重组人白细胞介素-6治疗小鼠膀胱癌机制的实验研究

目的 :探讨重组人白细胞介素 - 6 (rhIL 6 )对BTT739荷瘤小鼠的抗肿瘤作用机制。方法 :BTT739肿瘤细胞接种T739小鼠 ,随机分组 :1)对照组 :腹腔注射生理盐水 0 2mL ,每日 1次 ;2 )rhIL 6组 :每日腹腔注射 1次rhIL 6 ,剂量为 4× 10 6IU/kg小鼠体重 ;应用电镜、流式细胞分析技术检测细胞凋亡 ;用流式细胞仪检测肿瘤细胞膜Fas与FasL受体及Bcl 2蛋白的表达。结果 :rhIL 6组小鼠肿瘤组织电镜下可见特征性凋亡细胞的出现 ,流式细胞仪检测出在G1期前出现凋亡峰较对照组明显增加 ,P <0 0 5 ;Fas与FasL的表达较对照组明显增加 ,rhIL 6组升至 12 5 7%和 2 0 1% ,而对照组仅为 4 6 6 %和 14 1% ,经检验P <0 0 5 ;Bcl 2蛋白的表达较对照组无明显变化 ,经检验P >0 0 5。结论 :rhIL 6可以诱导小鼠膀胱癌细胞凋亡 ,死亡受体Fas及FasL的表达增加 ,可能是rhIL 6诱导肿瘤细胞凋亡的重要信息传导途径     

醋酸甲羟孕酮对人结肠癌LS174T细胞体内生长抑制的作用

目的检测醋酸甲羟孕酮(MPA)对人结肠癌细胞LS174T移植瘤生长的抑制作用并初步分析其机制。方法建立人结肠癌裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为3组,每组10只,对照组:静脉注射或以同等容量的生理盐水灌胃;处理组分为MPA治疗组和MPA+5-Fu治疗组,MPA治疗组:每只每次灌胃MPA30mg/kg;MPA+5-Fu治疗组:每只每次静脉注射5-Fu30mg/kg;每只每次MPA30mg/kg灌胃,MPA灌胃每周5次,5-Fu静脉注射每周3次,共用3周。5周后处死动物,切除瘤灶、称瘤重、测瘤体积、计算抑瘤率;标本用流式细胞仪分析移植瘤细胞周期、凋亡率和细胞表面Fas/FasL表达;免疫组织化学SABC法检测移植瘤组织Fas/Fas-L表达。结果对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组肿瘤体积分别为(1.65±0.68)cm3、(0.78±0.31)cm3、(0.23±0.12)cm3;抑瘤率分别为0、52.7%、86.1%。流式细胞仪分析细胞周期,移植瘤LS174T细胞经MPA处理后阻止G1期细胞向S期的进程,S期和G2/M期细胞相对减少,MPA+5-Fu合用组作用更明显。对照组、MPA治疗组、MPA+5-Fu合用组细胞凋亡率分别为3.6%、13.7%、28.6%,MPA作用后移植瘤LS174T细胞表面Fas和FasL表达显著增强。结论MPA对人结肠癌移植瘤LS174T细胞生长具有显著的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与MPA使LS174T细胞停滞于G1期及细胞表面Fas和FasL表达上调有关。     

四君子汤诱导裸小鼠移植性人胃癌细胞凋亡的初步研究

目的:研究健脾类中药四君子汤在体内诱导移植性人胃癌细胞凋亡的作用。方法:采用人胃癌细胞SGC7901裸小鼠皮下移植瘤模型。实验动物共30只,造模后随机分为3组,每组10只。四君子汤组,予四君子汤煎剂灌胃;5FU组,5FU腹腔注射,共6天;对照组,予生理盐水灌胃,共40天。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)、电镜观察结合流式细胞分析技术,观察四君子汤的抑瘤作用及细胞形态学改变,并计算肿瘤细胞凋亡率。结果:发现四君子汤对裸小鼠移植性人胃癌细胞瘤抑瘤率为34.33%,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡指数AI为16.24%±3.21%,与对照组的2.63%±1.03%比较明显提高t检验P<0.01;流式细胞分析示四君子汤组凋亡率为11.38%±6.46%,比对照组的7.15%±1.32%提高(t检验P<0.05);电镜下见凋亡细胞染色质浓聚成块,位于核周边,胞浆浓缩。结论:四君子汤有诱导裸小鼠移植性人胃癌细胞凋亡的作用,其对胃癌治疗的价值有必要进一步研究。     

