TIMPs与肝纤维化

肝纤维化的主要病理变化就是ＥＣＭ (细胞外基质 ,ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｒｍａｔｒｉｘ)在肝脏中过多沉积。肝脏ＥＣＭ的代谢主要由ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶 ,ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｐｒｏ ｔｅａｓｅ)及其抑制因子ＭＭＰｓ(基质金属蛋白酶的组织抑制因子 ,ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｐｒｏｔｅａｓｅ)所调节 ,ＭＭＰｓ促进ＥＣＭ的降解 ,而ＴＩＭＰｓ通过抑制ＭＭＰｓ,阻止ＥＣＭ的降解 ,从而形成或促进肝纤维化。肝脏受损后 ,一方面ＥＣＭ合成增多 ,另一方面ＴＩＭＰｓ表达上调 ,发挥对ＭＭＰｓ的普遍抑制作用 ,使Ｅ…     

基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1在肺间质纤维化实验中的

细胞外基质 (ＥＣＭ)合成和降解失衡是引起ＥＣＭ积聚导致肺间质纤维化的重要病理生理因素。基质金属蛋白酶(ＭＭＰｓ)及其抑制物 (ＴＩＭＰｓ)是调节ＥＣＭ降解的重要体系。我们以博莱霉素诱导的肺间质纤维化大鼠为模型 ,观察肺间质纤维化发生过程中基质金属蛋白酶 2、9(ＭＭＰ 2、ＭＭＰ 9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子 1(ＴＩＭＰ 1)基因表达的变化 ,探讨ＭＭＰ 2、9和ＴＩＭＰ 1在肺间质纤维化发病中的作用。材料与方法　 (1)动物模型制备 :雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 6 0只(沈阳军区医学专科学校动物实验中心提供 ) ,体重 (2 15±2 0 )ｇ,…     

金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

近年来 ,随着医学分子生物学的发展 ,肝纤维化发病机制研究有了较大进步。目前认为肝纤维化发生不仅是由于肝内的细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａ ｔｒｉｘ ,ＥＣＭ )合成过多 ,而且与ＥＣＭ降解水平有着密切关系。在肝内参与ＥＣＭ降解的主要是一组名为基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＭＭＰｓ)的酶系 ,其特异性抑制物———金属蛋白酶组织抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ,ＴＩＭＰｓ)可对该酶系活性产生抑制作用。二者与肝内ＥＣＭ…     

基质金属蛋白酶-2与肝纤维化

肝纤维化是各种慢性肝病向肝硬化发展的共同病理过程 ,其实质是以Ⅰ、Ⅲ型为主的胶原纤维等细胞外基质 (ＥＣＭ )合成与降解失衡 ,导致ＥＣＭ在肝内过度沉积而形成的。研究表明 ,参与ＥＣＭ降解的主要是基质金属蛋白酶类 (ＭＭＰｓ) ,其中基质金属蛋白酶 2 (ＭＭＰ 2 )在ＥＣＭ的降解与重塑中起着非常重要的作用 ,并有其独特的性质。本文就ＭＭＰ 2的来源、性质、结构及其在肝纤维化的发生、发展中的作用等作一介绍。一、ＭＭＰ 2的来源、结构ＭＭＰ 2又名明胶酶Ａ ,为Ⅳ型胶原酶的一种。相对分子质量为 72× 10 3 ,无糖基形式 ,主要由各种…     

基质金属蛋白酶—2在肝纤维化时的表达

基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）特异性地分解细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）,对胶原的沉积和组织结构的改建具有重要作用。肝星形细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌ,ＨＳＣ,又称ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｌ,ｌｉｐｏｃｙｔｅ）不仅是肝纤维化时合成ＥＣＭ的主要来源［１］,而且能表达和分泌基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）［２］,直接参与ＥＣＭ的代谢。本文分别测定了正常与ＣＣｌ４诱导的肝纤维化大鼠肝组织和ＨＳＣ的ＭＭＰ…     

