琉球松茎皮中的三萜类及其对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

松科琉球松(Pinus luchuensis)为高大常绿树木,生长在日本东南部琉球岛。曾报道从其茎皮中分离出4种新的25,26,27-三去甲羊毛甾烷型三萜和包括新成分1、2在内的9种羊毛甾烷型和锯齿石松烷型(seratane)三萜。本次确定了新成分1、2的结构,并检测了其对DNA拓     

008 尼泊尔蒿草中具抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ活性的新的白藜芦醇低聚物nepalensinol D-G

尼泊尔蒿草Kobresia nepalensis广泛分布于北半球，尤其是喜马拉雅山脉、中国和中亚的高纬度地区。作者从该植物中分离得到4个新的白藜芦醇低聚物nepalensinol D（1）、E（2）、F（3）和G（4），检测了它们对人拓扑异构酶Ⅱ的抑制活性。     

不同中医辨证分型胃癌细胞拓扑异构酶Ⅱ表达的实验研究

目的：检测不同证候类型胃癌细胞拓扑异构酶Ⅱ（topoⅡ）的表达。方法：原发性胃癌标本52例。中医辨证分为肝胃郁热型、脾胃虚寒型、瘀毒内阻型、痰湿凝结型，SP免疫组织化学染色检测拓扑异构酶Ⅱ的表达。结果：topoⅡ标记指数与胃癌中医辨证各分型均有明显相关性，其中以瘀毒内阻型topoⅡ表达最强。结论：说明瘀毒内阻型胃癌细胞对于DNA调节控制及细胞核内核酸代谢过程功能较强，同对各种肿瘤抗癌药物敏感性表现也较高。     

紫草素对DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的抑制作用和诱导人白血病K562细胞的凋亡

目的：研究紫草素对DNA拓扑异构酶I催化活性和K562白血病细胞凋亡的影响。方法：从K562白血病细胞提取拓扑异构酶I，通过DNA解螺旋试验评价该药对拓扑异构酶I催化活性的抑制作用。用MTT法测定了该药对K562白血病细胞增殖的抑制作用。应用流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳观察了该药对细胞凋亡的诱导作用。结果：紫草素可显著抑制拓扑异构酶I的解螺旋活性(IC50=75．Oμmol/L)。该药能显著抑制K562的细胞增殖，并随剂量增大而抑制作用增强。紫草素O．3～3μmol/L对K562细胞作用24h后，其凋亡率为20％～70％。琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA“lad-der”。结论：紫草素显著抑制拓扑异构酶I的催化活性，并能诱导K562白血病细胞凋亡。     

Albaconol对DNA拓扑异构酶活性的抑制及对DNA的直接作用

目的：研究地花茵(Albatrellus confluens)提取物Albaconol对DNA拓扑异构酶(TOPO)活性的抑制及对DNA的直接作用。方法：DNA超螺旋解旋法检测Albaconol对TOPO介导pBR322 DNA解旋反应的影响;琼脂糖凝胶电泳法测定Albaconol对pBR322 DNA的直接断裂作用。结果：Albaconol能明显促进TOPOⅡ介导的DNA解旋或断裂,并抑制DNA再连接反应,在16μg／ml时完全抑制TOPOⅡ活性,但对TOPOⅠ介导的DNA解旋反应几无影响;同时在较高浓度时(≥400μg／ml)还能直接引起pBR322 DNA双链断裂。结论：Albaconol能选择性地抑制TOPOⅡ的活性,TOPOⅡ是其抗肿瘤作用的细胞内靶点之一。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶表达的影响

目的:探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)和Ⅱ的影响.方法:实验分为对照组(不加药)与实验组(华蟾素注射液0.105,0.21,0.42 mg·L-1);采用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)观察对HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(AnnexinV/PI)双染色法检测对HepG-2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测对HepG-2细胞周期的影响;采用逆转录-多聚酶联反应(RT-PCR)法检测对肝癌HepG-2细胞Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA水平表达的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western-blot法)观察对HepG-2细胞中Topo Ⅰ,TopoⅡ蛋白表达的影响.结果:华蟾素注射液抑制HepG-2细胞增殖(P＜0.05),诱导细胞凋亡(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期(P＜0.05),呈剂量依赖性;下调Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA(P ＜0.05)及蛋白的表达(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,下调Topo Ⅰ,TopoⅡ表达可能是其机制之一.     

