全反式维甲酸对儿童卵黄囊瘤细胞增殖及维甲酸β受体表达的影响

目的:研究全反式维甲酸(ATRA)对儿童卵黄囊瘤细胞诱导分化过程中细胞形态及维甲酸β受体表达的影响.方法:在体外细胞培养的基础上,观察细胞形态学的变化、细胞增殖动力学的变化,采用MTT比色法测定细胞细胞增殖活性,以半定量RT-PCR方法检测维甲酸β受体(RAR-β)mRNA的表达.结果:全反式维甲酸能使卵黄囊瘤细胞形态趋向良性分化,有效地抑制了肿瘤细胞增殖;半定量RT-PCR结果显示,经不同浓度的ATRA处理后的卵黄囊瘤细胞的RAR-β mRNA表达水平均上调.结论:ATRA对卵黄囊瘤细胞有诱导分化作用,ATRA通过上调维甲酸β受体基因表达实现其诱导分化作用.     

全反式维甲酸诱导中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化的作用

目的：观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,ATRA）体外对大鼠中脑神经干细胞（neural stem cells,NSCs）的诱导分化作用及其可能的分子机制。方法：分离培养孕14～15 d大鼠中脑NSCs,使用1.0μmol/L ATRA诱导1、3、5和7 d,以免疫组织化学染色观察ATRA对NSCs分化为多巴胺能神经元的影响;RT-PCR分析维甲酸（retiadic acid,RA）各受体表达情况。结果：ATRA诱导后多巴胺能神经元特异性酪氨酸羟化酶（TH）染色呈阳性,细胞有多个细长突起,与对照组比较,诱导7 d后多巴胺神经元特异性TH染色阳性细胞率均明显升高（P〈0.01）;各诱导组RA受体βmRNA的表达量均明显升高（P〈0.01）,而且存在时间依赖性。结论：ATRA能显著提高NSCs分化为多巴胺能神经元的比例,同时发现细胞维甲酸A受体（RAR）βmRNA表达增加,RARβ激活可能促进NSCs向多巴胺神经元方向的分化。     

维甲酸受体在小鼠胚胎造血发育中的表达

目的 检测小鼠胚胎造血发育中维甲酸(retinoic acid,RA)受体(RA receptors,RARs)不同亚型RAR-α、RAR-β、RAR-γ及其合成酶视黄醛脱氢酶1(retinal dehydrogenase 1,Raldh1)和Raldh2的转录水平,探讨RARs不同亚型及其合成酶在胚胎造血发育中的作用.方法 获取孕鼠胎龄9.5 d(embryonic day 9.5,E9.5)卵黄囊(yolk sac,YS),E10.5、E11.5主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区,E13.5、E14.5、E17.5胎肝(fetal liver,FL)和成年小鼠骨髓(bone marrow,BM),运用实时荧光定量PCR检测各组织中RAR-α、RAR、RAR-γ、Raldh1和Raldh2的转录水平.结果 与其他不同阶段造血组织比较,在E9.5 YS、E11.5 AGM区和BM中,RAR-α、RAR-β、RAR-γ及Raldh1、Raldh2均高表达(P＜0.01).E11.5 AGM区RAR-α、RAR-β、RAR-γ及Raldh1、Raldh2表达水平高于E10.5 AGM区(P＜0.01).而E13.5～E17.5 FL间的RAR-β、RAR-γ及Raldh1、Raldh2表达水平差异无统计学意义.结论 YS、AGM区和BM中RAR-α、RAR-β、RAR-γ及其合成酶Raldh1和Raldh2表达趋势与已有研究中相应造血组织来源的红系造血祖细胞改变相一致,反映了RA与小鼠个体发育中YS、AGM区和BM的造血形成密切相关,而RA对FL的造血形成作用可能并不显著.     

两个新维甲酸特异激活表达的cDNA序列的生物学功能测定

两个新维甲酸特异激活表达的ｃＤＮＡ序列的生物学功能测定雷薇黎伯铨吴我们在发现全反式维甲酸（ＲＡ）可引起食管癌细胞系生长抑制及终末分化的基础上，结合ＲＡ作用的分子机制，开辟了一条分离肿瘤抑制基因或促分化基因的新途径，建立了ＲＡ诱导前后的肿瘤细胞系的ｃ...     

