阴性突变Rac-N17基因转染对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 探讨基因转染对内皮细胞凋亡的影响及其相关机制。方法 采用凝血酶诱导法诱导人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）凋亡，检测细胞凋亡情况及caspase-3活性。结果 结果显示，凝血酶诱导48 h后，HUVECs细胞浆内颗粒和空泡增多，细胞凋亡率明显增高，caspase-3活性明显增加，而加入RacN17干预后，细胞凋亡率明显降低、caspase-3活性明显下降。结论 Rac-N17基因转染能防止细胞的凋亡与衰老，保护血管内皮细胞。     

血管抑素对人脐静脉内皮细胞及体外微血管模型的作用

目的:观察血管抑素对人脐静脉内皮细胞及体外微血管模型的抑制作用。方法:实验于2005-01/2006-12在中国医科大学基础医学院实验病理研究室(省部级)完成。①采用改进的Jaffe式培养法体外培养人脐静脉内皮细胞。②MTT法检测不同质量浓度(1,2,4,8,16,32mg/L)、不同时间(24,48,72h)血管抑素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。③流式细胞仪检测不同质量浓度(2,4,8,16,32mg/L)的血管抑素对人脐静脉内皮细胞生长周期的影响。④建立肿瘤微血管体外生成模型,培养4,8,12h倒置显微镜观察血管网形成情况;血管网未形成之前加16mg/L血管抑素观察对血管形成的影响;肿瘤微血管体外生成模型经24h培养形成血管网后加16mg/L血管抑素观察对新生血管的影响。结果:①血管抑素对人脐静脉内皮细胞增殖的影响:8,16,32mg/L血管抑素能明显抑制人脐静脉内皮细胞的生长(P<0.01),血管抑素作用于人脐静脉内皮细胞24,48,72h后细胞明显受抑制(P<0.01),这种作用具有剂量-时间依赖性。②血管抑素对人脐静脉内皮细胞生长周期的影响:血管抑素作用于人脐静脉内皮细胞后能诱导细胞凋亡。③血管抑素对体外血管模型的影响:光镜下血管抑素可抑制新生血管的形成,且能破坏新生的血管网。结论:血管抑素可能抑制人脐静脉内皮细胞增殖,从而破坏新生血管形成,抑制肿瘤的生长和转移。     

牛膝多糖对过氧化氢损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:观察牛膝多糖对过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用。方法:体外培养HUVEC,分为空白对照组、模型对照组、牛膝多糖低、中、高浓度组(浓度为5%、10%、15%),显微镜观察细胞形态;微板法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性及一氧化氮(NO)的含量,ELISA法检测内皮素-1(ET-1)、组织型纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的含量。结果:与模型对照组比较,牛膝多糖中、高浓度组细胞形态改善,LDH活性显著减低、ET-1和PAI-1含量显著减少,NO和t PA显著升高。结论:牛膝多糖对H2O2诱导的HUVEC损伤具有显著地保护作用。     

氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中microRNA表达谱分析

目的:研究氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡过程中micro-RNA(miRNA)表达谱的变化,对差异miRNA调控的靶基因进行初步预测。方法:建立体外ox-LDL诱导HUVECs凋亡模型,采用miRNA芯片技术筛选表达变化显著的miRNA,实时荧光定量PCR验证结果,并对差异miRNA调控的靶基因进行生物信息学分析。结果:miRNA芯片检测发现,在ox-LDL诱导HUVECs凋亡过程中有4个表达上调和11个表达下调的miRNA。实时荧光定量PCR对其中2个上调(hsa-miR-142-3p、hsa-miR-365)和2个下调(hsa-miR-590-5p、hsa-miR-33a)miRNA的验证结果与芯片检测所示有较好的一致性。生物信息学分析发现,差异miRNA调控的靶基因与细胞增殖、凋亡、代谢及原癌基因表达等生物学功能相关。结论:经ox-LDL诱导凋亡的HUVECs其miRNA表达谱发生明显改变,提示miRNA可能参与内皮细胞功能障碍和动脉粥样硬化的发生。     

