肾上腺髓质素对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素（AM）对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株（CAOV3细胞）增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM（1-52）（1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）分别处理CAOV3细胞24小时、48小时、72小时,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞的增殖率。结果在AM（1-52）浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖（P〈0.05）,随着AM（1-52）浓度的增高及作用时间的延长细胞的增殖率呈增高趋势（P〈0.05）。结论AM能促进CAOV3细胞的增殖。     

肾上腺髓质素对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:研究肾上腺髓质素(ADM)对幼年大鼠心肌成纤维细胞(FBC)增殖的影响,并探讨其可能的作用受体.方法:用差速贴壁分离法获得心肌成纤维细胞为材料,用免疫组化的方法鉴定细胞,并绘制生长曲线.用MTT比色法测定细胞增殖.结果:①ADM对基础状态下的FBC增殖无明显抑制作用,但能呈浓度依赖性地抑制Ang Ⅱ刺激的FBC增殖.②CGKP8-37和ADM22-52均能部分拮抗ADM对Ang Ⅱ的抑制作用,而二者合用几乎能完全拮抗.CGRP8-37对ADM的拮抗作用强于ADM22-52.结论:①M具有浓度(10-8M～10-5M)依赖性地抑制Ang Ⅱ介导的FBC增殖的作用.②心肌成纤维细胞上可能同时存在CGRP受体和ADM特异性受体,但其作用可能更多通过CGRP受体.     

肾上腺髓质素和心血管疾病

肾上腺髓质素（ADM）是日本学者Kitamura等1993年在嗜铬细胞瘤组织中发现的一种个氨基酸的多肽。随后的一52系列研究显示在体内多种组织、器官广泛存在，尤以ADM血管内皮、血管平滑肌、心脏、肾上腺、肾、肺、肝组织中含量高并发现有很强的扩血管、利尿、利钠、强心等 ,ADM多种生理或药理作用。在充血性心衰（）、急性心肌梗CHF塞（）等疾病状态下组织合成明显增加，提示AMIADM 可能作为一种新的体液因子在上述疾病中起重要作ADM用。本文对在心血管疾病中的研究进展作一综述。ADM　的结构、分布、生物合成及调节1ADM　　由…     

高血压大鼠血浆肾上腺髓质素和肾上腺升压素的变化

观察高血压大鼠血浆肾上腺髓质素和肾上腺升压素的变化及其与内皮素的关系。方法；在Ｗｉｓｔａｒ大鼠上用一氧化氮合酶抑制剂Ｌ－ＮＡＭＥ复制大鼠高血压模型，用放射免疫分析法测定血浆Ａｄｍ，Ａｄｔ和ＥＴ。结果；血浆Ａｄｍ明显升高「（７．６±１．２）ｐｍｏｌ／Ｌ比对照组」「（３．４±０．７）ｐｍｏｌ／Ｌ，Ｐ〈０．０１」，与高血压和心肌肥大程度正相关「ｒ值分别为０．７６和０．４８」，反之，血冰Ａｄｔ降低「（１．     

影响大鼠主动脉肾上腺髓质素和肾上腺升压素释放的因素

用放射免疫法测定离体大鼠主动脉孵育或灌流介质中肾上腺髓质系（ＡＭ）和肾上腺升压素（ＡＴ）,发现：①～１００ｎｍｏｌ／Ｌ ＡＩＩ和ＥＴ－１呈剂量依赖性增加ＡＭ的释放率;１和１０ｎｍｏｌ／Ｌ ＡＩＩ和ＥＴ－１对ＡＴ的释放无明显的影响,１００ｎｍｏｌ／Ｌ ＡＩＩ和ＥＴ－１则增加ＡＴ释放率;这六组的ＡＭ／ＡＴ比值均增大;②１０ｎｍｏｌ／Ｌ肾上腺素增加ＡＭ和ＡＴ的释放率,１０ｎｍｏｌ／Ｌ ＣＧＲＰ则降低两者     