维甲酸受体功能及其在肿瘤治疗中的应用

目的 对维甲酸受体功能、分子机制及其在肿瘤治疗中的应用进行综述,为以维甲酸受体为靶点的肿瘤治疗和新药研发提供参考。方法 检索近年来国内外有关维甲酸受体的研究文献,针对其功能、分子机制以及肿瘤治疗方面的应用,进行分析和总结。结果 维甲酸受体通过转录调节、翻译调节和磷酸化调节与其他多条信号通路相互联系、共同调节。维甲酸受体在肿瘤治疗中起到非常重要的作用,维甲酸类似物在诱导多种肿瘤细胞分化、逆转肿瘤细胞的恶性表型方面效果显著。结论 维甲酸受体的调节过程极为复杂,因此在肿瘤发生发展及治疗中的作用还有待进一步的研究。     

维甲酸β受体的表达介导肺腺癌细胞系A549凋亡的研究

目的：研究RARβ在肺癌细胞的增殖、分化和诱导细胞凋亡中的作用.方法：应用脂质体将RARβ的表达载体pcDNA3.0-RARβ瞬时转染到RARβ表达下降的肺腺癌细胞A549中,观察形态学变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR检测细胞RARβ、p53、cdk4、cyclinD1的表达水平.结果：试验组出现细胞皱缩、粘附性降低、染色体凝集和边集现象,细胞凋亡率为65.8%,DNA断裂成片状.RT-PCR显示凋亡细胞中的RARβ表达明显升高（P＜0.01）、p53的表达无明显变化、cdk4和cyclinD1的表达明显降低（P＜0.01）.结论：9-顺-维甲酸通过RARβ受体诱导细胞凋亡并且显著降低cdk4、cyclinD1的表达;9-顺-维甲酸不影响细胞中p53的表达;9-顺-维甲酸在p53表达正常的细胞中引起凋亡.     

表观遗传学机制对白血病细胞维甲酸受体β基因表达的调控作用及意义

目的探索表观遗传学机制对白血病细胞维甲酸受体β基因（RARβ）表达的调控作用及意义。方法应用DNA甲基化酶抑制剂地西他滨（DAC）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂丙戊酸钠（VPA）与全反式维甲酸（ATRA）处理白血病细胞;RARβ基因甲基化测定和表达定量;染色质免疫沉淀。结果56例急性髓系白血病（AML）患者RARβ基因甲基化总阳性率为64．3％。DAC与VPA可显著增加ATRA对RARβ表达的激活作用。染色质免疫沉淀实验证明DAC和VPA通过DNA去甲基化和组蛋白乙酰化作用上调RARβ表达。三药联合可诱导部分U937细胞出现髓系分化标记CD11b,使克隆形成能力明显下降。结论表观遗传学调控剂与ATRA联合应用可激活RARβ的表达,具有协同抗白血病作用。     

诱导分化的人食管癌细胞DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的改变

目的：了解诱导分化的食管癌细胞中DNA聚合酶β和碱基切除修复功能的变化.方法：采用全反式维甲酸（ATRA）和二甲亚砜（DMSO）诱导人食管癌Eca109细胞分化,应用原位杂交、碱基切除修复功能（BER）测定方法分别检测细胞po1B基因的表达和BER功能的变化.结果：ATRA、DMSO作用5 d后可以诱导Eca109细胞分化.随着Eca109细胞的分化,polβ基因的表达降低,BER恢复.结论：ATRA、DMSO可下调Eca109细胞polβ基因的表达,恢复BER活性使其趋向正常细胞分化.     