肝素钠对氟尿嘧啶诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响探讨

目的通过观察不同浓度肝素钠对氟尿嘧啶诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响,探讨不同浓度肝素钠稀释液及不同作用时相点对氟尿嘧啶致血管内皮细胞损伤的影响及可能的作用机制。方法将体外培养的2~3代HUVECs随机分为对照组、氟尿嘧啶组、肝素钠组,其中对照组只用培养基培养;氟尿嘧啶组用终浓度为25mg/L的氟尿嘧啶为刺激物;肝素钠组分别以终浓度为12.5U/mL、25U/mL、50U/mL肝素钠稀释液联合终浓度为25mg/L的氟尿嘧啶为刺激物。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞白介素-6(IL-6)、白介素-1(IL-1)及组织纤维溶酶原激活物(t-PA)含量。结果氟尿嘧啶组IL-6、IL-1及t-PA蛋白表达较对照组升高(P0.05);与氟尿嘧啶组相比,肝素钠组可抑制氟尿嘧啶诱导的HUVECs释放IL-6、IL-1及t-PA(P0.05),以50U/mL肝素钠组作用最为显著,但IL-6、IL-1及t-PA蛋白表达仍高于对照组(P0.05)。不同浓度肝素钠组间差异无统计学意义(P0.05)。同一药物浓度组,与药物作用1d后相比,第4天、第7天、第14天均有统计学差异(P0.05),其中IL-6蛋白表达呈时间依赖性升高。结论肝素钠可抑制内皮细胞释放IL-1、IL-6及t-PA蛋白,对内皮细胞具有一定保护作用。     

阿托伐他汀对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路的影响

背景：研究表明Toll样受体4参与了动脉粥样硬化的发生和发展,目前Toll样受体4与MyD88依赖性或MyD88非依赖性信号转导通路在动脉粥样硬化发生和发展中的机制尚不明确。目的：观察阿托伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路主要元件MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF表达的影响,分析阿托伐他汀防治动脉粥样硬化的机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖刺激并加入阿托伐他汀干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIFmRNA表达;用Westernblotting法测定TLR4、MyD88及TRAF-6蛋白表达。结果与结论：用脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF的高表达（P〈0.01）,用阿托伐他汀干预后可显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6的表达（P〈0.01）。提示阿托伐他汀可阻断Toll样受体4高表达,同时阻断Toll样受体4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,这可能是阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制之一。     

阿托伐他汀对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路的影响

背景:研究表明Toll样受体4参与了动脉粥样硬化的发生和发展,目前Toll样受体4与MyD88依赖性或MyD88非依赖性信号转导通路在动脉粥样硬化发生和发展中的机制尚不明确.目的:观察阿托伐他汀对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4及其下游信号转导通路主要元件MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF表达的影响,分析阿托伐他汀防治动脉粥样硬化的机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,用脂多糖刺激并加入阿托伐他汀干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM及TRIF mRNA表达;用Western blotting法测定TLR4、MyD88及TRAF-6蛋白表达.结果与结论:用脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞后,引起TLR4、MyD88、TRAF-6、TRAM和TRIF的高表达(P < 0.01),用阿托伐他汀干预后可显著抑制TLR4、MyD88及TRAF-6的表达(P < 0.01).提示阿托伐他汀可阻断Toll样受体4高表达,同时阻断Toll样受体4胞内信号转导的MyD88依赖性途径,这可能是阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的作用机制之一.     

