小鼠中曼氏血吸虫感染的自然过程:产卵、粪便中排卵及宿主和虫体死亡对虫荷的影响

作者定量观察了小鼠感染曼氏血吸虫后的一些特征:组织中虫卵的沉积情况、感染后不同阶段的产卵量及其与粪便中排卵量的关系、不同感染度小鼠的虫荷及虫体死亡部位、肝、肺的病理变化及其与感染度的关系。 以不同周龄C57BL/6N(B6)和BALB/cAnN(BALB)小鼠皮下注射曼氏血吸虫尾蚴40,50,80或120条,感染后不同时间处死小鼠,检查粪内虫卵,门脉灌注法收集虫体;压     

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。     

SYBR Green荧光定量粪检PCR法检测日本血吸虫感染的敏感性研究

目的建立快速、敏感、特异的检测日本血吸虫感染的SYBR Green荧光定量PCR法,准确评估其敏感性。方法将计数的日本血吸虫虫卵掺人健康水牛粪样中,制备人工阳性粪样。采用改良QIAamp DNA Stool Kit粪样DNA提取方法,提取人工阳性粪样DNA,进行SYBR Green荧光定量PCR,建立Ct值与粪样中克粪虫卵数（EPG）的关系;提取单独（不与牛阴性粪样混合）日本血吸虫虫卵DNA与虫卵生理盐水冲洗液DNA,行定量PCR检测,以对本方法进行严格质量控制。结果每200mg粪样仅含1个虫卵时,荧光定量PCR仍呈阳性,人工阳性粪样EPG的对数与PCR的Ct值存在线性关系。结论SYBR Green荧光定量粪检PCR法检测日本血吸虫虫卵DNA敏感性高,EPG对数与PCR的Ct值存在线性关系。     

口服吡喹酮对小鼠体内曼氏血吸虫虫卵的作用

本实验用卵谱法和孵化法观察吡喹酮(PZQ)间隔9天两次口服给药对感染小鼠体内血吸虫虫卵的影响。 雄性体重20—25g远交系ICR小鼠,经皮肤感染波多黎各株曼氏血吸虫尾蚴200条。感染后第57天用加藤法检测粪内平均卵数/g(EPG),EPG为936的小鼠划入非治疗     

在血吸虫感染中成虫性比率的研究

本实验的目的是探讨血吸虫病流行区人体感染雄性尾蚴为多以及晚期慢性感染小鼠排出的血吸虫卵倾向发育为雄性毛蚴的可能性。实验小鼠为雌雄两性C57BL/6,BALB/c小鼠和雌性BALB/c裸鼠以及捕获于菲律宾索索贡省的野鼠。所用的日本血吸虫为菲律宾索索贡隔离群及来源于索索贡的湖北钉     

鼠疟原虫感染大鼠和小鼠的种特异性分析

目的用约氏疟原虫(P.y) BY265株和伯氏疟原虫(P.b) ANKA-luciferase株感染小鼠和大鼠，分析鼠疟原虫感染宿主的种特异性。方法制备P.y和P.b的子孢子和裂殖子。分别用5×10⁴的P.y和P.b子孢子经尾静脉注射感染SD大鼠、BALB/c小鼠(P.y感染组，5只/组)和SD大鼠、C57BL/6J小鼠(P.b感染组，5只/组)，每日取尾静脉血涂片镜检，记录红内期疟原虫出现的时间。P.y子孢子感染SD大鼠和BALB/c小鼠后42 h取肝组织，实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肝组织疟原虫18S rRNA的相对表达量。P.b子孢子感染SD大鼠和C57BL/6J小鼠后42 h活体成像法检测肝脏荧光值。分别用1×10⁸、1×10⁷、1×10⁶的P.y和P.b被感染红细胞(iRBC)感染SD大鼠(P.y感染组、P.b感染组)和易感小鼠(BALB/c、C57BL/6J)(阳性对照组)，每日取尾静脉血涂片镜检，计算原虫血症。分别用P.y、P.b裂殖子感染SD大鼠和易感小鼠，每日取尾静脉...     