LIF对人胚神经干细胞增殖和分化的影响

目的:探讨LIF对人胚神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响。方法:从孕24周流产胎儿脑组织中分离NSCs,并分4组培养。对照组用基础培养液,第1,2,3实验组分别于基础培养液中加入20μg/L EGF和B27,20μg/L LIF和B27,20μg/L LIF、20μg/L EGF及B27。观察细胞生长情况并在不同时间进行细胞计数。诱导细胞分化后,显微镜下观察。结果:培养3 d细胞开始分裂并聚集成球,后逐渐增大,培养10 d,第1,2,3实验组和对照组神经球形成数分别为(21.5±7.8),(23.8±5.4),(25.2±6.3)和(24.8±6.9),各组间差异无统计学意义。分化实验显示含LIF培养的神经干细胞分化少。结论:在体外,LIF能够促进神经干细胞的增殖并抑制神经干细胞的分化。     

肾上腺髓质素与肾脏疾病

肾上腺髓质素(ADM)是1993年日本学者Kita-mura等[1]从手术切除的嗜铬细胞瘤组织提取液中分离出的一种新的多肽类物质,具有增加大鼠血小板环腺苷酸(cAMP)的作用,并证明是一种新的降压多肽.近年来发现,ADM不仅具有降压作用,而且广泛分布在机体的许多组织,具有多种生物学效应.肾脏亦是ADM的主要靶器官,ADM具有强大的利钠利尿作用,参与肾功能的调控.肾脏系膜细胞和肾小管细胞均可分泌大量ADM,以自分泌/旁分泌方式发挥生物学作用,如抑制系膜细胞增生和细胞外基质沉积,在慢性肾衰、慢性肾小球肾炎和糖尿病肾病等多种疾病中,血浆及组织ADM水平明显升高.     

CGRP影响人牙髓干细胞增殖分化的研究

目的 研究降钙素基因相关肽(CGRP)对人牙髓干细胞增殖分化的调控作用,并初步探讨CGRP的调控信号通路.方法 首先获取健康的牙髓,体外培养并筛选牙髓干细胞;采用MTT法检测不同浓度的CGRP对牙髓干细胞的增殖作用,获取适宜的作用浓度;利用茜素红染色法观察CGRP作用下牙髓干细胞形成矿化结节的效果;在实时定量RT-PCR法及免疫印迹法检测CGRP作用下牙髓干细胞中Ⅰ型胶原(Col-1)、转录因子Runx2的mRNA和蛋白表达水平;最后利用实时定量RT-PCR法检测MAPK信号通路抑制剂作用下CGRP对牙髓干细胞中Ⅰ型胶原、Runx2 mRNA表达水平的影响.结果 经过筛选培养获得生长稳定的牙髓干细胞;MTT法检测可知CGRP可促进牙髓干细胞的增殖,在CGRP的浓度达到10-7 mol/L时效果最显著;在CGRP作用牙髓干细胞28 d后,经茜素红染色可见矿化结节;经实时定量RT-PCR法和免疫印迹法检测可知CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1、Runx2的mRNA和蛋白表达水平得到显著提高;MAPK信号通路中ERK激酶通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Runx2表达的水平,ERK激酶和p38通路能够调控CGRP作用下牙髓干细胞中Col-1表达的水平.结论 CGRP能够促进牙髓干细胞的增殖分化,这一作用受到MAPK信号通路的调控.     

肾上腺髓质素对醛固酮促心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对醛固酮(ALDO)促心肌成纤维细胞增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,将细胞分成对照组、不同浓度ALDO组、ALDO+不同浓度ADM组、ALDO+ADM受体拮抗剂组,用3H-胸腺嘧啶([3H]-TdR)掺入和MAPK活性反映心肌成纤维细胞增殖。结果:ALDO呈浓度依赖性增加心肌成纤维细胞3H-TdR掺入,ALDO强烈刺激成纤维细胞ADM分泌和ADMmRNA表达,亦呈浓度依赖性,加入ADM(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性抑制ALDO促心肌成纤维细胞增殖作用,其[3H]-TdR掺入量减低,抑制率分别为16.8%-37.4%(P<0.01),其MAPK活性明显减低,抑制率为7.4%-33.6%(P<0.05或P<0.01)。ADM22-52明显增强ALDO的促心肌成纤维细胞3H-TdR掺入效应,而CGRP8-37对ALDO的促细胞增殖效应无明显影响。结论:ADM对ALDO促心肌成纤维细胞增殖具有抑制作用,同时具有下调MAPK活性的作用,ADM对心肌成纤维细胞增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