肿瘤坏死因子α诱导人脐静脉内皮细胞凋亡改变及其意义

目的：探讨肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对血管内皮细胞（ＶＥＣ）损伤的机制以及在急性肺损伤（ＡＬＩ）发病中的作用。方法：通过建立人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）体外培养,采用流式细胞技术观察ＴＮＦα对ＨＵＶＥＣ凋亡的影响以及抗ＴＮＦα的保护效应。结果：ＴＮＦα加入细胞培养中,可明显诱导ＨＵＶＥＣ凋亡,并随着作用时间的延长和ＴＮＦα浓度增加,细胞凋亡率也相应增加,一定范围内呈时间、剂量、效应关系。而抗ＴＮＦα单克隆抗体可明显阻断由ＴＮＦα诱导的细胞凋亡。结论：细胞凋亡是ＶＥＣ受损的主要方式之一。     

辛伐他汀抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡

背景：他汀类药物对血管内皮细胞的凋亡是否有影响目前尚不明确。目的：探讨辛伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响。方法：用DMEM细胞培养液培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分成空白对照组、高糖组和高糖＋辛伐他汀组,用四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞的存活率,流式细胞仪和Westernblot分别检测细胞早期凋亡率及P53蛋白表达。结果与结论：高糖组及高糖＋辛伐他汀组细胞增殖率较空白对照组明显降低（P〈0.01）,而高糖组细胞增殖率较高糖＋辛伐他汀组亦降低（P〈0.01）;高糖组P53蛋白表达量及凋亡率较空白对照组及高糖＋辛伐他汀组明显增加（P〈0.01）,高糖＋辛伐他汀组P53蛋白表达及凋亡率亦明显高于空白对照组（P〈0.01）。表明高糖可通过促进促凋亡蛋白P53的表达进而促进人脐静脉内皮细胞的凋亡,而辛伐他汀可抑制此作用。     

黄芪注射液对脂多糖诱导内皮细胞损伤保护作用的实验研究

目的:观察黄芪注射液对脂多糖(LPS)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κB(NF-κB)激活与一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)分泌的影响.方法:体外培养的第2代HUVECs用于实验,用免疫组织化学分析检测细胞NF-κB亚单位p65的表达程度,利用硝酸还原酶法、非平衡放射免疫法、黄嘌呤氧化酶法、双抗体夹心ABC-ELISA法分别检测培养液中NO、ET、SOD以及ICAM-1含量.结果:LPS有效激活NF-κB并诱导HUVECs分泌NO、SOD减少,分泌ET、ICAM-1增加.黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κB表达,并减轻LPS诱导的上述反应.结论:LPS可能通过激活NF-κB使NO、SOD减少,ET、ICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能.黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κB这一途径来实现血管内皮保护功能的.     

叶酸对同型半胱氨酸所致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的:通过培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC),研究不同浓度的同型半胱氨酸(Hcy)对内皮细胞损伤的影响,并观察叶酸的干预是否能够削弱Hcy对HUVEC的细胞毒作用。方法:将培养的HUVEC细胞分成8组,将其与不同浓度的Hcy(100,200,500,1000,2000μmol/L)和叶酸(100μmol/L)共同培养20h,分别利用MTT、苏木精-伊红染色和流式细胞仪技术观察HUVEC细胞的生长及凋亡情况。结果:HUVEC与不同浓度的Hcy培养20h后,细胞活力A值呈现剂量依赖性的降低,超过500μmol/L的Hcy对HUVEC已经形成了显著的抑制和毒性效应,滞留于G1期的细胞比例增加,由于对照组的56.3%上升至60.0%(Hcy100μmol/L),63.1%(Hcy200μmol/L),64.4%(Hcy1000μmol/L),73.9%(Hcy2000μmol/L);100μmol/L的叶酸能够在一定程度上抑制Hcy诱导凋亡的作用。结论:高浓度的Hcy具有内皮细胞毒作用,可以抑制细胞的生长并促进其凋亡,而叶酸则具有保护性。     

