pTARGET-TCR Vβ5.2真核表达质粒的构建及表达

目的 构建含大鼠TCR Vβ5.2基因的重组真核表达质粒.方法 以RT-PCR法扩增Lewis大鼠脾脏淋巴细胞的TCR Vβ5.2基因片段,将目的基因直接克隆到真核表达载体pTARGET中,构建重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2.连接产物转化E.coli JM109细胞后进行蓝白斑筛选,并经菌落PCR和DNA测序进行鉴定.将重组质粒以肌注法免疫Balb/c小鼠,用RT-PCR和免疫组化方法分别检测重组质粒在注射部位的转录和表达.通过脂质体介导,将重组质粒转染COS-7细胞进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测目的基因在真核细胞内的表达.结果 测序鉴定证实,TCR Vβ5.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到肌肉组织和COS-7细胞内目的蛋白的表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2,为进行TCR VβDNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护作用的研究提供了基础.     

利用pIRES载体构建TCR独特型重组质粒

目的 利用可同时表达两个基因片段的pIRES作为载体,构建TCR独特型重组质粒,为制备诱导抗T细胞肿瘤免疫的TCR独特型DNA疫苗提供基础.方法 设计引物,提取Jurkat及Molt4细胞株RNA为模板,RT-PCR法特异性扩增CDR3区,与pIRES经酶切连接后氯化钙法转化,重组质粒经酶切鉴定后测序.结果 构建出3种重组质粒pIRES-Jurkat Vβ8、pIRES-Molt4 Vβ2①和pIRES-Molt4 Vβ2②,其中pIRES-Molt4 Vβ2②测序正确,可体外表达Vβ2蛋白.结论 利用真核表达载体pIRES可成功构建TCR重组质粒,并有可能用于进一步克隆佐剂基因片段入pIRES的多克隆位点,提高DNA疫苗的免疫原性.     

独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体构建及体外表达

目的:构建Jurkat细胞株独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,转染后了解其体外表达情况.方法:根据聚合酶链反应-基因扫描(PCR-Genescan)检测Jurkat细胞株TCR Vα及Vβ亚家族表达情况,分别将其所表达的单克隆性的TCR Vα1及TCR Vβ8亚家族基因片段克隆至质粒pIRES的多克隆位点A(MCS A)和多克隆位点B(MCS B)中.通过限制性酶切分析、序列分析、RT-PCR、间接免疫荧光、流式细胞术(FCM)手段鉴定重组表达载体的正确性以及转染A549和Molt4细胞后基因及蛋白的表达情况.结果:构建了2组TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,该表达载体转染A549和Molt4细胞后,在mRNA和蛋白水平检测到了TCR Vα1和TCR Vβ8的表达.结论:成功构建了2种独特型Vα1-pIRES-TCR Vβ8真核表达载体,为利用特异性TCR基因修饰T细胞的研究提供方法学依据.     

人类心发育候选基因ZNF569融合EGFP真核表达载体的构建及表达

目的:构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,并鉴定其在哺乳动物COS-7细胞系能否正确表达.方法:把ZNF569基因ORF定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,脂质体介导将pEGFP-ZNF569转染入哺乳动物COS-7细胞,以一步法RT-PCR检测其在哺乳动物COS-7细胞中的表达情况.结果:双酶切及测序鉴定表明成功构建真核表达重组体pEGFP-ZNF569,并在COS-7细胞中成功地表达了融合荧光蛋白.RT-PCR检测显示RT-PCR扩增产物与ZNF569目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mRNA.结论:真核表达重组体pEGFP-ZNF569的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究ZNF569在心发育过程中的信号调控奠定了一定的实验基础.     

大鼠少突胶质细胞转录因子2基因真核表达载体的构建

背景：碱性螺旋-环-螺旋转录因子少突胶质细胞转录因子2在脊髓的少突胶质细胞的分化过程中起着关键性的作用。 目的：构建大鼠少突胶质细胞转录因子2基因重组真核表达载体,观察其在真核细胞内的表达。 方法：从新生大鼠脊髓组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因片段,克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将少突胶质细胞转录因子2 cDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-Olig2以脂质体法转染至COS-7细胞中,反转录PCR鉴定少突胶质细胞转录因子2 mRNA的表达,免疫印迹法检测少突胶质细胞转录因子2蛋白质表达水平。 结果与结论：克隆了少突胶质细胞转录因子2 的cDNA,并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-Olig2,经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;转染72 h时免疫印迹分析显示,COS-7/pEGFP-N1-Olig2实验组COS-7细胞表达Olig2-GFP融合蛋白。提示实验成功构建pEGFP-N1-Olig2真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到高效表达。     

