氧化型胆固醇对胰岛细胞活性的损害及诱导凋亡作用

目的 探讨氧化型胆固醇(Ch-Ox)中25-羟胆固醇(25-OH)、3β,5α,6β一三羟胆固醇(3-Triol)对体外培养胰岛素细胞活性的损害及诱导凋亡作用,并观察其时效与量效关系.方法 体外培养小鼠胰岛素细胞株MIN6细胞,待细胞生长融合后,分别加入不同浓度的Ch-Ox(3-Triol与25-OH)作用2Ah,或用同一浓度的两种不同Ch-Ox作用不同时间.采用MTT法检测细胞的存活情况,并用TUNEL法检测胰岛细胞的凋亡率.结果 Ch-Ox可降低MIN6胰岛细胞活性.并呈时间和剂量依赖性,3-Triol对MIN6胰岛细胞活性影响较25-OH明显;Ch-Ox剂量依赖性影响MIN6胰岛细胞凋亡率,3-Triol诱导凋亡作用较25-OH明显.结论 Ch-Ox可剂量依赖性和时间依赖性地降低胰岛素细胞的活性,并剂量依赖性诱导MIN6胰岛细胞凋亡率,提示血液中Ch-Ox浓度升高在胰岛β细胞功能损害中具有一定的作用.     

银杏叶提取物诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的　观察银杏叶提取物 (Egb)对血管平滑肌细胞 (VSMC)的诱导凋亡作用。方法　采用酶消化结合贴块法培养胎儿主动脉VSMC。加Egb干预 ,检测VSMC凋亡。用Annexin -Ⅴ (Fitc标记 )结合PI染色 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　与对照组比较 ,加Egb组血管平滑肌细胞凋亡率明显增加 ,并且随着时间的延长 ,浓度的增加 ,细胞凋亡率明显升高。结论　Egb可以诱导血管平滑肌细胞凋亡 ,并且平滑肌细胞的凋亡率与Egb的浓度及作用时间呈直线正相关。     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞凋亡及C-myc基因表达的影响

目的观察PNS对体外培养的VSMC凋亡及C-myc基因表达的影响。方法体外培养兔胸主动脉血管平滑肌细胞,在培养基中加入不同浓度的PNS,采用流式细胞仪检测和电镜观察细胞凋亡率,细胞免疫组化方法检测C-myc蛋白。结果PNS组细胞凋亡率明显增加,电镜下呈典型细胞凋亡形态学改变。该组C-myc蛋白的表达也增加。结论PNS可诱导VSMC的凋亡,促进C-myc基因的表达可能是其作用环节。     

西红花苷对3β,5α,6β-三羟胆甾烷致内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响

目的:研究西红花苷(crocin)对3β,5α,6β-三羟胆甾烷(cholestane-3β,5α,6β-triol,Triol)致血管内皮细胞凋亡和相关基因表达的影响.方法:将内皮细胞分成正常对照组、模型组(25 μmol/L Triol)、西红花苷 (10-6 mol/L,10-7mol/L,10-8mol/L) 25 μmol/L Triol组.采用诱导内皮细胞凋亡的模型,用比色法测定丙二醛含量.光学显微镜、电子显微镜观察细胞形态和超微结构的变化,电泳法检测DNA 梯形条带、流式细胞仪分析法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测Bcl-2和Bax mRNA表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达.结果:用Triol处理后,培养液中MDA含量增加(P<0.01 vs control),细胞收缩,核浓缩,深染,线粒体肿胀空化,出现凋亡小体、DNA 梯形条带和亚二倍体峰,细胞凋亡率为30.62%,Bax mRNA、Bax蛋白和Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组(P<0.01);Bcl-2 mRNA和蛋白表达低于正常对照组(P<0.01);西红花苷(10-7mol/L、10-6mol/L) Triol组,MDA含量减少,内皮细胞形态结构完整,细胞凋亡率分别为24.4%、6.3%,细胞Bax和Caspase-3基因表达明显下调,Bcl-2基因表达上调(P<0.05 or P<0.01 vs Triol).结论:西红花苷可能是通过调节Bcl-2,Bax 和Caspase-3基因表达抑制Triol诱导的内皮细胞凋亡.     