Initial Study on Immune Escape Mechanism of Mouse Acute Myelomonocytic Leukemic Cell Line WEHI-3

目的研究小鼠急性粒-单核白血病WEHI-3细胞系表面Fas、Fas配体(FasL)、CD80分子表达以及FasL的功能。方法应用流式细胞仪检测WEHI-3细胞表面Fas、FasL、CD80分子表达情况,同时采用氚胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测FasL功能。结果WEHI-3细胞表面CD80和Fas表达率分别为5．06％±0．41％、6．75％±2．31％(n=5),但FasL表达率高达63．73％±5．23％(n=5),当WEHI-3(效应细胞,E)和Fas+YAC-1细胞(靶细胞,T)以3:1、10:1和30:1混合培养时,YAC-1细胞的凋亡率分别为26％±4．5％,35％±3．2％和45％±2．7％(n=5)。结论WEHI-3细胞高表达FasL、低表达Fas和CD80,并能诱导Fas+YAC-1细胞凋亡。     

三氧化二砷对非M_3的AML及ALL细胞Fas和FasL蛋白影响的研究

 目的　了解As2 O3 对非M3 的急性髓性白血病 (AML)及急性淋巴细胞性白血病 (ALL)细胞Fas、FasL蛋白的影响。方法　将非M3 的AML细胞和ALL细胞体外与不同浓度As2 O3 共同培养 ,通过细胞计数、细胞活力的判定并利用流式细胞仪检测DNA、Fas和FasL蛋白的变化 ,来观察As2 O3 对上述细胞的细胞活力、增殖周期及Fas、FasL蛋白的影响。结果　随着As2 O3 浓度由 0 μmol/L增加至2 μmol/L ,细胞活力由 (91.1± 2 .3) %降至 (6 4 .32± 3.5 ) % ;细胞生长抑制率由 (10 .6± 1.6 ) %增至(2 9.36± 2 .6 ) % ;细胞凋亡率由 (0 .0 7± 2 .5 ) %增至 (5 .0 4± 2 .2 ) % ;随着As2 O3 浓度增加 ,Fas、FasL的阳性率也随之增加。结论　As2 O3 以浓度依赖的方式抑制非M3 的AML及ALL细胞的生长、活力及细胞周期 ,使G0 G1期细胞增多 ,As2 O3 在诱导非M3 的AML及ALL细胞发生凋亡的同时 ,可以上调Fas、FasL的表达 ,提示Fas/FasL系...     

肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞凋亡的双重阻断研究

目的通过阻断Fas/FasL介导的T细胞凋亡,建立快速制备大量激活的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的方法。方法选择FasL表达阳性的肝癌标本,分离肝癌细胞和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),然后在体外将两者混合,并在CD28单抗共刺激下,激活制备特异性CTL。应用可溶性Fas受体阻断肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发激活T细胞凋亡,与对照组比较用流式细胞仪和DNA ladder Test同时检测阻断凋亡作用,通过3H掺入法和51Cr释放法了解T细胞增殖力及杀伤活性。结果流式细胞术仪检测未阻断组较阻断组和未阻断对照组凋亡率明显升高,未阻断组凋亡率达47．82％±0．13％,对照组静息性T淋巴细胞组为3．76%±0．25％,阻断组为8．22％±0．26％(P<0．01),DNA ladder显示未阻断组T淋巴细胞出现明显梯状条带,阻断组为阴性。51Cr释放法表明阻断后T淋巴细胞杀伤活性增加,较未阻断组及未阻断对照组差异有显著性(P<0．01)。3H掺入法检测证实可溶性Fas受体阻断激活T细胞凋亡后,细胞增殖明显升高,较未阻断组差异有显著性(P<0．01)。结论体外实验可获得大量激活T细胞,并可杀伤肿瘤细胞。     