人IL-24基因的克隆及在COS-7细胞中的表达

目的：克隆人IL-24基因，构建真核表达载体，在COS-7细胞中进行表达，并检测重组表达蛋白hIL-24的抗肿瘤活性。方法：分离人外周血单个核细胞，提取细胞总RNA，采用RT-PCR技术克隆人IL-24基因，将其重组于pUC19，双脱氧末端终止法测定其核苷酸序列，构建真核重组表达载体pcDNA3-hIL-24，进行双酶切和PCR鉴定，以质粒pcDNA3-hIL-24转染COS-7细胞进行瞬时表达，用RT-PCR检测mRNA表达，并用MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测其诱导肿瘤细胞凋亡的活性。结果：成功获得621bp的人IL-24基因，测序正确，经双酶切和PCR鉴定真核表达质粒构建正确，以脂质体转染COS-7细胞后，用RT-PCR法、MTT法、TUNEL法和流式细胞术检测表明COS-7细胞可表达hIL-24，且所表达的人IL-24具有较强的诱导A549肺腺癌细胞凋亡的作用。结论：人IL-24基因的瞬时表达和凋亡效应的初步研究已获成功，为研究人IL-24抗肿瘤的分子机制和临床应用提供了实验依据．     

独特型TCR Vβ2 DNA疫苗的构建和体外表达检测

目的:构建抗淋巴细胞白血病的独特型TCR Vβ2 DNA疫苗，并检测其转染K562细胞和体外表达情况。 方法:利用RT-PCR扩增表达TCR Vβ2的Molt-4细胞株的独特型TCR Vβ2基因片段，定向克隆于pIREs表达载体中，重组质粒转染至K562细胞中，利用间接免疫荧光法、SDS-PAGE和Western blotting等检测其表达情况。 结果:经PCR检测证实成功构建pIREs-TCR Vβ2重组子，转染至K562细胞后，利用Vβ2单抗可检测到K562细胞表面表达TCR Vβ2，SDS-PAGE分离检测为15 kD的蛋白质，并经Vβ2特异抗体Western blotting鉴定为TCR Vβ2蛋白。 结论:成功构建pIREs- TCR Vβ2 DNA疫苗，并可以在K562细胞株中表达特异蛋白。     

抗原特异TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCRV β13-pIRES2-EGFP真核表达载体的构建及共转染研究

目的 构建携带弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤(DLBL)相关抗原特异性的TCR Vα和TCR Vβ基因片段的真核表达载体TCR Vα-pIRES2.EGFP和TCR Vβ-plRES2-EGFP,将其共同转染Raji和Jurkat细胞.方法 前期研究从1例DLBL患者外周血T细胞中发现克隆性增殖T细胞受体(TCR)Vα6和Vβ13亚家族T细胞,在此基础上利用RT-PCR扩增TCR Va6和TCR Vβ13基因全长序列后,分别将其定向克隆入带有绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pIRES2-EGFP,酶切和核酸序列测定分析方法鉴定重组质粒TCR Vα6-pIRKS2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP的正确性;利用核转染技术(nueleofector)将其分别或共同转染Raji细胞和Jurkat细胞,24 h后利用激光共聚焦显微镜观察EGFP的瞬时表达情况,48h后利用实时定量PCR检测TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达情况,Western blot检测EGFP蛋白的表达情况.结果 获得来自DLBL患者的TCR Vα6和TCR Vβ13基因全长序列,酶切分析和核酸序列测定证实TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染24 h后,激光共聚焦显微镜下可观察到EGFP的表达,40%以上细胞发出绿色荧光,单独转染和共转染组荧光产生情况相似;实时定量PCR在单独转染和共转染组均町检测到TCR Vα6和TCR Vβ13基因的表达,共转染组2基因的表达水平稍低于单独转染组;Western blot检测在单独转染和共转染组均显示EGFP蛋白的表达,2组的蛋白杂交带强度相似.结论 成功构建了DLBL特异性的TCR Vα6-pIRES2-EGFP和TCR Vβ13-pIRES2-EGFP真核表达质粒,两者可同时转染到细胞中,并实现了体外共表达.     