盐酸槐定碱注射液对DNA拓扑异构酶活性抑制作用的研究

目的研究盐酸槐定碱对DNA拓扑异构酶I和酶II(TOPO I、II)活性的影响。方法DNA超螺旋解旋法检测盐酸槐定碱注射液对拓扑异构酶I及酶II介导的PBR322 DNA解旋反应的影响。结果盐酸槐定碱注射液能明显抑制TOPOI介导的DNA解旋及断裂,在终浓度为6 250μg/m l和3 215μg/m l时对拓扑异构酶I均有抑制作用,且剂量--效应关系密切,但对拓扑异构酶II介导的DNA解旋反应无影响。结论结果提示盐酸槐定碱注射液的直接作用靶点是DNA拓扑异构酶I,该药为拓扑异构酶I抑制剂。     

灵芝及灵芝孢子提取物的抗肿瘤及对DNA拓扑异构酶作用的研究

目的：观察灵芝子实体水提物及醇提物混合品（灵芝提取物）、灵芝孢子粉提取物（油）的体内外抗肿瘤作用,并测定它们对DNA拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的作用。方法：台盼蓝计数法、MTT法观察体外对肿瘤细胞的抑制作用;应用小鼠移植瘤模型研究体内抗肿瘤作用,同时测定荷瘤小鼠的胸腺指数及脾指数;DNA超螺旋解旋法测定拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ活性。结果：灵芝提取物对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为0.44mg/ml、0.39mg/ml、0.90mg/ml,灵芝孢子油对K562、HL60、SGC-7901细胞作用24h的IC50值分别为1.13mg/ml、2.27mg/ml、6.29mg/ml;体内实验中,对S180、H22移植瘤株的抑制率灵芝提取物4g/kg分别为39.1%、44.6%,灵芝孢子油1.2g/kg分别为30.9%、44.9%;灵芝提取物1g/kg和2g/kg对S180的抑制率分别为15.6%和19.0%,对H22的抑制率分别为28.8%和38.5%;灵芝提取物对荷瘤小鼠的免疫功能有一定的上调影响,灵芝孢子油则无明显作用;两者对拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。结论：灵芝提取物、灵芝孢子油均具有体内外抗肿瘤作用,二者的抗癌机制与抑制拓扑异构酶Ⅰ、Ⅱ的活性有关。     

绵马鳞毛蕨根茎中2个新的三萜类化合物及其对HIV-1蛋白酶的抑制作用

在人免疫缺陷病毒-1（HIV—1）感染的生命周期中,HIV-1蛋白酶是病毒粒子成熟所必需的酶。因此这种酶是开发新的抗HIV剂的重要靶向物。绵马鳞毛蕨Dryopteriscrassirhizoma Nakai根茎在中药中作为驱绦虫药、抗感冒药和抗病毒剂。曾从该植物分离出具有抗菌、抗氧化活性的间苯三酚类和具HIV-1逆转录酶抑制活性的山柰酚乙酰鼠李糖苷类等化合物。     

山核桃叶总黄酮及其单体化合物对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的：研究山核桃叶总黄酮及其4种单体化合物球松素查尔酮、松属素、白杨素、汉黄芩素对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）增殖和迁移的作用。方法：组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMC。调细胞密度2.0×10⁴/mL,血清饥饿处理后用100 nmol·L^-1 AngⅡ诱导增殖12 h。调细胞密度6.0×10⁴/mL,用100 nmol·L^-1 AngⅡ诱导迁移12 h。均给予12.5~62.5 mg·L^-1总黄酮,10~50 mg·L^-1球松素查尔酮、松属素、白杨素、汉黄芩素作用12 h。用细胞计数法检测VSMC增殖,伤口愈合实验检测VSMC迁移。结果：12.5 mg·L^-1总黄酮可剂量依赖性地显著抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,50 mg·L^-1球松素查尔酮、白杨素和汉黄芩素对AngⅡ诱导的VSMC增殖有微弱抑制。12.5 mg·L^-1总黄酮,10 mg·L^-1球松素查尔酮、松属素、白杨素、汉黄芩素均能剂量依赖性地显著抑制AngⅡ诱导的VSMC迁移。其中总黄酮、白杨素、汉黄芩素的效果优于松属素和球松素查尔酮。结论：山核桃叶总黄酮能有效抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖和迁移;白杨素、汉黄芩素、松属素和球松素查尔酮对AngⅡ诱导的VSMC迁移的抑制作用强于对其诱导的VSMC增殖的抑制作用。