实验性肝纤维化间质胶原酶酶原表达的研究

肝纤维化实质是Ⅰ、Ⅲ型为主的胶原纤维等细胞外基质(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ ,ＥＣＭ)合成与降解失衡 ,在肝内过度沉积而形成的病理性疾病。基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ)是一组参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶 ,目前肝内发现了 8种 ,其中间质胶原酶 (ｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｃｏｌｌａ ｇｅｎａｓｅ,ＭＭＰ 1ｉｎｈｕｍａｎ ,ＭＭＰ 13ｉｎｒａｔ)主要参与Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解 ,与肝纤维化的发生发展紧密相关[1] 。既往研究表明 ,肝损伤或肝纤维化早期间质胶原酶活性常…     

缺氧对肝星状细胞基质金属蛋白酶Ⅱ表达及活性调节的影响

目的 研究缺氧对ＨＳＣ基质金属蛋白酶Ⅱ（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－２,ＭＭＰ－２）表达及活性调节的影响。方法 大鼠ＨＳＣ体外原代培养,以免疫细胞化学及ＥＬＩＳＡ法分别检测细胞内ＭＭＰ－２及基质金属蛋白酶组织抑制因子Ⅱ（Ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｍｅｔａｌｌｏｐｏｒｅｉｎａｓｅ－２,ＴＩＭＰ－２）的表达,和培养上清流中两者的相对量,并以酶图法测培养上清液ＭＭＰ－     

金属蛋白酶组织抑制因子1与肝纤维化

近年来,有关胶原降解方面的改变在肝纤维化形成中的作用日益引起重视。金属蛋白酶组织抑制因子(ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＴＩＭＰ)是一组胶原酶抑制物,通过与相应的胶原酶结合而抑制其对胶原的分解。ＴＩＭＰ1主要特异性地结合激活的间质胶原酶(ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ1,ＭＭＰ1),从而抑制其对Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解[1]。肝脏星形细胞(ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌｌａｔｅｃｅｌｌｓ,ＨＳＣ)在体外培养时能够表达和分泌ＴＩＭＰ1[2]。为了研究ＴＩＭＰ1在肝纤维化过程中…     

秋水仙碱对肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶—1及其抑制因 …

目的 观察秋水仙碱对纤维化肝脏基质金属蛋白酶－１（ＭＭＰ－１）、基质金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达的影响。从胶原降解的角度探讨秋水仙碱对肝纤维化有无逆转作用及可能存在的机制。方法 制备免疫性大鼠肝纤维化模型,并给予秋水仙碱治疗;通过ＲＴ－ＰＣＲ检测ＭＭＰ－１、ＴＰＭＰ－１的表达,并作Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化以及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色。结果 发现秋水仙碱对肝纤维化大鼠ＭＭＰ－１的表达无明     

逆转录定量PCR检测实验性肝纤维化组织中金属蛋白酶抑制因子-1的表达

肝纤维化是Ⅰ,Ⅲ型胶原为主的细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ）成分过度沉积导致的病理性疾病．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ,ＭＭＰｓ）是一族依赖Ｚｎ离子降解ＥＣＭ成分的水解蛋白．目前为止该家族肝内发现８个成员,它们的抑制因子１（ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ１,ＴＩＭＰ１）可以抑制其活化和活性,因此,ＴＩＭＰ１与肝纤维化的发生发展紧密相关．我们应用大鼠ＣＣｌ４肝纤维化模型,通过逆转录定量ＰＣ…     

非小细胞肺癌中MMP-9、TIMP-1表达与转移和预后的关系

恶性肿瘤的浸润和转移是一个多阶段、多步骤、多种成分参与的序贯连续过程 ,肿瘤组织对细胞外基质 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ)的降解是肿瘤细胞能否形成转移的关键步骤。目前研究证实基质金属蛋白酶 (ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＭＭＰ)与金属蛋白酶组织型抑制因子 (ｔｉｓｓｕｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ＴＩＭＰ)是参与和调控此过程的重要胶原酶系统[1] 。材料与方法　 65例非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)组织蜡块来自中国医科大学附属第一医院 1989～ 1992年…     

重视肝纤维化细胞外基质降解中TIMPs的研究

在正常肝脏纤维组织中存在着细胞外基质(ＥＣＭ)的合成与降解的动态平衡 ,肝纤维化及肝硬化时纤维结缔组织的形成 ,是各种不同致病因子导致ＥＣＭ合成与降解的失衡所致。纤维组织的形成不是一个静止过程 ,而是一个动态过程 ,因此 ,研究肝纤维化及早期肝硬化的可逆性 ,在注意胶原合成过程的同时 ,应加强胶原降解过程的研究。1　胶原降解主要由基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)介导既往对肝纤维化ＥＣＭ合成与沉积的研究比较深入。ＥＣＭ主要由胶原以及蛋白多糖、糖蛋白等组成 ,肝星状细胞 (ＨＳＣ)是其主要来源。处于“静止”期的ＨＳＣ主要合成Ⅳ…     