人RASSF1A基因的真核表达载体的构建及其表达

目的 通过构建人RASSF1A基因的真核表达载体,为研究其在肿瘤细胞凋亡、细胞周期阻滞、细胞增殖抑制等方面奠定基础.方法 采用RT-PCR从人外周血的单个核细胞RNA中扩增出人RASSF1A基因的全长cDNA,利用DNA重组技术将其插入到真核表达栽体pcDNA3.1(+)中获得重组质粒.利用脂质体将重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2中,采用RT-PCR.westem-blot检测RASSF1A的瞬时表达.结果 酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF1A基因已被完整、正确地插入到pcDNA3.1(+)质粒载体中,RT-PCR及Western-blot结果显示转染细胞的RASSF1A表达水平上调.结论 成功构建了RASSF1A基因的真核表达栽体pcDNA3.1(+)/RASSF1A.     

人幽门螺杆菌外膜蛋白18000 DNA疫苗的构建及表达

目的：构建含人幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H-pylori)18000外膜蛋白编码基因的真核重组载体，并在COS-7细胞中表达，为核酸疫苗的开发奠定基础。方法：从原核表达质粒pET32a( )／528中，酶切H-pylori 18000外膜蛋白编码基因片段，将目的基因与同样进行酶切、纯化的载体pcDNA3．1进行连接，而后转化并筛选含有目的基因的重组载体pcDNA3．1／528，并在COS-7细胞中表达，以RT-PCR，Western法检测其表达产物。结果：经单、双酶切证实插入的基因片段为H-pylori 18000外膜蛋白编码基因；采用RT-PCR方法，能够从转染的COS-7细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段，Western法等检测显示，该重组质粒能够在COS-7细胞中表达目的蛋白，而且具有生物活性。结论：成功地构建了核酸疫苗pcDNA3．1／528，并在COS-7细胞中表达，为H-pylori核酸疫苗的研制奠定了良好的基础。     

小鼠子宫珠蛋白结合蛋白真核表达载体构建及其在COS-1细胞的表达

目的:构建小鼠子宫珠蛋白结合蛋白(mouse uteroglobin binding protein,mUGBP)真核表达载体,观察其在COS-1细胞中的表达和定位.方法:用RT-PCR方法扩增mUGBP的cDNA序列,将其插入pEGFP-N1载体的多克隆位点构建pEGFP-UGBP重组质粒.采用脂质体转染法将重组质粒转染到无内源性mUGBP表达的非洲绿猴肾成纤维细胞株COS-1中,观察其在细胞内的表达,并用Western免疫印迹方法进行验证.结果:pEGFP-UGBP重组质粒经酶切鉴定以及测序证实,插入的目的基因序列完全正确.激光共聚焦显微镜观察发现,转染了pEGFP-UGBP重组质粒的细胞株可见绿色萤光蛋白的表达;Western免疫印迹检测发现细胞膜组分中可检获上述转染了重组质粒的细胞所表达的融合蛋白.结论:成功构建了pEGFP-UGBP重组质粒并进行了真核表达.     

EBV特异性CTL相关TCR Vα-pIRES-TCR Vβ重组质粒的构建及体外表达

目的 构建EBV特异性细胞毒T细胞(CIL)相关的TCR Vα-pIRFS-TCR Vβ真核双表达质粒.方法 通过RT-PCR和基因扫描技术分析EBV特异性CTL克隆的T细胞受体(TCR)Vα和Vβ谱系表达情况及T细胞克隆性,确定其优势表达的TCR Vα15和TCR Vβ1亚家族基因的核苷酸序列(包括CDR3互补决定区),PCR扩增出TCR Vα15和TCR Vβ1基因后,分别定向克隆入真核双表达载体pIRES,构建双顺反子重组质粒TCR Vα-pIRES-TCR、Vβ,转基因技术将其转染A549细胞和Molt4细胞,通过RT-PCR、实时定量PCR、流式细胞术和蛋白印迹分析检测TCR Vα15和TCR Vβ1基因的表达.结果 酶切分析和核酸序列测定证实重组质粒构建正确,转染重组质粒的细胞能够表达TCR Vα15和TCR Vβ1的mRNA及蛋白.结论 成功构建了EBV特异性的TCR Vα-pIRES-TCR Vβ双顺反子真核表达质粒,并在体外实现了共表达,为进一步的实验研究奠定了基础.     