抑制胞浆型磷脂酶A2活性对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞分泌瘦素的影响

目的 通过改变胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的活性,检测细菌脂多糖(LPS)及Ca2+载体A23187诱导的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)上清液中瘦素(Leptin)水平的变化,探讨在体外炎症状态下cPLA2活性与细胞分泌Leptin的关系.方法 体外培养ECV-304细胞.实验1:将细胞分为空白对照组,LPS 3个浓度5、10、20 μg/ml刺激组,Ca2+载体A23187 3个浓度0.1、 1.0、10.0 μmol/L刺激组共7个组,分别作用6、12、24 h后收集上清液.实验2:根据实验1结果将细胞分为空白对照组,LPS 20 μg/ml刺激组,cPLA2特异性抑制剂AACOCF3 3个浓度0.1、1.0、10.0 μmol/L与LPS合用刺激组,丝裂素活化蛋白激酶上游激酶1/2(MEK1/2)抑制剂 U0126 3个浓度0.1、1.0、5.0 μmol/L与LPS合用刺激组共8个组,在LPS刺激前1 h加入AACOCF3或U0126,LPS刺激24 h后收集上清液.采用放射免疫分析法检测Leptin水平.结果 实验1:随LPS刺激浓度增加和时间延长,细胞释放Leptin浓度逐渐减少,LPS 20 μg/ml组作用24 h后Leptin浓度(ng/ml)较空白对照组显著下降(0.540±0.109比0.823±0.048,P<0.05).但A23187对细胞分泌Leptin并无显著影响.实验2:LPS刺激能使细胞分泌Leptin浓度(ng/ml)明显下降(0.558±0.069比0.825±0.067,P<0.05);而用不同浓度AACOCF3或U0126干预后,细胞分泌Leptin的浓度(ng/ml)有所回升,且呈浓度依赖性(AACOCF3 0.1、1.0、10.0 μmol/L组分别为0.673±0.135、 0.723±0.055、 0.797±0.062;U0126 0.1、 1.0、5.0 μmol/L组分别为0.698±0.112、 0.862±0.184、0.935±0.145),AACOCF3 1.0 μmol/L、10.0 μmol/L组和U0126 1.0 μmol/L、5.0 μmol/L组Leptin浓度均显著高于LPS 20 μg/ml刺激组(均P<0.05).结论 在由LPS诱导的体外炎症状态下,Leptin的分泌与cPLA2的活性具有一定的关系.

Abstract：

Objective To determine Leptin levels in supernatant fluid of culture of human umbilical vein endothelial cells (ECV-304) after being challenged by lipopolysaccharide (LPS) and calcium ion vector A23187, and to explore the possible relation between Leptin release and cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) activity in an inflammatory cell model. Methods ECV-304 cells were cultured in vitro. Experiment 1: the cells were divided into seven groups: blank control group, LPS 5, 10, 20 μg/ml stimulation groups, A23187 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L stimulation groups. The supernatants were collected at 6, 12 and 24 hours. Experiment 2: according to the results of experiment 1, the cells were divided into eight groups: blank control group, LPS 20 μg/ml stimulation group, the inhibitor of cPLA2 AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, the inhibitor of mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated protein kinase kinase 1/2 (MEK1/2) U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, with AACOCF3 or U0126 added 1 hour before the addition of LPS, and the supernatants were collected 24 hours after the addition of LPS. Leptin level was determined by radioimmunoassay. Results Experiment 1: with increase in LPS concentration and prolongation of time, Leptin release was decreased gradually. After 24 hours of interaction the concentration of Leptin (ng/ml) in LPS 20 μg/ml group was decreased significantly compared with the blank control group (0.540±0.109 vs. 0.823±0.048, P<0.05). However, A23187 had no significant effect on Leptin release. Experiment 2: LPS rendered cells to release less Leptin (ng/ml: 0.558±0.069 vs. 0.825±0.067, P<0.05); by adding AACOCF3 or U0126 in different concentration before adding LPS rendered the cells to release more Leptin (ng/ml), and it showed concentration-dependent (the AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L groups were 0.673±0.135, 0.723±0.055, 0.797±0.062, respectively; the U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L groups were 0.698±0.112, 0.862±0.184, 0.935±0.145, respectively). The release of Leptin in AACOCF3 1.0 μmol/L, 10.0 μmol/L and U0126 1.0 μmol/L, 5.0 μmol/L groups was significantly higher than LPS 20 μg/ml stimulation group (all P<0.05). Conclusion There is a possible relation between Leptin release and cPLA2 activity in inflammatory cells induced by LPS.     