肾上腺髓质素生物学特性研究进展

<正> 1993年日本学者Kitamura等在人的嗜铬细胞瘤中分离一种新的生物活性肽,命名为肾上腺髓质素(Adrenomedullin,AM)。短短数年,对AM生物学特性、生物学效应及与疾病的关系进行了广泛的研究。 1 AM生物学特性 1.1 结构特点 人AM前体有185个氨基酸残基,其N端有21个氨基酸残基组成的信号肽。AM前体中第95位至146位氨基酸残基水解后形成AM。AM由52个氨基酸组成,第16位和第12位为半胱氨酸,形成一个二硫键组成的环状结构。     

氯化锂对牙髓干细胞增殖与分化的影响

目的 检测氯化锂对人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs)细胞增殖与分化的影响。方法 收集18~25岁患者因正畸拔除的健康完整前磨牙或智齿,用改良组织块法分离培养牙髓干细胞;利用免疫荧光染色与流式细胞术对分离培养的细胞进行细胞来源鉴定;利用细胞计数试剂盒（CCK-8）测定不同浓度氯化锂对牙髓干细胞增殖的影响,选择适宜浓度的氯化锂对牙髓干细胞进行矿化诱导培养,利用茜素红染色观察矿化结节形成以及荧光定量PCR实验研究氯化锂对牙髓干细胞分化的影响。结果 流式细胞术及免疫组化染色结果显示原代人牙髓干细胞来源与标志物与间充质干细胞表现一致;CCK-8法检测结果表明2.5mmol/L的氯化锂对牙髓干细胞增殖具有促进作用;选用该浓度下的氯化锂对牙髓干细胞进行矿化诱导培养,茜素红染色与荧光定量PCR结果显示,氯化锂对牙髓干细胞牙向分化具有促进作用。结论 一定浓度的氯化锂对牙髓干细胞细胞增殖与细胞分化具有促进作用。     

CCN2 对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

目的探讨CCN2对体外培养的人牙髓干细胞增殖、分化的影响。方法收集在延安大学附属医院口腔修复科因正畸或阻生而拔除的牙齿,酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志蛋白的表达。取对数生长期牙髓干细胞,加入不同浓度的CCN2将其分为CCN26．25、12．5、25、50、100μg/L组,同时设置阴性对照组;采用噻唑蓝（MTr）法检测CCN2对牙髓干细胞增殖作用的影响,通过碱性磷酸酶及Western blot检测CCN2对牙髓干细胞分化的影响。结果人牙髓干细胞呈集落状生长,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性表达,CCN26．25、12．5、25、50、100μg／L组OD值分别为（0．78±0．05）、（0．91±0．03）、（1．23±0．09）、（1．57±0．11）、（1．61±0．15）,均高于对照组（0．51±0．02）,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;细胞增殖实验表明,CCN2可显著促进牙髓干细胞的增殖;此外,CCN2可促进牙髓干细胞碱性磷酸酶的活性,并呈现浓度依赖关系,CCN26．25、12．5、25、50、100μg/L组OD值分别为（0．32±0．04）、（0．43±0．04）、（0．61±0．03）、（0．79±0．06）及（0．81±0．07）,与对照组（0．19±0．03）比较,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）;Western blot结果表明。CCN2可诱导牙本质细胞特异性标志蛋白的表达。结论CCN2可促进牙髓干细胞向成牙本质细胞的分化。     

淫羊藿苷对人牙髓干细胞神经向分化作用的初步研究

目的 探讨淫羊藿苷（ICA）对人牙髓干细胞（DPSC）神经向分化的作用。方法 分离培养DPSCs后,采用不同浓度ICA(0.01μmol、0.10μmol、1.00μmol、10.00μmol)处理DPSCs。CCK-8法检测ICA对细胞增殖活力的影响,确定其最佳促DPSCs增殖浓度。分别进行细胞形态学观察和Nestin细胞免疫荧光检测。Western blotting检测DPSCs神经向分化相关蛋白Nestin、βⅢ-tubulin及NSE的表达。结果 不同浓度ICA细胞相对活力值比较,差异有统计学意义（P <0.05）,其中以0.10μmol ICA细胞相对活力最高。与对照组比较,ICA组神经球的直径增加（P <0.05）,Nestin荧光强度增强（P <0.05）,Nestin、βⅢ-tubulin、NSE蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 ICA能够有效促进DPSCs增殖,提高DPSCs神经向分化能力。     