小鼠pdx-1基因真核表达载体的构建及其在胚胎干细胞中的表达

目的： 克隆小鼠pdx-1基因，构建其真核表达载体，并在小鼠胚胎干细胞中表达，为糖尿病的细胞移植治疗奠定基础。方法： PCR扩增小鼠胰腺pdx-1基因 cDNA，酶切后和携带绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体pEGFP-N1重组，将pdx-1基因 cDNA片段连接到pEGFP-N1载体的多克隆位点，形成重组载体pEGFP/pdx-1，转化大肠杆菌DH5α菌株，构建成pdx-1基因真核表达载体质粒。扩增DH5α后抽提质粒DNA，Hind Ⅲ 和BamHⅠ酶切，电泳，DNA测序鉴定。鉴定正确的质粒DNA用脂质体包裹后转染小鼠胚胎干细胞MESPU13。结果： 从小鼠胰腺cDNA扩增出876 bp的DNA片段并成功重组到pEGFP-N1载体中。经酶切和DNA测序验证，插入载体的DNA片段为pdx-1基因，插入方向正确。重组质粒经脂质体转染胚胎干细胞MESPU13，24 h 后观察到绿色荧光蛋白报告基因和目的基因的pdx-1表达。结论： 小鼠pdx-1基因的克隆和真核表达载体构建获得成功，为进一步研究其功能奠定了基础。     

人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定

目的研究含人连接蛋白Connexin26（Cx26）基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞（COS-7）中获得稳定、高效表达的方法。方法提取人外周血淋巴细胞RNA，经逆转录制备成cDNA，设计特异性引物，用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因，将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子-采用酶切法和测序法鉴定。用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞，经G418筛选，获得阳性克隆。用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测。结果从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段，pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功。RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达。结论本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26：pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞，可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达。该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础。     

赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体的构建及表达的初步研究

目的:构建赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体并在COS-7细胞中表达,为钩端螺旋体DNA疫苗的研究和开发奠定基础.方法:从赖型钩端螺旋体017株全基因组中PCR扩增出目的基因,双酶切构建重组质粒pcDNA3.1-LipL32.脂质体转染法将重组质粒转染COS-7细胞,通过RT-PCR、Western blot检测目的基因的表达.结果:成功构建了LipL32基因的真核表达载体,并在COS-7细胞中获得瞬时和稳定表达.结论:赖型钩端螺旋体外膜蛋白LipL32基因真核表达载体能在哺乳动物细胞内表达,为钩端螺旋体DNA疫苗的应用提供了实验依据.     

重组人β-防御素-2基因COS-7细胞的转染表达

目的通过构建两种SV40系列的重组载体,即N端带Flag标签的重组hBD-2基因和C端带Myc和6xHis双标签的重组hBD-2,并转染COS-7细胞,探索建立既能持续有效地表达和分泌hBD-2、其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳类动物细胞表达系统的可能性及技术路线.方法与结果(1)将hBD-2全长cDNA片段插入带有报告基因的真核表达质粒pCMV.tag2B构建出hBD-2的上游带Flag报告基因的重组表达载体pCMV.tag2B/hBD-2,经DNA测序证明hBD-2cDNA片段的插入方向和其全长cDNA的碱基组成顺序均准确无误.(2)hBD-2全长cDNA片段插入编码双重标签基因Myc和6xHis的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(+),构建出C端带Myc和6xHis双重标签的重组真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2.DNA测序结果表明hBD-2cDNA片段插入方向和全长cDNA的碱基组成顺序均准确无误.(3)采用脂质体转染法分别将以上两种重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析hBD-2的表达情况.并检测经重组真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2转染细胞的可溶性蛋白及其培养上清的抗菌活性.(4)采用RT-PCR法对经带Flag报告基因的重组表达载体pCMV.tag2B/hBD-2转染的COS-7细胞的总RNA进行RT-PCR扩增,结果扩增出一条约240bp的cDNA片段,其大小与预测相符.经Westernblot法检测到细胞可溶性蛋白在约10kD处有强反应条带显示.(5)用特异性引物(hBD2p6/hBD2p7)对经pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2转染的COS7细胞的总RNA进行RT-PCR扩增,用抗标签基因His表达产物的特异性抗体,经Westernblot法检测到细胞蛋白在约10kD处有强反应条带显示,其大小与该重组质粒结构中由pCMV启动子驱动的基因片段有可能表达成肽链的分子量(10.1)相符.双层肉汤琼脂平板扩散法抑菌试验结果表明分别与正常COS-7细胞的细胞可溶性蛋白及其培养上清比较,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2的COS-7细胞的细胞可溶性蛋白及其培养上清在金黄色葡萄球菌质控菌株25923的平板上形成明显的抑菌环.结论(1)N端带Flag标签基因重组真核表达载体pCMV.tag2B/hBD-2已被成功构建和转染COS-7细胞.通过RT-PCR法和Westernblot法证实hBD-2基因已在COS-7细胞内持续有效地表达.(2)C端带双重标签基因Myc和6xHis的真核表达质粒pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2已被成功构建和转染COS-7细胞.通过RT-PCR法、Westernblot法和体外抗菌实验证实,该系统不仅能有效地表达和分泌具抗菌活性hBD-2,也为其表达产物的检测、分离纯化提供了必要条件.     