永磁磁场对内皮细胞的影响及其量效关系研究

目的以磁源空间磁场定量计算为依据，探讨不同磁感强度永磁磁场对人脐静脉内皮细胞（ECV304）体外培养的影响及其量效关系。方法选取极面中心磁感强度为93．3，175．3，263．6，320．3和375．4mT的5组圆片磁源，采用有限元数值法计算其空间磁场，得出磁感强度并以磁感强度等值线表示；将5种强度的磁源分别作用于人脐静脉内皮细胞进行体外培养，用MTT法检测细胞活力（OD值）。结果各加磁组人脐静脉内皮细胞OD值（1．285±0．164，1．251±0．122，1．142±0．176．1．021±0．127，1．015±0．240）均比非加磁对照组OD值（1．411±0．079）下降，且差异均有统计学意义（P〈0．05或0．01）；总体呈现出磁感强度越强，OD值下降越明显的趋势。结论实验所使用各磁感强度组磁场均对人脐静脉内皮细胞体外增殖有抑制作用，提示磁场可能对增生性瘢痕血管形成有预防和治疗作用。     

山莨菪碱和蜕皮激素对内毒素致体外内皮细胞能量代谢的保护作用

目的：探讨山莨菪碱（６５４－２）和蜕皮激素９ＥＤＳ）对内毒素（ＬＰＳ）致伤培养脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣｓ）能量代谢的保护作用。方法：采用反相市郊和液相色谱分析法测定ＬＰＳ损伤后培养ＨＵＶＥＣｓ ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ及能量负荷（ＥＣ）的变化以及６５４－２、ＥＤＳ的保护作用。结果：ＬＰＳ与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,ＬＰＳ同一浓度刺激后,随刺激时间延长,ＨＵＶＥＣｓ ＥＣ降低,与正常     

辛伐他汀抑制高糖诱导人脐静脉内皮细胞的凋亡

背景:他汀类药物对血管内皮细胞的凋亡是否有影响目前尚不明确.目的:探讨辛伐他汀对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响.方法:用DMEM 细胞培养液培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分成空白对照组、高糖组和高糖+辛伐他汀组,用四甲基偶氮唑蓝比色法测定人脐静脉内皮细胞的存活率,流式细胞仪和Western blot 分别检测细胞早期凋亡率及P53 蛋白表达.结果与结论:高糖组及高糖+辛伐他汀组细胞增殖率较空白对照组明显降低(P < 0.01),而高糖组细胞增殖率较高糖+辛伐他汀组亦降低(P < 0.01) ;高糖组P53 蛋白表达量及凋亡率较空白对照组及高糖+辛伐他汀组明显增加(P <0.01),高糖+辛伐他汀组P53 蛋白表达及凋亡率亦明显高于空白对照组(P < 0.01).表明高糖可通过促进促凋亡蛋白P53 的表达进而促进人脐静脉内皮细胞的凋亡,而辛伐他汀可抑制此作用.     

异丙酚在第三丁基过氧化氢诱导脐静脉内皮细胞氧化应激中的保护作用

目的:研究异丙酚对第三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激的保护作用和机制。方法:体外培养的HUVECs分为对照组、异丙酚组、t-BHP组、异丙酚预处理+t-BHP组,给予相应处理后,Westernblot检测p38MAPK磷酸化水平变化,RT-PCR检测iNOS、eNOS表达。结果:t-BHP处理后,能显著诱导p38MAPK磷酸化,激活iNOS、eNOS表达,而异丙酚预处理后能减轻这些变化。结论:异丙酚通过抑制p38MAPK,减少iNOS、eNOS表达,减轻氧化应激从而起到保护HUVECs的作用。     

