小半夏加茯苓颗粒含药血清对肝癌细胞凋亡及其Bcl-2表达的影响

目的:观察小半夏加茯苓颗粒含药血清对肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2表达的影响。方法:选用SD大鼠制备小半夏加茯苓颗粒及原方汤剂、环磷酰胺(CTX)含药血清。①采用ELISA法检测细胞凋亡相关基因Bcl-2表达。②FCM法观察细胞生长凋亡情况。结果:①与空白对照组比较,颗粒剂组细胞液中Bcl-2含量降低(P0.05),汤剂组显著降低(P0.01)。②与同时段内空白对照组比较,含药血清作用18 h后,环磷酰胺(CTX)组、汤剂组、颗粒剂组细胞存活率有所下降(P0.05);作用36 h后,CTX组、汤剂组细胞存活率显著下降(P0.01)。结论:小半夏加茯苓颗粒含药血清可下调肝癌SMMC-7721细胞Bcl-2基因表达,抑制其生长增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡或细胞毒作用有关。     

小半夏加茯苓方含药血清抑制HepG2细胞增殖及促进凋亡

目的:采用血清药理学的方法,观察小半夏茯苓方对肝癌HepG2细胞增殖的影响,初步探索该方诱导肝癌细胞凋亡相关因子表达的影响。方法:制备含药血清,正常实验用动物Wistar大鼠,采用灌胃或腹腔注射给药途径,连续给药3 d,其中,正常对照组,灌服生理盐水;环磷酰胺(CTX)组,腹腔注射CTX;原方汤剂组,灌服小半夏加茯苓汤;原方汤剂加CTX组,灌服小半夏加茯苓汤的同时腹腔注射CTX;颗粒剂高中剂量组,灌服相当于小半夏加茯苓汤等量、二倍量的颗粒剂,末次给药后12 h,腹主静脉取血,制备含药血清,刺激体外培养的HepG2肝癌细胞,采用MTT法检测其对细胞增殖抑制的影响,流式细胞术检测其对各时相细胞周期分布,免疫组织化学的方法观察其对凋亡相关蛋白半胱天冬酶-3(caspase-3)、半胱天冬酶-9(caspase-9)的影响。结果:小半夏加茯苓方能抑制人肝癌HepG2细胞的生长,在作用24 h时效果最明显。流式检测结果显示,药物作用细胞24 h,小半夏加茯苓方阻滞细胞于S期,环磷酰胺将细胞阻滞于G2期。小半夏加茯苓方作用24 h能诱导HepG2细胞的凋亡,caspase-3表达与药物的剂量呈正相关。结论:小半夏加茯苓方可能通过激活caspase-3蛋白表达,从而诱导肝癌细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期,有效抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤的作用。     

柔肝解毒方法含药血清体外抗肝癌的实验研究

目的：通过体外抑制肿瘤细胞增殖试验,观察柔肝解毒方体外防治肝癌的药效作用。方法：制备柔肝解毒方含药血清,用MTT法观察含药血清对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞增殖的影响。结果：柔肝解毒方含药血清能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的增殖,对HepG2的最高抑制率为69.73%,对SMMC-7721的最高抑制率为62.64%,与空白对照组及PBS组相比差异显著（P〈0.01）;最高剂量组与含5-氟尿嘧啶血清抑制肝癌细胞的效果相比,无显著性差别（P〉0.05）。中药组的抑制率呈一定的量效关系,随着给药剂量的增加其抑制率升高。结论：柔肝解毒方具有良好的体外抗肝癌的药效作用。     

肝癥口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:探讨肝口服液含药血清对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的影响,为临床应用肝口服液治疗肝癌提供实验室依据。方法:选取Ⅱb或Ⅲ期肝癌病人和健康志愿者各5例,分别在用药前及用药后8周采集血清,与SMMC-7721细胞共同培养24h、48h后,应用噻唑氮蓝(MTT)比色法测定肝癌细胞SMMC-7721增殖水平。结果:HCC患者含药血清对SMMC-7721细胞增殖抑制率在24h、48h分别为45.00%3、9.32%;而健康志愿者为4.58%、7.70%,HCC患者含药血清对肝癌细胞增殖抑制作用明显高于健康志愿者。结论:肝口服液含药血清对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用并促进其凋亡,表明肝口服液有抗肿瘤作用。     

四君子汤含药血清抑癌作用的实验研究

目的:观察四君子汤含药血清体外抑制肿瘤细胞增殖的作用.方法:以人胃癌细胞系SGC-7901和人肝癌细胞系SMMC-7721为病理模型,采用血清生物化学方法,酶标仪MTT比色法和倒置显微镜观察四君子汤不同剂量、不同浓度含药血清对人胃癌细胞系SGC-7901、肝癌细胞系SMMC-7721的增殖抑制状况,并计算各组细胞生长抑制率.结果:加药组细胞变小、变圆、脱落、悬浮情况较对照组明显,且以20%高剂量血清组最为明显.四君子汤含药血清对这两种细胞增殖均有明显的抑制作用,呈剂量、浓度依赖性.结论:四君子汤含药血清能明显抑制胃癌和肝癌细胞生长.     