人MUC1与GM-CSF基因融合真核表达质粒的构建与表达

目的：构建人MUC1重复序列串联体基因与GM-CSF基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1（＋）-MUC1-GM-CSF,并观察重组质粒在COS-7细胞中的表达。方法：将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片段经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1（＋）真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1（＋）-MUC1-GM-CSF。以重组质粒转染COS-7细胞,通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达。结果：酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒免疫小鼠可诱导产生抗GM-CSF抗体。结论：人MUC1重复序列串联体与GM-CSF基因重组的真核共表达质粒的成功构建,为对其免疫原性、生物学特性及免疫治疗的进一步研究奠定了基础。     

人神经营养素-3基因真核表达载体的构建和鉴定

目的：构建含有人NT-3基因真核表达载体pcDNA3．1-NT-3。方法：采用PCR技术，扩增编码神经营养素-3基因，克隆到PMD18-T载体上，再亚克隆到真核表达载体pcDNA3．1的Hind Ⅲ和BamHI位点。结果：重组真核表达载体pcDNA3．1-NT-3经酶切鉴定证明NT-3基因正向插入真核表达载体中，碱基序列的测定证明重组质粒中含有人的NT-3基因序列。结论：构建的真核表达载体携有人NT-3cDNA序列，并且含有巨细胞病毒强启动子、ploy(A)加尾信号和neo标志基因，可能具有转染多种哺乳类细胞通用性，可用于NT-3基因的真核表达及基因治疗的研究。     

人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达

目的：构建人血管内皮生长因子165（hVEGF165)的真核表达载体，并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达。方法：利用基因克隆技术，将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用BamHI和XhoI双酶切后，再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中，构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导，用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞，然后以G418筛选阳性克隆。用免疫细胞化学鉴定。结果：经酶切鉴定及基因测序证实，重组体中已插入目的基因片段VEGF165，免疫细胞化学证实，重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达。结论：成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165。并在骨髓基质细胞中得到表达，为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据。     

野生型/突变型PSD-95真核表达载体的构建及其表达

目的 构建野生型和突变型PSD-95(postsynaptic density protein 95)的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞系中表达.方法 采用RT-PCR扩增大鼠PSD-95的cDNA,以PSD-95-GW1为模板,以PCR扩增PSD-95序列的突变体Myc-ΔSG(-SH3-GK)和Myc-ΔG(-GK),分别克隆到真核表达载体pcDNA3.1( ).以脂质体法将重组质粒转入COS-7细胞,免疫印迹法鉴定PSD-95及其突变体的蛋白表达.结果 限制性内切酶酶切和测序结果表明,扩增出的野生型/突变型PSD-95基因完全正确;免疫印迹法检测表明,转染的重组质粒能在COS-7细胞中高效表达.结论 构建的PSD-95-pcDNA3.1( )、Myc-ΔSG-pcDNA3.1( )和Myc-ΔG-pcDNA3.1( )重组载体在COS-7细胞系中高效地表达,为深入研究PSD-95在缺血性脑损伤中的作用及机制打下基础.