人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的：研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论：hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

白花蛇舌草对宫颈癌Hela细胞周期、凋亡及端粒酶活性的影响

目的研究中药白花蛇舌草（Hedyotic diffusa,HD）对人宫颈癌Hela细胞端粒酶活性、细胞周期及凋亡的影响,以探讨HD抑制Hela细胞肿瘤活性与端粒酶的关系。方法分别以不同的药物浓度作用于体外培养的Hela细胞,用PCR-TRAP-ELISA方法定量检测HD处理Hela细胞后其端粒酶活性水平,同步采用流式细胞仪检测细胞周期的变化及凋亡率。结果 Hela细胞端粒酶呈阳性,一定浓度的HD作用于Hela细胞一定时间后可使Hela细胞阻滞于S期,并可诱导其凋亡,而端粒酶活性明显降低。结论 HD可能通过改变Hela细胞周期分布（S期阻滞）并同时诱导细胞凋亡,下调其端粒酶活性而达到抗肿瘤作用。     

苹果酸、γ-氨基丁酸对Hela细胞端粒酶活性的影响

目的:观察苹果酸、γ-氨基丁酸(GABA)对Hela细胞端粒酶活性的影响。方法:苹果酸、γ-氨基丁酸作用于Hela细胞不同时间后,用TRAP-银染半定量法检测端粒酶活性的变化。结果:1.将不同浓度的苹果酸作用于Hela细胞48 h后,端粒酶活性降低,以10μmol/L浓度时作用活性最低。10μmol/L苹果酸作用于Hela细胞不同时间,端粒酶活性于作用8 h时就有所下降,当作用48 h时与对照组相比下降最多达到11%。2.将不同浓度的GABA作用于Hela细胞48 h后,端粒酶活性降低,以1 mmol/L浓度时作用活性最低。1 mmol/L GABA作用于Hela细胞不同时间,结果显示端粒酶活性于作用8 h时就有所下降,当作用48 h时与对照组相比几乎下降最多达到13%。结论:苹果酸,GABA对Hela细胞端粒酶活性起下调作用。     

As4S4诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对端粒酶活性的影响

目的研究雄黄主要成分硫化砷（As4S4）抑制宫颈癌Hela细胞株增殖和诱导凋亡时对细胞内端粒酶活性的影响。方法用不同浓度的As4S4作用于Hela细胞株不同时间段后光镜观察细胞形态变化；四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率；流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡率；DNA梯状电泳（DNAladder）检测凋亡的发生；PCR—ELISA法测定细胞内端粒酶活性变化。结果As4S4可抑制Hela细胞增殖，作用呈明显的时效和量效关系，24hIC50为30mg／L；As4S4诱导Hela细胞的凋亡率明显增加并呈浓度依赖性；DNAlad-der呈梯状条带；细胞内端粒酶活性明显受抑制。结论As4S4具有抑制Hela细胞增殖和促进凋亡作用，其机制可能与抑制细胞内端粒酶活性有关。     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

γ-氨基丁酸对Hela细胞端粒酶活性影响的研究

目的 探讨γ-氨基丁酸(GABA)对.Hela细胞端拉酶活性的影响.方法 用不同浓度γ-氨基丁酸作用于体外培养的hela细胞,用自动电泳凝胶成像分析仪进行结果分析.结果 Immol/L的GABA作用48h时,Hela细胞的端粒酶活性降低最显著.结论 GABA对Hela细胞端粒酶活性起下调作用,其下调作用可能与其抑制肿瘤细胞增殖,恶化有关.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分(hTR)模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF-7细胞.发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72 h,端粒酶活性较对照组降低61.0%(P<0.05);细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0/G1期细胞数增多,S期及G2/M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化.提示端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景.     

端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

HTR反义寡核苷酸抑制鼻咽癌细胞生长及对其致瘤能力的影响

目的:研究针对端粒酶RNA(Human telomerase RNA,HTR)的反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)抑制鼻咽癌HNE-1细胞株生长及对其致瘤能力的影响.方法:PCR-ELISA法检测细胞内端粒酶活性.MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性.电镜观察细胞超微结构的改变.将经AS-ODN处理的HNE-1细胞接种于裸鼠皮下,观察其致瘤情况.结果:HTR反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶.AS-ODN降低了HNE-1细胞的致瘤能力,裸鼠成瘤时间延长,肿瘤生长速度变慢.结论:HTR反义寡核苷酸可通过抑制鼻咽癌HNE-1细胞端粒酶活性而抑制细胞的生长,并抑制其对裸鼠的致瘤能力.     