结肠癌细胞通过Fas/FasL诱导淋巴细胞发生凋亡

背景与目的:研究发现,肿瘤组织中Fas配体阳性表达区肿瘤浸润淋巴细胞的凋亡率比FasL阴性区高,推测肿瘤细胞可通过增加表达FasL来杀伤肿瘤浸润淋巴细胞。本研究拟在体外验证结肠癌细胞SW480是否可以诱导淋巴细胞发生凋亡。方法:结肠癌细胞系SW480(效应细胞)与对Fas介导凋亡敏感的Jurkat细胞(靶细胞)共培养,分为3种效靶比20∶1,10∶1,5∶1。生长曲线法、流式细胞术、荧光显微镜观察分别检测Jurkat细胞的凋亡情况。结果:流式细胞仪检测结果显示,SW480接种浓度为0(对照)、0.5×105/ml、1×105/ml、2×105/ml时,Jurkat细胞凋亡率为(1.8±0.21)%、(5.49±0.17)%、(11.18±0.14)%、(18.22±0.11)%。荧光显微镜观察结果表明,SW480接种浓度为0(对照)、0.5×105/ml、1×105/ml、2×105/ml时,Jurkat细胞凋亡率为(1.58±0.12)%、(5.22±0.13)%、(9.74±0.21)%、(19.33±0.18)%。3种效靶比条件下,SW480细胞均能诱导Jurkat细胞发生凋亡。随着SW480接种浓度的升高及共培养作用时间的延长,Jurkat细胞凋亡率逐渐增加。每个实验组与对照组相比,P值均小于0.01。结论:结肠癌细胞SW480可以通过Fas系统诱导淋巴细胞发生凋亡,这为结肠癌的免疫逃逸、反击机制提供了又一证据。     

柔红霉素对HL-60细胞凋亡及Fas、FasL表达的影响

目的 :通过测定柔红霉素 (DNR)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60凋亡及Fas/FasL基因表达的变化 ,探讨Fas/FasL系统在细胞凋亡中的作用。方法 :应用荧光显微镜、结合DNA电泳及流式细胞仪分析技术 ,观察柔红霉素对HL 60细胞凋亡的影响及细胞凋亡过程中Fas/FasL基因的表达。结果 :柔红霉素浓度为 0 .1、1 μg/ml时 ,作用 6小时出现典型凋亡细胞 ,荧光显微镜观察HL 60细胞可见凋亡小体、染色质浓缩和胞体出芽改变 ,流式细胞仪分析可见凋亡峰 ,2 4小时达高峰 (45 .2 %± 1 0 .3 % )。 1 0 μg/ml柔红霉素作用 6小时 ,未见凋亡峰。柔红霉素可诱导Fas/FasL基因表达。结论 :柔红霉素诱导细胞凋亡是其治疗白血病的主要机制之一 ,Fas/FasL系统参与柔红霉素诱导的HL 60细胞的凋亡过程     

DFMO通过Fas/FasL通路诱导人肺癌细胞凋亡的研究

背景与目的:Fas/FasL系统是细胞凋亡的重要通路。为了解Fas/FasL系统在肿瘤多胺生物合成抑制导致恶性表型逆转中的作用,本研究拟探讨多胺生物合成抑制剂α-二氟甲基鸟氨酸(α-difluoromethylornithine,DFMO)对人肺癌A549细胞生长、凋亡的影响及其与人肺癌相关抗原、rasP21蛋白及Fas/FasL表达的相关性。方法:用MTT法观察细胞生长,流式细胞仪分析细胞周期,DNAladder电泳法观察细胞凋亡,SP免疫组化法及RT-PCR法检测细胞蛋白及基因表达。结果:DFMO可抑制A549细胞生长并诱导凋亡,使G1期细胞增多(61.0±2.08)%,S期细胞减少(21.2±0.88)%,出现DNAladder;同时下调A549细胞人肺癌相关抗原及rasP21蛋白表达,上调Fas基因mRNA及蛋白表达。结论:DFMO通过Fas/FasL通路诱导肺癌A549细胞的凋亡,并可能与人肺癌相关抗原及rasP21蛋白表达调控有关。     