四君子汤合膈下逐瘀汤对人肝癌细胞株HepG2和SMMC体外作用的实验研究

目的:观察四君子汤合膈下逐瘀汤对人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721的影响。方法:倒置显微镜观察中药组、阴性对照组、氟尿嘧啶组中He PG2及SMMC-7721细胞生长情况。采用MTT法检测3组细胞生长的抑制率,流式细胞仪(FCM)检测人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞凋亡情况及细胞周期。结果:倒置显微镜下观察阳性对照组及中药组中人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞生长明显受抑制,MTT法测定细胞增殖抑制率。中药对Hep G2和SMMC-7721细胞的增殖均有明显的抑制作用,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。FCM检测中药对Hep G2、SMMC-7721细胞凋亡具有一定的诱导作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:四君子汤合膈下逐瘀汤具有抑制人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡的作用。     

健脾柔肝方含药血清抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖及诱导凋亡作用

目的:探讨健脾柔肝方含药血清对人肝癌细胞SMMC-7721增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法:SMMC-7721细胞体外培养,以健脾柔肝方低、中、高剂量含药血清培养液作用SMMC-7721细胞,并设立空白血清及5-Fu组。MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:健脾柔肝方含药血清各组均有一定的抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,均能不同程度的诱导细胞凋亡;而以化疗药5-Fu组作用最强,健脾柔肝汤中剂量含药血清组次之。结论:健脾柔肝方含药血清不仅可直接抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,而且可有效诱导细胞凋亡。     

10种壮药含药血清抗人肝癌细胞的实验研究

目的:观察10种壮药含药血清对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用,筛选出具有较强抑癌作用的药物,以指导临床用药。方法:选用清洁级成年Wistar大鼠,分别制备金刚藤、龙葵、解毒蕨、半枝莲、排钱草、石见穿、绞股蓝、透骨消、叶下珠、藤梨根10种壮药含药血清,设低、中、高浓度作用于人肝癌SMMC-7721细胞,同时设生理盐水(NS)空白血清对照组及环磷酰胺(CTX)阳性血清对照组,用MTT法检测含药血清在24 h、48 h对细胞增殖的影响。结果:MTT法筛选结果显示,金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清在24 h及48 h对人肝癌SMMC-7721细胞均有较好的抑制作用,且金刚藤高剂量组在48 h抑制作用最强。结论:金刚藤、半枝莲、叶下珠、藤梨根的含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞有较好的抑制作用。     

苦参碱和氧化苦参碱对SMMC-7721细胞增殖及Stat3,Stat5基因表达的影响

目的：观察苦参碱和氧化苦参碱对肝癌细胞SMMC-7721增殖及Stat3, Stat5基因表达的影响。方法：苦参碱和氧化苦参碱干预肝癌细胞SMMC-7721，MTT法检测其对肝癌细胞增殖的影响，双荧光染色观察细胞凋亡率，RT-PCR法检测其对SMMC-7721细胞Stat3, Stat5 mRNA的影响。结果：苦参碱和氧化苦参碱作用于肝癌细胞后，能显著抑制肝癌细胞增殖，促进其凋亡，并呈时间剂量依赖性；二者均能下调Stat3, Stat5 mRNA表达水平。以相同浓度苦参碱和氧化苦参碱比较，苦参碱对肝癌细胞Stat3, Stat5 mRNA下调作用更显著(P<0.05或P<0.01)。结论：苦参碱和氧化苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖，其机制可能与下调Stat3, Stat5的基因表达，抑制细胞信号传导通路有关。     