小鼠牙髓干细胞培养及诱导分化

目的 :分离、培养小鼠牙髓干细胞并诱导分化 .方法 :采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,细胞密度调整为 1× 10 4/孔细胞 ,用 2 0 0mL·L -1胎牛血清的α MEM培养液培养 14d ,挑出细胞克隆消化传代 ,TGF β、BMP2 、bFGF细胞因子诱导 ,PCR检测DSPP的mRNA的表达 .结果 :小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率为 1.6 -2 .5个 / 10 4细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞体积小、胞核大 ,经细胞因子刺激后的细胞表达DSPP的mRNA .结论 :培养的小鼠牙髓集落状生长的细胞具有干细胞增殖快等特性 ,细胞因子可诱导小鼠牙髓干细胞定向分化     

SOX2对牙髓干细胞神经分化的促进作用及其意义

目的：探讨转录因子SOX2对牙髓干细胞（DPSCs）神经分化的影响,为研究DPSCs神经分化的机制提供依据。方法：从人源第三磨牙牙髓中分离DPSCs（DPSCs组）,通过逆转录病毒感染方法构建过表达SOX2的DPSCs（DPSCs-SOX2组）,以空白载体感染的DPSCs作为对照组（DPSCs-vector组）,采用神经分化培养基诱导各组DPSCs分化为神经前体细胞（NPCs）。采用CCK-8法分析各组NPCs的增殖指数（PI）;采用qPCR和流式细胞术检测各组NPCs中Nestin和Pax6基因的表达水平;采用免疫荧光和流式细胞术分析各组NPCs在神经元分化方面的能力和分化后β3-Tubulin的表达效率。结果：通过神经分化培养基的定向诱导,正常DPSCs、DPSCs-vector和DPSCs-SOX2均可通过分化形成NPCs,但DPSCs-SOX2组NPCs的PI和NPCs中Nestin和Pax6表达水平明显高于DPSCs组和DPSCs-vector组（P<0.05）;DPSCs-SOX2组NPCs在神经元分化方面也具有一定的优势,分化后细胞的β3-Tubulin表达效率明显高于其他2组（P<0.05）。结论：SOX2对DPSCs的神经分化具有一定的促进作用。     

富血小板纤维蛋白对人牙髓干细胞增殖、凋亡 及碱性磷酸酶活性的影响

目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）对人牙髓干细胞增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性的影响及机制。 方法 从人牙髓组织中分离出人牙髓干细胞（hDPSCs）,hDPSCs 随机分为对照组及实验组,CCK8 实验检测PRF 刺激hDPSCs 第0、1、3、5 及7 天时细胞增殖情况;RT-PCR 检测PRF 刺激hDPSCs 第0、3、7 及14 天时 碱性磷酸酶（ALP）的mRNA 表达情况;流式细胞仪检测PRF 刺激hDPSCs 7 d 后细胞的凋亡情况,Western blotting 检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、p38、p-p38 蛋白表达。结果 实验组第1 天时细胞的增殖与对照组比较,差异无统计学意义（P >0.05）,第3、5、7 天时细胞的增殖均高于 对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;实验组第3 天时ALP mRNA 表达与对照组比较,差异无统计学意义（P > 0.05）,第7 和14 天时ALP mRNA 表达均高于对照组,差异有统计学意义（P <0.05）;细胞的凋亡率及 Cleaved Caspase-3 蛋白、p-p38 蛋白表达实验组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,实验组细胞的 凋亡率及Cleaved Caspase-3 蛋白表达均下降,p-p38 蛋白表达上调,p38 蛋白表达两组间比较差异无统计学意 义（P >0.05）。结论 PRF 可促进hDPSCs 的增殖,上调ALP 的mRNA 表达,抑制其凋亡,其机制与激活p38 信号通路有关。     