单体人参皂甙Rb1对成年大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的：用缺血－再灌注损伤诱导成年Wistar大鼠心肌细胞凋亡,观察单体人参皂甙Rb1对心肌细胞凋亡的影响。方法：琼脂糖凝胶电泳、DNA裂解率的测定和原位末端标记法（TUNEL）。结果：缺血－再灌注组心肌DNA电泳呈明显的梯形图谱,DNA裂解率明显高于假手术组,TUNEL末端标记有典型的阳性细胞存在,假手术组电泳无条带,TUNEL标记无阳性细胞。Rb1组琼脂糖凝胶电泳中DNA条带变淡,TUNEL阳性细胞百分数下降,DNA裂解率降低。结论：缺血－再灌注损伤可诱导成年心肌细胞凋亡,Rb1可抑制此类细胞凋亡。     

三氧化二砷对球囊拉伤后兔血管平滑肌细胞作用的实验研究

目的　探讨三氧化二砷对球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的促凋亡作用及其对再狭窄防治的意义。方法　贴块法行球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞培养 ,将细胞分为正常对照组 ,三氧化二砷 (浓度分别为 1 0、2 0、3 0、4 0及 5 0 μmol/L)组 ,通过绘制细胞生长曲线、DNA电泳、透射电镜、原位细胞凋亡检测试剂盒 (TUNEL)来观察三氧化二砷促细胞凋亡作用。结果　随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制细胞的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关 ,观察第7天、浓度为 5 0 μmol/L时活细胞数为 (5 30± 0 10 )× 10 5/ml与正常对照组 (2 8 77± 0 93)× 10 5/ml相比较差异有显著意义P <0 0 5 )。透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由 18 0 %± 3 1%增至 39 8%± 2 7% (P <0 0 5 )。正常对照组均不见上述变化。结论　三氧化二砷可促进球囊拉伤后兔髂动脉血管平滑肌细胞的凋亡 ,抑制其过度增殖。     

维生素E对内皮细胞诱发血管平滑肌细胞凋亡的抑制作用

目的：研究维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞（EC）诱发的血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡是否具有抑制作用。方法：以氢过氧化枯烯为诱发剂引发培养的血管EC的脂质过氧化反应,将制备的内皮细胞条件培养液（EC－CM）作为实验因素作用于培养的VSMC。彩和透射电子显微镜,免疫组织化学等方法观察维生素E对内皮细胞条件培养液诱发的血管平滑肌细胞凋亡的影响。结果：电镜可见VSMC凋亡小体。免疫组织化学结果显示,VSMC的P53蛋白表达增加,bcl-2蛋白表达下调。加维生素E组电镜改变轻微,p53,bcl-2异常表达减轻,结果：维生素E对脂质过氧化损伤的内皮细胞诱发的血管平滑肌细胞凋亡具有抑制作用。,     

NHE-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的探讨NHE-1反义RNA对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的影响.方法构建NHE-1反义RNA逆转录病毒载体,转染体外培养的大鼠PASMC,应用半定量RT-PCR法(sqRT-PCR)测定细胞内NHE-1 mRNA的表达、BCECF法测定pHi、流式细胞仪测细胞周期、电镜及原位细胞凋亡检测(TUNEL法)观察细胞凋亡情况.结果转染NHE-1反义RNA逆转录病毒载体的细胞,NHE-1 mRNA表达量及pHi较空载体转染细胞及未转染细胞显著降低,细胞凋亡率显著增加,电镜示细胞凋亡,凋亡小体形成.结论抑制NHE-1可通过引起细胞内酸化,诱导肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