维甲酸致胚胎神经管畸形过程中RARα和RARβ表达水平变化的实验研究

目的：探讨过量维甲酸（RA）对金黄地鼠胚胎神经管维甲酸受体α（RARα）和维甲酸受体β（RARβ）蛋白表达的影响。方法：采用免疫组织化学方法及图像分析，半定量分析金黄地鼠神经管正常发生及RA致神经管畸形过程中RARα和RARβ表达水平的变化。结果：过量RA可使RARα和RARβ在金黄地鼠神经管中的表达水平呈现短时下降，而后又大幅上升的变化。结论：过量RA引起的RARα和RARβ表达水平的变化与RA致金黄地鼠神经管畸形相关。     

细胞凋亡相关基因19及信号转导和转录活化因子3与肿瘤的相关性

干扰素／维甲酸联合应用诱导的细胞凋亡相关基因（genes associated with retinoid interferon induced mortality，GRIMs）是一组可被干扰素（IFN—β）联合全反式维甲酸（RA）诱导并促进细胞凋亡的基因。GRIM-19是GRIMs家族重要成员之一，是一种新的细胞凋亡调节基因。     

IL-1β对HepG2细胞核受体RXRα蛋白表达的影响

目的研究白细胞介素1β（interleukin 1 beta,IL-1β）诱导人肝癌细胞HepG2维甲酸X受体α（retinoid Xreceptor alpha,RXRα）蛋白核-胞浆转移现象及其基因水平变化。方法 IL-1β处理HepG2细胞,收集不同时间点RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA;同时用蛋白酶体抑制剂,MG132预处理HepG2细胞后IL-1β诱导细胞,收集细胞蛋白及mRNA,应用Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,real-time PCR）检测RXRα总蛋白、胞浆蛋白、核蛋白及mRNA水平的变化。结果总胞核RXRα蛋白表达量降低（P〈0.05）,胞浆RXRα蛋白表达量增高（P〈0.05）,RXRαmRNA水平在6、12 h升高（P〈0.05）。MG132可以抑制IL-1β对细胞核、胞浆RXRα蛋白表达水平的变化。结论 IL-1β可以诱导HepG2细胞RXRα核-胞浆转移,RXRα核-胞浆转移可能与泛素-蛋白酶体降解途径相关。     

全反式维甲酸体外诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的影响

目的观察全反式维甲酸（alltrans retinoic acid，ATRA）诱导分化对人骨肉瘤MG-63细胞侵袭转移的抑制作用。方法体外用ATRA诱导MG-63细胞分化，通过电镜观察瘤细胞的超微结构；3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑嗅盐（MTT）检测细胞的增殖能力；软琼脂集落形成实验、侵袭和运动实验观察MG-63细胞生长和侵袭能力的变化；Westernblot检测细胞增殖核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）、细胞黏附分子44（cell differentiation44，CD44v6）蛋白的表达。结果经诱导剂处理后．细胞的生长明显受到抑制，细胞形态呈良性分化；肿瘤细胞的软琼脂集落形成率、穿膜运动能力均被显著抑制（P〈0．01）；与对照组相比随着作用时间的增加CD44v6和PCNA的表达均降低（P〈0．01）。结论ATRA对人骨肉瘤MG-63细胞有诱导分化作用，并且从细胞的黏附、运动、降解等多环节抑制肿瘤细胞的侵袭转移能力。     

维甲酸在^131I治疗分化型甲状腺癌中的作用

手术＋^131I治疗＋甲状腺激素抑制是目前治疗分化型甲状腺癌（DTC）的最佳综合治疗方案，所有DTC患者术后均应用^131I去除残留甲状腺组织，但在发生转移的DTC病人约有1／3失分化，DTC细胞的形态和功能发生退行性改变，促甲状腺激素（TSH）受体表达障碍和浓聚碘的功能丧失，使^131I治疗和T4抑制TSH治疗无法进行。近年来我院开展了利用维甲酸（RA）诱导分化治疗DTC的临床应用，现报告如下：     

NB4细胞PML—RARα融合基因表达对维甲酸诱导分化作用的影响

目的研究急性早幼粒白血病（ＡＰＬ）细胞株ＮＢ４细胞ＰＭＬ－ＲＡＲα（早幼粒细胞白血病基因－维甲酸受体基因α）融合基因的表达对维甲酸诱导分化作用的影响，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因与维甲酸治疗作用间的关系。方法用反义核酸来阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达并用逆转录－聚合酶链式反应检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能。通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ（硝基四氮唑蓝）还原试验进行判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果反义核酸阻断ＰＭＬ－ＲＡＲα表达后使维甲酸对ＮＢ４细胞的生长抑制作用增强，Ｓ期细胞由５２％降至２９％，同时ＮＢＴ还原能力提高，细胞表面标志变化明显，提示对维甲酸敏感性增加。结论ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达不仅与ＡＰＬ的发病有关，而且钝化了维甲酸对ＡＰＬ细胞的诱导分化作用。     