基质金属蛋白酶—1,反义金属蛋白酶组织抑制因子—1表达质粒？…

目的 观察基质金属蛋白酶－１（ＭＭＰ－１）,反义金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达质粒对大鼠肝纤维经的影响。方法 运用重组ＤＮＡ技术,构建大鼠ＭＭＰ－１,反义ＴＩＭＰ－１,真核细胞表达质粒,经脂质包埋后,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠纤维化模型体内,观察其对大鼠肝纤维化的影响。结果 ＭＭＰ－１,反义ＴＩＭＰ－１表达质粒均可促进肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原的降解（Ｐ〈０．０５－Ｐ〈０．０１）,且作     

肝纤维化大鼠肝窦内皮细胞整合素α_6β_1及粘着斑激酶表达的变化

目的 研究正常及肝纤维化时大鼠肝窦内皮细胞（ＳＥＣ）表面层粘连蛋白（ＬＮ）的整台素受体α６β１及粘着斑激酶（ＦＡＫ）的变化。方法 用胶原酶原位灌注、Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心法分离正常及四氯化碳（ＣＣｌ４）实验性大鼠肝纤维化模型中的ＳＥＣ,并进行体外培养。采用细胞－ＥＬＩＳＡ和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定的方法,分别观察ＳＥＣ细胞表面整合素α６β１表达及ＦＡＫ活性的变化。结果 正常大鼠ＳＥＣ细胞表面几乎不表达整合素α６β１;在肝纤维化时ＳＥＣ细胞表面α６β１蛋白表达却明显增加（Ｐ＜０．０５）,且细胞中ＦＡＫ活性明显增高（Ｐ＜０．０５）。结论 在肝纤维化时ＳＥＣ细胞表面整合素α６β１的表达及ＦＡＫ活性明显增高,可能在ＳＥＣ的形态及功能改变中起重要作用。     

肝纤维化中decorin与某些细胞因子的关系

肝纤维化由多种原因造成肝脏损伤,引起肝内细胞外基质(ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ,ＥＣＭ)过度沉积。ＥＣＭ由胶原、糖蛋白及蛋白多糖(ｐｒｏｔｅｏｇｌｙｃａｎ,ＰＧ)组成。ＰＧ是肝中ＥＣＭ的主要非胶原性成分,与组织形态发生、细胞分化、运动、增殖及胶原纤维形成密切相关。ＰＧ是一群异质性大分子糖复合物,其中以ｄｅｃｏｒｉｎ与肝纤维化关系最为密切。本文就ｄｅｃｏｒｉｎ与肝纤维化中某些细胞因子(ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ,ＣＫｓ)的相互关系作一综述。1　ｄｅｃｏｒｉｎ一般特性ｄｅｃｏｒｉｎ是一种主要存在于结缔组织中…     

反义金属蛋白酶组织抑制因子—1表达质粒对实验性大鼠肝纤维 …

观察反义金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ－１）表达质粒对实验性大鼠肝纤维化的影响。方法运用逆转录巢式和重组ＤＮＡ技术,构建大鼠反义ＴＩＭＰ－１真核细胞表达质粒,经脂质体包埋后,利用腹腔注射将其导入免疫性大鼠肝纤维化模型体内;通过ＲＴ－ＰＣＲ,Ⅰ、Ⅲ型胶原的免疫组化及Ｍａｓｓｏｎ胶原染色观察反义ＴＩＭＰ－１表达质粒对大鼠肝纤维化的影响。结果反义原的免疫组化以及     