发酵虫草菌粉对人肝癌细胞增殖、凋亡及VEGF,MMP-2表达的影响

目的:探讨从天然冬虫夏草中分离出的虫草拟青霉Cs-4菌株,经人工发酵所得发酵虫草菌粉对SMMC-7721人肝癌细胞的生长抑制作用。方法:20只体重(200±20)g雄性SD大鼠随机分为4组(每组5只):空白组及Cs-4低、中、高剂量组,空白组ig予蒸馏水,Cs-4低、中、高剂量组(0.77,1.54,3.08 g·kg-1,ig);给药3 d后,制备含药血清。肝癌细胞悬液调整至4×104/m L,96孔板每孔加入100μL,培养24 h后加入大鼠含药血清及顺铂注射液;干预48 h MTT法测各组细胞增殖抑制率。将SMMC-7721细胞悬液调整至2.8×104/m L,接种于6孔板培养24 h,加入大鼠含药血清及顺铂,干预培养48 h后Annexin V-FITC/PI染色,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;ELISA检测各组细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF),金属基质蛋白酶-2(MMP-2)表达量。结果:SMMC-7721细胞增殖被Cs-4含药血清明显抑制(与空白组比较P0.05),低、中、高剂量组抑制率分别为12.2%,23.2%,38.1%,呈剂量依赖性(Cs-4不同剂量组间比较P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞凋亡率分别为13.9%,23.5%,24.9%,均高于空白组(P0.05)。Cs-4含药血清低、中、高剂量组细胞上清液中VEGF分别为443.5,436.9,411.0 ng·L-1,低于空白组(P0.05);Cs-4低、中、高剂量组细胞上清液中MMP-2浓度与空白组比无显著差异。结论:Cs-4含药血清能抑制SMMC-7721细胞增殖,提高体外培养的SMMC-7721细胞凋亡率,抑制SMMC-7721细胞VEGF表达,提示Cs-4有抗肝癌作用,对SMMC-7721细胞MMP-2表达无显著影响。     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

丹参酮ⅡA联合奥沙利铂对人肝癌细胞SMMC-7721作用的实验研究

 目的探讨丹参酮ⅡA对人肝癌细胞系SMMC-7721生长活性及对奥沙利铂敏感性的影响和机制。方法不同浓度的丹参酮ⅡA和奥沙利铂单独或联合作用人肝癌细胞系SMMC-7721 72 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测该细胞系的生长活性,分析丹参酮ⅡA与奥沙利铂在抑制肝癌细胞增殖中的相互作用。流式细胞术分析丹参酮ⅡA单独及联合应用奥沙利铂对肝癌细胞凋亡的影响。结果实验所选各种浓度丹参酮ⅡA对SMMC-7721均表现出一定程度的生长抑制作用,并呈剂量依赖性;当丹参酮ⅡA质量浓度为1.0,2.0,5.0,10.0 mg·L^-1时,合用质量浓度为1.0,2.0,5.0 mg·L^-1的奥沙利铂能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,并显示出两种药物的协同作用(q>1.15)。流式细胞术分析发现两种药物均可有效诱导SMMC-7721细胞的凋亡,且在上述浓度联合应用时具协同效应。结论丹参酮ⅡA可以显著抑制肝癌细胞系SMMC7721细胞增殖,并能增强该细胞系对奥沙利铂的敏感性,其作用机制可能与丹参酮ⅡA和奥沙利铂协同诱导细胞凋亡有关。     

陈皮多甲氧基黄酮类成分对人肝癌SMMC-7721、HepG2细胞株增殖的影响

目的:研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对人肝癌株增殖的影响。方法:采用MTT法观察CM对人肝癌株SMMC-7721、HepG2的生长抑制作用;采用Wright-Giemsa染色观察CM作用于SMMC-7721、HepG2细胞株的形态变化。结果:CM20 mg/L、40 mg/L作用于SMMC-7721细胞株48 h,细胞抑制率分别为21.84%、44.83%,72 h细胞抑制率分别为40.00%、60.00%;CM20 mg/L、40 mg/LHepG2细胞株48 h,细胞抑制率分别为38.54%、51.04%,72 h细胞抑制率分别为43.40%、55.67%;CM与SMMC-7721、HepG2细胞株共同作用48 h,大部分细胞出现明显凋亡特征。结论:CM可以抑制人肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2的生长并对两株细胞的增殖呈现时间、浓度依赖性。     

红花多糖对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的:观察红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度SPS处理体外培养的SMMC-7721细胞株,采用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观测以及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示SPS对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。光镜下可见SPS组贴壁细胞数明显减少,细胞变小、变圆,折光性差,贴壁不牢,悬浮细胞增多。AO染色荧光显微镜下观察,24h部分细胞出现胞质浓缩,体积缩小,核固缩,染色增强,荧光更为明亮,形成致密浓缩的绿色荧光等;48h和72h部分细胞可见细胞核固缩为新月状。流式细胞术结果显示细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势。结论:SPS能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长且呈明显的量效和时效关系。SPS可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,具有一定的剂量依赖性。     