维生素E琥珀酸酯联合他莫昔芬抑制乳腺癌细胞增殖

目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合他莫昔芬(tamoxifen)对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并分析调控Fas/FasL系统表达在抑制乳腺癌细胞增殖中的作用。方法:人乳腺癌细胞MCF-7(ER阳性)和MDA-MB-435(ER阴性)以VES联合他莫昔芬作用24和48 h,VES浓度为10和20μg/mL,他莫昔芬的浓度分别为1、5和10μmol/L。以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas/FasL表达的变化。结果:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用。药物联合作用后,乳腺癌细胞表现为明显的G0/G1期阻滞,MCF-7和MDA-MB-435细胞的凋亡率分别由(3.30±0.2)%和(4.88±0.9)%升高至(25.61±2.7)%和(23.33±1.1)%,流式细胞仪提示,MCF-7和MDA-MB-435细胞表面的Fas分别由50.07和46.29升高至116.72和136.68;FasL分别由51.85和57.43升高至146.82和127.90。结论:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas和FasL表达上调有关。     

11种化疗药物对卵巢癌细胞的抑制作用及其对有核细胞毒性的研究

目的通过体外实验,观察11种化学治疗药物对人卵巢癌细胞的杀伤作用,及其对外周血有核细胞(白细胞、淋巴细胞和粒细胞)的毒性效应,并探讨这2种作用可能存在的相关性。方法采用经典的MTT比色法分别检测34例卵巢癌患者新鲜肿瘤组织标本的癌细胞对11种化疗药物的敏感性和药物对外周血有核细胞的毒性。结果各药物对癌细胞抑制率的差异有显著性;其中,TAX和VM-262种化疗药物的抑制率分别达到50.97%和41.38%,可认为属于卵巢癌细胞的敏感药物;其余9种药物对卵巢癌细胞的抑制率均较低。各药物对癌细胞的抑制率与其对有核细胞中的粒细胞的毒性作用有明显的相关性。结论TAX和VM-26,属于卵巢癌细胞敏感的化疗药物;检测的11种化疗药物,其对卵巢癌的疗效与其对粒细胞的毒性显著相关;在缺乏进行肿瘤细胞药敏试验条件的情况下,卵巢癌患者外周血粒细胞毒性试验,是1种可行的替代检测措施。     

米非司酮对子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长作用的研究

目的探讨米非司酮(RU486)对人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤生长的抑制作用。方法体外培养人子宫内膜癌HHUA细胞,裸小鼠皮下接种HHUA细胞建立裸小鼠移植瘤动物模型,将荷瘤裸小鼠随机分为两组,分别应用米非司酮、精制花生油治疗4周。治疗期间观察各组裸小鼠生长情况、移植瘤体积、增殖率和形态,治疗结束后应用流式细胞术(FCM)检测各组裸小鼠移植瘤组织细胞周期时相的变化和细胞凋亡率;应用免疫组化技术检测基因Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果米非司酮组裸小鼠移植瘤体积第3周明显减小,肿瘤增殖率明显降低(P<0.01)。4周治疗结束后米非司酮组裸小鼠移植瘤细胞G0/G1期比例升高(38.17±3.02)%,S期细胞比例(SPF)降低(43.87±4.29)%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.05),移植瘤细胞凋亡率为(15.03±2.19)%,明显高于对照组(3.06±1.13)%(P<0.01);治疗组移植瘤细胞Bcl-2蛋白表达明显降低(1.9±0.61),而Bax呈现过度表达(4.0±1.28)(P<0.05)。结论抗孕激素米非司酮(RU486)能显著抑制人子宫内膜癌HHUA细胞裸小鼠移植瘤的生长,其抗肿瘤作用与调控细胞周期时相和诱导细胞凋亡相关。     

抗肿瘤药物对肾上腺机制影响的研究进展

多种抗肿瘤药物如激素类、化疗、靶向药物和免疫检查点抑制剂在发挥抗癌作用的同时对内分泌腺具有毒性作用,其中对肾上腺的影响逐渐受到临床重视。药物治疗相关的肾上腺功能不全若无法及时诊治,可导致肾上腺危象的发生甚至危及生命。本文将就抗肿瘤药物对肾上腺机制影响进行综述,为临床防治肿瘤患者的肾上腺功能异常提供指导。      

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