1,25（OH）2D3和ATRA对HO8910生长的协同抑制作用

目的：通过单独或联合使用1,25-二羟维生素D3[1,25-dihydroxy vitaminD3,1,25（OH）2D3]和全反式维甲酸（all trans rinoic acid,ATRA）,研究其对人卵巢癌细胞HO8910生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,以及维生素D受体（vitamin D recept VDR）及维甲酸α受体受体（retinoic acid receptorα,RARα）mRNA的表达变化,探讨其作用的分子机制。方法：选用人卵巢癌细株HO8910在体外进行培养,培养时分别添加1,25（OH）2D3、ATRA或二者联合,采用MTT比色法测定细胞生长抑制率,流式细胞术（flow cytometry,FCM）进行细胞周期和细胞凋亡分析,用RT-PCR检测VDR及RARαmRNA的表达。结果：结果是单独或联合使用1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸诱导后,HO8910细胞生长均受到不同程度的抑制（P〈0.05）,并呈时间依赖关系;能够引起细胞周期时相的改变,G1细胞增多（P〈0.05）;能够诱导细胞产生细胞凋亡（P〈0.05）;能够上调VDR及RARαmRNA的表达（P〈0.05）,进而抑卵巢癌细胞增殖,其中以联合用药组最为显著。结论：说明1,25-二羟维生素D3和全反式维甲酸能抑制人卵巢癌细胞株HO8910生长;诱导细胞周期发生G1期阻滞,同时产生细胞凋亡作用;通过上调VDR及RARαmRNA的表达,从而抑制癌细胞增当1,25-二羟维生素D3与全反式维甲酸联合用药时,能够对HO8910细胞生长产生协同抑制作用。     

9-顺维甲酸对人肺癌组织RARα、RARβ及 RXRα转录的影响

目的:观察经9-顺维甲酸(9-cis-RA)处理前后肺癌组织和对照肺组织维甲酸受体α?β及维甲酸类受体α转录水平的变化,以进一步探讨维甲酸抑瘤的分子机制?方法:用组织块法培养肺癌组织和对照肺组织,用RT-PCR技术检测RARα?RARβ及RXRα的mRNA水平?结果:肺癌组织的RARα和RXRα基础转录水平高于对照肺组织,而RARβ基础转录水平低于对照肺组织;应用9-cis-RA 24 h后对照肺组织RARα转录水平升高;肺癌组织RARβ转录水平升高(P<0.01),与对照肺组织基础转录水平相近?结论:肺癌组织中RARβ受体表达异常可能与肺癌发生有关;9-cis-RA可诱导肺癌组织RARβ的表达显著升高,达对照肺组织mRNA相同表达水平?     

9—顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察9－顺维甲酸（9-cis-RA)处理前后人肺腺癌细胞株PG和A549维甲酸受体（RARs)及维甲类X受体（RXRs）不同时相mRNA转录水平的表达。方法：用RT－PCRT相对定量检测人肺腺癌细胞株PG和A549加9-cis-RA前后RARs和RXRs mRNA转录水平。结果：应用9-cis-RA后，两细胞株的RARα和RARβ mRNA转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体RARα和RARβ可能与9-cis-RA对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体　（ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ　ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后，两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。     

PCNA和RAR-α在肝细胞癌中的表达

目的 比较PCNA和RAR-α染色对HCC增殖的评估和相互关系。方法对44例肝细胞癌病例的石蜡切片，用免疫组化染色法，分别行增殖核抗原和维甲酸α核受体染色，比较两对HCC增殖的评估和相互关系。结果PCNA在HCCs中的阳性率为34．8％，RAR-α在HCCs中的阳性率为36．4％；HCC分化越差，PCNA和RAR-α阳性率越高，同时，我们证实PCNA和RAR-α在原发性肝细胞癌中的阳性率有十分密切的正相关关系。结论RAR-α与PCNA可用来评估HCC的增殖。