较PVL加NSCs组则更为明显。假手术各组未见明显变化。结论经脑室NSCs移植对早产儿PVL具有很大的治疗潜力,GDNF可能具有增强NSCs的治疗作用。     

神经干细胞移植治疗大鼠无神经节细胞症的初步研究

目的观察神经干细胞（NeuralStemcells,NSCs）在无神经节细胞症大鼠直肠壁内移植的存活和分化情况,以及对肠道运动和反射功能的改善,探讨神经干细胞移植对肠无神经节细胞症的治疗作用。方法用0．5％苯扎氯铵溶液浸湿造模,造模成功后,随机分为两组,每组各30只。模型组用免疫荧光标记的提纯好的脐带间充质神经干细胞150汕（浓度107／mL）分3处注入大鼠无神经节细胞肠壁内,对照组用生理盐水注射。并分别于注射后2,4,8周取材,观察大体表现,免疫荧光显微镜观察神经干细胞在病变肠管中的成活情况,免疫组化检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和S-100蛋白表达情况,钡灌肠检查肠道功能情况。结果本组造模成功60例,无试验过程中死亡。模型组移植后2周取材,其中22只移植后可检测到肠壁内移植细胞存活,证明神经干细胞移植成功;4周取材可见分化为神经节细胞和星型胶质细胞,免疫组化可见肠壁内NSE和S-100蛋白表达;8周取材与4周结果相同。注射生理盐水组无一只有神经节细胞存活。免疫组化检测,移植组病变肠段肠壁内神经细胞表达明显高于对照组。钡灌肠结果显示,神经干细胞移植前后结肠形态上有明显不同。结论脐带间充质干细胞来源的NSCs在无神经节细胞的肠壁内可以存活和分化,并在一定程度上恢复肠神经功能,从而为NSCs移植治疗无神经节细胞性巨结肠病提供了实验依据。     

大鼠胚胎肠神经嵴干细胞的分离培养和诱导分化

目的 探索从大鼠胚胎肠组织获取肠神经嵴干细胞（neural crest stem cells，NCSCs）的可能性；与脑神经干细胞（neural stem cells，NScs）比较，了解其生物学性状。方法 用NSCs的培养液同时进行肠NCSCs和脑NSCs的培养；得到的神经细胞球用神经上皮干细胞蛋白（nestin）进行鉴定，计数NCSCs神经细胞球和NSCs神经细胞球中各自的Nestin阳性细胞比例。NCSCs神经细胞球在胎牛血清诱导分化培养7d后，用神经元细胞特异性标记神经纤维丝蛋白（NF68）和星形胶质细胞特异性标记神经胶质酸性蛋白（GFAP）对其进行免疫荧光鉴定。结果从大鼠胚胎肠组织成功得到NCSCs，并且形成神经细胞球，Nestin为阳性；分化后细胞为NF68或者GFAP阳性；与NSCs比较，NCSCs能较快形成神经细胞球，其神经细胞球中的Nestin阳性细胞比例（66．75±12．42）％低于NSCs（91．60±5．62）％（P=0．000）。结论 肠NCSCs可以从大鼠胚胎肠组织分离培养得到，在体外培养环境下能够增殖，并且具有多向分化潜能。     

人神经干细胞移植治疗重度新生儿一氧化碳中毒一例

目的 探讨人神经干细胞移植治疗新生儿重度一氧化碳中毒（COP）的可行性。方法 1例生后18d的新生儿重度COP急性期患儿，肌张力异常，原始反射减弱，NBNA评分15分。取孕12周胚胎前脑细胞体外培养扩增11d，获取人神经干细胞（NSCs）球，经患儿脑室穿刺注入。结果 移植后28d，患儿肌张力、原始反射明显改善，NBNA评分35分。移植后9个月Peabody量表，0—6岁儿童神经心理检查量表评估，患儿运动、智力、语言发育正常。结论 本例人胚胎来源NSCs移植治疗急性期新生儿重度COP，临床疗效显著。最终的疗效还需更多病例的进一步观察。     