β-细辛醚抗动脉硬化的体外作用观察

[目的]观察β-细辛醚对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人脐静脉血管内皮细胞株ECV304损伤的保护作用及其对损伤条件培养基作用下的血管壁平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.[方法]取生长稳定的ECV304细胞随机分成5组:正常对照组,模型组,β-细辛醚高、中、低剂量组.除正常组外,其他各组均加入25 μg/mL ox-LDL诱导损伤,给药组同时分别加入30、15、7.5 μg/mL的β-细辛醚.采用流式细胞术(FCM)测定ECV304细胞凋亡率、线粒体膜电位(MMP)及VSMC细胞周期各时相的DNA含量、增殖指数.[结果]ox-LDL损伤模型组ECV304细胞凋亡率显著增高,MMP降低,损伤条件培养基可促进VSMC增殖,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.001).β-细辛醚能降低细胞凋亡率, 稳定MMP,抑制VSMC增殖,与模型组比较差异有显著性意叉(P<0.05或P<0.01或P<0.001).[结论]石菖蒲主要成分β-细辛醚的抗动脉硬化作用可能与其能有效抑制ox-LDL对ECV304的损伤作用,稳定MMP,减少细胞凋亡,抑制VSMC增殖有关.     

氯沙坦和卡托普利对兔动脉粥样斑块形成的影响

目的：研究血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂氯沙坦和血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利对兔动脉粥样硬化斑块形成的干预作用。方法：31只雄性新西兰兔分为正常对照组（4只）、高胆固醇组（7只）、氯沙坦组（6只）、卡托普利组（7只）和联合用药（氯沙坦 卡托普利）组（7只），饲养16周处死动物，分别测定（或计算）内皮素、一氧化氮、主动脉中胆固醇含量、主动脉粥样斑块面积比及血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）调亡率等指标。结果：与高胆固醇组比较，各服药组动态粥样斑块面积和主动脉胆固醇含量显著减少，以联合用药组疗效最佳，内皮素水平下降，一氧化氮含量增加；氯沙坦组及联合用药组VSMC调亡率增加。结论：氯沙坦和卡托普利可显著延缓高胆固醇饮食诱导的动脉粥样硬化进程，其作用机制与促进VSMC凋亡和内皮功能保护有关；小剂量联合用药疗效更佳。     

一氧化氮诱导VSMC凋亡观察

目的研究动脉粥样硬化和冠脉气囊成形术后再狭窄中血管平滑肌细胞数量异常增多的机制,并初步探讨ＮＯ诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用。材料和方法　以ＳＮＡＰ作为ＮＯ供体,采用ＨＥ,ＴＵＮＥＬ,荧光双染后光镜观察以及电镜、流式细胞术、细胞ＤＮＡ的琼脂糖凝胶电泳对ＳＮＡＰ作用下的细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　观察发现, ０．４ｍｍｏｌ／Ｌ　 ＳＮＡＰ作用 ８－１０ ｈ即能明显地诱导培养的血管平滑肌细胞凋亡。结论 ＳＮＡＰ以浓度依赖方式诱导血管平滑肌细胞凋亡;细胞爬片的ＨＥ染色结合ＴＵＮＥＬ标记是检测凋亡的较为准确且简单的方法。     

酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞

目的探讨胶原酶分离并培养家兔血管平滑肌细胞的方法。方法取家兔腹主动脉，0．2％胶原酶Ⅰ消化分离血管平滑肌细胞并进行培养，相差显微镜观察培养细胞的形态，免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白（α-actin）的表达。透射电镜观察血管平滑肌超微结构。结果相差显微镜下细胞呈长梭形，未见明显异型细胞，α-actin胞浆染色阳性细胞数占总细胞数的99％以上。电镜显示VSMC内肌丝丰富，线粒体、高尔基复合体等细胞器较少，VSMC呈现分化的收缩表型。结论胶原酶可消化分离培养血管平滑肌细胞，且有成活细胞数多、传代周期短的特点，可用于血管平滑肌表型研究。     

葛根素对过氧化氢诱导平滑肌细胞凋亡的保护作用

目的探讨葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡保护作用的机制。方法在过氧化氢(双氧水)H2O2诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡模型的基础上,以噻唑兰(MTT)法测定细胞存活率;用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色法观察细胞受损和凋亡;用DNA琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡过程中DNA断裂程度;用免疫细胞组织化学染色法检测细胞内Caspase-3的表达。结果过氧化氢(双氧水)H2O2诱导无血清培养的平滑肌细胞凋亡,葛根素可显著降低平滑肌细胞的凋亡,减少凋亡细胞DNA断裂,平滑肌细胞坏死减少,对Caspase-3的表达有明显抑制作用。结论葛根素对过氧化氢(双氧水)H2O2诱导血管平滑肌细胞凋亡有保护作用,其机制可能与抑制Caspase-3有关。     