维生素C对顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡的影响

目的探讨维生素C是否能影响顺铂诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,以及它对细胞内端粒酶活性的影响。方法MTT法和流式细胞术检测细胞生长和凋亡的情况,TRAP-ELISA法测定端粒酶活性变化。结果DDP联合AA作用组比单独用DDP组细胞凋亡率明显增高,端粒酶活性明显降低。单独10!mol/LDDP处理组细胞生长未受到明显抑制,但联合AA后其生长受到抑制。结论AA能增强DDP诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡,并增强DDP对细胞内端粒酶活性的抑制作用。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

冬凌草甲素对Raji细胞的增殖抑制作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病细胞株Raji细胞的增殖抑制作用及其机制。方法以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的Raji细胞，MTT法检测细胞生长抑制率，应用流式细胞仪、Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡，TRAP-PCR-ELISA法检测细胞凋亡前后的端粒酶活性。结果冬凌草甲素可显著降低Raji细胞的端粒酶活性，抑制细胞的生长，诱导细胞发生凋亡，并呈现出明显的剂量-效应与时间-效应关系。结论冬凌草甲素对B淋巴细胞白血病具有明显的体外抗白血病作用，降低细胞端粒酶活性，诱导细胞发生凋亡，可能是其重要作用机制。     

米诺环素对阿糖胞苷引起的离体毛囊损伤的保护作用

目的:观察米诺环素对阿糖胞苷(Ara-c)诱导的小鼠触须毛囊损伤的保护作用.方法:用离体器官培养的方法,在倒置显微镜下每日测量不同浓度米诺环素与不同浓度阿糖胞苷作用下毛囊生长长度,记录生长天数,并用MTT法测定米诺环素与阿糖胞苷对体外培养乳鼠毛囊球部细胞存活率的影响.结果:0.3×10-6 mol/L以上浓度的米诺环素能阻止阿糖胞苷对毛囊生长长度的抑制作用,延长化疗药物损伤后毛囊在体外的生长时间;米诺环素也能明显改善阿糖胞苷对体外培养乳鼠毛囊球部细胞存活率的抑制作用.结论:米诺环素在体外对阿糖胞苷诱导的毛囊损伤有保护作用,可能成为预防化疗后脱发的有效药物.     

5,7-二甲氧基白杨素对体外培养宫颈癌HeLa细胞生长的影响

目的:观察5,7-二甲氧基白杨素(dMChR)对体外培养宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法:检测5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖活性的影响采用MTT法;观察HeLa细胞凋亡形态运用丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色法;检测HeLa细胞凋亡率采用流式细胞术。结果:5,7-二甲氧基白杨素对HeLa细胞增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性;5,7-二甲氧基白杨素能有效地诱导HeLa细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:5,7-二甲氧基白杨素具有抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及对其端粒酶活性的影响

目的 为观察并比较不同型流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡能力的差异，并探讨肿瘤细胞端粒酶活性变化与凋亡之间的关系。方法 用A1、B型流感病毒及经紫外线照射后的病毒分别感染Hela细胞，于不同时间取细胞分别在电镜下观察细胞的形态，Annexin V-FITC染色流式细胞仪检测凋亡百分率，并用PCR-ELISA法检测肿瘤细胞端粒酶活性。结果 A1型流感病毒（UV-A1）及B型流感病毒（UV-B）作用于Hela细胞后24h，电镜下可见细胞凋亡的特征性改变。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡百分率随时间延长而增高，于12-24h达高峰，其中UV-B诱导凋亡百分率最高达38．6％，Uv-A1最高为23．9％。紫外线照射后的UV-B最高达到20．9％。UV-A1最高达到10．1％；此外，Hela细胞端粒酶活性均有所下降，其中UV-B诱导后的Hela细胞端粒酶活性下降比A1型更明显，同时，紫外线照射后的UV-B诱导的Hela细胞端粒酶活性也略降低。结论 UV-B在导肿瘤细胞凋亡的能力及降低其端粒酶活性方面都比UV-A1要强，而且经紫外线照射后的UV-B仍然具有一定的诱导Hela细胞凋亡的能力；流感病毒降低肿瘤细胞的端粒酶活性可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的又一重要机制。     

重建端粒酶活性延长ptsA58H质粒转染的人胚肌腱细胞寿命

目的 探讨以重建细胞端粒酶活性,达到延长经ptsA58H质粒转化的人胚肌腱细胞系（THETC）可行性。方法 构建含人端粒酶逆转录酶（hTERT)cDNA的质粒pGRN145,体外转染THEC;通过形态学观察、平板克隆形成率检测、软琼脂培养、不同培养条件下细胞生长曲线的测定,免疫组化法染色分析胶原分泌类型,hTERT mRNA表达及端粒重复序列扩增－PCR法检测细胞端粒酶活性等,对转染前后的细胞生物学特性进行比较。结果 经pGRN145质粒体外转染的THETC（telT)有端粒酶活性表达,并继续保持旺盛的增殖能力,寿命延长。telT保持原有的温度依赖性及血清营养依赖性生长的特点,并正常分泌Ⅰ型胶原,无恶性转化趋向。结论 重建端粒酶活性进行延长THETC寿命,为建立组织工程标准细胞系提供了新的实验手段。