杂交瘤细胞在玻璃微载体培养中生物特性观察

本文报道以玻璃微载体小珠(CMB,Class microcarrier beads)作为载体培养杂交瘤细胞方法的建立。结果表明4株杂交瘤细胞在GMB培养显示GNB法上清中特异性单克隆抗体的滴度。OD值较单层培养法为高。比较培养7d后的杂交瘤细胞数,也以GMB法获得细胞数为多。各株细胞都诱生出高滴度腹水。亚类鉴定方面,GMB法培养的4株杂交瘤细胞上清内McAb所属亚类,又都保持了与单层法培养者完全相同的结果。表明杂交瘤细胞在CMB培养中,细胞迅速增殖,且保持各细胞株分泌其特异的McAb的生物特性,细胞活力旺盛,为今后体外培养杂交瘤细胞,制备McAb,提供了新的途径。     

杂交瘤细胞在微囊内培养的生长特性

应用微囊技术大规模培养杂交瘤细胞以生产大量单克隆抗体,国际上已有专利。我国亟需解决此问题,为此作者对杂交瘤细胞在微囊内静态培养的生长动态特性、细胞的峰值浓度、生物学功能、形态特征以及影响囊内杂交瘤细胞满囊比的主要因素等进行了观察。结果表明:静态培养一周,细胞的峰     

杂交瘤细胞的无血清无蛋白培养

随着单克隆抗体在体内治疗中的广泛应用，杂交瘤细胞的无血清无蛋白培养日益受到重视。本文讨论了杂交瘤细胞无血清无蛋白培养基的常用添加成分和它们的功能，综述了用无血清无蛋白培养基培养杂交瘤细胞技术的进展     

一种拯救长时间远距离转送淋巴细胞杂交瘤细胞的方法

我们采用了先用９６孔培养板培养，再经２４孔培养板扩大培养至小培养瓶的培养途径，结合饲养细胞的方法成功地拯救了转送时间长达１１ｄ的淋巴细胞杂交瘤细胞。同时发现，用本方法拯救杂交瘤细胞时，培养液是否与原先一致天关紧要。     

L_(929)条件培养液在无血清培养中促进杂交瘤细胞生长的作用

在细胞融合、克隆时,为促进杂交瘤细胞生长常需加入饲养细胞。Wolker等用其他可溶性因子——L_(929)细胞培养上清取代饲养细胞用于细胞融合、克隆及杂交瘤细胞培养,证明有促进细胞生长的作用。本文介绍在杂交瘤细胞的无血清培养中加入L_(929)条件培养液培养细胞的结果。     

不同培养基对人杂交瘤细胞培养效应的影响

培养液是细胞培养的基本要素,选择适当的培养液是人杂交瘤技术成功的重要因素之一。我们分析比较了三种商品化培养液RPMI1640、DMEM、IMDM对分泌人单抗杂交瘤细胞的培养效应,包括对维持细胞的活力、增殖、克隆效率及抗体分泌等参数的观察比较,发现RPMI1640对人-(人×鼠)杂交瘤细胞“87-3”与人-鼠杂交瘤“87-3”培养效应最佳,为首选培养液。     

单克隆抗体

杂交瘤技术自创立以来尽管得到了迅速发展,仍然存在着一些有待解决的问题。为了能对它有一个全面正确的估价,本文对杂交瘤的培育过程及其存在问题作如下介绍。用指定抗原先后两次免疫小鼠,2—4日后取其脾脏制成细胞悬液,与能连续增殖的骨髓瘤培养细胞混匀,再加入聚乙二醇以促使细胞膜融合,然后进行培养。脾细胞与骨髓瘤细胞形成一个成活的杂交瘤细胞的成功率很低,在2×10~5个脾细胞中只有一个。要找到杂交瘤细胞,有点象大海捞针。因此,必须利用选择性培养基,将那些未能融     

杂交瘤细胞特异的DNA损伤（文摘）

杂交瘤细胞特异的ＤＮＡ损伤（文摘）［英／ＧｒｉｇｓｂｙＲＶ…Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ１９９３；１２（６）：７５５］近年来单克隆抗体技术得到了长足的发展，但杂交瘤细胞的不稳定性依然是一个严重的问题，对人一鼠或人一人杂交瘤的影响尤大，表现为培养中的杂交瘤细胞不...     