粪便中日本血吸虫卵的分布

本文通过对５例阳性病人３ｄ全粪的研究，发现日本血吸虫卵在粪便中的分布具有聚集性。虫卵主要分布在粪便的表层及头端，从表面至内部及从头至尾部虫卵数有逐渐减少的趋势。随着时间的不同粪便中的虫卵计数亦有变化；又通过对４４例阳性病人的同一粪样同时制Ｋａｔｏ片１０张，结果显示随着检查次数的增加，几何均数的变化并不明显，可认为虫卵在粪便的局部是呈随机分布的。     

粪便中日本血吸虫卵的分布

本文通过对５例阳性病人３ｄ全粪的研究，发现日本血吸虫卵在粪便中的分布具有聚集性，虫卵主要分布在粪便的表层及头端，从表面至内部及从头至尾部虫卵数有逐渐减少的趋势。随着时间的不同粪便中的虫卵计数亦有变化；又通过对４４例阳性病人的同一粪样同时制Ｋａｔｏ片１０张，结果显示随着检查次数的增加，几何均数的变化并不明显，可认为虫卵在粪便的局部是呈随机分布     

PRU株弓形虫包囊感染小鼠模型的建立

目的建立一个合理、经济的弓形虫包囊小鼠感染模型,为弓形虫的相关研究提供参考。方法 20个PRU株弓形虫包囊分别感染C57BL/6J、ICR、KM或BALB/c四个品系雌性小鼠10只,感染后42d,统计小鼠存活率、脑组织包囊数和包囊直径。结果 KM小鼠存活率100%(10/10),ICR小鼠存活率70%(7/10),C57BL/6J存活率10%(1/10),BALB/c全部死亡(0/10);ICR小鼠包囊数和包囊直径与KM小鼠相比具有显著性差异(P0.01):ICR鼠脑组织包囊数为1385.71±378.555,直径为4.044±0.187μm;而KM鼠脑组织包囊数为290.00±129.743,直径为3.557±0.271μm。结论与其他3个品系小鼠相比,ICR小鼠对PRU株弓形虫包囊的抗性较强,可以作为弓形虫包囊感染模型。     

日本血吸虫人工与自然感染性钉螺对小鼠的感染性

目的探讨人工培育与自然感染的日本血吸虫感染性钉螺对小鼠感染性的差异。方法将120只昆明种小鼠随机分为2组,将人工与自然感染性钉螺用常规法逸蚴,每只小鼠感染40条尾蚴,以平均虫荷、成虫发育率、每克肝脏虫卵数(肝卵EPG)和每克粪便虫卵数(粪卵EPG)为指标进行观察,并对观察结果进行统计分析。结果自然感染性钉螺感染小鼠的平均虫荷、成虫发育率、肝卵EPG及粪卵EPG分别为27.43±3.78、68.53±9.44、19 800.97±6 752.59、196.37±11.56,均明显高于人工组的23.93±4.93、59.83±12.32、5 803.69±1 560.49、107.73±10.32(P均<0.05);相同数量的尾蚴感染后,雄性组小鼠的虫荷、发育率、肝卵EPG均高于雌性组(P均<0.05)。结论自然感染性钉螺对小鼠的感染性明显高于人工感染性钉螺,且雄性小鼠比雌性小鼠更易感染血吸虫尾蚴。     

先天性抗丝虫小鼠IL-4可抑制丝虫的生长发育

丝虫Litomosoidessigmodontis主要感染啮齿类动物 ,BALB/c小鼠对该线虫十分敏感 ,可以作为理想的动物模型 ;C57BL/6小鼠对L .sigmodontis先天抗性 ,感染后 ,成虫不发育 ,血液中无微丝蚴。以往的研究认为 ,IL 4在排虫免疫效应中并非重要的细胞因子 ,相反有促进虫体的生长发育的作用。为了进一步了解IL 4在保护性免疫中所处的角色 ,建立BALB/c小鼠及IL 4缺损的C57BL/6小鼠动物模型 ,在感染L .sigmo dontis后 ,通过对淋巴因子的检测以确定其它免疫效应途径。BALB/c小鼠组、IL 4缺损的C57BL/6小鼠组及健康野生C57BL/6小鼠组均为 6…     

SjESG-2A锤头状核酶表达载体构建及其抗日本血吸虫虫卵发育研究

目的设计并合成日本血吸虫中国大陆株卵壳蛋白基因2A(eggshell protein gene 2A,ESG-2A)的特异性锤头状核酶并构建真核表达载体。探讨其在BALB/c小鼠体内的抗日本血吸虫虫卵发育作用。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用双酶切、琼脂糖凝胶电泳及DNA序列测定方法鉴定阳性克隆。以日本血吸虫尾蚴感染BALB/c小鼠,建立动物模型。大量抽提阳性重组子,分别在小鼠感染时、感染后2w、感染后4w,将其经后腿胫前肌免疫BALB/c小鼠,共3次。小鼠感染6w后计数成虫负荷及肝组织虫卵数。ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清IFN-γ和IL-4的水平。结果经酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA3.1(+)的XbaI和EcoR I酶切位点之间,命名为pcRz-ESG-2A。在核酶组,IFN-γ的水平呈上升趋势,IL-4的水平呈先上升后下降;在空载体组和生理盐水组,IFN-γ的水平呈上升趋势,IL-4的水平也呈上升趋势。核酶组免疫BALB/c小鼠能诱生减虫率25.64%和减卵率44.21%。结论成功合成SjESG-2A特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体。核酶在已感染日本血吸虫尾蚴的BALB/c小鼠体内具有抗日本血吸虫虫卵发育的作用。     