人胰岛素样生长因子-1基因修饰的神经干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的治疗作用

目的 探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因修饰神经干细胞(NSCs-IGF-1)移植对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑功能恢复的治疗作用.方法 采用结扎大鼠左侧颈总动脉,低氧箱中缺氧处理的方法,制成新生大鼠HIBD模型,随机分为正常对照组、模型对照组、神经干细胞(NSCs)移植组和NSCs-IGF-1移植组,尾静脉注入法进行干细胞移植.分别于移植1 d、7 d、14 d、21 d 取5只大鼠脑组织进行病理切片,通过5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)、巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色观察NSCs在宿主脑内存活及增殖和分化情况,并通过Y-迷宫实验和运动功能检测对剩余大鼠脑功能恢复情况进行观察.结果 移植7 d后,NSCs移植组和NSCs-IGF-1移植组均可见到BrdU阳性细胞,二组比较差异有统计学意义(P<0.05).在观测时间点内,NSCs-IGF-1移植组Nestin阳性细胞表达量早期升高,移植后14 d达峰值,后逐渐下降;NSE阳性细胞表达量逐渐升高.模型对照组在移植7 d后Nestin及NSE阳性细胞表达量逐渐降低,2组比较差异均有统计学意义(Pa<0.01).移植14 d,NSCs-IGF-1移植组Nestin及NSE阳性细胞表达量均明显高于NSCs移植组(Pa<0.01).大鼠学习记忆功能检测及运动功能检测结果均显示NSCs-IGF-1移植组明显优于模型对照组及NSCs移植组,二者差异均具有统计学意义(Pa<0.01,0.05).结论 NSCs及NSCs-IGF-1可以在脑内存活、增殖及分化,并可部分促进缺氧缺血大鼠脑功能的恢复;NSCs-IGF-1较单独移植NSCs效果好.     

骨髓基质细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时间窗探讨

近年来,用干细胞移植治疗新生动物缺氧缺血性脑损伤（hypoxic—ischemicbraindamage,HIBD）取得了一定的效果。如何充分利用脑损伤内在的修复机制,使移植达到最佳效果,目前关于这方面的研究较少,而且也主要基于成年动物大脑中动脉缺血（MCAO）模型。本研究在新生大鼠脑损伤后24h、72h、7d进行移植,观察不同时间点移植对大鼠远期行为学影响、组织学改变以及BMSCs在脑内的神经分化,探讨新生大鼠HIBD后最适宜的移植时间窗,为BMSCs临床移植治疗提供理论基础。     

神经营养素-3体外诱导新生鼠海马神经干细胞定向分化

目的探讨神经营养素-3（NT-3）对神经干细胞（NSCs）定向分化的影响。方法取24h龄新生鼠海马组织，以无血清培养基获得NSCs，随即分为实验和对照组。实验组用基础培养液加50g／L胎牛血清（FBS）和20μg／LNT-3诱导其分化；对照组用基础培养液加50g／LFBS。用免疫荧光及流式细胞仪法检测分化得到神经元特异性烯醇化酶（NSE）神经元及阳性神经元比例。结果随着分化培养时间延长，二组NSE阳性神经元渐增加；实验组NSE阳性神经元的比例在分化培养第3天达到高峰，约63％，对照组仅29％，二组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论NT-3体外促进NSCs向神经元定向分化，并可提高其分化比例。     

不同胎龄人胎脑皮质枕叶神经干细胞的发育特征

目的探讨不同胎龄胎脑皮质枕叶神经干细胞（NSCs）的发育特征。方法收集胎龄16～36周的水囊引产胎儿90例，采用免疫组织化学及光镜技术对人胎脑皮质枕叶NSCs的分布、形态、生长方式及数量进行检测。结果NSCs主要分布在锥体细胞层及内颗粒细胞层．呈圆形，中等大小，0、1个突起，核相对较大，2—4个核仁，染色质疏松。NSCs呈明显的区域性分布，大部分NSCs以群状、簇状或数个细胞形成的小集落样生长方式存在，少数NSCs以单个形式存在于其他神经细胞中，各胎龄组NSCs在分布、形态、种类、生长方式等方面无明显差异。随着胎龄的增加，皮质枕叶NSCs逐渐减少。结论不同胎龄人胎脑皮质枕叶存在NSCs，其数量随着胎龄的增加而减少。