微囊法培养人×人杂交干细胞-微囊法与常规液体培养法的细胞生长和单克隆抗体产生的比较

用ENCAPCEL~(TM)微囊技术培养鼠×鼠杂交瘤细胞和生产单克隆抗体,已显示出一定的优越性,表现在最终细胞密度和单克隆抗体产量、浓度以及纯度等四个方面。但鼠杂交瘤不易受人×人杂交瘤,培养方法即选择的限制因素的影响:如维持饲养裸鼠的困难和人×人、人×鼠杂交瘤单克隆抗体产量很低。作者实验应用微囊法培养,研究了生产人×人杂交     

抗肾综合征出血热病毒人杂交瘤细胞株的无血清培养

用于治疗的人单克隆抗体（IllAl，）不仅要有一定的数量，而且要有较高的纯度。体外大规模地培养杂交瘤细胞也许能够保证其数量，但因在培养基中要补充胎牛血清和其它蛋白成分“’，可使后续rll．m－一的纯化相当困难。所以，人们一直在研究人杂交瘤细胞的无血清培养技术，试图建立一种在无血清条件下，能大量培养人杂交瘤细胞的方法。本文中我们将1株抗肾综合征出血热病毒（HFRSV）人杂交瘤细胞2D5，用无血清培养，取得了一定的结果，现报道如下。l材料和方法1．l人杂9们细胞2D5细胞株为本室建立，可分泌抗HngSV人mAnIgG（‘’。互．…     

腹水杂交瘤细胞的直接冻存法与复苏效果的观察

在单克隆抗体的研究中,目前有关杂交瘤细胞的冻存均是采用传统体外培养的细胞进行。实验表明,这种冻存和复苏后的杂交瘤细胞的活力尚欠理想,尤其一些经数次克     

半固体培养基法制备单抗的可行性研究

目的建立稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。方法常规细胞融合后,用甲基纤维素半固体培养基重悬细胞沉淀,通过优化甲基纤维素半固体培养基中甲基纤维素、血清及L-谷氨酰胺三种成分的浓度,建立稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。并进行有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞的对照实验。阳性克隆扩大培养,ELISA检测后冻存,再次复苏后ELISA检测呈阳性为稳定杂交瘤细胞株。结果甲基纤维素三种浓度中,甲基纤维素浓度1．0％和1．2％时获得的杂交瘤细胞团个数约为甲基纤维素浓度1．25％时的2倍。而甲基纤维素浓度1．2％时细胞团固定效果较甲基纤维素浓度1．0％更好。通过对梯度稀释的SP 2／0细胞培养后,选择半固体培养基中使用的胎牛血清浓度（25％）,在半固体培养基中含4mmol／L L-谷氨酰胺比含2mmol／L L-谷氨酰胺得到多近一倍的杂交瘤。得到的5株阳性杂交瘤在扩大培养、冻存复苏后抗体分泌稳定,得到5株稳定阳性杂交瘤细胞株。有限稀释法和甲基纤维素半固体培养基法筛选杂交瘤细胞对照实验显示半固体培养基法可节省一半时间。结论建立了稳定的甲基纤维素半固体培养基一步法筛选和克隆化杂交瘤细胞的方法。该法缩短了克隆化的时间,节省了人力和材料．不需要添加饲养细胞和细胞因子,是一种稳定高效的杂交瘤细胞克隆化方法。     

低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断,免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛,使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行,但腹水含有大量杂蛋白,包括小鼠正常Ig。这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。遗憾的是杂交瘤细胞通常需在含有较高浓度(10～20％)小牛血清的培养液中生长繁殖,且培养上清中的抗体浓度比小鼠腹水的抗体浓度低得多。但也用有低血清培养杂交瘤细胞的成功报道。同时改善培养条件可提高培养上清液中的抗体浓度。为了使发酵罐能在成本较低的情况下生产较高滴养度的McAb。我们首先对静止培养的杂交瘤细胞进行了两个方面的研究——驯化适应低血清培的杂交瘤细胞株和添加蛋白质不同水解物以提高培养上清中的抗体产量。     