细胞凋亡与高血压脑出血患者血管破裂的相关性

目的：探讨高血压脑内出血患者血管破裂的发生机理。方法：正常脑血管,高血压脑出血患者出血部位的脑动脉分别进行TUNEL染色,计数血管平滑肌细胞凋亡比例。结果：高血压脑出血患者血管平滑肌细胞凋亡百分比为70.00±2.60,正常脑血管平滑肌细胞凋亡百分比为14.29±2.60。结论：血管平滑肌细胞凋亡与高血压脑内出血患者相关。     

丹参酮ⅡA对体外兔血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的观察丹参酮A对体外兔血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响,并初步探讨丹参酮A的作用机制。方法采用兔胸主动脉,用组织贴块法培养,设立空白对照组,加入不同浓度的丹参酮A共同孵育24 h、48 h和72 h,采用MTT法观察该药对细胞增殖的影响;划痕法观测细胞迁移情况;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量;TRITC-鬼笔环肽标记F-actin,观察该药物对细胞骨架微丝结构的影响。结果1同一时间点,丹参酮A各浓度组显著抑制体外培养兔VSMC增殖和迁移。细胞的A570值(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.762,P=0.000;r=-0.837,P=0.000;r=-0.944,P=0.000)、迁移距离(24 h、48 h、72 h分别为r=-0.966,P=0.000;r=-0.980,P=0.000;r=-0.966,P=0.000)与浓度呈负相关;2作用24 h后,处于G0/G1期的VSMC百分比增加,细胞DNA含量减少,凋亡率增加。兔VSMC在G0/G1期所占比例(r=0.962,P=0.000)、凋亡率(r=0.982,P=0.000)和浓度呈正相关;3药物干预组和对照组相比,兔VSMC的细胞骨架结构有所改变,对照组中细胞骨架呈极性分布,定向伸展,可见伪足;药物干预组细胞骨架呈非极性分布,未见伪足。结论丹参酮A对体外兔VSMC的增殖和迁移有抑制作用,上述作用可能是通过阻滞兔VSMC通过细胞周期的限制点,使其停滞于G0/G1期,诱导细胞凋亡以及影响细胞骨架微丝结构来实现。     

反义mTOR基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组转染纳米粒子包载的反义mTOR基因,空载体组转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3、7、14、28d取材,常规HE、弹力纤维VG染色,RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR蛋白产物表达较其他组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生程度在术后7、14、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

L-精氨酸调节大鼠低氧性肺血管结构重建与肺动脉平滑肌细胞凋亡

目的:探讨L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)对低氧性肺血管结构重建大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响及其机制.方法:将17只Wistar大鼠随机分为对照组(n=7)、低氧组(n=5)和低氧+L-Arg组(n=5).对大鼠肺血管进行显微形态学观测.通过末端转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)检测肺动脉平滑肌细胞凋亡,并以免疫组织化学方法研究肺动脉平滑肌细胞Fas表达.结果:低氧2周后出现大鼠肺血管结构重建.同时,肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显低于对照组(P均＜0.05),平滑肌细胞Fas表达明显降低.然而,L-Arg缓解了低氧性肺血管结构重建的形成.低氧+L-Arg组大鼠肺中、小型动脉凋亡平滑肌细胞百分数均明显高于低氧组(P均＜0.05).L-Arg使低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞Fas表达明显增强.结论:L-Arg通过使肺动脉平滑肌细胞Fas表达上调,促进肺动脉平滑肌细胞的凋亡,从而对低氧性肺血管结构重建有重要的调节作用.     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0、2.0、3.0、4.0及5.0 μmol/L)组,通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL)、四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化.结果 随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关,观察第7天、浓度为5.0μmol/L时细胞生存数为[(4.41±0.10)×105/ml,正常对照组(30.11±0.93)×105/ml差异有统计学意义,P<0.05],透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由(16.0±3.1)%增至(38.7±2.7)%(P<0.05),三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,抑制其过度增殖.