人脱落乳牙牙髓干细胞与人恒牙牙髓干细胞成骨分化及破骨能力的差异

目的比较处于生理性根吸收时期的自然脱落乳牙牙髓干细胞（SHED）和恒牙牙髓干细胞（DPSCs）的成骨分化及破骨能
力,探讨两者在成骨和破骨相关分子的表达情况。方法体外分离、培养和纯化处于生理性根吸收时期的自然脱落乳牙牙髓干
细胞与恒牙牙髓干细胞;两种干细胞在成骨诱导14 d 和21 d,分别进行ALP染色、茜素红染色,并通过Real-time PCR检测
SHED和DPSCs矿化诱导后的成骨与破骨相关基因表达。结果倒置显微镜下观察,SHED和DPSCs形态均为长梭形;两种干
细胞经矿化诱导后,茜素红染色可见SHED的矿化结节计数多于DPSCs（P<0.05）,SHED的ALP活性亦强于DPSCs（P<0.05）。
RT-PCR检测结果显示,经矿化诱导后两种干细胞均表达成骨与破骨相关基因Runx2、OCN、ALP、OPG和RANKL,但DPSCs的
Runx2、OCN 和ALP的表达水平均低于SHED（P<0.05）,且SHED反应细胞破骨/成骨能力的RANKL/OPG 的比值显著高于
DPSCs（P<0.05）。结论与DPSCs相比,SHED不仅具有较强的成骨分化能力,还兼有较强的破骨能力,为SHED参与生理性根
吸收骨改建的调控机制提供实验依据。
     

人乳牙牙髓干细胞体外成骨特性的实验研究

目的研究人乳牙牙髓干细胞体外成骨特性。方法从健康儿童滞留乳牙牙髓组织中分离培养乳牙牙髓干细胞(SHED)后,经流式细胞仪分选出两组细胞。A组:CD34+/CD117+双阳性表达的细胞,B组:剩余的混杂细胞。研究两组细胞各自成骨特性:运用流式细胞仪分选标记干细胞,以免疫细胞化学技术,荧光定量PCR技术检测成骨细胞标记物,并做矿化染色。结果分离培养的细胞呈成纤维细胞样生长,经分选的A、B两组细胞在第30天时免疫细胞化学检测发现均有成骨细胞的标记物RUNX-2、OC、BSP表达,在培养第40天时运用荧光定量PCR检测分析发现A、B两组细胞表达RUNX-2、OC、BSPmRNA基因水平的差异有显著性意义:A组高于B组;在第50天A、B两组细胞运用VonKossa's染色法和茜素红染色法检测,结果显示A组细胞呈阳性表达,B组细胞呈阴性表达。结论纯化后的CD34+/CD117+双阳性表达的SHED具有体外自行成骨特性。     

Induction of dental pulp-derived induced pluripotent stem cells in the absence of c-Myc for differentiation into neuron-like cells

BackgroundA recent research breakthrough has demonstrated that the ectopic expression of four genes is sufficient to reprogram human fibroblasts into inducible pluripotent stem cells (iPSCs). However, whether human dental pulp cells (DPCs) could be reprogrammed into iPSCs remains an open question. In this study, we demonstrated that DPCs from deciduous and permanent teeth can be reprogrammed into iPSCs without c-Myc and had the capacity to differentiate into neuron-like cells.MethodsDPCs were obtained from donors and reprogrammed into iPSCs using retroviral transduction with SOX2, OCT4, and KLF4. Then, these iPSCs were differentiated into neuron-like cells. Microarray and bioinformatics were used to compare the gene expression profile among these iPSCs and iPSC-derived neuron-like cells.ResultsThe DPCs displayed a high vitality and capability to quickly restart proliferation and expressed elevated pluripotency similar to mesenchymal stem cells. According to our results, DPC-derived iPSC colonies that could be subcultured and propagated were established as early as 10 days after transduction, in comparison with the skin fibroblast (DPC-derived iPSCs) without c-Myc presented embryonic stem cell-like properties and the pluripotent potential to differentiate into neuron-like cells, which resemble neurons both morphologically and functionally.ConclusionThe human DPCs from deciduous and permanent teeth can undergo reprogramming to establish pluripotent stem cell lines without c-Myc. These surgical residues, usually regarded as medical waste, can be used as an alternative source of pluripotent stem cells for personalized medicine.