基质金属蛋白酶组织抑制因子1对小鼠成纤维细胞增殖和细胞外基质的影响

肺纤维化的主要病理改变为肺成纤维细胞 (ＬＦ)聚积和细胞外基质 (ＥＣＭ)积聚。ＬＦ在肺纤维化过程中有着重要的作用。ＬＦ几乎能合成全部有ＥＣＭ降解活性的基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)及其抑制剂 (ＴＩＭＰｓ) ,特别是ＴＩＭＰ 1 [1 ] ,当ＬＦ在静止状态下只能合成较低水平的ＴＩＭＰ 1 ,但其被激活后表达、合成并分泌大量的ＴＩＭＰ 1 ,阻止ＥＣＭ的降解 ,特别是其中胶原的降解 ,从而促进肺纤维化的形成和发展。因此 ,我们将人的正义和反义ＴＩＭＰ 1 (ｈＴＩＭＰ 1 )全长ｃＤＮＡ导入小鼠成纤维细胞 (ＮＩＨ3Ｔ3细胞 )中以期观察其对Ｎ…     

人尿激酶型纤溶酶原激活剂重组腺病毒的构建及其在肝星状细胞中的表达

抑制ＨＳＣ激活和ＥＣＭ合成 ,促进ＥＣＭ降解已成为抗肝纤维化治疗的重要途径。基质金属蛋白酶 (ＭＭＰｓ)是抑制ＥＣＭ在肝脏内沉积的主要蛋白酶。研究证实 ,纤溶酶原由尿激酶型纤溶酶原激活剂 (ｕＰＡ)激活形成纤溶酶后 ,可将以酶原形式分泌的ＭＭＰｓ裂解而激活。此外 ,纤溶酶也可直接降解ＥＣＭ。本实验利用细菌内的同源重组机制构建以ＣＭＶ驱动并同时表达绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)的非分泌型ｕＰＡ复制缺陷型重组腺病毒 (ＡｄｕＰＡ) ,并研究其在ＨＳＣ中的表达和降解胶原的作用 ,为肝纤维化基因治疗研究提供新的手段。设计引物 ,ＰＣＲ获取氨基端以ＲＲ固定信号序列修饰和羧基端经ＫＤＥＬ信号修饰的ｕＰＡｃＤＮＡ片段 ,同时加入ＫｐｎⅠ和ＨｉｎｄⅢ的限制性酶切位点。通过体外连接构建 ｐＡｄＴｒａｃｋ ＣＭＶ ｕＰＡ穿梭载体 ;酶切线性化后与骨架载体ｐＡｄＥａｓｙ 1电穿孔共转化ＢＪ5 183感受态细菌 ,经同源重组得到重组腺病毒质粒ｐＡｄｕＰＡ ,然后在 2 93细胞内包装得到非分泌型重组腺病毒ＡｄｕＰＡ ;以一定滴度的ＡｄｕＰＡ感染ＨＳＣ ,ＲＴ ＰＣＲ法测定其在ＨＳＣ中的表达 ;同时检测ＭＭＰｓ活性并利用免疫细胞化学技术测定...     

软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、TIMP-2基因调节及蛋白表达的影响

探索肝纤维化发生的分子机理 ,尤其是ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的作用。采用免疫组织化学和原位杂交的方法分别测定组肝纤维化大鼠不同治疗前后ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的基因调节和蛋白表达。结果显示 ,ＣＣＬ4 模型组ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2ｍＲＮＡ及蛋白水平明显高于治疗组。正常组大鼠肝组织无 1例阳性。ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2与肝纤维化形成密切相关 ,软肝缩脾丸对ＴＩＭＰ 1、ＴＩＭＰ 2的基因和蛋白表达有一定的抑制作用。软肝缩脾丸对肝纤维化大鼠TIMP-1、TIMP-2基因调节及蛋白表达的影响@申德林!450042$郑州解放军第一五三中心…     

实验性肝纤维化过程中明胶酶A基因表达的动态变化

肝纤维化的实质是Ⅰ，Ⅲ型为主胶原纤维等细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）合成与降解失衡，导致在ＥＣＭ肝内过度沉积而形成的．基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）是一族参与降解ＥＣＭ的主要水解蛋白酶，目前为止该家族至少已有２０个成员，肝内发现了８种．其中明胶酶Ａ（ＭＭＰ２），即Ⅳ型胶原酶，主要参与基底膜Ⅳ型胶原的代谢，与肝纤维化的发生发展紧密相关［１］．为了了解肝纤维化过程中ｍｍｐ２基因变化，我们应用四氯化碳（ＣＣｌ４）中毒性方法…