藻酸钙凝胶固定法能增进无血清培养基中杂交瘤产生抗体的稳定性

虽然在杂交瘤细胞培养中加入胎牛血清能促进细胞生长,但胎牛血清价格昂贵。其组分尚未完全弄清,再加之其质量不稳定,它还常常是微生物污染的来源,血清带入到培养液中的蛋白质,使得抗体的纯化困难。这些都是使用胎牛血清的不利因素。人们进行了大量的研究以期减少或停止使用血清。现已有好几种无血清的杂交瘤细胞培养基应市。然而,研究发现,杂交瘤细胞在无血清培养基中长期培养会丧     

识别人体结肠癌的单克隆抗体

应用人体结肠癌细胞系CL-187与佐剂相混合,免疫BALB/c小鼠。以聚乙二醇(PEG1000)为促融剂,使被免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合。细胞融合之后,经HAT选择性培养液培养,去除自身融合和未融合的细胞。用Vectein ABC试剂和间接免疫荧光法检测杂交瘤细胞上清液中的抗体,筛选出呈阳性反应的杂交瘤细胞。再经甲基纤维素培养     

改良的融合技术——Ⅱ杂交克隆的稳定性和纯度

关于产生抗体与杂交瘤细胞生长情况的关系,和融合后产生抗体杂交瘤细胞的均一性及稳定性等方面报导极少.某些作者主张不产生抗体的克隆细胞生长速度超过产生抗体的克隆细胞,但迄今未经实验证明.为了回答这些问题,作者做了两部分试验.一、以不同浓度细胞作融合,然后培养9天,检查产生抗体杂交瘤细胞的形成情况.二、用三种浓度融合后,第11天开始检测,第十四天作有限稀释培养,两周后筛选各孔,用细胞毒试验测定生长孔的上清液.计算每一浓度克隆平均数/孔,并与泊松(Poisson)分     

在CELLMAX人工毛细管体系中生产单克隆抗体

在ＣＥＬＬＭＡＸ人工毛细管体系中生产单克隆抗体生长在普通细胞培养体系如Ｔ－瓶培养及悬液培养中的杂交瘤细胞通常而临营养物和氧的逐渐减少以及乳酸和氨离子浓度的逐渐增加。与之相比，培养在人工毛细管中的杂交瘤细胞可以享用循环生长培养基持续提供的氧和营养物，同...     

杂交瘤冻存的简便快速方法

本文介绍两种在96孔微培养板内冻存和复苏杂交瘤细胞的简便快速方法,可提高对杂交瘤的管理水平,以避免细胞的丢失。具体方法是:用福尔马林杀死的嗜肺军团菌(OLDA株)或鹌鹑肌细胞,分别免疫Balb/c小鼠。杀鼠取脾细胞,与Sp 2/O—Ag14小鼠浆细胞瘤细胞杂交得LD 8 a 2—3 D 8-1 B 7和MF 2-5 A6杂交瘤。通过间接免疫荧光试验检测杂交瘤所分泌的抗     

丁酸钠对杂交瘤细胞增殖及抗体分泌的影响

用含不同浓度丁酸钠完全培养液和无血清培养液培养分泌抗组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)单克隆抗体的杂交瘤细胞。当丁酸钠浓度为0.25～0.5 mmol/L时,对杂交瘤细胞分泌抗体能力具有刺激作用,提高抗体效价2～4倍,对细胞生长无抑制作用。表明丁酸钠可作为一种添加剂用以提高杂交瘤细胞分泌抗体的能力。     

人—人杂交瘤免疫球蛋白分泌稳定性的研究

对三株人—人杂交瘤细胞株的免疫球蛋白分泌稳定性作了研究。研究中注意到用有限稀释法多次克隆的杂交瘤细胞(C_(10),13H_2)与未经克隆的细胞株(F_3)在体外培养和扩增中,其细胞形态大小,染色体数和抗体分泌能力有不同程度的变化。研究证实杂交瘤球蛋白分泌稳定性与染色体丢失或不分泌群体的过度生长有关。我们用HAT筛选培养液进行再处理,注意到C_(10)这一株细胞的四倍体细胞数明显增加,抗体分泌量也有所增加。结果提示对杂交瘤细胞及早克隆,或适时用HAT进行重筛选,对稳定分泌群体可能有一定的效果。