凝血酶调节蛋白基因对脐静脉内皮细胞抗凝功能的调控

目的将含入凝血酶调节蛋白(hTM)基因的真核表达载体质粒 pcDNA3.1/hTM 转染体外培养的脐静脉内皮细胞(HUVECs),观察外源凝血酶调节蛋白的表达及其所致的 HUVECs 抗凝功能的改变。方法由阳离子脂质体介导将 pcDNA3.1/hTM 质粒转入内皮细胞中,半定量 RT-PCR 测定各组 hTM mRNA 的表达强度;免疫组化法检测 hTM 在内皮细胞膜上的表达;测定各组内皮细胞对蛋白 C(PC)的激活;半自动凝血仪测定内皮细胞-PC 反应液对正常血浆活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)的影响。结果 HUVECs pcDNA3.1/hTM 质粒转染率约为10%,TM mRNA 和 TM 蛋白的表达强度都有明显提高。重组质粒转染组、空载质粒组及未转染组 PC 反应液中活化蛋白 C(acti-vated protein C,APC)的含量分别是(2.80±0.43)μg/ml、(0.75±0.08)μg/ml、(0.85±0.11)μg/ml。APTT 值在重组质粒转染组、空载质粒组、未转染组、未激活 PC 组和正常对照组中分别为(51.68±2.73)s、(38.38±2.44)s、(39.65±2.39)s、(33.93±1.73)s 和(34.60±1.86)s。PT 值在各组中分别为(21.89±1.66)s、(20.56±1.74)s、(20.42±2.04)s、(19.57±1.36)s 和(20.16±1.35)s。结论pcDNA3.1/hTM 质粒能被导入内皮细胞中,表达的 TM 分子具有生物学活性,能明显提高对 PC 的激活。激活的 PC 能明显抑制血浆内源性凝血途径使 APTT 延长,也使外源性凝血途径受到轻度抑制。     

高糖对人脐静脉内皮细胞c-Jun表达影响

目的:观察高糖对人脐静脉内皮细胞c-Jun表达的影响.方法:提取、分离人脐静脉内皮细胞,体外培养至第3代,分别用5.5,11.0,22.0,44.0 mmol/L葡萄糖培养液培养内皮细胞,并设22.0 mmol/L 甘露醇培养液培养者为对照组.以22.0 mmol/L葡萄糖分别作用0,0.5,1.0,2.0 h,应用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测c-Jun mRNA和蛋白表达水平.结果:高搪以浓度依赖方式上调人脐静脉内皮细胞c-Jun mRNA的表达,22.0 mmol/L葡萄糖达到最强刺激效应,与5.5 mmol/L 葡萄糖组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).22.0 mmol/L葡萄糖刺激0.5 h c-JunmRNA表达升高,刺激1.0 h达高峰,2.0 h开始下降.22.0 mmol/L葡萄糖刺激2 h后,人脐静脉内皮c-Jun蛋白表达增加.结论:高糖可上调人脐静脉内皮细胞c-Jun mRNA和蛋白表达.     

ADMA通过引起脐静脉内皮细胞内质网应激而诱导细胞凋亡

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)是否通过内质网应激引起人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡。方法对HUVEC进行体外培养,通过流式细胞仪检测细胞凋亡水平,用RT-PCT检测CHOP mRNA和ATF4 mRNA水平,用Western blot检测RNA蛋白激酶的内质网类似激酶(PERK)、转录激活因子-4(ATF4)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白水平。结果流式细胞仪结果表明ADMA引起HUVEC凋亡,RT-PCR结果表明ADMA引起CHOP mRNA和ATF4 mRNA表达增加,Western blot结果表明ADMA引起PERK、ATF4、CHOP蛋白表达明显增高。结论ADMA通过内质网应激而引起HUVEC凋亡,从而加快动脉硬化的进展。