白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 研究白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖抑制率、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 采用MTT法研究白茅根水提物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率及抑制率与时间剂量关系;并通过PI染色法和Annexin V-EGFP/PI双染法研究白茅根水提物作用于人肝癌细胞株SMMC-7721后细胞周期DNA含量变化及对细胞凋亡率的影响.结果 不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞24,48,72,96 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P＜0.05);细胞周期与细胞凋亡实验结果显示不同浓度的白茅根水提物处理肝癌SMMC-7721细胞46 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P ＜0.001),作用36 h后,可增加S期比例同时降低G2/M期细胞比例,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 白茅根水提物对人肝癌细胞株SMMC-7721具有明显的增殖抑制作用并可诱导其凋亡,该作用是通过抑制C2/M期细胞比例,将细胞周期阻滞在S期实现的.     

没食子酸体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的机制研究

目的 研究没食子酸(gallic acid,GA)体外诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其作用机制。方法 体外培养人肝癌SMMC-7721细胞,噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖;Hoechst-33258、AnnexinV-FITC/PI检测细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法研究凋亡抑制基因Survivin mRNA的变化。结果 6.25～50 μmol·L-1 GA可抑制SMMC-7721细胞的生长,并呈剂量依赖性;不同剂量的GA作用48 h后,SMMC-7721细胞出现明显的凋亡形态,细胞凋亡率有显著的剂量依赖性。RT-PCR法检测结果显示,GA能明显抑制肝癌细胞中Survivin mRNA的表达。结论 GA可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖,这可能与下调凋亡抑制基因Survivin有关。     

苦参素与顺铂联合应用诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制

目的:探讨苦参素和顺铂联合应用诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其机制。方法:采用MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,应用金氏公式分析药物间的相互作用,RT-PCR方法检测fas和caspase-3基因mRNA表达水平。结果:与单药组相比,联合用药对肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05),并表现明显的协同作用,细胞fas和caspase-3基因mRNA表达水平明显上升(P<0.05)。结论:苦参碱与顺铂联合应用能明显诱导肝癌SMMC-772 l细胞凋亡并有协同作用,其机制可能与上调细胞fas和caspase-3基因表达有关。     

对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2，Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达的影响

目的 研究对叶百部总生物碱对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 选择人肝癌SMMC-7721细胞,常规培养及传代,对叶百部总生物碱设置添加干预的质量浓度为50,75,112,167,250 mg·L^-1,另设置仅添加10%胎牛血清作为空白组。采用噻唑蓝（MTT）比色法和细胞克隆实验观察细胞增殖的作用,Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测3种凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和cleaved Caspase-3的表达。结果 对叶百部总生物碱可抑制SMMC-7721细胞增殖,与空白组比较,细胞增殖抑制率显著升高（P<0.01）,作用24,48,72 h的50%细胞抑制浓度（IC₅₀）分别为（173.36±8.75）,（112.14±16.50）,（96.41±2.60） mg·L^-1,细胞集落形成抑制率显著升高（P<0.01）,存在浓度依赖性。与空白组比较,对叶百部总生物碱可促进细胞凋亡,SMMC-7721细胞凋亡数目和凋亡率显著增加（P<0.01）,在荧光正置显微镜下可观察到典型细胞凋亡形态,如亮蓝色细胞核染色,细胞质浓缩和细胞核固缩等。与空白组比较,抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著下调（P<0.01）;与空白组比较,对叶百部总生物碱75,112,167,250 mg·L^-1促凋亡蛋白Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达显著上调（P<0.01）。结论 对叶百部总生物碱有很好的抑制SMMC-7721细胞增殖和促进凋亡的作用,其机制可能与抑制Bcl-2蛋白表达和促进Bax,cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响

目的观察癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404体外增殖及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法癌痛消饱和溶液按86.4、43.2、21.6 g/kg剂量给予SD大鼠灌胃1周,取血制备含药血清,加入SMMC-7721及Bel-7404肝癌细胞培养液。不同浓度癌痛消药物血清处理人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果体外研究显示,癌痛消方药物血清低、中、高剂量组对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404均具有不同程度的抑制作用,且这种抑制作用在一定范围内呈浓度依赖性,癌痛消药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404有促凋亡作用。结论癌痛消方药物血清在体外对人肝癌细胞SMMC-7721和Bel-7404肝癌细胞有抑制增殖作用和促凋亡作用。