T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活及肝脏虫卵肉芽肿形成的影响

目的观察T细胞缺陷对日本血吸虫感染宿主存活时间,肝脏虫卵肉芽肿形成及日本血吸虫雌虫产卵的影响。方法T细胞缺陷小鼠（裸鼠）和BALB／c小鼠各20只,每只感染日本血吸虫尾蚴（25±1）条,记录感染后存活时间。感染后第42d,从2组存活小鼠中各随机取7只剖杀,取肝组织,计数肝内虫卵;制作肝组织切片,观察虫卵肉芽肿病理学变化,并测量单个虫卵肉芽肿直径。结果20只裸鼠感染日本血吸虫后46d全部死亡。裸鼠肝组织中的雌虫产卵数为（4759．5±2161．3）个／条,BALB／c小鼠为（7323．4±2254．6）个／条,差异有统计学意义（P％0．05）。裸鼠肝脏中单个虫卵肉芽肿直径为（138．4±31．9）μm,与感染组BALB／c小鼠（316．4±68．2）μm比较,差异有统计学意义（P〈0．01）,且不能形成典型局限性虫卵肉芽肿,肉芽肿内嗜酸性粒细胞明显减少,周围肝组织伴有大面积坏死。结论宿主T细胞对虫卵肉芽肿的形成和维持感染宿主的生存具有重要作用。     

129/J和C57BL/6小鼠对日本和曼氏血吸虫感染不同抵抗力的进一步研究

在WEHI实验室繁殖的大部分129/J小鼠和小部分C57BL/6小鼠对血吸虫感染具有明显抵抗力。由于门脉漏的出现,门静脉系统的虫体可经血管分流到达肺,肺中炎症反应最终消灭大部分虫体,因而在肝门脉系统中未检出虫体。本研究发现小鼠抵抗力比例与同种鼠肠系膜静脉内注射乳胶小珠显示门脉漏(分流)的比例是高度相关的,用此方法证明:WEHI 129/J小鼠的抵抗力可高达100％;而C57BL/6小鼠抵抗力约为20％;C57BL/6裸鼠(nu/nu)、WEHI 129/J小鼠与C57BL/6或BALB/c小鼠的杂交子_1代(F_1)均为血吸虫适宜宿主,未显示门脉漏;     

BALB/c小鼠阻断肝期疟原虫并降低对伯氏疟原虫的易感性

BALB/c小鼠比C57BL6小鼠对伯氏疟原虫子孢子感染具有更强的抵抗力。在用γ射线减毒子孢子感染小鼠的实验中,少量的减毒子孢子即可诱导BALB/c小鼠产生抗攻击感染的长期的保护性免疫力。     

自然调节性T细胞对脑型疟疾易感鼠和抵抗鼠感染结局的影响

目的探讨自然调节性T细胞(nTregs)在伯氏疟原虫感染过程中的活化特点及其与疾病进展的相关性。方法用伯氏疟原虫ANKA分别感染C57BL/6、BALB/c和DBA/2小鼠,计数红细胞感染率;感染前和感染后3、5、8d制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾细胞悬液中nTregs百分含量;ELISA和Griess方法检测脾细胞培养上清IFN-γ、IL-10和NO水平。结果C57BL/6小鼠感染后8～11d死于脑疟,BALB/c和DBA/2小鼠感染后3～4w死于贫血和过度虫体血症。3种小鼠于感染后3d,nTregs百分数达到峰值后逐渐下降,于感染后8d,C57BL/6小鼠nTregs百分数下降最为显著并明显低于正常水平,整个感染过程中,C57BL/6小鼠的nTregs百分含量显著低于BALB/c和DBA/2小鼠。3种小鼠脾细胞培养上清IFN-γ、NO和IL-10水平于感染后开始升高,感染后5d达到峰值,感染后8d与感染后5d相比,C57BL/6小鼠IFN-γ、NO水平轻微下降,IL-10水平显著下降;BALB/c和DBA/2小鼠IFN-γ、NO水平显著下降,IL-10水平轻微下降。并且C57BL/6小鼠IFN-γ、NO水平高于BALB/c和DBA/2小鼠,而IL-10水平低于BALB/c和DBA/2小鼠。3种小鼠感染后脾脏nTregs数量与IFN-γ和NO水平呈负相关,IL-10水平与感染率呈正相关。结论伯氏疟原虫感染过程中,nTregs数量的动态变化与宿主感染结局密切相关。     

日本血吸虫虫卵破坏小鼠脾脏结构的作用

目的观察日本血吸虫虫卵对脾脏结构的病理影响。方法 C57BL/6小鼠分别经尾静脉注射日本血吸虫虫卵或虫卵可溶性抗原,经剖腹手术后向小鼠脾脏注射虫卵,4周后剖杀小鼠分离脾脏,石蜡切片苏木素伊红染色观察脾脏结构。以单性和双性尾蚴感染小鼠,9周后剖杀比较组间脾脏质量,石蜡切片观察各组小鼠脾脏结构。结果尾静脉注射虫卵小鼠脾脏淋巴滤泡数目减少,边缘区模糊难辨。手术将虫卵注射入小鼠脾脏4周后,虫卵注射部位淋巴滤泡萎缩甚至消失。单性尾蚴感染小鼠脾脏质量（0.15±0.01）g,显著低于双性尾蚴感染组（0.41±0.03）g（P〈0.01）。苏木素伊红染色脾脏切片显示单性尾蚴感染组小鼠脾脏淋巴滤泡未被破坏,而双性尾蚴感染组脾脏淋巴滤泡消失。结论日本血吸虫虫卵对C57BL/6小鼠脾脏结构有破坏作用。     

日本血吸虫感染适宜与非适宜宿主的免疫学特征初步研究

目的研究3种不同易感性宿主感染日本血吸虫后免疫应答特征的差异,初步探讨适宜和非适宜鼠类宿主感染血吸虫后免疫应答的机制。方法 C57BL/6小鼠、Sprague Dawley(SD)大鼠和东方田鼠(Microtus fortis)各12只,均随机分为感染组和未感染组,每组6只。C57BL/6小鼠、SD大鼠和东方田鼠的感染组每鼠经腹部皮肤分别感染日本血吸虫尾蚴20、200和1000条。感染后42d,剖杀各组动物,观察门脉系统成虫寄生及肝脏肉芽肿情况。收集血清,ELISA法检测细胞因子白细胞介素10(IL-10)、γ干扰素(IFN-γ)和血清特异性抗体IgG、IgG_(2a)及IgG_1的水平。结果感染日本血吸虫后42d,C57BL/6小鼠和SD大鼠均检获日本血吸虫成虫,并在宿主肝脏发现虫卵肉芽肿,而东方田鼠未检获血吸虫成虫及虫卵,肝脏正常。SD大鼠血清中IL-10的含量[(2.21±0.12)pg/ml]明显高于东方田鼠[(1.64±0.39)pg/ml](P<0.05)和C57BL/6小鼠[(0.10±0.04)pg/ml)](P<0.01),而东方田鼠也显著高于C57BL/6小鼠(P<0.01);SD大鼠血清...     

日本血吸虫感染的虫卵计量变化研究

目的了解粪中日本血吸虫卵计量变异特征。方法对清溪二村民连续7次收集粪便，用改良Kato法涂片2张;对44倒粪检阳性者，再涂片10张。结果一村粪检累计检出率从单次42.38％增加到7次的68.26％，二村从17.02增加到35.98％。虫卵在同一粪便中的分布并非完全随机。结论改良Kato法的敏感性与人群感染度及粪便取样部位有关;个体内虫卵计量变异，可用负二项分布来描述其特征。     

血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织中的分布

目的研究血吸虫感染BALB/c鼠后,虫卵在其部分组织中特别是在肠壁中的分布状况。方法 10只BALB/c鼠腹部贴片感染血吸虫尾蚴(40±1条/只),感染42d后剖杀,分别取鼠的肝脏、脾脏、肠道(小肠上段、中段、下段、盲结肠、直肠)进行成虫计数、虫卵计数、毛蚴孵化、组织切片观察,并将得到的结果进行统计学分析。结果血吸虫虫卵在BALB/c鼠各组织的分布为:肝脏(59.64%)、脾脏(0.81%)、小肠上段(6.27%)、小肠中段(5.24%)、小肠下段(5.14%)、盲结肠(17.48%)、直肠(5.41%),肝脏的沉积虫卵数和孵化数与其他组织相比差异显著,肠组织中大肠段比小肠段的沉积虫卵数和孵化数多且差异显著。在孵化率的比较中肝脏的孵化率最高(1.09%)。病理切片观察,肝脏产生大量肉芽肿结节,肠壁出现不同程度的炎症坏死。结论 BALB/c鼠定量人工感染血吸虫后,肝脏中的沉积虫卵最多,其次是盲结肠,最少的是脾脏;且不同组织的沉积虫卵数目与病理损伤程度有关。